專利名稱：：酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法及其在醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景黑刺菝葜(5Vm7axsco6/m'c做foC.H.Wright)又名短梗菝葜，是菝葜科菝葜屬植物，生于低山灌叢或山谷河岸，主產(chǎn)于陜西、甘肅等省，廣泛分布于北方地區(qū)，資源十分豐富。其根莖在我國北方代替威靈仙入藥，商品上稱為"鐵絲威靈仙"、"金剛刺"、"金剛藤"等。煎湯或浸酒內(nèi)服；研粉、磨汁調(diào)敷或煎水洗外用；具除風(fēng)濕、活血解毒、鎮(zhèn)驚息風(fēng)和抗癌等功效，臨床上用于治療風(fēng)濕性腰腿病、小兒驚風(fēng)腸炎、瘰疬，瘡癤、癌腫等病癥。中藥黑刺菝葜中主要含有甾體皂苷類化學(xué)成分，其中主要皂苷類為含有拉肖皂苷元的甾體皂苷及其類似物，是制備拉肖皂苷元(Laxogenin)極好的原料(專利"一種從黑刺菝葜植物中制備拉肖皂苷元的方法"，申請?zhí)枮?00710199224.X)，而且具有抗腫瘤、抗菌等活性(張存莉等，林業(yè)科學(xué)，2006,42(9):69-73;張存莉等，西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2003,31(4):163-166.)，因此研究黑刺菝葜總皂苷的制備方法具有重要的意義。中草藥成分復(fù)雜，有活性成分，也有如蛋白質(zhì)、果膠、淀粉、植物纖維等非活性成分，這些成分既影響植物細(xì)胞中活性成分的浸出，又影響中藥液體制劑的澄清度。選用相應(yīng)的酶可將纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、果膠等雜質(zhì)分解去除，不僅有利于活性成分的提取，極大提高有效成分的得率，而且還可以回收利用酶解副產(chǎn)物，實(shí)現(xiàn)一物多用，清潔生產(chǎn)，保護(hù)環(huán)境。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種酶法提取黑剌菝葜總皂苷的方法。本發(fā)明制備的黑刺菝葜總皂苷提取物所涵蓋的各種皂苷類活性成分之中，最主要的是黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b、黑刺菝葜皂苷c及其類似物等成分。其中主要化合物結(jié)構(gòu)如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>作為黑刺菝葜總皂苷提取物，其中各皂苷類成分百分含量的總和為70100%(w/w)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是；首先將中藥黑刺菝葜材料，干燥，粉碎成30120目的粉末；按照一定的固液比，將粉末和水置于生物反應(yīng)器中，攪拌成勻漿，調(diào)節(jié)pH值和溫度，分別或依次加入纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、糖化酶、復(fù)合酶制劑等其中的一種或任意幾種酶進(jìn)行酶催化反應(yīng)；酶解結(jié)束后，繼續(xù)在4(TC10(TC條件下保溫0.5h5h，促進(jìn)甾體皂苷的浸出；然后過濾，濾渣中加入210倍量去離子水繼續(xù)提取兩次，每次13h，過濾，合并濾液，得粗總皂苷提取液；然后將粗總皂苷提取液進(jìn)一步利用澄清處理法、溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、色譜法、液-液逆流分配色譜法等其中的任意一種方法，或這些方法的任意組合純化得總皂苷提取物。在使用這些方法進(jìn)行制備時，一般包括以下幾個步驟(1)原料處理本發(fā)明所述材料，來源于百合科菝葜屬植物黑剌菝葜(5>m7x"o6/m'c做foC.H.Wright)。作為提取黑刺菝葜總皂苷的原材料，可以是市售黑刺菝葜飲片，也可以是黑刺菝葜塊根、須根、根莖、莖、巻須和葉子等任一部位或全部植株，其中優(yōu)選的藥材部位為黑刺菝葜干燥根及根莖。上述所述的黑刺菝葜包括未經(jīng)任何炮制處理的原藥材及飲片，還包括各種炮制品。綜合產(chǎn)品的收率和純度兩個因素，黑刺菝葜原材料的粉碎粒度以30120目的粉碎粒徑提取效果最佳。(2)酶催化反應(yīng)制備粗皂苷提取液按照固液比1:11:20(原料的質(zhì)量克數(shù)和水的體積毫升比)將原料粉末和水置于生物反應(yīng)器中，調(diào)節(jié)pH值，按照原料的質(zhì)量克數(shù)與酶液的毫升體積比10000:11000:5，分別加入纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、糖化酶等其中一種酶或其中兩種或三種酶組成的復(fù)合酶，或階梯法加入各種酶，即依次加入其中的兩種或三種、四種酶，按照下表所示控制最適酶解溫度和pH值，酶解15h。