專利名稱：一種注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種注射用胸腺肽a Jl釋微球制劑，屬藥物領(lǐng)域。
技術(shù)背景胸腺肽a t (thymosin a"簡(jiǎn)稱T a》是一種具有免疫功能的多肽臨床上多用于治療病毒性肝炎，其氨基酸序列為A C-Ser- A sp- A 1 a - A 1 a -V a 1- A sp-Thr-Ser-SerH^lu-lie-Thr-Thr-Lys- A sp-Leu-lys^Glu-Lys-Lys~Glu-V a 1-V a l""Glu~Glu- A1 a ~Glu- A sn—-OH分子式C129H215N33055—分子量3108.37現(xiàn)有T ci,制劑由于半衰期短治療時(shí)間長(zhǎng)需要頻繁給藥，病人順應(yīng)性較差 而且生物利用度低等缺點(diǎn)。目前關(guān)于胸腺肽a,微球的報(bào)道較多，如何熠等，胸腺肽聚乳酸微球的 制備和釋藥性能研究，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006， 37 (3)，公開了用乳化溶劑 揮發(fā)法制備胸腺肽聚乳酸微球，其中以聚乙交酯-丙交酯(PLGA)為載體， 以乳化揮發(fā)法制備的微球。鄒良等，胸腺肽明膠微球的制備和體外釋藥的特征， 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志2004年第24巻第9期，公開了一種胸腺肽的明膠微球。用 乳化交聯(lián)法制備的胸腺肽明膠微球，以藥物A型明膠為囊材。張海松、陳陽(yáng) 述，胡軍高，等，口服胸腺微球的研究，中國(guó)藥房，1999、 10 (2); 58;專利 申請(qǐng)?zhí)?00310119386.X公開了一種利用PLGA (聚乙丙交酯)提取、合成胸 腺肽微囊緩釋針的方法。它是以PLGA為有機(jī)相，將胸腺肽溶解于水量水中， 制成內(nèi)層水相，再將束殼材料PLGA溶解在有機(jī)溶液中，制成有機(jī)相；在高 速攪拌下使內(nèi)層水相分散在有機(jī)相中，形成油包水型乳液，再加入含有分散劑 的外層水相中，攪拌下形成雙層乳液，制成水/油/水復(fù)乳液；最后在攪拌下使 有機(jī)溶劑揮發(fā)并使聚合物層固化，形成固體的微球，胸腺肽包裹在微球中。朱 艷等，微球制劑條件下胸腺肽CM的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005年， 26 (5)，報(bào)道了囊球制劑工藝條件下胸腺肽(M的穩(wěn)定性。采用HPLC，研究 胸腺肽a i在不同溫度(-2(TC，6-8'C,60。C)，不同的超聲時(shí)間(10-60s)及不同的 pH值(4.0、 7.0、 IO.O)條件下的穩(wěn)定性。朱艷等，胸腺肽(M微球的制備及其 評(píng)價(jià)，藥學(xué)服務(wù)與研究，2005， 5 (3)，公開了胸腺肽(M微球的制備及評(píng)價(jià)方法。其中以聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PLGA)為載體材料，采用復(fù)乳法 (Wo/w)制備胸腺肽a ,長(zhǎng)效注射微球，考察其粒徑大小，外觀、包封率等理 化性質(zhì)；采用RP-HPLC法測(cè)定微球中胸腺肽a ,的含量。胸腺肽a,原料藥較昂貴，lg的售價(jià)約為8000元人民幣。在胸腺肽a,微球 包封率較低的情況下，大量胸腺肽ar溶解在水中，造成巨大的浪費(fèi)和成本的 提高；所以此時(shí)，微球包裹技術(shù)的一個(gè)重要指標(biāo)是高的包封率。胸腺肽a,的半衰期短，需要頻繁的給藥，上述技術(shù)公開了各種完全釋放 時(shí)間為1 3個(gè)月的長(zhǎng)效緩釋制劑，可以滿足部分患者的需要，使治療更加方便。 但是由于臨床上疾病的復(fù)雜和多樣化常常會(huì)出現(xiàn)各種不同的需求。如ICU(重 癥監(jiān)護(hù)室)內(nèi)的病人，常常需要使用胸腺肽a,等免疫增強(qiáng)劑的治療；但是由 于抗生素等藥物的大量使用，部分患者極有可能會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏、皮疹等變態(tài)反應(yīng)， 此時(shí)再使用胸腺肽a ,等免疫增強(qiáng)劑將不利于患者疾病的進(jìn)一步治療；尤其是 當(dāng)這些變態(tài)反應(yīng)是難以耐受時(shí)，除了使用抗過(guò)敏藥物以外，需要停止免疫增強(qiáng) 劑胸腺肽a ,的免疫上調(diào)作用。又如正在使用胸腺肽a ,等免疫增強(qiáng)劑的患者， 不可預(yù)知的出現(xiàn)了強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)時(shí)，為防止器官和組織受到嚴(yán)重的損傷，保護(hù) 器官和組織的功能，需要抑制免疫細(xì)胞的增殖和分化；若患者之前接受了持續(xù) 釋放3個(gè)月的長(zhǎng)效胸腺肽a i微球制劑的治療，此時(shí)將難以控制炎癥反應(yīng)的進(jìn)程，患者的組織器官有可能受到不可逆轉(zhuǎn)的損傷。再如感染病毒性皰疹的患 者，有時(shí)只需使用一個(gè)月以內(nèi)的免疫增強(qiáng)調(diào)節(jié)時(shí)間。因此， 一種釋放時(shí)間適當(dāng)， 如持續(xù)釋放10 15天，或者10 25天的胸腺肽d i微球緩釋制劑在臨床上具有 巨大的需求空間。通常經(jīng)PLGA制備的胸腺肽a ,微球，其釋放時(shí)間為1 3個(gè)月(見(jiàn)上述文獻(xiàn))， 此時(shí)的PLGA粘度較大。