專利名稱：制備富含丹酚酸a的丹參提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥丹參中提取富含丹酚酸A的丹參提取物的 方法。
背景技術(shù)：
丹參是最常用的中藥之一，臨床上主要用于高血壓、心絞痛、冠 心病及中風(fēng)等心腦血管疾病。自80年代起對(duì)丹參水溶性成分進(jìn)行了系 統(tǒng)的研究，從中分離得到了 13個(gè)丹酚酸類化合物，其中活性最高的兩 個(gè)化合物為丹酚酸A和丹酚酸B。
中國(guó)專利申請(qǐng)CN1397276于2002年公開了用水或醇提取，經(jīng)樹 脂或聚酰胺層析，再用硅膠柱層析制備丹酚酸A的方法。中國(guó)專利申 請(qǐng)CN1513848于2003年^^開了采用水溫浸，離心，超濾，調(diào)酸，有機(jī) 溶劑萃取，再經(jīng)反相柱層析制備丹酚酸A的方法。中國(guó)專利申請(qǐng) CN1887849A于2007年^^開了采用水或醇提取，柱層析，調(diào)酸，有機(jī) 溶劑萃取制備丹酚酸A的方法。中國(guó)專利申請(qǐng)CN1830"7A于2006年 公開了采用水或醇提取，高溫高壓反應(yīng)，柱層析，調(diào)酸，有機(jī)溶劑萃 取制備丹酚酸A的方法。中國(guó)專利申請(qǐng)CN100999470A于2007年公開 了采用水或醇提取，調(diào)酸，加熱，過大孔樹脂柱，再過硅膠或葡聚糖 凝膠LH-2G或聚酰胺柱，調(diào)酸，有機(jī)溶劑萃取制備丹酚酸A的方法。 以上的這些方法都是將提取液直接進(jìn)行色譜分離，容易污染色譜柱， 分離效果不好，純度達(dá)不到要求，并且有些方法工藝復(fù)雜，不適合工 業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種制備富含丹酚酸A的丹參提取物的工藝，解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，使丹酚酸A提取工藝更加簡(jiǎn)單，提取 率高，純度好，工藝穩(wěn)定，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，首先將提取液用乙醇沉淀去除一 部分雜質(zhì)，再進(jìn)行保溫，可以提高中間產(chǎn)物中丹酚酸A的含量，然后 進(jìn)行有機(jī)溶劑萃取，進(jìn)一步去除水溶性雜質(zhì)，最后經(jīng)過色鐠分離，使 丹酚酸A含量達(dá)到50%以上，甚至達(dá)到90%以上，工藝簡(jiǎn)單合理，提 高了產(chǎn)率。
更具體的說，本發(fā)明所述的提取分離富含丹酴酸A的丹參提取物 方法包括以下步驟
步驟(1)、向丹參飲片或初粉中加入適量的溶劑進(jìn)行提取或滲漉， 所述溶劑優(yōu)選為水、堿水溶液(例如碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、 氫氧化鉀、氨水的水溶液，優(yōu)選濃度約0.1-2%,更優(yōu)選0.2-1.5 %)、甲醇、乙醇、丙酮或者它們的混合溶液，優(yōu)選提取溶劑用量為 丹參重量的4 ~ 15倍(優(yōu)選6 - 12倍，更優(yōu)選8 - 10倍)，優(yōu)選采用 回流或滲漉提??；過濾，得提取液，將提取液濃縮，優(yōu)選使得濃縮液 的比重為1~ 1. 3 (優(yōu)選1. 1-1. 25);加乙醇，邊加邊攪拌，至達(dá)醇濃 度為40~90% (優(yōu)選50-80 %,更優(yōu)選60-70%)，放置，使沉淀靜 置，取上清液，濃縮，得濃縮液；或在一定溫度下，加入澄清劑，優(yōu) 選澄清劑為酸(優(yōu)選醋酸、鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸 櫞酸、乳酸等等，更優(yōu)選醋酸、鹽酸)、甲殼素類，明膠，101果汁 澄清劑，ZTC1+1 (天津正天成澄清技術(shù)有限公司)，優(yōu)選澄清劑的濃 度為0. 1% ~20% (優(yōu)選3- 10% )，攪拌，過濾，將濾液濃縮，得濃 縮液。
步驟(2)、將濃縮液在40。C 100t:(優(yōu)選50 - 90X:，更優(yōu)選 60 - 80'C )的溫度下保溫6~72小時(shí)(優(yōu)選10-60小時(shí)，更優(yōu)選20 -50小時(shí))。
步驟(3)、將上述保溫后的溶液用酸(優(yōu)選醋酸、鹽酸、硫酸、 磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸櫞酸、乳酸等等，更優(yōu)選醋酸、鹽酸)調(diào) 節(jié)PH值為1 ~ 6 (優(yōu)選2 - 5，更優(yōu)選2. 5-4);用有機(jī)溶劑萃取，得萃取液，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸
丁酯；回收有機(jī)溶劑，得萃取物。
步驟(4)、將上述萃取物用溶劑溶解，所述溶劑優(yōu)選為水、堿水 溶液(例如碳酸鈉、碳酸氬鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水的水溶 液，優(yōu)選濃度約0.1-2%，更優(yōu)選O. 2-1.5% )、甲醇、乙醇、丙酮 或者它們的混合溶液；經(jīng)色語柱吸附，優(yōu)選色傳柱中的填料為大孔樹 脂、凝膠或聚酰胺；用水、醇-水溶液或醇或丙酮-水進(jìn)行洗脫，優(yōu) 選洗脫劑為水，乙醇、甲醇或丙酮及其水溶液；收集并合并含有丹酚 酸A的級(jí)份，干燥(優(yōu)選減壓或真空或冷凍干燥)，得富含丹酚酸A 的丹參提取物。
根據(jù)本發(fā)明的制備丹參提取物的方法，用水或有機(jī)溶劑提取，主 要是充分提取出丹酚酸類成分，提取液濃縮后用乙醇進(jìn)行沉淀，去除 一些醇不溶性雜質(zhì)；保溫的作用是在溫和的反應(yīng)條件下，將一些其它 酚酸類成分轉(zhuǎn)化成丹酚酸A，使丹酚酸A的收率明顯提高；調(diào)節(jié)PH值 后，用有機(jī)溶劑萃取，進(jìn)一步去除非酚酸類的水溶性雜質(zhì)，使下一步 的色譜分離樣品更加純化，減少對(duì)色譜柱的污染，延長(zhǎng)色譜柱的壽命， 并且保證得到富含丹酚酸A的丹參提取物樣品。經(jīng)過上述提取分離， 丹酚酸A的含量大于50%，工藝簡(jiǎn)單，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明還涉及一種富含丹酚酸A的制劑，其中含有按照本發(fā)明的 方法制備的富含丹酚酸A的丹參提取物，所述制劑為片劑、注射劑、 膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊、口月艮液、滴丸或眼用制劑等藥物制劑形式。
本發(fā)明中檢測(cè)丹酚酸A的含量的方法采用高效液相色譜法，以丹 酚酸A對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。
在本發(fā)明中，測(cè)定丹酚酸A的高效液相方法如下
照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄V )測(cè)定。
色語條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 流動(dòng)相甲醇-0. 4%醋酸水溶液(50: 50 );流速1. Oml/min;檢測(cè) 波長(zhǎng)286nm;理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)不低于3000。
丹酚酸A對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A對(duì)照品，加甲醇
6制成每lml含丹酚酸AO. 2mg的溶液。
供試品溶液的制備精密稱取樣品lOmg置于50ml量瓶中，加甲 醇溶解并稀釋至刻度，即得。
測(cè)定分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 Ml,注 入液相色鐠儀，計(jì)算，得到樣品中丹酚酸A的含量。
具體實(shí)施例方式
下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備
取丹參飲片或粗粉，加IO倍量水回流提取3次，過濾，合并濾液， 減壓濃縮至比重為1.2，加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至醇濃度達(dá)到 60%,靜置24小時(shí)，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，70。C保溫 24小時(shí)，取出，放置至室溫，用1M鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3,用等量的乙 酸乙酯萃取3次，合并萃取液，減壓回收乙酸乙酯至干，得干浸骨， 干浸骨用10%乙醇溶解，上大孔樹脂HP-20 (日本三菱抹式會(huì)社)， 分別用10%、 30%、 50%、 70%乙醇洗脫，用高效夜相色譜儀進(jìn)行監(jiān) 測(cè)，收集含有丹酚酸A的組份，減壓干燥，既得，經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A 含量為62. 36 %。
實(shí)施例2.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備
與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是大孔樹脂改為Sephadex LH20。經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為90. 41%。
