專(zhuān)利名稱(chēng)：：一類(lèi)新型縮酚酸類(lèi)化合物及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類(lèi)新型的縮酚酸類(lèi)化合物的制備方法及其用途。技術(shù)背景縮酚酸，嚴(yán)格意義上是指那些兩個(gè)或者兩個(gè)以上的苯環(huán)之間由酚羥基參與形成的酯鍵相連接而形成的化合物。天然的縮酚酸類(lèi)化合物主要存在于苔蘚類(lèi)中，但是高等植物如石南科灌木、罌粟屬植物中也含有這類(lèi)化合物。據(jù)報(bào)道，從苔蘚類(lèi)植物中分離出來(lái)的一些縮酚酸類(lèi)化合物具有很多的生物活性，包括抗分枝桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、昆蟲(chóng)及線(xiàn)蟲(chóng)等活性。另外，它們還表現(xiàn)出抗細(xì)胞增殖、抗癌細(xì)胞、抗HIV-1整合酶、抗病毒以及退熱止痛等作用。還有研究表明，一些縮酚酸類(lèi)化合物可以通過(guò)抑制前列腺素和白細(xì)胞三烯B4的生物合成，從而有可能成為非甾體類(lèi)抗炎藥。炎癥(inflammation)是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛。通常情況下，炎癥是有益的，是人體的自動(dòng)的防御反應(yīng)。在這個(gè)反應(yīng)過(guò)程中，白介素8(chemokineinterleukin(IL)-8)等細(xì)胞因子起著很重要的作用。IL一8是一種多源的細(xì)胞因子，IL一1、TNF、LPS和PMA均能誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等合成和分泌IL一8。PHA等絲裂原活化的T細(xì)胞也可產(chǎn)生IL一8，此外，人類(lèi)多種腫瘤細(xì)胞均可表達(dá)IL一8。在一些組織發(fā)生炎癥時(shí)，可以檢測(cè)到IL—8的量升高，而通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯勘砻?，降低IL—8的量會(huì)對(duì)病變組織產(chǎn)生有利的作用(Sekido，N.;Mukaida,N.;Harada,A.;Nakanishi,I.;Watanabe，Y.;Matsushima,K.iVart/re(Zowtfo"」，1993,365,654.Mulligan,M.S.;Jones,M丄.；Bolanski,M.A.;Baganoff，M.P.;Deppeler,C丄.；Meyers,DM.;Ryan,U.S.;Ward,P.A.J!/mww"o/"1993,5585.)。最近，一種從產(chǎn)自巴西南部的植物擬愛(ài)神木的果實(shí)中分離出來(lái)的名為jaboticabin的縮酚酸類(lèi)化合物，被證實(shí)具有抑制由刺激人的肺部上皮細(xì)胞所產(chǎn)生的IL一8的活性，因而具有一定的抗炎能力(Reynertson,K.A.;Wallace,A.M.;Adachi,S.;Gil，R.R.;Yang，H.;Basile，M丄；Armiento，J.D.;Weinstein,B.;Kennelly,E丄J！Ato./Vod2006，69,1228.)。迄今為止，人們對(duì)縮酚酸類(lèi)化合物的研究局限在從含有這類(lèi)化合物的植物中提取分離后再研究它們的生物活性，而關(guān)于針對(duì)性地設(shè)計(jì)合成縮酚酸類(lèi)化合物的報(bào)道并不多。本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成了一類(lèi)新型的縮酚酸類(lèi)化合物，并對(duì)它們抗細(xì)菌活性篩選，結(jié)果顯示這些化合物不僅可以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，這是以前的文獻(xiàn)未曾報(bào)道過(guò)的。進(jìn)一步地，本發(fā)明又對(duì)通過(guò)抗菌篩選出的活性好的化合物進(jìn)行了抑制由細(xì)菌引起的IL一8產(chǎn)生量的測(cè)試，結(jié)果表明其中一個(gè)化合物具有較強(qiáng)的抑制由大腸桿菌刺激產(chǎn)生的IL一8，因而可以有潛力成為一類(lèi)非甾體類(lèi)抗炎藥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類(lèi)新型的縮酚酸類(lèi)化合物的制備方法與用途。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一類(lèi)縮酚酸類(lèi)化合物，它有如下通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中R尸-CH3或隱CH2CH3;R2=H、F、Cl或Br;R3=H、Cl、Br、OCH3、OCH2CH:或N02;R4=H、F、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或CH3;R產(chǎn)H或OCH3;11=0或1。一種制備上述縮酚酸類(lèi)化合物的方法，它包括如下步驟:1.將鄰羥基苯乙酸酯溶于無(wú)水二氯甲垸中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入各種R2、R3、R4和R5取代的苯甲酸或者苯乙酸類(lèi)化合物，鄰羥基苯乙酸酯與苯甲酸或者苯乙酸類(lèi)化合物兩者的物質(zhì)的量之比為1:1.2，2.然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)，加入的DMAP與鄰羥基苯乙酸酯的物質(zhì)的量之比為1:4-1:5，DCC與鄰羥基苯乙酸酯的物質(zhì)的量之比為1.1:1，3.待反應(yīng)液完全冷卻后，加入少量水(水的加入量可以是水與反應(yīng)物鄰羥基苯乙酸酯的物質(zhì)的量之比為100:1)，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯:石油醚=1:2-1:5，得到上述的本發(fā)明的縮酚酸類(lèi)化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的新型的縮酚酸類(lèi)化合物不僅可以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，后者是以前的文獻(xiàn)未曾報(bào)道過(guò)的。本發(fā)明還對(duì)抗菌篩選出的活性好的化合物進(jìn)行了抑制由細(xì)菌引起的IL一8產(chǎn)生量的測(cè)試，結(jié)果表明其中一個(gè)化合物具有較強(qiáng)的抑制由大腸桿菌刺激產(chǎn)生的IL一8，因而可以有潛力成為一類(lèi)非甾體類(lèi)抗炎藥。圖1為化合物21對(duì)由大腸桿菌誘發(fā)產(chǎn)生的白介素8量的抑制活性。試驗(yàn)結(jié)果是5次試驗(yàn)的平均值。圖2為化合物21在不同濃度下對(duì)細(xì)胞成活率的影響。試驗(yàn)結(jié)果是5次試驗(yàn)的平均值。具體實(shí)施方式通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。實(shí)施例一鄰羥基苯乙酸甲酯的制備將鄰羥基苯乙酸(7.6g,50mmo1)溶于無(wú)水甲醇(50mL)中，待完全溶解后，90'C及攪拌下慢慢滴加3ml98%濃硫酸，回流條件下反應(yīng)24小時(shí)后停止反應(yīng)。待冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離。用乙酸乙酯:石油醚=1:5進(jìn)行洗脫，得到此目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率90%，mp:61~62°C,&NMR(300MHz,c^-DMSO):3.54(s,2H);3.58(s，3H);6.78(m,2H);7.06(m,2H);9.47(s,1H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):171.9，155.5,131.2,128.2,121.4,118.9,115.0，51.6，35.2.MS(ESI):167.1(C9Hu03，[M+H]+).Anal.CalcdforC9H10O3:C,65.05;H，6.07%;Found:C,65.03;H,6.10%。實(shí)施例二鄰羥基苯乙酸乙酯的制備OCH2CH3將鄰羥基苯乙酸(7.6g,50mmol)溶于無(wú)水乙醇(50mL)中，待完全溶解后，95'C及攪拌下慢慢滴加3.5ml98%濃硫酸，回流條件下反應(yīng)24小時(shí)后停止反應(yīng)。待冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:4.5進(jìn)行洗脫，得到此目標(biāo)化合物，白色粉末。產(chǎn)率86%,mp:67~68°C;NMR(300MHz，^-DMSO):U7(t，</=7.1Hz，3H);3.53(s，2H);4.01(m,2H);6.75(m,2H);7.07(m,2H);9.46(s，1H).13CNMR(DMSO-浙<5ppm):171.6,155.3,131.8,127.9,121.8,118.3,115.4，51.5,35.8,14.3.MS(ESI):181.1(C10H13O3,[M+H]+).Anal.CalcdforC10H12O3:C，65.65;H,6.71%;Found:C，65.69;H，6.74%。實(shí)施例三4-氟苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物l)的制備。OCH3將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氟苯乙酸(1.85g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol),回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5，洗脫，得到目標(biāo)化合物，淡黃色油狀物。產(chǎn)率89。/。,111NMR(300MHz，^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s，3H);3.95(s,2H);7.20(m，4H);7.32(m，2H);7,41(m,2H).13CNMR(DMSO-瓶(5ppm):170.8,169.6，149.2,131.7，130.1,128.2,127.1,126.1，122.6，115.2，51.4，35.4.MS(ESI):303.1(C17H16F04，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15F04:C,67.54;H,5.00%;Found:C，67.60;H，5.05%。實(shí)施例四4-氯苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物2)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmd)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氯苯乙酸(2.04g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)7jCNa2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物，淡黃色油狀物。產(chǎn)率86%，'HNMR(300MHz,^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s,3H);3.96(s,2H);7.13(m，1H);7.22(m，1H);7.32(m,2H);7.41(m,4H).13CNMR(DMSO-必,Sppm):170.7,169.3,149.1,132.9,132.1，131.5,128.4,127.1，126.1，122.6，51.8,35.3.MS(ESI):319.1(C17Hi6C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，65.06;H，4.74%;Found:C,65.09;H，4.79%。實(shí)施例五4-溴苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物3)的制備。OCH3將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmo1)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，80。C及攪拌下慢慢加入4-溴苯乙酸(2.56g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率88%，^NMR(300MHz，^-DMSO):3.55(s,2H);3.59(s,3H);3.95(s,2H);7.14(m，1H);7.22(m,1H);7.32(m,4H);7.56(d,/=1.8Hz，2H).13CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.6，169.2,149.0,133.3,131.9,131.6,128.4，126,9,122.5,114.9,51.8，35.2.MS(ESI):363.0(C17H16Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15Br04:C,56.20;H,4.16%;Found:C,56.14;H，4.21%。實(shí)施例六3-氯苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物4)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，8CrC及攪拌下慢慢加入3-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然后加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酉旨:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率84%,力NMR(300MHz，^-DMSO):3.56(s,2H);3.59(s,3H);3.99(s,2H);7.15(m，1H);7.23(m,1H);7.37(m，4H);7.47(s,1H).13CNMR(DMSO-必，5ppm):170.8,169.3，149.1，136.3，133.2,131.7，130.3，129.7,128.4,127.2,127.0,126.2,122.5,118.9，115.0,51.5,35.2.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C,64.06;H，4.74%;Found:C,64.01;H,4.69%。實(shí)施例七3-溴苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯((化合物5)的制備。OCH3將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入3-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基批啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,Ummol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率89%,&顧R(300MHz，c4-DMSO):3.35(s，2H);3.36(s，3H);4.01(s，2H);7.14(m，1H);7.23(m,1H);7.35(m，4H);7.50(m，1H);7.62(s,1H).13CNMR(DMSO隱浙3ppm):170.7，169.3，149.1，136.6,132.6,131.6,131.1,130.1，128.9,128.2,127.0，126.2,122.6，119.0，115.151.5，35.3.MS(ESI):363.0(C17H16Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15Br04:C,56.22;H，4.16%;Found:C,56.28;H，4.20%。實(shí)施例八3-甲氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物6)的制備。將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，80。C及攪拌下慢慢加入3-甲氧基苯乙酸(1.99g，12mmo1)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率83%，NMR(300畫(huà)z，^-DMSO):3.54(s,2H);3.55(s,3H);3.76(s，3H);3.90(s,2H);6.87(m,1H);6.94(m，2H);7.09(m,IH);7.28(m,4H).13CNMR(DMSO-必,5ppm):170.8，169.5，159.6,149.2,135.3，131.6,131,1,129.6,128.2,127.0,122.6,121.8，115.4,112.7,55.1，51.5，35.2.