若要實(shí)現(xiàn)10 15天或10 25的較短釋放效果，需降低 PLGA的粘度，但粘度的降低必然伴隨包封率的降低，大量昂貴的胸腺肽cn將 流失在水中，造成巨大的浪費(fèi)和成本的升高。如何將經(jīng)PLGA包封的胸腺肽(M 微球釋放時(shí)間控制在10 25天的相對(duì)較短范圍內(nèi)，同時(shí)又保持高的包封率，節(jié) 省制造成本，并為臨床提供多樣化、急需的緩釋胸腺肽ci,制劑，滿足中等緩 釋時(shí)間的需求，是廣大藥劑工作者一直希望解決的難題。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種能夠均勻、穩(wěn)定的在10 20內(nèi)釋放完全 的胸腺肽a i緩釋微球制劑，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了胸腺肽(i ^夷釋微 球制劑的制備方法。本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑，它是由微球重量的 0. 5% 10%的胸腺肽0 ,和微球重量的70。/。 99. 5%的可降解的分子量為5，000 500， 000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0% 10%的其它藥學(xué)上可 接受的輔料制備而成的制劑。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚 羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種以上的混合物。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、聚乳酸、聚乙烯醇、聚乙 二醇、羥基乙酸、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇中的一種 或兩種以上的混合物。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 400， 000 道爾頓，重量百分含量為78% 99.5%。更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 300， 000 道爾頓。其中，藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯，所述的聚乙交酯-丙交酯分 子量為5， 000 500， 000道爾頓，乙交酯和丙交酯比例為50 : 50,特性粘度 范圍為0. 15dl/g 0. 90dl/g。聚乙交酯-丙交酯由于無(wú)毒、安全及良好的物理化學(xué)性質(zhì)廣泛用于藥物微 球的制備；經(jīng)它包裹制備的微球，大量文獻(xiàn)報(bào)道的釋放時(shí)間為1 3個(gè)月，屬 于長(zhǎng)效釋放制劑。PLGA為高分子物質(zhì)，其特定粘度對(duì)應(yīng)特定的分子量；本領(lǐng) 域技術(shù)人員可以很方便的查詢粘度與分子量的對(duì)照表。其中，所述的藥用高分子輔料聚乙交酯-丙交酯分子量為10， 000 400， 000道爾頓，乙交酯和丙交酯比例為50: 50，特性粘度范圍為0. 30dl/g 0.90dl/g。所述的聚乙交酯-丙交酯是由兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯進(jìn)行混合 后使用，低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1:0.5 3。其中，所述 低粘度為"0.3 0.65dl/g，高粘度為0.5 0.9dl/g"。每次使用時(shí)，均選用 兩種不同粘度的PLGA，當(dāng)次粘度高的稱為高粘度PLGA，當(dāng)次粘度低的稱為低粘度聚乙交酯-丙交酯。進(jìn)一步優(yōu)選地，低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯重量比為1 : 1 2。所述 特性粘度范圍為0. 30dl/g 0. 90dl/g。所述低高粘度聚乙交酯-丙交酯重量比 為1 : 1、 1 : 1. 5、 1:2、 1 : 1. 8、 1:1. 7.本發(fā)明緩釋微球是由總投料量的1.5%的胸腺肽(11、占總投料量2.4%的 PEG-6000和占總投料95. 9%的聚乙交酯-丙交酯(0. 65dl/g:0. 89dl/g:l :1.7) 分別投料制備w/o微球，再在PVA的濃度為2%， NaCl的濃度為2%的水溶液中 制備完成w/o/w的微球.其中，所述的緩釋微球的粒徑為1 200um平均粒徑20 150ura。優(yōu)選粒徑為1 150um平均粒徑32. 5 86. 3um。 所述的制劑為皮下注射或肌肉注射制劑。 其中，所述的制劑為皮下注射制劑。本發(fā)明還提供了一種制備注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑的方法，包括如 下步驟.-第一步，首先用有機(jī)溶劑將可降解的輔料溶解成油相，然后將另外溶有胸 腺肽a !的內(nèi)水相加入其中，將油相和水相置與攪拌器內(nèi)，以每分鐘2000 3000 轉(zhuǎn)高速攪拌5 8分鐘，形成w/o乳液，之后將w/o乳液滴加入到0-8"C的冰 浴1%--5%的PVA的外水相中形成W/0/W復(fù)乳攪拌3-5分鐘；第二步，將上述所得W/0/W復(fù)乳中再加入含1-5%的PVA、含l 5%NaCl 水溶液，在每分鐘400-700轉(zhuǎn)的低速攪拌下?lián)]發(fā)有機(jī)溶劑；微球固化后，過(guò)濾， 濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、干燥即得微球。