專利名稱：：一種楊梅素的醫(yī)藥新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種楊梅素的醫(yī)藥新用途，具體涉及楊梅素在制備用于預(yù)防和治療急、慢性炎癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、治療肝炎、護肝保健、鎮(zhèn)痛的藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景炎癥是多種疾病在臨床上的常見癥狀，是機體對各種炎性物質(zhì)刺激引起組織損害而產(chǎn)生的一種復(fù)雜的病理過程。其主要表現(xiàn)為局部的紅、腫、熱、痛，病理檢查可發(fā)現(xiàn)在炎癥部位有大量炎性細胞浸潤和組織壞死。炎癥是機體對炎癥因子侵襲的重要保護性反應(yīng)，但同時炎癥反應(yīng)又對機體具有不同程度的損害，許多疾病與炎癥有關(guān)，如關(guān)節(jié)炎及外傷感染等。目前，臨床上用于治療炎癥的藥物大致可分為齒體抗炎藥和非甾體抗炎藥(NSAIDs)。甾體抗炎藥如氫化可的松，潑尼松等具有良好的抗炎作用，但長期使用可產(chǎn)生水、鈉滯留，蛋白分解以及腎上腺素功能減退等嚴重的不良反應(yīng)，因此限制了其在需要長期用藥的慢性炎癥上的治療應(yīng)用。非甾體抗炎藥按化學結(jié)構(gòu)可分為四類水楊酸類(阿司匹林)、苯胺類(對乙酰氨基酚、非那西丁)、吡唑酮類(氨基比林、保泰松)及其他有機酸類(丐l噪美辛、布洛芬、吡羅昔康)。盡管本類抗炎藥物在化學結(jié)構(gòu)上屬于不同類別，但均有共同的作用基礎(chǔ)，即抑制體內(nèi)前列腺素(prostaglandin，PG)的生物合成。細胞膜磷脂中以脂化方式結(jié)合的花生四烯酸(arachidonicacid，AA)在磷脂酶A2的作用下可從磷脂中釋放出來。游離的花生四烯酸轉(zhuǎn)化途徑有二一是經(jīng)細胞微粒體內(nèi)PG合成酶(環(huán)氧酶)的催化生成各種PG(PGI,PGE,PGF)，另一代謝途徑是經(jīng)細胞質(zhì)中的脂氧酶的催化生成白三烯類(leukotrienes,LTs),這兩條代謝途徑的產(chǎn)物有相互調(diào)節(jié)和制約作用。選擇性C0X2(環(huán)氧酶2)抑制劑、5-L0X(5脂氧酶)抑制劑、C0X/5-L0X雙重抑制劑和NO釋放型非甾體抗炎藥是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的一類藥物，主要用于治療各種急、慢性炎癥及中、輕度疼痛。類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以慢性、對稱性、多關(guān)節(jié)表現(xiàn)為主的全身性自身免疫性疾病，為臨床常見病。目前認為類風濕性關(guān)節(jié)炎可能是由于人們尚未知的某種抗原對具有敏感性的某些遺傳背景的人產(chǎn)生刺激后，發(fā)生免疫反應(yīng)所引起，通常認為與T細胞免疫反應(yīng)和B細胞產(chǎn)生自身抗體均有關(guān)。隨著分子生物學和免疫學的發(fā)展研究發(fā)現(xiàn)白細胞介素(Interleukin,IL)IL-l,IL-6，IL-8和腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)是類風濕性關(guān)節(jié)炎等嚴重炎癥的主要致炎因子。IL阻斷劑的研究已經(jīng)成為當前抗炎藥研究的新領(lǐng)域，其中，IL-1阻斷劑的研究已經(jīng)取得了令人矚目的進展。IL-1阻斷劑與傳統(tǒng)的NSAIDs、C0X2選擇性抑制劑以及C0X/5-L0X雙重抑制劑不同，這類抗炎劑不影響L0X活性，對COX抑制活性也比較弱。總之細胞因子、白細胞分化抗原(CD)、黏附分子、Thl/Th2平衡、疾病病因、基因等在類風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中均起著重要作用。臨床上治療RA常見的藥物主要有非甾體抗炎藥以及糖皮質(zhì)激素等，其臨床療效顯著，但對其副作用也頻見報道，如胃腸道反應(yīng)、女性月經(jīng)的紊亂、肝臟轉(zhuǎn)氨酶的升高等。而傳統(tǒng)的NSAIDs普遍都具有導致胃腸道、腎以及肝損傷等毒副作用。NSAIDs的胃腸道不良反應(yīng)已成為其臨床應(yīng)用的最大障礙。而且抗炎藥物臨床應(yīng)用面廣，使用時間長，難于進行有效的用藥監(jiān)控。因此，對該類藥物毒副作用的限制更為嚴格，尋找低毒高效的新非甾體抗炎藥一直是藥物研究的一個重要領(lǐng)域。在醫(yī)療模式由治療型向預(yù)防、保健相結(jié)合模式轉(zhuǎn)變的大背景下，人們對化學合成藥物毒副作用的認識逐漸增強，追求生命的原生態(tài)已成為目前研究的主題。植物藥能滿足人們的這種心理需求，是人類防病治病的主要天然藥物。楊梅素作為一種不可多得的天然活性物質(zhì)，廣泛存在于多種中草藥植物中，但其一直以粗提物的形式被開發(fā)和銷售，致使其不能更廣泛的應(yīng)用到制藥、食品添加劑等領(lǐng)域，這也是我國目前植物天然產(chǎn)物開發(fā)過程中存在的不足之處。因楊梅素毒副作用極小，無胃腸道不良反應(yīng)，體外實驗表明能降低IL-1水平，由此其有望進一步被開發(fā)為特珠人群尤其對妊娠及哺乳期婦女和嬰兒更加適合的抗炎藥物。