(ESI):363.0(C18H1905,[M+H]+).Anal.CalcdforCi8H1805:C,68.78;H,5.77%;Found:C，68.81;H，5.73%。實(shí)施例九3，4-二甲氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物7)的制備。將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入3，4-二甲氧基苯乙酸(2.35g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率85%,mp:6566°C，NMR(300MHz，^-DMSO):3.49(s,2H);3.51(s,3H);3.72(s，3H);3.73(s,3H);3.82(s,2H);6.84(m,1H);6.90(m，1H);6.94(m，1H);7.08(m，1H);7.18(m,1H);7.30(m,2H).13CNMR(DMSO-必，5ppm):170.8，169.8,149.1，148.2,131.6,128.4,127.0，126.3，126.1,122.6，121.8，113.5,55.6，51.8,35.2.MS(ESI):345.1(C19H2I06，[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O6:C,66.27;H，5.85%;Found:C，66.23;H,5.89%。實(shí)施例十3,4-二乙氧基苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物8)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入3，4-二乙氧基苯乙酸(1.39g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。黃色粉末，產(chǎn)率82%,mp:92~93°C,^NMR(300MHz，^陽(yáng)DMSO):1.24(s，3H);1.33(s,3H);3.52(s,2H);3.54(s,3H);3.83(s，2H);3.92(s,2H);3.95(s,2H);6.83(m，1H);6.94(m,2H);7.09(m，1H);7.21(m，1H);7.30(m，2H).13CNMR(DMSO陽(yáng)必，<5卯m):170.8，169.9,149.2,148.4，147.7,131.7,128.5，12.70，126.3，12.61,122.6,122.0，115.3，113.9，64.1，51.8，35.8,31.9，30.6,25.6，25.3,24.6，15.0.MS(ESI):373.1(C21H2506,[M+H]+).Anal.CalcdforC21H2406:C,67.73;H,6.50%;Found:C，67.78;H,6.56%。實(shí)施例十一4-甲基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物9)的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入4-甲基苯甲酸(1.63g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率84%,mp:59~60°C,巾NMR(300MHz,&-DMSO):2.46(s,3H);3.47(s，3H);3.68(s,2H);7.27(m,2H);7.39(m，4H);7.98(d,/=8.0Hz，2H).13C畫(huà)R(DMSO-瓶3ppm):170.8，164.0,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>。實(shí)施例十二3-硝基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物IO)的制備將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入3-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡咬(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率82%,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>實(shí)施例十三2-氯苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物ll)的制備將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，80'C及攪拌下慢慢加入2-氯苯甲酸(1.87g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基妣啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率84%，NMR(300MHz，^-DMSO):3.51(s，3H);3.71(s,2H》7.31(m，2H);7.43(m,2H);7.58(m,1H);7.67(m,2H);8.06(m，1H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.8，163.1,149.1,134.1，133.0,131.9,131.3，128.8,128.7,127,6,127.2,126.5,122.7,51.8,35.8.MS(ESI):305.0(C16H14C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC16H13C104:C,63.06;H,4.30%;Found:C,63.02;H,4.32%。實(shí)施例十四4-氯苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物12)的制備CIOCH3將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入4-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2,03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸千后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率86。/。,mp:82~83°C,NMR(300MHz，^-DMSO):3.47(s,3H);3.69(s，2H);7.30(m,2H);7.41(m，2H);7.30(m，2H);7.41(m,2H);7.70(d，/=8.4Hz,2H);8.10(d,/=8.4Hz，2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.8,163.3，149.1,139.3,131.8，131.7，129.3,129.1,128.6，128.1,127.8,127.2，126.4，122.8,51.8,35.9.MS(ESI):305.0(C16H14C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC16H13C104:C,63.06;H，4.30%;Found:C,63.08;H,4.29%。實(shí)施例十五3，5-二甲氧基苯甲酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物13)的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>將實(shí)施例一得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸甲酯(1.66g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入3，5-二甲氧基苯甲酸(2.18g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,llmmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率85°/。