酶催化反應(yīng)的pH值和溫度酶種類酶活力(U/g)最適pH值最適酶解溫度(°C)纖維素酶■10004.56.53055果膠酶^10003.0102560淀粉酶法^15004.07.55090糖化酶^500003.56.55570復(fù)合酶^15003.07.04065酶解過程中時時有氧攪拌；酶解結(jié)束后，在4(TC10(TC繼續(xù)保溫0.5h5h，促進(jìn)甾體皂苷的浸出；然后過濾，濾渣中加入210倍量去離子水繼續(xù)提取兩次，每次l3h，過濾，合并濾液，得粗總皂苷提取液。(3)粗總皂苷提取液的純化雖然運(yùn)用酶技術(shù)對黑刺菝葜中的淀粉、膠體、蛋白進(jìn)行了處理，但粗皂苷提取液中仍含有大量淀粉、膠體及蛋白等物質(zhì)，需要進(jìn)一步純化處理?？梢允褂贸吻逄幚矸ǎ蛉軇┹腿》?、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、色譜法、液-液逆流分配色譜法等其中的任意一種方法，或這些方法的任意組合純化粗總皂苷提取液，得總皂苷提取物。當(dāng)采用澄清處理法純化粗總皂苷提取液時，處理法包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任意一種澄清劑或其組合醇沉劑、明膠、高嶺土、各種樹脂、聚乙二醇、聚乙三醇、殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等。當(dāng)采用萃取法進(jìn)行制備進(jìn)行時，先用低極性的酯類、垸烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適的極性溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總皂苷成分，得到總皂苷提取物。當(dāng)采用大孔吸附樹脂法純化粗總皂苷提取液時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型，如D101、D4020、D3500、D941、D21、HP-20、HP-20、XDA-1、AB-8、HPD400、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中優(yōu)選的為7095%的乙醇。當(dāng)采用超臨界流體萃取法純化粗總皂苷提取液時，可以對黑刺菝葜粗皂苷提取液的直接進(jìn)行萃取，也可以對上述任一方法和步驟所獲得的產(chǎn)物進(jìn)行萃取。萃取時可以使用或不使用以下任一種類溶劑及溶劑混合物水、醇類、酮類及酯類溶劑。當(dāng)采用柱色譜法純化粗總皂苷提取液時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的粗皂苷提取液，也可以是經(jīng)上述澄清處理法、溶劑提取法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。所用的固定相可以是硅膠、聚酰胺、氧化鋁、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex-20系列)、C-8、C-18、活性碳、纖維素等，所用的洗脫液因固定相的不同而不同，一般是水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等組成的混合溶劑。當(dāng)采用液-液逆流萃取法純化粗總皂苷提取液時，其處理的對象可以是上述提取步驟獲得的粗皂苷提取液，也可以是經(jīng)上述澄清處理法、溶劑提取法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。一般是將粗總皂苷提取液混懸于水中，然后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總皂苷成分，得總皂苷提取物。(4)濃縮常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮等濃縮除去皂苷提取物中的溶劑。(5)干燥真空干燥或噴霧干燥、冷凍干燥等方法，除去皂苷中殘留溶劑，制備得黑刺菝葜總皂苷提取物。該提取物可以單獨(dú)或與其它任何中西藥或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等，也可以作為制備拉肖皂苷元(Laxogenin)及其類似物的原料。本發(fā)明質(zhì)量控制方法可包括以下含量測定方法中的一種或兩種1.溶血指數(shù)法測定皂苷含量0.5%藥材浸出液的配制黑刺菝葜藥材粉末以等滲磷酸鹽緩沖液(或生理食鹽水)精確配制成0.5%濃度。