目前，楊梅素在治療心腦血管疾病的藥物及治療脂肪肝、肥胖癥的藥物和治療潰瘍疾病的藥物中都有所應(yīng)用，分別見中國專利申請?zhí)?00710034611.8、03127190.1、20061008296.7。.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種抗炎活性強，毒副作用小的新型抗炎藥，用于治療急、慢性炎癥和類風濕性關(guān)節(jié)炎的藥物。本發(fā)明的一個目的是提供一種含有楊梅素和藥學可接受載體或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明的另一個目的是提供楊梅素和其藥物組合物在制備治療急、慢性炎癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎的藥物和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明的原理是通過建立藥理篩選類型追蹤楊梅素藥效活性，找到其藥用用途。本發(fā)明人經(jīng)過代表炎癥反應(yīng)第一時相的醋酸致小鼠毛細血管通透模型、二甲苯致小鼠耳腫脹模型、蛋清和角叉菜膠致足腫脹模型，代表炎癥反應(yīng)第二時相的CMC-Na誘導小鼠皮下氣囊白細胞游走模型，代表炎癥反應(yīng)第三時相的棉球肉芽腫模型和醋酸扭體法、甲醛致痛模型考察了楊梅素的抗炎鎮(zhèn)痛作用，又經(jīng)原發(fā)性和繼發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎模型考察了楊梅素的抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用，同時對楊梅素的保肝作用及無胃粘膜損傷作用進行了實驗研究。結(jié)果表明，楊梅素能抑制急性炎癥反應(yīng)，能抑制炎癥晚期的組織增生和肉芽組織的形成，且能減少醋酸所致小鼠的扭體反應(yīng)，提示楊梅素既可抑制炎癥早期的水腫與滲出，又可抑制炎癥晚期的肉芽組織形成，同時能緩解原發(fā)性和繼發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎癥狀又有鎮(zhèn)痛作用。本發(fā)明所應(yīng)用的楊梅素可以從楊梅葉或根、皮中提取，經(jīng)分離純化制得。-本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)楊梅素可以用于制藥領(lǐng)域，保健品領(lǐng)域和食品領(lǐng)域。楊梅素可以直接藥用或者與藥學上可接受載體或賦形劑組合可以配制成藥物組合物，楊梅素還可以作為保健品的有效成分，本發(fā)明組合物還可以配制成飲料等。本發(fā)明藥物組合物可以通過藥學領(lǐng)域常規(guī)配制技術(shù)和載體，配制成藥物組合物。本發(fā)明組合物可以制備成片劑、膠囊、顆粒劑、軟膠囊、滴丸等劑型。還可以加入到茶或飲料中，制成保健茶或飲料。片劑的普通配方可以是楊梅素10-90%重量比，蔗糖O-9%重量比，硬脂酸鎂1%重量比，50%的乙醇適量。膠囊劑的普通配方可以是楊梅素10-100%重量比，淀粉0%-90重量比。顆粒劑的普通配方可以是楊梅素5-100%重量比，(蔗糖+糊精)0%-95%重量比，蔗糖糊精=2:1。但是本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以根據(jù)需要用本領(lǐng)域公知的技術(shù)和載體配制成其他劑型。本發(fā)明通過動物藥理實驗，確定楊梅素的使用劑量為100mg/kg-400mg/kg/d。且在有效預(yù)防、治療劑量范圍內(nèi)無毒副作用，且無胃損傷副作用且對肝臟有保護作用，可以長期服用。具體實施方式—通過下面實施例詳細說明本發(fā)明。但是應(yīng)該理解這些實施例只是說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的范圍。實施例1:片劑，楊梅素10g糖粉19.5硬脂酸鎂0.5g"50°/。乙醇適量將楊梅素、糖粉粉碎成細粉，過篩(IOO目)，混勻，以50%乙醇(20目t)制成濕顆粒，干燥，整粒(16目篩)，加入硬脂酸鎂，混勻，壓制成100片，包薄膜衣，即得。實施例2:膠囊劑楊梅素100g錠粉20g50%乙醇適量-_將楊梅素粉碎，加淀粉，混勻，以50%乙醇(20目篩)制成濕顆粒，干燥，整粒(16目篩)，填入空膠囊中，即得實施例3:顆粒劑楊梅素100g糖粉300g糊精150g乙醇5ml將楊梅素、糖粉、糊精粉碎成細粉，過篩(IOO目)，混勻，以乙醇(20目篩)制成濕顆粒，干燥，整粒(16目篩)，得到顆粒劑。實施例4:軟膠囊5楊梅素50g大豆油150g將楊梅素粉碎成細粉，過篩(10G目)加入大豆油混合均句后和軟膠囊的膠片壓制成軟膠囊。實施例5:滴丸楊梅素50gPEG600025gPEG400025g將楊梅素加入到加熱融化的聚乙二醇輔料中混勾；接著將熔融混合液移入滴丸機進行滴制；藥液滴至液體石蠟冷卻劑中冷卻；用吸布吸干冷卻劑，選丸，即得到楊梅素滴丸。本發(fā)明通過動物藥理實驗，確定楊梅素的使用劑量為100mg/kg-400mg/kg/d。且在有效預(yù)防、治療劑量范圍內(nèi)無毒副作用，且無胃損傷副作用且對肝臟有保護作用，可以長期服用。