其中形成有機(jī)相的有機(jī)溶劑為具有足夠揮發(fā)性、低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑，例如 可以選自二氯甲垸、三氯甲垸、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、乙醇中的一種或其中 的兩種或兩種以上的混合物。上述可降解輔料在有機(jī)溶劑中的濃度優(yōu)選為 10 1000mg/tnl。內(nèi)水相，用明膠、甘露醇、聚乙二醇等水溶液溶解制成胸腺肽c^的水溶 液，使胸腺肽a ,在水相的濃度達(dá)到10 500mg/ml。外水相采用聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸鈉、氯化鈉水溶液 中的一種或兩種，濃度為0.5% 15% (w/v)。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)注射用胸腺肽a ^緩釋微球的降解產(chǎn)物及含量的 方法，采用高效液相色譜法，其色譜條件為色譜柱C18 (300A， 4.6X250mm) 流動(dòng)相是PH7.0磷酸鹽緩沖溶液-異丙醇(體積比95 : 5)，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm進(jìn) 樣體積20pl。本發(fā)明處方工藝制備的注射用胸腺肽a i微球均為流動(dòng)性良好的白色粉 末，平均粒徑在20 100um左右，跨距在0. 1 2.0之間藥物，包封率〉85°/0 以上，突釋程度〈20°/0。為了將本發(fā)明的胸腺肽a ,的注射用緩釋微球制成成品注射劑，在制成微 球后還應(yīng)予以滅菌，本發(fā)明的胸腺肽a i的緩釋微球可以采用無(wú)菌操作的滅菌 方法和6°Co Y射線放射源進(jìn)行輻射滅菌方法，優(yōu)選無(wú)菌操作的滅菌方法。本發(fā)明注射用胸腺肽a >的緩釋微球是將制備好的微球無(wú)菌粉末在無(wú)菌的 0. 1 1.0%羧甲基纖維素鈉，1.0 5.0的甘露醇，0.01 0.05聚山梨酯-80溶 液中混懸，均勻后經(jīng)皮下或肌注給藥，每10天給藥一次，每15天給藥一次， 每30天給藥一次。本發(fā)明胸腺肽a i緩釋微球制劑優(yōu)選用聚乙交酯-丙交酯包封，為滿足臨床需求提供了一種重要的選擇；按照本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容制備的胸腺肽a,微球，具 有包封率高、釋放穩(wěn)定、均勻的特點(diǎn)?？山档托叵匐腶i的毒副作用，提高生 物利用度，同時(shí)減少給藥次數(shù)，方便患者用藥。通過(guò)大量的試驗(yàn)證明，按照特 定的比例綜合利用兩種或幾種粘度的聚乙交酯-丙交酯的特性，達(dá)到了一種突 釋率低，包封率90%以上，胸腺肽a 1在10 — 25天內(nèi)平穩(wěn)釋放完全的微球制劑， 為胸腺肽a ,的臨床應(yīng)用提供了一種新的選擇。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)和慣用手段，在不 脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換 或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的 詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基 于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。說(shuō)明書附1:實(shí)施例1所制注射用緩釋微球樣品掃描電鏡圖 圖2:實(shí)施例1所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖3:實(shí)施例2所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖4:實(shí)施例3所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖5:實(shí)施例4所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖6:實(shí)施例5所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖7:實(shí)施例6所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖8:實(shí)施例7所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖 圖9:實(shí)施例8所制注射用緩釋微球樣品體外釋放度曲線圖

圖10:采用單一 (0.30dl/g)粘度的聚乙交酯-丙交酯微球樣品的體外釋 放曲線圖具體實(shí)施方式
通過(guò)以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明所述注射用胸腺肽a ,緩釋 微球的制備方法、粒徑控制、突釋情況、緩釋效果、及微球載藥量和包封率的 測(cè)定(包封率9^實(shí)際測(cè)定Ta,量+ T(^投料量X10(m)。其中，聚乙交酯-丙交 酯特性粘度如"0.45dl/g:0.89dl/g=2:3"中，2:3表示重量比。實(shí)施例中均 按此寫法描述。實(shí)施例中的微球載藥量和包封率的測(cè)定試驗(yàn)方法精密稱取制備的微球12mg到10ml的具塞離心試管中，加入二 氯甲垸0.5ml，渦旋溶解，再加入2.5ml的PH7. 4的緩沖液渦旋萃取3分鐘2000r/m離心10min收集全部上清液，再向離心試管加入2. 5ml緩沖液同法操 作，合并兩次的上清液，進(jìn)樣HPLC 20ul.計(jì)算藥物含量和包封率。高效液相色譜法其色譜條件為色譜柱C18 (300A， 4. 