溶血指數(shù)的測定取直徑、長短一致的9支小試管，分別精確吸入O.l、0.2、0.3.......0.9mL黑刺菝葜提取物，精密加緩沖液補(bǔ)足體積為lmL，各試管中再各精密加lmL2X血球懸浮液，各管搖勻后由可以產(chǎn)生完全溶血的黑刺菝葜提取物最低濃度來計算溶血指數(shù)。皂苷含量的測定用標(biāo)準(zhǔn)皂苷黑刺菝葜皂苷a或黑刺菝葜皂苷b配成適當(dāng)濃度的溶液，同上法測定溶血指數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)皂苷與黑刺菝葜提取物的溶血指數(shù)計算黑剌菝葜皂苷的百分含量。2.HPLC-ELSD法分析黑刺菝葜皂苷的含量色譜條件蒸發(fā)光散射檢測器，色譜柱反相C18(4.6X150mm，5pm);流動相乙腈-水梯度洗脫，4080%(070min);流速1.0mL/Min;柱溫25°C。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密吸取黑刺菝葜標(biāo)準(zhǔn)皂苷黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b或黑刺菝葜皂苷c對照品溶液(1.0pg/|aL)0、2、5、10、15、20jaL注入液相色譜儀，測定各色譜峰峰面積，以對照進(jìn)樣量(W)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。含量測定精密稱取3批黑刺菝葜提取物樣品各3份，每份約20mg，置于10mL量瓶中，加70%乙醇超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為黑刺菝葜皂苷含量測定的供試樣品溶液，精密吸取上述供試樣品溶液20|iL注入液相色譜儀，測定各色譜峰峰面積，計算含量。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:酶法提取黑刺菝葜總皂苷提取物的方法黑刺菝葜干燥根，粉碎，過80目篩，取粉末25g，按照固液比1:14(每g原料粉末加入pH值為4.5的NaAc-HAc緩沖液14mL)加入原料粉末和緩沖液于生物反應(yīng)器中，調(diào)節(jié)溫度為45。C，再加入活力為40000U/g的纖維素酶0.025mL，酶解120min，酶解期間時時攪拌；然后升溫至6(TC，在此條件下保溫120min促進(jìn)甾體皂苷的浸出，離心分離固體殘渣和濾液，用100mL去離子熱水洗滌濾渣，合并濾液，真空濃縮至100mL，冷凍干燥，得黑刺菝葜總皂苷，測定黑刺菝葜總皂苷提取物中總皂苷含量為85%，測定黑剌菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b和黑刺菝葜皂苷c三種成分的含量之和為76/0。實(shí)施例2:酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法黑刺菝葜干燥塊根，粉碎，過30目篩，取粉末25g，按照固液比1:7加入原料粉末和緩沖液置于生物反應(yīng)器中，調(diào)節(jié)溫度為8CTC，再加入活力為20000U/g的淀粉酶0.01mL，酶解100min;然后降溫至50。C，加入活力為10000U/g的糖化酶0.02mL，酶解30min，離心分離固體殘渣和濾液，殘渣中加入用5倍量去離子浸提2次，合并濾液，真空濃縮至生藥濃度為5:1(W/W)，調(diào)節(jié)溫度為8(TC，加入15%殼聚糖溶液，靜置8h，過濾，濾液上已處理好的大孔型弱堿性陰離子D392交換柱，用2倍樹脂床體積的2XNaOH溶液沖洗，沖洗液棄去，再用3倍純水沖洗，水沖洗液棄去；用5倍樹脂床體積的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至稠膏(50。C下相對密度為1.281.33)干燥，得黑刺菝葜總皂苷提取物。測定黑刺菝葜總皂苷提取物中總皂苷含量為96%，測定黑刺菝葜皂苷a和黑刺菝葜皂苷b兩種成分的含量之和為91%。實(shí)施例3:酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法黑刺菝葜干燥根莖，粉碎，過50目篩，取粉末25g，加入蒸餾水120mL,調(diào)節(jié)pH值為4.5,再加入纖維素果膠復(fù)合酶，其中活力為15000U/g的纖維素酶用量為0.04mL、活力為1000U/g的果膠酶酶用量0.05mL，升溫至50°C，酶解100min酶解期間時時攪拌，然后升溫至8(TC保溫180min促進(jìn)甾體皂苷的浸出。