實(shí)施例3.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備
與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是大孑UN"月旨改為聚,，經(jīng) 測(cè)定，丹酚酸A含量為82. 55 % 。
實(shí)施例4.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備
與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是保溫溫度改為8ox:，保 溫時(shí)間改為20小時(shí)，經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為71. 72%。
實(shí)施例5.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備
與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是萃取所用的溶劑改為乙酸丙酯，經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為75. 18%。
實(shí)施例6，富含丹酚酸A的丹參提取物的制備 -與實(shí)施例2基本相同，所不同的是萃取所用的溶劑改為乙酸丙酉旨， 經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為71.47%。
實(shí)施例7.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備 與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是提取改用50%的乙醇水 溶液進(jìn)行滲漉，經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為61.20%。 實(shí)施例8.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備 與實(shí)施例1的方法基本相同，所不同的是醇沉改用0.2%ZTC1+1 澄清劑，經(jīng)測(cè)定，丹酚酸A含量為91.26%。
實(shí)施例9.富含丹酚酸A的丹參提取物的制備 與實(shí)施例2基本相同，所不同的是干燥方法改為冷凍千燥，經(jīng)測(cè) 定，丹酚酸A含量為91. 82%。
實(shí)施例IO富含丹酚酸A的丹參提取物片劑處方 丹酚酸A(實(shí)施例2) 10g 淀粉 40g 微晶纖維素 49. 3g
亞硫酸氫鈉 0. 2g
硬脂酸鎂 0. 5g
制成 1000片
將上述組分混勻后，過篩，壓片，既得。 實(shí)施例11富含丹酚酸A的丹參提取物片劑處方 丹酚酸A(實(shí)施例2) 10g 淀粉 40g 微晶纖維素 50g 焦亞硫酸氫鈉 0. 5g
硬脂酸鎂 0. 5g
無水乙醇 適量 制成 1000片取丹酚酸A與淀粉、微晶纖維素、焦亞硫酸氫鈉混合均勻，加無 水乙醇制成軟材，過24目篩，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻， 壓片。
實(shí)施例12富含丹酚酸A的丹參提取物片劑處方 丹酚酸A(實(shí)施例1) 20g
乳糖 40g
微晶纖維素 39 g
焦亞硫酸氫鈉 0.5 g
硬脂酸鎂 0. 5g
無水乙醇 適量
制成 1000片
取丹酚酸A與乳糖、微晶纖維素、焦亞硫酸氫鈉混合均勻，加無 水乙醇制成軟材，過24目篩，制成顆粒，千燥，加入硬脂酸鎂，混勻， 壓片。
實(shí)施例13富含丹酚酸A的丹參提取物注射劑處方
丹酚酸A(實(shí)施例1) 20g
亞石克酸氬鈉 0. 2g
甘露醇 80g
注射用水 1000ml 上述組分混合，采用常用粉針劑常規(guī)制備方法，冷凍千燥，既得。
實(shí)施例114富含丹酚酸A的丹參提取物滴眼劑處方
丹酚酸A(實(shí)施例2)20g
亞石克酸氫鈉2g
玻璃酸鈉lg
磷酸二氫鈉7.2g
磷酸氫二鈉0. 947g
注射用水1000ml
上述組分混合，過濾，既得。實(shí)施例15富含丹酚酸A的丹參提取物滴眼劑處方
丹酚酸A(實(shí)施例1) 20g
亞硫酸鈉 0.6g
聚乙二醇8000 279. 4g
制成 1000粒
上述組分混合，融溶，滴入液體石蠟，選丸，除去液體石蠟，既得。
以上實(shí)施例僅是為了對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體的說明，而本發(fā)明的 范圍不受所舉實(shí)施例的局限。
權(quán)利要求