以下通過實施例對本發(fā)明做進一步說明試驗動物昆明種小鼠，體重18-22g,Wistar雄性大鼠，150-180g,購于沈陽藥科大學動物中心，受試動物預(yù)處理在飼養(yǎng)室內(nèi)觀察一周，室溫21-23t:,相對濕度30-70%,進食沈陽藥科大學實驗動物室提供機制料塊，飲自來水，自然光照。.實施例6:楊梅素對醋酸致痛小鼠扭體反應(yīng)的影響'雄性小鼠60只，體重18-22g,隨機分為5組，每組12只，各組均ig給藥，l次/天，連續(xù)給藥7d。5組分別去空白組0.5%CMC-Na(0.2ml/kg),阿司匹林陽性對照組300mg/kg,楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg，400mg/kg)，末次給藥lh后，每只小鼠腹腔注射O.6%醋酸溶液(醋酸溶液臨用前配制)致痛(10mL/kg),觀察注射致痛劑后15min內(nèi)各小鼠的扭體次數(shù)(腹部收縮內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高、扭轉(zhuǎn)，蠕行)，計算扭體鎮(zhèn)痛百分率，鎮(zhèn)痛百分率-(溶媒組平均扭體次數(shù)一給藥組平均扭體次數(shù))/溶媒組平均扭體次數(shù)x100%,并進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(各治療組與對照組的比較釆用t檢驗)，結(jié)果見表l。表l楊梅素對醋酸致痛小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±S，n=12)組別劑量(mg/kg)扭體次數(shù)鎮(zhèn)痛率W)CMC-Na0.5°/。42.0±14.010025.5±15.3*39.29楊梅素20023.4±19,5*'44.2940023.0±9.1*45.24阿司匹林30015.7±7.7**62.62,p<0.05,**p<0.01vsCMC-Na由表l可知，與空白對照組比較，楊梅素各劑量組和阿司匹林均能明6顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，鎮(zhèn)痛百分率分別為39.29%,44.29%、45.24%,并有劑量依賴性。表明楊梅素對醋酸誘發(fā)的小鼠疼痛反應(yīng)有顯著抑制作用，即楊梅素有明顯的鎮(zhèn)痛作用，提示其對化學致痛有明顯緩解作用。實施例7:楊梅素對甲醛致小鼠疼痛的作用雄性小鼠50只，體重18-22g，隨機分為5組，每組10只。分組為楊梅素各劑量組(100mg/kg，200mg/kg,400mg/kg)，正常對照組0.5%CMC-Na(0.lml/kg)和陽性對照組(消炎痛15mg/kg)。對照組和楊梅素組均ig給藥，l次/天，連續(xù)給藥7d。末次給藥lh后，用微量注射器給小鼠右足背部1%的福爾馬林30ju1,即刻記錄sc后0-10min的小鼠持續(xù)抬高后足的次數(shù)，進行組間比較。結(jié)果見表2。_奉2楊梅素對甲醛致痛小鼠疼痛反應(yīng)的影響(X±S)n=10<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表2可見，在sc甲醛后10min內(nèi)，消炎痛可明顯減少甲醛致痛小鼠抬足次數(shù)，楊梅素100mg/kg、100mg/kg和100mg/kg組的小鼠抬足次數(shù)與正常對照組比較，抬后足次數(shù)也顯著減少，表明楊梅素有鎮(zhèn)痛作用。實施例8:楊梅素對甲醛致痛小鼠疼痛反應(yīng)的影響雄性小鼠56只，體重18-22g,隨機分為5組，每組10只。分組為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg,400mg/kg)，正常對照組0.5%CMC-Na(0.1ml/kg)和陽性對照組(消炎痛15mg/kg)。正常對照組和楊梅素組均ig給藥，l次/天，連續(xù)給藥7d。末次給藥lh后立即在小鼠的右前足背皮下注射1%的曱醛0.03ml/只致痛，在致痛后lh，將小鼠放入2000ml的燒杯中，穩(wěn)定5min,然后觀察并用秒表記錄小鼠在lmin內(nèi)致痛腳離地的時間，以此作為疼痛指標，同時對疼痛進行4級評分。結(jié)果見表3。_表3楊梅素對甲醛致痛小鼠疼痛反應(yīng)的影響(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*p<0.05,**p<0.01vsCMC-Na由表3可見，楊梅素各劑量組在注射曱醛后lh內(nèi)均減少小鼠的致痛足離地時間及痛反應(yīng)評分值，與對照組比較差異顯著。實施例9:楊梅素對小鼠腹部毛細血管通透性的影響昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g,按體重隨機分為5組，每組10只，各組均ig給藥，給藥體積20mL/kg,l次/天，連續(xù)給藥7d。5組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg、400mg/kg),另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.lml/kg)和陽性對照組(阿司匹林300mg/kg)。末次給藥1h后，各鼠尾靜脈注射G.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1mL/10g體重，并立即ipO.6%醋酸0.2mL/只。