，mp:86~87°C,&NMR(300MHz,^-DMSO):3.49(s,3H);3.69(s,2H);3.84(s,6H);6.88(t,J=2.4Hz，1H);7.20(d,/=2.4Hz,2H);7.28(m,2H);7.39(m,2H).13C麗R(DMSO國(guó)必，3ppm):170.8,163.8,160.8,149.2，131.8，130.9,128.6,127.2，126.3,122.8，107.5,106.1,55,8,51.8,35.9.MS(ESI):305.0(C18H1906,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H1806:C,65.45;H,5.49%;Found:C,65.41;H，5.53%。實(shí)施例十六4-氟苯乙酸-2-(甲氧羰基甲基)苯酚酯(化合物14)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入4-氟苯乙酸(1.85g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率84%,]HNMR(300MHz,A-DMSO):3.15(t，/=9.1Hz,3H);3.52(s，2H);3.96(s，2H);4.02(q，J=8.1Hz,2H);7.14(t，■/=4.0Hz,2H);7.22(t,/=6.6Hz,2H);7.32(m,2H);7.42(q,/=5.2Hz,2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.3,169.6，163.2,160.0，149.1，131.7，131.6,130.2，128.4，128.2,127.1,126.1,122.6,115.5,115.2,60.5，35.5，14.1.MS(ESI):305.0(CsH18F04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17F04:C，68.35;H,5.42%;Found:C，68.39;H,5.48%。實(shí)施例十七4-氯苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物15)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>o將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入4-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚二l:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率87%,&NMR(300MHz，A-DMSO):1.13(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s，2H);3.96(s,2H);4.02(q，J=8.4Hz,2H);7.13(d,8.0Hz,1H);7.22(m，1H);7.32(m,2H);7.42(m,4H).13CNMR(DMSO-必,Jppm):170.3,169.4,149.1,133.0，132.2,131.7,128.6,128.4,127.1,126.1，122.6,60.6,35.6,14丄MS(ESI):333.0(C18H18C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17C104:C，64.97;H，5.15%;Found:C,64.91;H,5.11。/o。實(shí)施例十八4-溴苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物16)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入4-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率82%,〗HNMR(300MHz,4-DMS0):1.14(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s,2H);3.96(s，2H);4.01(q,/=8.4Hz,2H);7.13(d，J=8.4Hz,1H);7.21(t，J=7.5Hz,1H);7.33(t,/=8,0Hz，4H);7.56(d,■/=8.4Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.3,169.2,149.1，133.4，132.0,131.6,131.5，128.4,127.1，126.1，122.6，120.6,60.6,35.6，14.2.MS(ESI):377.0(C18H18Br04，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C,57.31;H,4.54%;Found:C,57.38;H,4.58%。實(shí)施例十九3-氯苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物17)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3-氯苯乙酸(2.04g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率85%,^NMR(300MHz,c4-DMSO):1.16(t,J=8.6Hz，3H);3.54(s,2H);3.99(s,2H);4.06(q，《/=10.0Hz,2H);7.15(d,J=7.9Hz,1H);7.22(t,■/=7.3Hz,1H);7.37(m,5H);7.48(s,1H).13CNMR(DMSO-必，Sppm):170.3，169.2，149.1，136.4,133.2,131.7,131.1,130.4,129.7，128.5，128.4,127.2,127.1，126.2，122.6,60.6,35.5,14.2.MS(ESI):333.0(Ci8Hi8C104，[M+H〗+).Anal.CalcdforC18H17C104:C,64.97;H,5.15%;Found:C,64.93;H，5.12%。實(shí)施例二十3-溴苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物18)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3-溴苯乙酸(2.56g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率83%,^NMR(300MHz,^-DMSO):1.17(t,/=8.1Hz，3H);3.55(s,2H);3.99(s,2H);4.06(q,/=2.0Hz,2H);7.11(m,2H);7.23(m，2H);7.35(m，2H);7.50(m,2H).13C雨R(固SO-必，<5ppm):171.4，170.0，169.3,155.6，149.1，136.7,132.7,131.7,131.1，130.7,130.4,130.1,129.6,129.1,128.9，128.4,128.2,127.1,126.2,122.6,121.8,121.5,118.9，115.0,60.6，60.1，48.0,35.5，14.3.MS(ESI):377.0(C18H18Br04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C，57.31;H，4.54%;Found:C,57.37;H,4.59%。實(shí)施例二十一3-甲氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物19)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3-甲氧基苯乙酸(1.99g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率86%,&NMR(300MHz，^-DMSO):1.14(t,J=7.1Hz，3H);3.52(s，2H);3.76(s,3H);3.91(s,3H);4.03(q，/=6.9Hz,2H);6.89(m，2H);7.12(d，/=7.9Hz,1H);7.30(m,4H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.3,169,5,159.6，149.2，135.3,131.7,131.2,129.7，128.4,127.1，126.1,122.6,121.9,115.4,112.7,60.5,55.1，35.5,14.3.MS(ESI):377.0(C19H2105,[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O5:C，69.50;H,6.14%;Found:C,69.54;H，6.17%。