6X250mm)流動(dòng)相 是PH7.0磷酸鹽緩沖溶液-異丙醇(體積比95 : 5)，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm進(jìn)樣體積 20yl。其余按常規(guī)進(jìn)行。微球粒徑的測(cè)定試驗(yàn)樣品實(shí)施例中制備的微球試驗(yàn)儀器Ma stersizer2000試驗(yàn)方法將制備的干燥的微球粉末用1000ml的蒸餾水分散，用 Ma stersizer2000測(cè)定，得粒徑分布。本發(fā)明緩釋微球輔料中聚乙交酯-丙交酯的乙交酯和丙交酯比例選擇試驗(yàn)市售的聚乙交酯-丙交酯PLGA有PLGA (50 : 50)、 PLGA (65 : 35)、 PLGA (75 : 25)、 PLGA (85 : 15)，降解時(shí)間PLGA比例505065 : 3575:2585:15降解時(shí)間(天)30 6090 120120 150150 180本發(fā)明優(yōu)選的PLGA為PLGA (50 : 50)。以下通過(guò)具體實(shí)施例說(shuō)明在上述選擇范圍內(nèi)，均能達(dá)到本發(fā)明的有益效果。實(shí)施例1:復(fù)乳-液中干燥法制備的注射用胸腺肽a i緩釋微球 將100mg的胸腺月太a l 0. 7g的PEG-6000溶于6 ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖 液中，6g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50)(特性粘度 0.45dl/g:0. 55dl/g=2:3)和溶于130ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5-8min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到1000ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度 700r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入1500ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m，攪拌4 小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥4天，得流動(dòng)性較 好的白色粉末，包封率92. 1%，微球粒徑1 120iim微球平均粒徑36.4iim， 外觀圓整。實(shí)施例2:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽ct t的緩釋微球 將lOOmg的胸腺肽a丄5g的甘露醇溶于6ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中， 6 g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50 ，特性粘度 0,35dl/g:0.89dl/g=l:3)溶于130ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5-8min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到1000ml的冰浴的含2%PVA、 P/。NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入1500ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時(shí) 間4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較 好的白色粉末，包封率90. 2%，微球粒徑l 104pm，微球平均粒徑32. 5lim， 外觀圓整。實(shí)施例3:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a t的緩釋微球 將500 mg的胸腺肽a ,溶于20ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，33g的聚 乙交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 80dl/g=l: 1) 和PEG-6000 3g溶于600ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2000r/m作用下 將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液 倒入到4000ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m,時(shí) 間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時(shí)間5小時(shí)， 揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較好的白色粉 末，包封率92.6%，微球粒徑l 120um，微球平均粒徑86.3，外觀圓整。 實(shí)施例4:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a (的緩釋微球 將500mg的胸腺肽a t、5g的甘露醇溶于21ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中， 32. 