致炎后60min頸推脫臼處死小鼠，剪開腹腔，用總量5mL的生理鹽水多次沖洗小鼠腹腔，收集沖洗液。用吸管吸出洗滌液4ml加入生理鹽水至10ml,3000rpm離心15min,取上清液于波長590nm比色測定OD值，以生理鹽水溶液調(diào)零讀取吸光度A值，以A值表示Evans藍含量，進行組間比較，結(jié)果見表4。_表4楊梅素對小鼠腹部毛細血管通透性的影響(X±S,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*p<0.05vsCMC-Na結(jié)果所示楊梅素中、高劑量組的吸光度值與正常對照組比較顯著降低，i明楊梅素對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的增加均有不同程度的抑制作用，具有抗炎作用。實施例10:楊梅素對二甲苯所致小鼠耳廓炎癥的影響雄性小鼠60只，體重18-22g,隨機分為5組，每組12只。5組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg,400rag/kg),另設(shè)正常對照組..0.5%CMC-Na(0.1ml/kg)和陽性對照組(地塞米松2.5mg/kg)。正常對照組和楊梅素組均ig給藥，l次/天，連續(xù)給藥7d,陽性對照組于實驗當日ip—次(按10mL/kg)。末次給藥1h后，用0.02ral微量進樣器將二甲苯以0.02ml/只涂于小鼠右耳兩面，左耳不涂作為空白對照，4h后脫頸椎處死，用8mm打孔器沿耳廓基線兩耳相同部位打下兩圓耳片，稱重，以左右耳片重量之差表示腫脹程度(AW,單位是mg),計算腫脹度和腫脹抑制率。按下式計算每只鼠耳腫脹度(Ic)和給藥組的腫脹抑制率(E):Ic=WR—WL;E=(Ic—It)/Icx簡。其中，WR、WL分別代表每只鼠右、左耳片的平均重量；Ic、It分別代表對照組和給藥組耳片的腫脹度并進行組間比較。結(jié)果見表5。表5楊梅素對二甲苯所致々<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>**p<0.01vsCMC-Na由表5可知，地塞米松和楊梅素高劑量組均能極顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹(P〈0.01),其抑制率分別為57.78%和41.11%，且楊梅素低、沖、高劑量組腫脹抑制率分別為28.89%、34.44%、41.11%，有隨劑量增高的趨勢，且地塞米松與楊梅素高劑量無顯著性差異(P〉0.05)。實施例11:楊梅素對蛋清致小鼠足腫脹的影響雄性小鼠48只，體重18-22g,隨機分為5組，各組均ig給藥，1次/天，連續(xù)給藥7d。5組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg，200mg/kg,400mg/kg)，另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.1ml/kg)和陽性對照組(地塞米松2.5mg/kg)。實驗當日每鼠右后足踝正面上端用筆作一清晰橫線，容積法測定致炎前小鼠右后足容積，并于末次給藥1h后，小鼠右后足跖皮下注射10%新鮮蛋清0.05ml致炎，分別于致炎1、2、3、4h測量小鼠右后足跖容積l次，并計算小鼠足跖腫脹率。足跖腫脹百分率=(致炎后足跖體積一致炎前足跖體積)/致炎前足跖體積xlOO"/。，結(jié)果見表6、表-表6楊梅素對蛋清致小鼠足腫脹足跖腫脹體積的影響劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*p<0.05,"p<0.01vsCMC-Na表7楊梅素對蛋清致小鼠足腫脹的影響組別動<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*p<0.05，vsCMC匿Na結(jié)果顯示，與空白對照組比較，在致炎l,2,3h，地塞米松能顯著降低蛋清所致小鼠足跖腫脹百分率，楊梅素100mg/kg,200mg/kg及400mg/kg組小鼠在致炎后lh能明顯降低蛋清所致小鼠足跖腫脹百分率，足跖腫脹百分率分別為19.6%、16.0%和15.0%,且對蛋清致足腫脹的抑制作用在第l小時間最強，表明楊梅素具有抗炎作用。實施例12:楊梅素對大鼠蛋清性足腫脹的影響雄性SD大鼠40只，隨機分為5組，每組8只。分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg、400mg/kg)，另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.lml/kg)和陽性對照組(阿司匹林300mg/kg)。常規(guī)飼養(yǎng)3d后灌胃給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d。末次給藥lh后，于每只大鼠右足跖注射新鮮蛋清0.05raL,在注射前每只大鼠測一次足容積作給藥前值。分別于注射后30min、rh、2h和4h測大鼠右足足跖厚度以所測厚度值減給藥前值作為腫脹度。蛋清致炎大鼠血清中丙二醛、一氧化氮的測定將足腫脹實驗中蛋清致炎4h后的大鼠血清裝于EP管中，4。C保存待測超丙二醛含量。