實(shí)施例二十二3，4-二甲氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物20)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3，4-二甲氧基苯乙酸(2.35g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率85%,^NMR(300MHz，^隱DMSO):1.16(t,/=7.1Hz，3H);3.53(s,2H);3.74(s，3H);3.76(s，3H);3.86(s，2H);4.02(q，J=4.2Hz，2H);6.94(m,3H);7.11(m，1H);7.22(tn,1H);7.32(m,1H).13CNMR(DMSO-必,(5ppm):170.4,169.9,149.2,148.9,148.2,131.6,131.2，128.4,128.2,127.1,126.2，126.1，122.6,121.8,118.9,115.0,113.4，112.0，60.5，55.7,35.5,14.3.MS(ESI):377.0(C20H23O6，[M+H]+).Anal.CalcdforC20H22O6:C,67.03;H,6.19%;Found:C,67.09;H，6.23%。實(shí)施例二十三3，4-二乙氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物21)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3，4-二乙氧基苯乙酸(1.39g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。黃色油狀物，產(chǎn)率81%,&NMR(300MHz，^-DMSO):1.13(t,/=7.1Hz,3H);1.31(q,/=2.4Hz,3H);1.33(q,>2.4Hz，3H);3.50(s,2H);3.82(s,2H);3.99(m，6H);6.84(m，1H);6.93(m,2H);7.11(m，1H);7.22(m,1H);7.32(m,1H).l3CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.9，149.2,148.3，147.6,131.6,128.4,127.1,126.3,126.1,122.6，121.9,115.1，113.6，6線(xiàn)60.5,35.5，15.0，14.1.MS(ESI):387.1(C22H2706,[M+H]+).Anal.CalcdforC22H2606:C,68.38;H，6.78%;Found:C,68.36;H,6.74%。實(shí)施例二十四4-甲基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物22)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入4-甲基苯甲酸(1.63g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡徒(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。黃色粉末，產(chǎn)率85Q/。，mp:55~56°C,^畫(huà)R(300MHz,c4-DMS0):1.01(t,/=7.1Hz,3H);2.43(s,3H);3.64(s，2H);3.91(q，/=8.1Hz，2H);7.28(m，2H);7.41(m，4H);7.99(d,8.3Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,(5ppm):170.4，166.9，163.0,149.0,134.3,132.9,132.7，132.0,131.4,131.0,130.8,130.6,128.7,127.7,127.4，127.2，126.5，122.7,60.5,36.0,14.0.MS(ESI):299.1(C18H1904,[M+H]+).Anal.CalcdforCi8Hi804:C,72.47;H,6.08%;Found:C,72.43;H,6.03%。實(shí)施例二十五3-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物23)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲'烷(50mL)中，待完全溶解后，85X:及攪拌下慢慢加入3-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL少量水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率88%,mp:73~74°C,&NMR(300MHz，c4-DMSO):0.99(t，/=7.1Hz,3H);3.71(s，2H);3.94(q,/=7.1Hz,3H);7.31(m，1H);7.42(m,3H);7.93(t,/=8.0Hz，1H);8.52(d,J=7.9Hz,1H);8.59(d>8.3Hz，1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4,162.4,149.0,148.2,136.0,131.9，131.1,130.7，128.6，127.2,126.6，124.2,122.8，60.6,36.1，14.0.MS(ESI):330.0(C17H16N06，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C，62.00;H，4.59;N,4.25%;Found:C,62.07;H,4.62;N,4.28%。實(shí)施例二十六2-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物24)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入2-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然后加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率86。/。，mp:7778。C，'H固R(300MHz，^-DMSO):1.01(t，6.9Hz,3H);3.69(s,2H);3.94(q,/=7.1Hz,3H);7.30(m，2H);7.41(m,3H);7.67(m,2H);8.08(d，《/=7.5Hz，1H).13CNMR(DMSOJ,(5ppm):170.4，163.7，160.8,149.2,131.8，130.9,128.5，127.3,126.3，122.8，107.6，106.0，60.5，55.8,36.1，13.9.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H，4.74%;Found:C,64.08;H,4.78%。實(shí)施例二十七4-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物25)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入4-氯苯甲酸(1.87g,12mmol)。然后加入N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol),回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100raL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。黃色油狀物，產(chǎn)率85。/。？HNMR(300MHz,^-DMSO):0.99(t,J=7.1Hz,3H);3.68(s,2H);3.92(q,J=7.1Hz，2H);7.29(m，2H);7.41(m，2H);7.68(m，2H);8.12(m,2H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.8，163.3，149.1，139.3,131.8,131.7，129.3，129.1,128.6,128.1，127.8，127.2,126.4,122.8，51.8，35.9,14.2.MS(ESI):319.0(C17H16C104，[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H,4.74%;Found:C,64.11;H，4.78%。實(shí)施例二十八3，5-二甲氧基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物26)的制備。