5g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50 ，特性粘度 0.65dl/g:0.80dl/g=l:2)溶于300ml 二氯甲垸中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速 2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5min得w/o乳液， 將w/o乳液倒入到2500ml的冰浴的含2%PVA、 l%NaCl外水相溶液中攪拌速度 700r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入2000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時(shí) 間4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較 好的白色粉末，包封率93.2%，微球粒徑1-126um，微球平均粒徑67. 8 " m， 外觀圓整。實(shí)施例5:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a i的緩釋微球 將100mg的胸腺肽a!溶于6ml的水中，10g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯 :丙交酯二50 : 50，特性粘度0.65dl/g:0. 89dl/g二l:1.8)和PEG-6000 3g溶 于120ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2000r/m作用下將水相倒入到油相 中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到3500ml的冰浴 的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m,時(shí)間2-3分鐘，再加入 1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m撹拌時(shí)間4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽 濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較好的白色粉末，包封率94.7%， 微球粒徑1-150um，微球平均粒徑55.4ym，外觀圓整。實(shí)施例6:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將100mg的胸腺肽a ,溶于6ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，10. 5g的聚 乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯二50 : 50 ，特性粘度0. 65dl/g:0. 89dl/g=l:0. 5)和PEG-6000 3. 2g溶于120ml 二氯甲烷中，在高 剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化 5min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到3500ml的冰浴的含2%PVA、 1. 5%Na cl 外水相溶液中攪拌速度700r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液， 攪拌速度550r/m攪拌時(shí)間4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次， 冷凍干燥，得流動(dòng)性較好的白色粉末，包封率91.2%，微球粒徑1-150um，微 球平均粒徑62. 3 u m，外觀圓整。實(shí)施例7:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將1. 55g的胸腺肽a i溶于57ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，90g的聚乙 交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 89dl/g二l: 1. 7) 和PEG-6000 2.25g溶于700ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速3500r/m作 用下將水相倒入到油相中，3500r/m轉(zhuǎn)速下乳化8min得w/o乳液，將w/o乳 液倒入到101的冰浴的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時(shí)間 2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度700r/m攪拌時(shí)間4小時(shí)， 揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較好的白色粉 末，包封率98.6%，微球粒徑1-150 um，微球平均粒徑76. 3 u m，外觀圓整。 實(shí)施例8:復(fù)乳-液中干燥法制備注射用胸腺肽a ,的緩釋微球 將200mg的胸腺肽a ,溶于12ml的PH7. 4的磷酸鹽緩沖液中，12g的聚乙 交酯-丙交酯(乙交酯:丙交酯二50 : 50，特性粘度0. 65dl/g:0. 90dl/g=2:3) 和PEG-6000 0. 3g溶于102ml 二氯甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2500r/m作用 下將水相倒入到油相中，2500r/m轉(zhuǎn)速下乳化5min得w/o乳液，將w/o乳液 倒入到3500ml的冰浴的含2%PVA、 2%NaCl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時(shí) 間2-3分鐘，再加入1000ml的外水相溶液，攪拌速度550r/m攪拌時(shí)間4小時(shí)， 揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥，得流動(dòng)性較好的白色粉 末，包封率96.2%，微球粒徑1-150um，微球平均粒徑48. 