_表8楊梅素對大鼠蛋清性足腫脹足跖腫脹厚度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>10042.56±19.38**(36.48)33.22±15.17**(46,90)25.92±15.74**(化92)23.54±14.71(30.08)楊梅素20036.19±14:52**(45.08)32.74±11.47**(46.46)26.42±13.22**(47.31)19.26±13.27*(42.28)40037.61±20.08**(45.49)30.92±19.45**(51.77)25.40±19.35*(51.61)21.43±15.90(39,02)阿司匹林30035.26±19.48*'*(45.08)31.05±17.38**(48.67)22.86±15.45承水(54.84)17.94±10.94*(45.53)**p<0.01vsCMC-Na()內(nèi)為抑制率.由表8和表9，以看出，楊梅素可顯著抑制蛋清誘發(fā)的大鼠足腫脹，3個劑量組在30min—4h時均能顯著抑制大鼠足腫脹，且3個劑量組之間表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系與時效關(guān)系。即楊梅素對以滲出性水腫為主的炎癥早期反應(yīng)有較強抑制作用。表IO楊梅素對蛋清致炎大鼠血清中MDA含量的影響組另'J,,、nMDA(nmol/L)(mg/kg)CMC-Na—74.684±2.10110084.241±0.842-.楊梅素20073.653±2.3104007.2.640±0.934*阿司匹林30082.152±0.729***p<0.05,"p<0.01vsCMC-Na由此可見，楊梅素3個劑量組與空白組比較能顯著降低致炎大鼠血清中丙二瞎的含量。實施例13:楊梅素對角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響雄性小鼠60只，體重18-22g，隨機分為5組，每組12只，各組均ig給藥,1次/天,連續(xù)給藥7d。5組分別為空白組0.5%CMC-Na(0.2ml/kg),阿司匹林陽性對照組300mg/kg,楊梅素各劑量組(100mg/kg,200rag/kg'400mg/kg),末次給藥lh后，以0.75%角叉菜膠生理鹽水溶液，注射在名鼠右足跖部皮下致炎，每只0.05ml。注射角叉菜膠前和在致炎后2、4h分別用千分尺測量足跖墊厚度，單位為mm,按以下公式計算腫脹度。足趾腫脹度=致炎后右足趾厚度-致炎前右足趾厚度；足趾腫脹率(%)=(炎后右足趾厚度-致炎前右足趾厚度)/致炎前右足趾厚度。結(jié)果見表11。表11楊梅素對小鼠角叉菜膠足腫脹足趾厚度腫脹度的影響(腿,x±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*p<0.05,"pO.OlvsCMC-Na結(jié)果表明楊梅素各劑量組在大鼠致炎2、4h后，能顯著降低致炎足足趾腫脹度及足趾腫脹率。實施例14:楊梅素對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響雄性大鼠37只，體重(180±20)g,隨機分5組，分組及劑量同前2.2.4。連續(xù)給藥7d后于末次給藥lh后，大鼠右后足sciy。角叉菜膠0.lmL,于致炎4h后測左、右后足重量，求出腫脹度、腫脹率及抑制率。結(jié)果如表12所示，表12楊梅素對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>**p<0.01vsCMC-Na與模型組比較，楊梅素中、高劑量給可顯著抑制角叉菜所致足重量的增加、降低足跖腫脹率，增加足跖腫脹抑制率。實施例15:楊梅素對小鼠羧甲基纖維素囊中滲出液白細胞游走的影響昆明種雄性小鼠50只，體重18-22g，按體重隨機分為5組，各組均ig給藥，給藥體積20ml/kg，1次/天，連續(xù)給藥7d。5組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg、400mg/kg)，另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.2ml/kg)和陽性對照組(布洛芬140mg/kg)。于末次給藥前一天，將各組小鼠背部剃毛，無菌操作下向小鼠背部皮下注入空氣1ml,形成圓形氣囊。次曰于末次給藥后lh后，用消毒針頭及注射器向囊內(nèi)注入l.5%CMC液lml。于末次給藥后7h吸取囊內(nèi)CMC,精確吸取0.02ml,稀釋到0.4ml的生理鹽水中，用微量移液器取O.01ml滴于血細胞計數(shù)板上，在鏡下計數(shù)白細胞數(shù)。白細胞計數(shù)方法在低倍鏡下計數(shù)計數(shù)室內(nèi)四角的四大方格中所有白細胞數(shù)，最后把所得總數(shù)*50,即為每mm3血液中的白細胞總數(shù)。(計算原理每個大方格的面積為1腿2,計數(shù)室深度為1/lOmm,血液稀釋倍數(shù)為20倍，因此每mm3血液中的白細胞總數(shù)為4個大方格的白細胞*10*20/4)。另取小鼠31只，體重18-22g,按體重隨機分為3組，各組均ig給藥，給藥體積20ml/kg，l次/天，連續(xù)給藥7d。3組分別為楊梅苷292mg/kg、楊梅總黃酮600mg/kg和正常對照組0.5%CMC-Na,實驗方法同前。結(jié)果見表13。