OCH3將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲'垸(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入3，5-二甲氧基苯甲酸(2.18g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。白色粉末，產(chǎn)率88%,mp:75~76°C，NMR(300MHz,^-DMSO):1.01(t,/=7.1Hz，3H);3.67(s,2H);3.84(s,6H);3.93(q,J=7.1Hz，2H);6.88(t,/=2.4Hz，1H);7.21(d，/=2.4Hz,2H);7.28(m，2H);7.40(m,2H).13CNMR(DMSO-必,3ppm):170.4,164.0,149.3，144.8，131.8,130.0,129.7,128.5,127.4,126.2,122.9,60.5,36.1,21.4,14.0.MS(ESI):345.1(C19H2i06，[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O6:C，66.27;H,5.85%;Found:C,66.23;H，5.87%。實(shí)施例二十九2-氟苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物27)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入2-氟苯甲酸(1.85g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04千燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率80%,if!NMR(300MHz,A-DMSO):3.14(t，/=9.1Hz,3H);3.51(s,2H);4.08(q,J=8.1Hz，2H);7.17(t，《/=4.0Hz，2H);7.22(t,/=6.6Hz,2H);7.36(m,2H);7.42(q,/=5.2Hz，2H).13C畫(huà)R(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.6,163.2,160.0，149.1,131.7，131.6，130.2,128.4，128.2,127.1,126.1,122.6，115.5,115.2，60.5,35.5,14.1.MS(ESI):305.0(C18H18F04,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17F04:C,68.35;H,5.42%;Found:C，68.31;H，5.46%。實(shí)施例三十3-氯苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物2S)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>OCH2CH3將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85°<3及攪拌下慢慢加入3-氯苯甲酸(1.87g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸千后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率83%,^NMR(300MHz，A-DMSO):1.01(t，J=6.9Hz,3H);3.94(q,/=7.1Hz，3H);7.30(m,2H);7.41(m，3H);7.67(m，2H);8.08(d,J=7.5Hz,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4，163.7，160.8,149.2，131.8，130.9,128.5,127.3，126.3，122.8，107.6,106.0,60.5，55.8，36.1，13.9.MS(ESI):319.0(C17H16C104,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15C104:C，64.06;H，4.74%;Found:C，64.09;H,4.71%。實(shí)施例三十一2-溴苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物29)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入2-溴苯甲酸(2.56g，12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g，11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率85%,^NMR(300MHz,^-DMSO):1.14(t,/=8.1Hz,3H);3.52(s，2H);4.01(q,/=8.4Hz，2H);7.13(d，J=8.4Hz，1H);7.21(t,J=7.5Hz，1H);7.33(t,/=8.0Hz,4H);7.56(d,/=8.4Hz,2H)."CNMR(DMSO-必，(5ppm):170.3，169.2,149.1,133.4，132.0,131.6，131.5，128.4，127.1,126.1,122.6,120.6,60.6,35.6,14.2.MS(ESI):377.0(C18H18Br04，[M+H]+).Anal.CalcdforC18H17Br04:C,57.31;H,4.54%;Found:C,57.34;H,4.57%。實(shí)施例三十二2-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物30)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入2-硝基苯甲酸(l.卯g，12mmo1)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)禾tlN，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。無(wú)色油狀物，產(chǎn)率83%，&NMR(300MHz,c^-DMSO):0.99(t,J=7.1Hz，3H);3.73(s，2H);3.92(q，/=7.1Hz,3H);7.34(m,1H);7.45(m，3H);7.94(t,/=8.0Hz，1H);8.52(d，J=7.9Hz,1H);8.59(d，/=8.3Hz,1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，<5ppm):170.4，162.4,149.0，148.2，136.0,131.9,131.1，130.7,128.6，127.2，126.6,124.2,122.8,60.6，36.1，14.0.MS(ESI):330.0(C17Hi6N06,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C,62.00;H，4.59;N,4.25%;Found:C,62.02;H,4.64;N:4.22%。實(shí)施例三十三2-甲氧基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物31)的制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85"及攪拌下慢慢加入2-甲氧基苯甲酸(1.90g,12mmo1)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg,2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入100mL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。淡黃色油狀物，產(chǎn)率80%,&NMR(300MHz,^-DMSO):1.14(t,/=7.1Hz,3H);3.75(s，3H);3.93(s，3H);4-06(q，《/=6.9Hz,2H);6.86(m,2H);7.12(d,/=7.9Hz,1H);7.30(m,4H).13CNMR(DMSO-必,<5ppm):170.3,169.5,159.6，149.2,135.3,131.7,131.2，129.7,128.4,127.1，126.1,122.6,121.9,115.4,112.7,60.5,55.1，35.5，14.3.MS(ESI):377.0(C19H2105,[M+H]+).Anal.CalcdforC19H20O5:C,69.50;H,6.14%;Found:C，69.56;H,6.18%。實(shí)施例三十四4-硝基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物32)的制備。