3 u m，外觀圓整。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的篩選試驗(yàn)及對(duì)平均粒徑、包封率、突釋影響的極差分 析發(fā)現(xiàn)內(nèi)水相胸腺肽a 1的濃度、PLGA的濃度、攪拌速度、乳化強(qiáng)度、NaCl 濃度及其內(nèi)外水相的比例對(duì)包封率、微球圓整度、微球粒徑大小和釋放度有決 定性影響。當(dāng)采用本發(fā)明所述優(yōu)選的輔料及工藝流程制備微球時(shí)可以實(shí)現(xiàn)10 25天 的持續(xù)釋放效果。以下通過(guò)體外釋放度試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。 試驗(yàn)例1:注射用胸腺肽a ,的緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0.2%吐溫80 PH7.4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。 試驗(yàn)條件溫度37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法:精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T h含量)取樣時(shí)間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為8.9。/。， 10天累 積釋放94.5%，體外釋放度圖見(jiàn)圖2。另附實(shí)施例1制備的注射用緩釋微球 樣品掃描電鏡圖，見(jiàn)圖1。試驗(yàn)例2:胸腺肽a !的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2所述的方法制備的樣品。試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。試驗(yàn)條件溫度37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 ffl7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T c^含量)取樣時(shí)間0.5h、 ld、3d 、5d 、 7d 、 10d。試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為12.6%, 10天 累積釋放96. 3%，體外釋放度圖見(jiàn)圖3。試驗(yàn)例3:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。 試驗(yàn)條件溫度37°C±0.5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2°/。吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T a,含量)取樣時(shí)間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為6， 8%， 10天累積釋放97.9%，體外釋放度圖見(jiàn)圖4。試驗(yàn)例4:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例4所述的方法制備的樣品。試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。試驗(yàn)條件溫度** 37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T a,含量)取樣時(shí)間0. 5h、 ld、 3d 、 5d 、 7d 、 10d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為5. 6%， 10天累 積釋放95. 8%，體外釋放度圖見(jiàn)圖5。試驗(yàn)例5:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例5所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。 試驗(yàn)條件溫度37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T q含量)取樣時(shí)間0. 5h、 ld、 5d 、 7d 、 10d、 15d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為3. 2%， 15天累 積釋放95. 5%，體外釋放度圖見(jiàn)圖6。試驗(yàn)例6:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例6所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0.2%吐溫80 PH7.4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。試驗(yàn)條件溫度37°C±0.5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T a,含量)取樣時(shí)間O. 5h、 ld、 5d 、 7d 、 10d、 15d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0.5h釋放度為8.9。