表13楊梅素對小鼠羧甲基纖維素囊中滲出液白細胞游走的影響(X士S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)囊中白細胞數(shù)(io7i)CMC-Na0.5%112.845±0.88710092.044±0.505*、梅素20091.467±0.320**400111.309±0.263林布洛芬140101.330±0.371林一組別劑量(mg/kg)動物數(shù)囊中白細胞數(shù)(靡)CMC-Na一112.555±0.518楊梅苷292102.010±0.461*楊梅總黃酮600102.020±0.569**p<0.05,**p<0.01vsCMC德結(jié)果表明，楊梅素100mg/kg、楊梅苷292mg/kg和楊梅總黃酮600rag/kg能明顯減少末次給藥7h后CMC囊內(nèi)白細胞數(shù)(P〈0.05)，楊梅素200rag/kg和400mg/kg組小鼠CMC囊內(nèi)白細胞數(shù)亦顯著下降(P<0.01),與生理鹽水組比較有顯著差異且與劑量有關(guān)，布洛芬組的白細胞數(shù)也明顯減少(P〈0.01),表明楊梅素有抗炎作用，實施例16:楊梅素對棉球引起小鼠肉芽腫慢性炎癥的影響-雄性小鼠48只，'體重18-22g,將小鼠在乙醚淺麻醉狀況下背部去毛消毒、正中切口，將精密稱定的10mg經(jīng)高壓蒸氣和氨節(jié)青霉素滅菌的脫脂棉球植入背部正中皮下，待小鼠蘇醒后，術(shù)后當天選活動正常的模型鼠13隨機分為5組，各組均ig給藥，1次/天，連續(xù)給藥7d。5組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg),另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.2ml/kg)和陽性對照組(地塞米松2.5mg/kg)。第7天將小鼠麻醉處死，取出棉球及肉芽組織(給藥期間，傷口被抓破棉球脫出的樣本棄去)，于6(TC烤箱中烘干6h稱重，減去原棉球重量10mg，即為肉芽腫凈重，并計算抑制率。抑制率(％)=(空白肉芽組織干重一給藥組肉芽組織干重)/空白肉芽組織干重*100%，結(jié)果見表14。表14楊梅素對棉球引起小鼠肉芽胂慢性炎癥的影響(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*p<0.05,**p<0.01vsCMC-Na由表14可知，與模型空白組相比較，地塞米松和楊梅素均能顯著抑制棉球引起的小鼠炎癥肉芽組織增生，抑制率分別為44.44%，33.02%,38.58%和32.10%。實施例17:楊梅素對棉球引起大鼠肉芽腫慢性炎癥的影響雄性大鼠50只，戊巴比妥鈉麻醉下左右腋窩部碘酒消毒，75%乙醇脫碘后各切開lcm長的小口，將2個滅菌棉球(每個棉球重(50土l)mg，高壓滅菌，各加入IOg/L氨芐青霉素2滴)，5(TC烘箱烤干分別植入其中并縫合切口。術(shù)后大鼠隨機分為5組。分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg,200mg/kg、400mg/kg)，另設(shè)正常對照組0.5%CMC-Na(0.1ml/kg)和陽性對照組(地塞米松2.5mg/kg)。常規(guī)飼養(yǎng)3d后灌胃給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d。末次給藥lh后處死動物，取出棉球，在6(TC烘箱放置12h后稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫凈重。抑制率(％)=(空白肉芽組織干重一給藥組肉芽組織干重)/空白肉芽組織干重*100%。表15楊梅素對棉球肉芽腫大鼠的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>**p<0.01vsCMC-Na由表15所示楊梅素3個劑量組與空白組比較均能顯著抑制肉芽腫形成，楊梅素400mg/kg組對肉芽腫的抑制作用只比地塞米松略低，說明楊梅素對炎癥中晚期產(chǎn)生的增生現(xiàn)象有明顯抑制作用。實施例18:楊梅素對原發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響雄性SD大鼠50只，各大鼠右后足趾部皮內(nèi)注射Freimd，s完全佐劑O.lmL誘發(fā)佐劑性關(guān)節(jié)炎。造模后隨機分為6組，各組分別為楊梅素各劑量組(100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg)，正常對照組0.5%CMC-Na(0.1ml/kg)、模型組0.5%CMC-Na(0.lml/kg)和陽性對照組(雷公藤15mg/kg)。原發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠預(yù)防給藥于致炎后每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7d。于造模前，造模后l天，4天，7天觀察記錄各組大鼠原發(fā)側(cè)足跖關(guān)節(jié)腫脹程度的變化。楊梅素對繼發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防給藥于致炎后第7天至第28天灌胃給藥，每天一次。觀察造模第14天，第17天，第22天繼發(fā)側(cè)足趾關(guān)節(jié)腫脹程度的變化。