離心分離固體殘渣和濾液，同法再用去離子水浸提濾渣2次，，合并濾液，將濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂層析柱，吸附流速4BV/h，數(shù)值柱徑高比為1:7，上樣量為0.1g/mL(以生藥量計)；用水洗劑樹脂12BV，洗脫流速為6BV/h，沖洗液棄去；用90%乙醇洗脫8倍樹脂體積，洗脫流速為5BV/h，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥得黑刺菝葜總皂苷。測定黑刺菝葜總皂苷提取物中總皂苷含量為90%,測定黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b和黑刺菝葜皂苷c三種成分的含量之和為89%。實(shí)施例4:酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法黑剌菝葜干燥根莖，粉碎，過100目篩，加入粉末25g和60mL水置于生物反應(yīng)器中，加入0.03mL的淀粉酶液，調(diào)節(jié)pH值為4.5，反應(yīng)溫度為75°C，當(dāng)?shù)庠噭┯龇磻?yīng)液不再變藍(lán)，酶反應(yīng)結(jié)束，繼續(xù)保溫2h，促進(jìn)甾體皂苷的浸出。離心分離固體殘渣和濾液，用lOOmL去離子熱水洗滌濾渣，合并濾液；依次用等體積的石油醚、正丁醇分別萃取5次，減壓回收、干燥正丁醇萃取物得黑刺菝葜總皂苷提取物。測定黑刺菝葜總皂苷提取物中總皂苷含量為92%，測定黑刺菝葜皂苷a、黑剌菝葜皂苷b和黑刺菝葜皂苷c三種成分的含量之和為88%。實(shí)施例5:利用黑刺菝葜總皂苷提取物制備拉肖皂苷元的方法將總皂苷50毫克溶解在30mL濃度為lmol/LH2S04(MeOH:H20=l:l)溶液中，85t:熱水浴回流水解2h，反應(yīng)液冷卻后，減壓濃縮除去甲醇，再用環(huán)己垸萃取，回收溶劑，N2干燥得拉肖皂苷元，純度98%。權(quán)利要求1.酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于首先將中藥黑刺菝葜材料，干燥，粉碎成30～120目的粉末；按照一定的固液比，將粉末和水置于生物反應(yīng)器中，攪拌成勻漿，調(diào)節(jié)pH值和溫度，分別或依次加入纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、糖化酶、復(fù)合酶制劑等其中的一種或任意幾種酶，酶解一定時間；酶解結(jié)束后，繼續(xù)在40℃～100℃保溫0.5h～5h，促進(jìn)甾體皂苷的浸出；然后過濾，濾渣中加入2～10倍量去離子水繼續(xù)提取兩次，每次1～3h，過濾，合并濾液，得粗總皂苷提取液；然后將粗總皂苷提取液進(jìn)一步利用澄清處理法，或溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、色譜法、液-液逆流分配色譜法等其中的任意一種方法，或這些方法的任意組合純化得總皂苷提取物。2.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于在使用這些方法進(jìn)行制備時，一般包括以下幾個步驟原料處理粉碎黑剌菝葜原材料，過30120目的篩。酶催化反應(yīng)制備粗皂苷提取液按照固液比1:11:20(原料的質(zhì)量克數(shù)和水的體積毫升比)將原料粉末和水置于生物反應(yīng)器中，調(diào)節(jié)pH值，按照原料的質(zhì)量克數(shù)與酶液的毫升體積比10000:11000:5，分別加入纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、糖化酶等其中一種酶或其中兩種或三種酶組成的復(fù)合酶，或依次加入其中的兩種或三種、四種酶，按照下表所示控制最適酶解溫度和pH值，酶解l5h。酶催化反應(yīng)的pH值和溫度<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>酶解過程中時時有氧攪拌；酶解結(jié)束后，繼續(xù)在4(TC10(TC繼續(xù)保溫0.5h5h，促進(jìn)甾體皂苷的浸出；然后過濾，濾渣中加入210倍量去離子水繼續(xù)提取兩次，每次l3h，過濾，合并濾液，得粗總皂苷提取液。粗總皂苷提取液的純化可以使用澄清處理法，或溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、色譜法、液-液逆流分配色譜法等其中的任意一種方法，或這些方法的任意組合純化得總皂苷提取物。濃縮常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮等濃縮除去皂苷提取物中的溶劑。干燥真空干燥或噴霧干燥、冷凍干燥等方法，除去皂苷中殘留溶劑，制備得黑刺菝葜總皂苷提取物。3.