NO將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g，10mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(50mL)中，待完全溶解后，85。C及攪拌下慢慢加入4-硝基苯甲酸(1.90g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。無(wú)色油狀物，產(chǎn)率83%,'HNMR(300MHz,^-DMSO):0.99(t,/=7.1Hz,3H);3.71(s，2H);3.94(q,J=7.1Hz,3H);7.31(m,1H);7.42(m,3H);7.93(t,/=8.0Hz,1H);8.52(d，《/=7.9Hz,1H);8.59(d,/=8.3Hz，1H);8.76(m,1H).13CNMR(DMSO-必，3ppm):170.4,162.4,149.0，148.2,136.0，131.9,131.1,130.7,128.6,127.2,126.6,124.2，122.8，60.6,36.1,14.0.MS(ESI):330.0(C17H16N06,[M+H]+).Anal.CalcdforC17H15N06:C，62.00;H,4.59;N,4.25%;Found:C，62.03;H,4.61;N,4.27%。實(shí)施例三十五2-甲基苯甲酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯(化合物33)的制備。將實(shí)施例二得到的產(chǎn)物鄰羥基苯乙酸乙酯(1.80g,10mmol)溶于無(wú)水二氯甲垸(50mL)中，待完全溶解后，85'C及攪拌下慢慢加入2-甲基苯甲酸(1.63g,12mmol)。然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(248mg，2.03mmol)禾卩N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(2.26g,11mmol)，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)。待完全冷卻后，加入IOOmL水，然后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗兩次，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，用乙酸乙酯:石油醚=1:5洗脫，得到目標(biāo)化合物。黃色油狀物，產(chǎn)率81%,mp:55~56°C,&NMR(300MHz,^-DMSO):1.01(t,■/=7.1Hz,3H);2.45(s，3H);3.92(q,J=8.1Hz,2H);7.27(m,2H);7.41(m，4H);7.99(d,8.3Hz,2H).13CNMR(DMSO-必,3ppm):170.4,166.9,163.0，149.0,134.3,132.9,132.7,132.0,131.4，131.0，130.8,130.6，128.7,127.7,127.4，127.2,126.5,122.7,60.5,36.0,14.0.MS(ESI):299.1(C18H1904,[M+H]+).Anal.CalcdforC18H1804:C,72.47;H,6.08%;Found:C,72.40;H,6.05%。實(shí)施例三十六上述實(shí)施例制備的縮酚酸類(lèi)化合物列于表1。表1.本發(fā)明的縮酚酸類(lèi)化合物通式中R基團(tuán)所代表的取代基及其表征數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實(shí)施例三十七本發(fā)明合成的縮酚酸類(lèi)化合物對(duì)細(xì)菌的抑制作用本發(fā)明采用MTT法，以及rato7/sATCC6633，S.awrewsATCC6538，S./aecafcATCC9790，Pam^"osaATCC13525，￡.co//ATCC35218和￡.c/oacaeATCC13047為研究對(duì)象，進(jìn)行最低抑菌濃度(minimuminhibitoryconcentration,MIC)判定，并初步進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究，MTT法由于可通過(guò)測(cè)定對(duì)結(jié)果進(jìn)行量化分析，較之肉眼觀察法更為客觀、靈敏，易于進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，因而具有更大的應(yīng)用價(jià)值。1.藥物的稀釋將藥物按照二倍稀釋法逐管稀釋藥液，使助溶劑的最終濃度為1%。2.待測(cè)菌液的制備從新鮮菌種斜面沾取少量的菌苔，接種在適合實(shí)驗(yàn)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中，細(xì)菌放在37度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24h。培養(yǎng)后加入2-3ml的無(wú)菌生理鹽水，用無(wú)菌的接種針將菌體充分的洗下，用管口帶棉花的無(wú)菌吸管從斜面中吸出懸液于無(wú)菌試管中，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。細(xì)菌再用MH培養(yǎng)基稀釋50倍，使其最終濃度為103-105cfu/ml。3.對(duì)照細(xì)菌革蘭氏陰性菌卡那霉素。革蘭氏陽(yáng)性菌青霉素。陽(yáng)性對(duì)照只有培養(yǎng)基和一定濃度的助溶劑。4.藥敏板的制備取無(wú)菌96孔板，于每排1號(hào)孔加入培養(yǎng)基100Ul，作為空白對(duì)照；2-10號(hào)孔加入不同濃度的受試化合物溶液IOul和新鮮配置的菌液90ul。ll號(hào)孔加入已知的對(duì)照藥品10ul和菌液90ul作為陰性對(duì)照；12號(hào)孔不含受試藥物，作為陽(yáng)性對(duì)照。每個(gè)濃度做三個(gè)重復(fù)。5.培養(yǎng)細(xì)菌放在37度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后加入2mg/ml的MTT溶液50ul作用4-5h后，每孔再加入裂解液IOOul(異丁醇鹽酸SDS)作用12h。6.MIC值判定將上述處理好的藥敏板，用酶標(biāo)分析儀在570nra下測(cè)各孔的OD值。計(jì)算ICs。值，作為藥物的最低抑菌濃度即MIC。結(jié)構(gòu)見(jiàn)表2。表2本發(fā)明所合成的縮酚酸類(lèi)化合物的抗細(xì)菌活性的MIC列表<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>抗細(xì)菌試驗(yàn)結(jié)果顯示大部分縮酚酸類(lèi)化合物不僅能夠抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng)，還可以抑制革蘭氏陰性細(xì)菌的生長(zhǎng)。其中一些化合物顯示了很強(qiáng)的抗菌活性，比如化合物10和23具有很強(qiáng)的抑制及w&ffeATCC6633的活性，MIC值為0.78pg/mL，高于對(duì)照青霉素G;化合物8和21對(duì)￡.co/!'ATCC35218表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用，MIC值為1.562;/g/mL，高于對(duì)照卡那霉素B。實(shí)施例三十八篩選出的抗菌活性好的化合物21繼續(xù)進(jìn)行了抵抗大腸桿菌引起的炎癥反應(yīng)的活性研究，測(cè)定它對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)胃腺癌上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8水平的影響。試驗(yàn)步驟如下1.細(xì)胞培養(yǎng)人胃腺癌上皮細(xì)胞AGS的培養(yǎng)為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素)，置37。C、5%<:02孵箱中培養(yǎng)，每隔34天傳代一次。傳代時(shí)先棄去原培養(yǎng)液，再用D-Hanks緩沖液洗滌；然后用0.5%胰蛋白酶消化1分鐘左右，加入少量新鮮培養(yǎng)液終止消化；吹打，使貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來(lái)；移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液至原體積。