腫脹抑制率(%)=(炎后右足趾厚度-致炎前右足趾厚度)/致炎前右足趾厚度廠踝關(guān)節(jié)周長腫脹度=致炎后右足踝關(guān)節(jié)周長-致炎前右踝關(guān)節(jié)周長；踝關(guān)節(jié)周長腫脹率(%)=(致炎后右踝關(guān)節(jié)周長-致炎前右踝關(guān)節(jié)周長)/致炎前右踝關(guān)節(jié)周長。由表16、表17、表18、表19所示造模后第2天所有大鼠出現(xiàn)造模局部(原發(fā)側(cè))的紅腫，伴皮溫升高，精神萎靡。造模12天，模型組大鼠在不同程度上出現(xiàn)對側(cè)后肢繼發(fā)性腫脹，少數(shù)大鼠前肢也出現(xiàn)繼發(fā)性腫脹。造模18天，模型組大鼠的關(guān)節(jié)腫脹程度較之急性期有所緩解，局部的紅腫基本消失，皮溫基本正常，但幾乎都伴有關(guān)節(jié)的強直，變形以及活動的受限。AA組大鼠經(jīng)楊梅素預(yù)防及治療后，原發(fā)性和繼發(fā)性病變均明顯好轉(zhuǎn)，楊梅素組AA大鼠造模側(cè)和繼發(fā)側(cè)的腫脹均明顯小于模型組。楊梅素對原發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎的影響表16楊梅素對造模側(cè)原發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重的影響(x±SD)組別動物劑量基礎(chǔ)重(g)重量(g)數(shù)(mg/kg)d0d1d4d7CMC-Na8—188.9±31.5197.2±38.0210.1±47.1215.2±52.4模型AA9—185.4±33.0194.1±37.7169.0±30.1A168.3±27.5A850189.1±24.9200.6±25.0216.7±26.2**225.8±28.1**楊魂素8100191.2±32.7200.9±31.0204.8±40.5218.6±28.2**9200181.9±32.5198.7±22.9215.3±27.7**232.5±28.5**雷公藤多苷片815195.9±39.5199.2±38.9220.5±24.8**'PO.05vsCMC-Na;**P<0.01vsAAmodelgroup表17楊梅素對造模側(cè)原發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足趾厚度的影響(cm，x±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例19:楊梅素對小鼠胃粘膜的影響昆明種小鼠36只，隨機分為4組，空白組(等體積生理鹽水，20ml/kg)，楊梅素100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg,連續(xù)給藥30天，給藥方式為灌胃。"末次灌胃給藥前禁食24h，末次灌胃給藥4h后，脫頸處死，打開腹腔，結(jié)扎賁門和幽門，向胃內(nèi)注射10%甲醛lmL,取胃，置于10y。曱醛固定20min,沿胃大彎剪開，沖洗胃內(nèi)容物，平展于玻璃板上，測胃黏膜所有潰瘍面積(mm2)，將其總和作為潰瘍數(shù)。潰瘍指數(shù)的測定釆用張守仁法(張守仁，邵金鶯，於毓文.呋喃唑酮和一些常用抗?jié)兯帉λ姆N大l胃潰瘍模型的景l(fā)響.藥學學報，1984，91:5),即黏膜完整為0級；點狀一出血1—5個點為—1級，6—10個點為2級，10個點以上為3級，條狀出血1—5條為4級，6—10條為5級，IO條以上為6級。結(jié)果楊梅素各組胃粘膜完整，無水腫、無充血，與空白組比較無差異，沒有胃潰瘍副作用。實施例20:楊梅素對肝臟的保護作用將受試小白鼠按體重、性別均衡分成七組，每組10只，雌雄各半，分別為溶媒對照組、模型對照組、陽性對照聯(lián)苯雙酯滴丸組(200mg/kg)、楊梅素四個劑量組(100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg、50mg/kg)。灌胃給藥；給藥容積為0.2ml/10g,溶媒對照組、模型對照組、灌胃相同體積的5%。CMC-Na溶劑，連續(xù)給藥7天。于末次給藥后1小時，腹腔注射0.1%CC14,0.2ml/10g進行急性肝損傷模型的制備。16小時后眼眶靜脈叢釆血，分離血清。按試劑盒說明測定血清中ALT及AST的含量，結(jié)果見表8。結(jié)果表明模型組與空白對照組比較AST及ALT值有顯著性提高，提示模型制備成功。與模型組比較，楊梅素400mg/kg、200mg/kg劑量組連續(xù)給藥7天，ALT及AST值顯著降低，說明楊梅素200mg/kg、400mg/kg對CC14致小鼠化學性肝損傷有保護作用。_表22楊梅素對CC14致小鼠肝損傷的影響_組別劑量(mg/kg)ALT(u/L)AST(u/L)17CMC-Na—73.39±26.98119.18±45.45模型組—351.78±16.21AA268.57±33.22"400255.01±52.43**225.71±50.11*200285.37±67.23**230.10±39.94*楊梅素100294.41±63.61*237.24±42.2550316.57±51.26246.12±42.92聯(lián)苯雙酯滴丸100207.42±63.74**228.06±75.09與溶劑對照組比較AAPO.Ol與模型對照組比較4P0.05**P<0.01炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對局部損傷的防御反應(yīng)，是由損傷因子引起的組織損傷，炎癥損傷以血管反應(yīng)為中心，局部血流適當?shù)募铀俸鸵好翝B出，有利于稀釋、限制和消除損傷因子，清除壞死組織，.