/。， 15天累 積釋放94. 5%，體外釋放度圖見(jiàn)圖7。試驗(yàn)例7:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例7所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。 試驗(yàn)條件溫度37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ml釋放介質(zhì)(含0.2y。吐溫80PH7.4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T a,含量)取樣時(shí)間0. 5h、 ld、 5d 、 10d、 15d、 21d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為4. 5%， 21天累 積釋放97. 1%，體外釋放度圖見(jiàn)圖8。試驗(yàn)例8:胸腺肽a ,的注射用緩釋微球體外釋放度試驗(yàn)。 試驗(yàn)樣品根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例8所述的方法制備的樣品。 試驗(yàn)試劑含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液試驗(yàn)儀器水浴恒溫振蕩器、離心機(jī)。 試驗(yàn)條件溫度37°C±0. 5°C試驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約12mg置于10ml的具塞離心試管中，加 5ral釋放介質(zhì)(含0. 2%吐溫80 PH7. 4的磷酸鹽緩沖液)，置于水浴恒溫振蕩器 中保持一定的溫度按時(shí)取樣。取樣方法離心、棄取上清液、干燥48h，按含量測(cè)定方法測(cè)定剩余固體 的含量。(0.5h直接測(cè)定水溶液中T CM含量)取樣時(shí)間O. 5h、 ld、 5d 、 10d、 15d、 21d試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明所制備的微球體外釋放度0. 5h釋放度為6. 1%， 21天累 積釋放96.8%,體外釋放度圖見(jiàn)圖9。 試驗(yàn)例9穩(wěn)定性對(duì)比試驗(yàn) a、采用單一的低粘度的PLGA制備微球?qū)?00mg的胸腺肽a 1溶于6. 25ml的水中，8g的聚乙交酯-丙交酯(乙交酯丙交酯=50 : 50)(特性粘度0. 30dl/g)和0. 3g甘露醇溶于110ml 二氯 甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m 轉(zhuǎn)速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到15ml的冰浴的2%PVA、 2%Na Cl外水相溶液中攪拌速度500r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入1500ml的外水 相溶液,攪拌速度550r/m攪拌4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3 次，冷凍干燥4天，得流動(dòng)性較好的白色粉末。結(jié)果包封率59.8%，包封率不 高造成極大的浪費(fèi)，1天釋放度達(dá)60%，完全釋放時(shí)間為10天。突釋現(xiàn)象嚴(yán) 重。見(jiàn)圖10。b、試驗(yàn)例二采用單一的高粘度的PLGA制備微球?qū)OOmg的胸腺肽a 1溶于6. 25ml的水中，8g的聚乙交酯-丙交酯(乙 交酯丙交酯二50 : 50)(特性粘度0. 89dl/g)和0. 3g甘露醇溶于110ml 二氯 甲烷中，在高剪切乳勻機(jī)轉(zhuǎn)速2000r/m作用下將水相倒入到油相中，2500r/m 轉(zhuǎn)速下乳化5-8min得w/o乳液，將w/o乳液倒入到15ml的冰浴的2%PVA、 l%Na Cl外水相溶液中攪拌速度700r/m，時(shí)間2-3分鐘，再加入1500ml的外水 相溶液，攪拌速度550r/m攪拌4小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，抽濾，用蒸餾水洗滌3 次，冷凍干燥4天，得流動(dòng)性較好的白色粉末。結(jié)果包封率67.3%，包封率 不高造成極大的浪費(fèi)且釋放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。按照本文中提供的實(shí)驗(yàn)方法，同等條件下，采用單一粘度聚乙交酯-丙交 酯時(shí)釋放時(shí)間和包封率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示.-PLGA粘度(dl/g)0.250.300.550.800.95包封率％5562658586釋放時(shí)間(天)1010123040上述試驗(yàn)可知，單一采用較高粘度的聚乙交酯-丙交酯，可以實(shí)現(xiàn)提高微球包封率，載藥量，也沒(méi)有突釋問(wèn)題的存在，但釋放的時(shí)間長(zhǎng)；單一采用較低 粘度的聚乙交酯-丙交酯包封后，釋放完全的時(shí)間較短，但包封率不高、載藥 量低，突釋現(xiàn)象較嚴(yán)重。與混合不同濃度的普通小分子材料的溶液后，能得到一種穩(wěn)定濃度的均一 體系不同；采用兩種或幾種粘度的聚乙交酯-丙交酯按照一定的比例混合，可 以形成具有特性粘度特征、特定物理化學(xué)性質(zhì)的混合物；由于構(gòu)成不同粘度的 聚乙交酯-丙交酯高分子物質(zhì)的聚合物本身的分子構(gòu)成是不同的，同時(shí)高分子 物質(zhì)具有分子量大，分子空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜的因素，上述混合物與僅僅按照數(shù)學(xué)平 均計(jì)算得到的單一均值濃度的聚乙交酯-丙交酯溶液的物理化學(xué)特征是完全不 同的，并可導(dǎo)致包封效果的明顯差異和穩(wěn)定效果的差異，通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果可知， 采用兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯混合，包封率均在92%以上，且能在10 一25天內(nèi)平穩(wěn)、完全釋放藥物。
