專利名稱：貝類親本性別鑒定的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及貝類親本性別鑒定的方法，具體為一種無繁殖損傷的貝類親本 性別鑒定的方法。
背景技術：
貝類多為雌雄異體，雌雄同體種類也相當普遍。貝類雖分為雌雄異體和雌 雄同體，但這種區(qū)分并不是恒定不變的，雌雄異體的種類可以發(fā)生性逆轉(zhuǎn)而互 換性別，雌雄同體種類也能因性變而成為雌雄異體。在雌雄異體的種類中，除 少數(shù)種類為雌雄異形即兩性第二性征比較鮮明，可根據(jù)外部性征鑒別雌雄外， 絕大多數(shù)的雌雄異體的貝類為雌雄同形即兩性第二性征不明顯，故很難根據(jù)外 部性征識別雌雄。由于對雌雄異體型貝類親本的性別鑒定困難，使得海產(chǎn)工作 者在開展貝類的近緣、遠緣雜交，家系建立，尤其是群體雜交、大規(guī)模生產(chǎn)時 遇到了很大的困難。
目前，對貝類的性別方面的研究中，張國范等(2003)采用雌雄同體的海 灣扇貝建立了自交系；在雌雄異體型貝類方面，授權公告號為CN1263374C的中 國發(fā)明專利公開了一種雌雄異體型貝類自交系的建立方法，該發(fā)明專利的目的 在于在雌雄異體的貝類中尋找雌雄同體的貝類，建立子代純系，可以加快基因 純化速度，淘汰致死基因，大大加快雌雄異體型貝類的品種選育速度；而如何 辨別雌雄異體的貝類，也是一個亟待解決的難題。
授權公告號為CN100382683C的中國專利公開了一種櫛孔扇貝的判性系及制 備方法和應用。根據(jù)貝殼顏色來判斷性別，建立判性系，該發(fā)明制備方法簡單、 易行，不需要專用的設備，容易在生產(chǎn)中推廣。然而，該發(fā)明的判性系具有品 種單一，識別率低的缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在解決以往對雌雄異體型貝類親本性別鑒定困難的問題，提供一 種貝類親本性別鑒定的方法，經(jīng)該方法鑒定好的親貝，可以正常產(chǎn)卵排精，針 對外觀上無法識別的雌雄異體型貝類親本具有普遍的通用性。
本發(fā)明的技術方案是采用直徑為0.6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類， 確定貝類親本的性腺位置，在貝類親本的殼上鉆孔直至深入至性腺部位，用消 毒過的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進行 性別鑒定，卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧 狀，顯微鏡下為蝌鈄狀。
本發(fā)明的工藝過程包括以下步驟
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇電鉆鉆頭直徑的大小，直接決定了貝類的 受損傷程度。鉆頭直徑越小，貝類的受損程度越小。但是由于鉆頭的堅硬程度 的限制，直徑過小的鉆頭在對貝殼鉆孔時，會發(fā)生折斷、碎裂等現(xiàn)象，故一般 選用鉆頭的最小直徑規(guī)格為0.6腿。貝類的精子很小，卵徑大多集中40-90Mm， 這樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定大多數(shù)的雙殼貝類，其性腺在內(nèi)臟團中， 而每種貝類的性腺所在部位不同，需先確定好性腺的位置，然后采用電鉆小心 謹慎進行鉆孔。
第三步、微型注射器的處理對微型注射器的要采取嚴格的消毒，尤其是 針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。在所 述消毒過程中采用青霉素來消毒效果最佳。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行性別區(qū)分。若果是卵，在海水中發(fā)散，在顯微鏡下 為圓形或梨形；若果是精子，在海水中為煙霧狀觀察，顯微鏡下為蝌鈄狀；如 果是精卵同時存在，顯微鏡下為雌雄同體型；若果是存在寄生蟲的親本，顯微 鏡下可以看見多種寄生蟲。
本發(fā)明的有益效果是針對外觀上無法識別的雌雄異體型貝類親本具有普 遍的通用性，識別率在98%以上，且經(jīng)該方法鑒定好的親貝可以正常繁殖，產(chǎn) 卵排精率在95%以上，這為開展貝類的近緣、遠緣雜交，家系建立，尤其是群 體雜交，大規(guī)模生產(chǎn)奠定了良好的基礎。這對貝類的遺傳育種具有重要的指導 意義。
具體實施例方式
下面以菲律賓蛤仔、寬殼全海筍、青蛤、四角蛤蜊、中國蛤蜊、薄片鏡蛤的親本性別鑒定作為實施例進一步說明本發(fā)明，但不構成對本發(fā)明的限制 實施例1
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇于2001-2003年，開始選用電鉆對菲律賓 蛤仔莆田群體和大連群體親本進行性別鑒定。選用的直徑為0.6mm的鉆頭，菲 律賓蛤仔的卵徑為64-72Mm，這樣可以取出成熟精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定菲律賓蛤仔的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若 干個成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三步、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒， 尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形； 精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀；染病個體在顯微鏡下有許多生蟲。
經(jīng)過該方法鑒定的菲律賓蛤仔，性別識別率高達98%以上，且鑒定好的親本， 可以正常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率在95%以上。 實施例2
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇于2006年，開始選用電鉆對大連莊河的寬 殼全海筍親本進行性別鑒定。選用直徑為0.6ram的鉆頭，寬殼全海筍的卵徑為 40-42Mm，這樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定寬殼全海箅的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若 干個成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三步、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒， 尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為梨形；精子 在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