有利于組織的再生和修復(fù)。但過度的變性、滲出、壞死或異常的肉芽增生反應(yīng)等對機體會造成不同程度的損傷。在炎癥的早期，某些炎癥介質(zhì)刺激血管，使血管擴張，血管內(nèi)皮間隙擴大，血管壁通透性增強，血漿內(nèi)的液體、蛋白質(zhì)和白細胞等滲出到組織間隙，隨著滲出的增加，造成組織腫脹。因此，炎性滲出組織腫脹是炎癥早期的重要指標。在炎癥晚期和慢性炎癥期，由于巨嗜細胞和纖維母細胞等增生，形成肉芽組織。我們用醋酸、二甲苯、蛋清、角叉菜膠和棉球作為致炎因子，考察了楊梅素對實驗性滲出、腫脹、增生的影響；用羧甲基纖維素納注入小鼠背部空囊中考察了楊梅素對滲出液中白細胞游走的影響；用醋酸、甲醛作為化學致痛劑觀察了楊梅素對疼痛的影響；用弗氏完全佐劑觀察了楊梅素對類風濕性關(guān)節(jié)炎的影響；用長期給小鼠灌服一定劑量的楊梅素考察了其對胃粘膜是否有損傷作用；用CC14致小鼠化學性肝損傷來考察楊梅素對肝的保護作用，結(jié)果表明楊梅素對對醋酸所致小鼠毛組血管通透性的增加具有明顯的抑制作用，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，高、中劑量組抗炎作用與阿司匹林組接近，無明顯差異；楊梅素高劑量對二甲苯誘發(fā)的小鼠急性滲出性炎癥(耳廓腫脹)組有明顯的抗炎消腫作用；楊梅素各劑量組對小鼠、大鼠蛋清性足跖腫脹和角叉菜膠足跖腫脹模型均有顯著抑制作用，且作用強度近似于地塞米松。醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性亢進主要在于和H+的局部作用，以毛細血管擴張及通透性亢進為主要病理過程，而蛋清所致主要以組織胺和5-HT為炎性介質(zhì)。fe此可見，楊梅素能抑制急性炎癥反應(yīng)。楊梅素能明顯減少末次給藥7h后CMC嚢內(nèi)白細胞數(shù)，又可抑制炎癥晚期的組織增生和肉芽組織的形成，同時能緩解f發(fā)性和繼發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎癥狀又有鎮(zhèn)痛作用。提示楊梅素在100mg/kg—400mg/kg劑量范圍有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用，最為難能可貴的是，楊梅素無胃損傷副作用且對肝臟有保護作用，其作用機制有待進一步探討。:總之，本實驗表明楊梅素具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用，且本發(fā)明的實質(zhì)性特點和顯著進步在于楊梅素使用的安全性，在具有抗炎、抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用的同時具有鎮(zhèn)痛、保肝、降糖、保護腦神經(jīng)元的作用。此項研究對于藥效評價和臨床應(yīng)用具有重要意義，為楊梅素的進一步開發(fā)提供了理論依據(jù)。權(quán)利要求1、一種楊梅素的醫(yī)藥新用途，其特征在于楊梅素用于制備預(yù)防和治療急、慢性炎癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎、護肝保健、各種疼痛的藥物中。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種楊梅素的醫(yī)藥新用途，其特征在于:所述的楊梅素為從楊梅或其它植物中提取分離出來的黃酮類化合物。3、一種楊梅素的藥物組合物，其特征在于楊梅素可以和藥學上可接受的載體混合制備成藥物組合物。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種楊梅素的醫(yī)藥新用途，其特征在于:所述的楊梅素可以和藥學上可接受的載體或賦形劑制成片劑、膠囊、顆粒劑、軟膠囊、滴丸。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
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，公開了一種楊梅素的醫(yī)藥新用途。經(jīng)醋酸扭體法、甲醛致痛法、冰醋酸致毛細血管通透法、二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、蛋清和角叉菜膠致足腫脹法、羧甲基纖維素囊中滲出液白細胞游走法、肉芽腫慢性炎癥法及原發(fā)性和繼發(fā)性佐劑性關(guān)節(jié)炎幾個動物模型篩選，發(fā)現(xiàn)其抗炎活性高且有鎮(zhèn)痛作用，同時能預(yù)防和治療佐劑性關(guān)節(jié)炎，其抗炎活性與阿司匹林活性相當卻無胃腸道毒性，其抗類風濕性關(guān)節(jié)炎活性與雷公藤活性相當，同時具有保肝作用，是一種預(yù)防和治療急、慢性炎癥和類風濕性關(guān)節(jié)炎的理想藥物。楊梅素可以和藥學上可接受的載體制備成各種劑型，用于抗炎、鎮(zhèn)痛及抗類風濕性關(guān)節(jié)炎。文檔編號A61P19/02GK101254186SQ200810010909公開日2008年9月3日申請日期2008年4月3日優(yōu)先權(quán)日2008年4月3日發(fā)明者巖佟,王淑君申請人:沈陽藥科大學