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用澄清處理法純化粗總皂苷提取液時，處理法包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任意一種澄清劑或其組合醇沉劑、明膠、高嶺土、各種樹脂、聚乙二醇、聚乙三醇、殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等。4.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用萃取法純化粗總皂苷提取液時，先用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適的極性溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總皂苷成分，得到總皂苷提取物。5.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用大孔吸附樹脂法純化粗總皂苷提取液時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型，如D101、D4020、D3500、D941、D21、HP-20、HP-20、XDA-1、AB-8、HPD400、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中優(yōu)選的為7095%的乙醇。6.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用超臨界流體萃取法純化粗總皂苷提取液時，可以對黑刺菝葜粗皂苷提取液的直接進(jìn)行萃取，也可以對上述任一方法和步驟所獲得的產(chǎn)物進(jìn)行萃取。萃取時可以使用或不使用以下任一種類溶劑及溶劑混合物水、醇類、酮類及酯類溶劑。7.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用柱色譜法純化粗總皂苷提取液時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的粗皂苷提取液，也可以是經(jīng)上述澄清處理法、溶劑提取法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。所用的固定相可以是硅膠、聚酰胺、氧化鋁、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex-20系列)、C-8、C-18、活性碳、纖維素等，所用的洗脫液因固定相的不同而不同，一般是水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等組成的混合溶劑。8.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于當(dāng)采用液-液逆流萃取法純化粗總皂苷提取液時，其處理的對象可以是上述提取步驟獲得的粗皂苷提取液，也可以是經(jīng)上述澄清處理法、溶劑提取法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。一般是將提取物混懸于水中，然后用低極性的酯類、垸烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總皂苷成分，得總皂苷提取物。9.如權(quán)利要求1所述的酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法，其特征在于該提取物可以作為制備拉肖皂苷元及其類似物的原料。全文摘要本發(fā)明公開了一種酶法制備黑刺菝葜總皂苷提取物的方法。將黑刺菝葜干燥粉碎成30～120目的粉末，按照一定的固液比，將其和水置于生物反應(yīng)器，控制pH值和溫度，分別或依次加入纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、糖化酶、復(fù)合酶等其中一種或任意幾種酶進(jìn)行酶反應(yīng)，酶解后，40℃～100℃保溫0.5h～5h；過濾，濾渣中加入去離子水再提取兩次，合并濾液得粗總皂苷提取液；然后將其利用澄清處理法、溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、色譜法、液-液逆流分配色譜法等其中任意一種或這些方法的任意組合純化得總皂苷提取物。該提取物可作制備拉肖皂苷元及其類似物的原料，也可制備藥物或功能性食品。文檔編號A61K31/7048GK101229335SQ20081001753公開日2008年7月30日申請日期2008年2月22日優(yōu)先權(quán)日2008年2月22日發(fā)明者劉華偉,周一萬,張存莉,樺管申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)