經(jīng)過該方法鑒定的寬殼全海筍，性別識別率高達100%，且鑒定好的親本， 可以正常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率為100%。 實施例3
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇于2007年，開始選用電鉆對大連莊河的青
蛤親本進行性別鑒定。選用直徑為0.6mm的鉆頭，青蛤的卵徑為90陶左右，這 樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定青蛤的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若干個成 熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三步、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒， 尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形； 精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
經(jīng)過該方法鑒定的青蛤，性別識別率高達100%，且鑒定好的親本，可以正 常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率為95%。 實施例4
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇于2007年，開始選用電鉆對大連莊河的四 角蛤蜊親本進行性別鑒定。選用直徑為0.6mm的鉆頭，四角蛤蜊的卵徑為50Mm 左右，這樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定四角蛤蜊的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若干 個成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三歩、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒， 尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形； 精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
經(jīng)過該方法鑒定的四角蛤蜊，性別識別率高達9諷，且鑒定好的親本，可以 正常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率在97%以上。 實施例5
第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇于2008年，開始選用電鉆對大連莊河的中 國蛤蜊親本進行性別鑒定。選用直徑為0. 6mm的鉆頭，四角蛤蜊的卵徑為60-70她 左右，這樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定中國蛤蜊的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若干
個成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三步、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒，
尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。 第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水
滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形;
精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
經(jīng)過該方法鑒定的中國蛤蜊，性別識別率高達100%，且鑒定好的親本，可
以正常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率為96%。
實施例6
第一歩、電鉆鉆頭直徑的選擇于2008年，開始選用電鉆對大連莊河的薄 片鏡蛤親本進行性別鑒定。選用直徑為0.6mm的鉆頭，薄片鏡蛤的卵徑為70Wn 左右，這樣可以取出成熟的精或卵。
第二步、貝類性腺部位的確定薄片鏡蛤的性腺在內(nèi)臟團中，先解剖若干 個成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹慎進行鉆孔。
第三歩、微型注射器的處理采用青霉素對微型注射器的進行嚴格的消毒，
尤其是針頭部位，切忌給貝類帶來外來的病原菌，使貝類不能夠正常產(chǎn)卵排精。
第四步、顯微鏡下性別鑒定將取好的樣品放置在昆蟲培養(yǎng)皿中，采用水 滴法，加入少許海水，進行觀察。卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；
精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
經(jīng)過該方法鑒定的中國蛤蜊，性別識別率高達100%，且鑒定好的親本，可 以正常繁殖，親本產(chǎn)卵排精率在95%以上。
權利要求
1、一種貝類親本性別鑒定的方法，包括以下步驟采用直徑為0.6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類，確定貝類親本的性腺位置，在貝類親本的殼上鉆孔直至深入至性腺部位，將微型注射器消毒，用消毒過的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進行性別鑒定；卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
全文摘要
貝類親本性別鑒定的方法，采用直徑為0.6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類，確定貝類親本的性腺位置，在貝類親本的殼上深入性腺部位鉆孔，用消毒過的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進行性別鑒定，卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。本發(fā)明具有簡單易行，識別率高的特點。針對外觀上無法識別的雌雄異體型貝類親本具有普遍的通用性，且經(jīng)過鑒定的貝類可以正常繁殖，這為開展貝類的近緣、遠緣雜交，家系建立，尤其為群體雜交和大規(guī)模生產(chǎn)奠定了良好的基礎，對貝類的遺傳改良具有重要的指導意義。
文檔編號A61B10/02GK101377485SQ20081001331
公開日2009年3月4日 申請日期2008年9月23日 優(yōu)先權日2008年9月23日
發(fā)明者張國范, 張躍環(huán), 鳳 楊, 越 趙, 閆喜武, 霍忠明 申請人:大連水產(chǎn)學院