1. 一種制備富含丹酚酸A的丹參提取物的方法，所述方法包括以下步驟步驟(1). 向丹參飲片或初粉中加入適量的提取溶劑進(jìn)行回流提取或滲漉；過濾，得提取液，將提取液濃縮；加乙醇，邊加邊攪拌，至達(dá)醇濃度為40～90％(優(yōu)選50-80％，更優(yōu)選60-70％)，放置，使沉淀靜置，取上清液，濃縮，得濃縮液；或在一定溫度下，加入澄清劑，攪拌，過濾，將濾液濃縮，得濃縮液。步驟(2). 將濃縮液在40℃～100℃(優(yōu)選50-90℃，更優(yōu)選60-80℃)的溫度下保溫6～72小時(shí)(優(yōu)選10-60小時(shí)，更優(yōu)選20-50小時(shí))。步驟(3). 將上述保溫后的溶液用酸調(diào)節(jié)PH值為1～6(優(yōu)選2-5，更優(yōu)選2.5-4)；用有機(jī)溶劑萃取，得萃取液，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯；回收有機(jī)溶劑，得萃取物。步驟(4). 將上述萃取物用溶劑溶解；經(jīng)色譜柱吸附，優(yōu)選色譜柱中的填料為大孔樹脂、凝膠或聚酰胺；洗脫；收集并合并含有丹酚酸A的組份，干燥，得富含丹酚酸A的丹參提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(l)中所述提 取溶劑優(yōu)選為水、堿水溶液、甲醇、乙醇、丙酮或者它們的混合溶液， 提取溶劑用量為丹參重量的4 ~ 15倍(優(yōu)選6 - 12倍，更優(yōu)選8 - 10倍)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(l)中所述的 將提取液濃縮使得濃縮液的比重為1~1. 3 (優(yōu)選1.1-1.25)。
4，根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(l)中所述的澄清劑為 酸(優(yōu)選醋酸、鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、酒石酸、枸櫞酸、乳酸等 等，更優(yōu)選醋酸、鹽酸)、曱殼素類，明膠，101果汁澄清劑，ZTC1+1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求5中所述的方法，其特征在于澄清劑的濃度為0. 1 % ~ 20% ，優(yōu)選3 - 10% 。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(3)中調(diào)節(jié)PH值時(shí)采用的酸優(yōu)選為醋酸、鹽酸、硫酸、磷酸、曱磺酸、酒石酸、枸櫞酸、 乳酸等等，更優(yōu)選醋酸、鹽酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(4)中溶解萃取物時(shí) 采用的溶劑為水、堿水溶液、甲醇、乙醇、丙酮或者它們的混合溶液； 所述洗脫劑為水，乙醇、甲醇或丙酮或其水溶液；所述的干燥為減壓干 燥、真空干燥或冷凍干燥。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2或7所述的方法，其特征在于所述堿水溶液為 碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水的水溶液，濃度為約0. 1 -2%，優(yōu)選O. 2-1. 5%。
9. 按照權(quán)利要求1 - 8任一項(xiàng)所述的方法獲得的富含丹酚酸A的丹 參提取物。
10. —種富含丹酚酸A的制劑，其中含有根據(jù)權(quán)利要求l _ 8任一項(xiàng)制 備的富含丹酚酸A的丹參提取物，所述制劑為片劑、注射劑、膠囊劑、 顆粒劑、軟膠嚢、口服液、滴丸或眼用制劑等藥物制劑形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從中藥丹參中提取富含丹酚酸A的丹參提取物的方法。本發(fā)明將丹參粗提液用乙醇沉淀去除一部分雜質(zhì)，再進(jìn)行保溫轉(zhuǎn)化，可以提高中間產(chǎn)物中丹酚酸A的含量，然后進(jìn)行有機(jī)溶劑萃取，進(jìn)一步去除水溶性雜質(zhì)，最后經(jīng)過色譜分離，使丹酚酸A含量達(dá)到50％以上，甚至達(dá)到90％以上，工藝簡(jiǎn)單合理，提高了產(chǎn)率。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101480423SQ20081000090
公開日2009年7月15日 申請(qǐng)日期2008年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月7日
發(fā)明者曄 劉, 揚(yáng) 呂, 崔志萍, 猛 張, 杜冠華, 楊秀穎, 趙立敏, 穎 郭, 陳明霞 申請(qǐng)人:北京科萊博醫(yī)藥開發(fā)有限責(zé)任公司;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所