權(quán)利要求
1、一種注射用胸腺肽α1緩釋微球制劑，其特征在于它是由微球重量的0.5％～10％的胸腺肽α1和微球重量的70％～99.5％的可降解的分子量為5，000～500,000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0％～10％的其它藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑；所述的藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種以上的混合物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用胸腺肽a J愛(ài)釋微球制劑，其特征在于 所述的藥用高分子輔料的分子量為10， 000 400， 000道爾頓，重量百分含 量為78% 99. 5%。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑，其特征 在于藥用高分子輔料選自聚乙交酯-丙交酯，其中，乙交酯和丙交酯比例為 50 : 50，特性粘度范圍為0. 15dl/g 0. 90dl/g。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的注射用胸腺肽cii緩釋微球制劑，其特征在于 所述聚乙交酯-丙交酯粘度范圍為0. 40dl/g 0. 90dl/g。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的注射用胸腺肽a i緩釋微球制劑，其特征 在于所述的聚乙交酯-丙交酯是由兩種不同粘度的聚乙交酯-丙交酯進(jìn)行混 合后使用，其中，所述低粘度為0.3 0.65dl/g，高粘度為0. 5 0. 9dl/g; 低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1 : 0.5 3。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的注射用胸腺肽c^緩釋微球制劑，其特征在于 所述低、高粘度的聚乙交酯-丙交酯的重量比為1 : 1 2。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用胸腺肽a,緩釋微球制劑，其特征在于 所述的微球是由總投料量的1. 5%的胸腺肽a 1、占總投料量2. 4%的PEG-6000 和占總投料95.9%的聚乙交酯-丙交酯分別投料制備w/o微球，其中，兩種粘 度的聚乙交酯-丙交酯的重量配比為0.65dl/g:0.89dl/g=l : 1.7;再在PVA 的濃度為2%， NaCl的濃度為2%的水溶液中制備成w/o/w的微球。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l-7任一項(xiàng)所述的注射用胸腺肽q緩釋微球制劑，其 特征在于所述的緩釋微球的粒徑為1 200um平均粒徑20 150iim。
9、 根據(jù)權(quán)利要求l-8任一項(xiàng)所述的注射用胸腺肽cn緩釋微球制劑，其 特征在于所述的制劑為皮下注射或肌肉注射制劑。
10、 一種制備權(quán)利要求1所述的注射用胸腺肽a ,緩釋微球制劑的方法， 包括如下步驟第一步，首先用有機(jī)溶劑將可降解的藥用高分子輔料溶解成油相，然后 將另外溶有胸腺肽h的內(nèi)水相加入其中，將油相和水相置與攪拌器內(nèi)，以每分鐘2000 3000轉(zhuǎn)高速攪拌5 8分鐘，形成w/o乳液，之后將w/o乳液滴 加入到0-8'C的冰浴1%—5%的PVA的外水相中形成W/0/W復(fù)乳攪拌3-5分鐘； 第二步，將上述所得W/0/W復(fù)乳中再加入含1-5%的PVA、含l 5%NaCl 水溶液，在每分鐘400-700轉(zhuǎn)的低速攪拌下?lián)]發(fā)有機(jī)溶劑；微球固化后，過(guò) 濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、干燥即得微球。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑，它是由微球重量的0.5％～10％的胸腺肽α₁和微球重量的70％～99.5％的可降解的分子量為5,000～500,000道爾頓的藥用高分子輔料以及占微球重量的0％～10％的其它藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。本發(fā)明還提供了該緩釋微球制劑的制備方法。本發(fā)明注射用胸腺肽α₁緩釋微球制劑可降低胸腺肽α₁的毒副作用，提高生物利用度，同時(shí)減少給藥次數(shù)，方便患者用藥。
文檔編號(hào)A61K47/36GK101244259SQ20081000825
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2008年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者劉忠榮, 劉金花, 及元喬, 兵 葉, 李伯剛 申請(qǐng)人:成都地奧九泓制藥廠