2.細(xì)菌的培養(yǎng)本實(shí)驗(yàn)中的菌株為五.co/!'ATCC35218，生長(zhǎng)于MH培養(yǎng)基。3.藥物的配制每種化合物在實(shí)驗(yàn)中共設(shè)計(jì)了15、30和60Wnol/ml三個(gè)濃度，藥物用DMSO配成1200tool/ml的母液，使用D-Hanks兩倍梯度稀釋待用。4.大腸桿菌水提物的制備細(xì)菌在生長(zhǎng)34d后，在超凈臺(tái)上用接種環(huán)刮取菌落置于生理鹽水中，吹打散開(kāi)，于2400rpm離心5min，棄上清，加入適量滅菌生理鹽水，使菌液ODs(K)為1左右，此時(shí)菌液的濃度大約為108CFU/ml，然后2400rpm離心5min，加入原體積1/4的已滅菌三蒸水，振蕩均勻。菌液然后經(jīng)過(guò)23min渦旋振蕩，置于室溫放置1h后，使用超速低溫離心機(jī)，20000g離心20min，吸出的上清即為所需的大腸桿菌水Ji物，4'C冰箱中保存待用。5.化合物21對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)人胃腺癌上皮細(xì)胞AGS產(chǎn)生IL-8的影響效果測(cè)定AGS細(xì)胞在24孔板中生長(zhǎng)48h后，棄去原培養(yǎng)液，用D-Hanks清洗兩遍，再換入無(wú)血清無(wú)抗生素的培養(yǎng)基350W，培養(yǎng)6h后，加入待測(cè)化合物母液50W預(yù)孵1h，對(duì)照組加入50WDMSO，空白組加入50W的D-Hanks。每組加入100W的HPE(空白組中加入100W滅菌的三蒸水)，37。C培養(yǎng)12h。12h后，取培養(yǎng)液上清于4。C25000rpm離心15min后，吸出上清，4'C保存待測(cè)。6.酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定IL-8含量得到的細(xì)胞上清中IL-8含量的測(cè)定使用購(gòu)買(mǎi)的人細(xì)胞上清ELISA試劑盒測(cè)定，具體的測(cè)定操作步驟為①建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)8個(gè)孔，每孔加入樣品稀釋液100W，第一孔加入標(biāo)準(zhǔn)品100W，混勻后，依次從上一孔中吸取IOOW放入下一孔中。直到第七個(gè)孔中，第八個(gè)孔作為空白對(duì)照。②加樣每孔加入待測(cè)樣品100W。③將反應(yīng)板放入37°C120min洗板用洗滌液將反應(yīng)板反復(fù)洗滌4一6次，在濾紙上印干。⑤每孔中加入第一抗體工作液50W，37'C反應(yīng)60min。⑥洗板用洗滌液將反應(yīng)板反復(fù)洗滌4一6次，在濾紙上印干。⑦每孔中加入酶標(biāo)抗體工作液IOOW，37'C反應(yīng)60min。⑧洗板用洗滌液將反應(yīng)板反復(fù)洗滌4一6次，在濾紙上印干◎每孔中加入底物工作液10014，37'C暗處反應(yīng)60min。⑩每空加入50W終止液混勻，492nm處測(cè)吸光值。7.化合物21對(duì)細(xì)胞存活率的影響為了檢驗(yàn)以上各化合物抑制大腸桿菌誘導(dǎo)AGS細(xì)胞產(chǎn)生IL-8的水平效果是否受其細(xì)胞毒作用的影響，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT法來(lái)測(cè)定各種化合物的對(duì)細(xì)胞存活率的影響。細(xì)胞孵育按正常細(xì)胞傳代的程序消化吹打細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞懸液濃度為1.5xl04/ml。在96孔培養(yǎng)板中每孔加細(xì)胞懸液100nl，置5。/。C02、37。C的孵箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后，加入藥液。加藥將待測(cè)的化合物21加入到各個(gè)孔中，使終濃度分別為15、30、60和12O^M，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行孔。實(shí)驗(yàn)分為藥物試驗(yàn)組(分別加入不同濃度的測(cè)試藥)、對(duì)照組(只加培養(yǎng)液和細(xì)胞，不加測(cè)試藥)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細(xì)胞和測(cè)試藥)。將加藥后的96孔板置于5%C02、37'C的孵48h中培養(yǎng)。存活細(xì)胞的測(cè)定在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加4mg/mlMTT40W，在37。C放置4h后，移去上清液，每孔加150WDMSO，振蕩5min，使Formazan結(jié)晶溶解，利用自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀在570nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的光密度(OD570值)。8.統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS9.0forwindows軟包處理。用成對(duì)的t測(cè)驗(yàn)分析試驗(yàn)組和對(duì)照組的差異，其中+P〈0.05，**P<0.01，***P〈0.001為具有顯著性意義。試驗(yàn)結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物21對(duì)大腸桿菌水體物誘導(dǎo)AGS產(chǎn)生的IL-8水平有很強(qiáng)的抑制作用。如圖1所示，大腸桿菌水體物單獨(dú)刺激可以產(chǎn)生接近于1100pg/ml的IL-8，而化合物21和阿司匹林分別表現(xiàn)出了對(duì)此強(qiáng)烈的，劑量依賴(lài)性的抑制作用?；衔?1在15Mmol/ml時(shí)，可以把IL-8的分泌量減少在830pg/ml左右，而此后隨著濃度的增大，抑制的作用越來(lái)越明顯，當(dāng)60Wnol/ml的時(shí)候抑制作用與阿司匹林相當(dāng)。2.如圖2所示，在15、30、60陶ol/L三個(gè)濃度下，化合物21和阿司匹林對(duì)AGS細(xì)胞的存活率均沒(méi)有明顯的影響。結(jié)論在15、30、60陶ol/L三個(gè)濃度下，由于化合物21和阿司匹林對(duì)AGS細(xì)胞的存活率沒(méi)有明顯的影響，在之前實(shí)驗(yàn)中，兩者能夠抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的AGS細(xì)胞產(chǎn)生IL-8的結(jié)果就不會(huì)受到其直接對(duì)細(xì)胞活性的影響的干擾。權(quán)利要求1.一類(lèi)縮酚酸類(lèi)化合物，其特征是它有如下通式式中R1＝-CH3或-CH2CH3；R2＝H、F、Cl或Br；R3＝H、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或NO2；R4＝H、F、Cl、Br、OCH3、OCH2CH3或CH3；R5＝H或OCH3；n＝0或1。2.—種制備權(quán)利要求1所述的縮酚酸類(lèi)化合物的方法，其特征是它由下列步驟組成步驟1.將鄰羥基苯乙酸酯溶于無(wú)水二氯甲垸中，待完全溶解后，8(TC及攪拌下慢慢加入各種R2、R3、R4和R5取代的苯甲酸或者苯乙酸類(lèi)化合物，鄰羥基苯乙酸酯與苯甲酸或者苯乙酸類(lèi)化合物兩者的摩爾比為1:1.2，步驟2.然后加入N，N-二甲基氨基吡啶和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺，回流條件下攪拌12小時(shí)停止反應(yīng)，加入的N，N-二甲基氨基吡啶與鄰羥基苯乙酸酯的物質(zhì)的量之比為1:4-1:5，N，N-二環(huán)己基碳二亞胺與鄰羥基苯乙酸酯的物質(zhì)的量之比為1.1:1，步驟3.待反應(yīng)液完全冷卻后，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗，然后用無(wú)水Na2S04干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離，洗脫液為乙酸乙酯石油醚=1:2-1:5，得到縮酚酸類(lèi)化合物。3.權(quán)利要求1所述的縮酚酸類(lèi)化合物在制備抑制革蘭氏陽(yáng)性菌株或抑制革蘭氏陰性菌株藥物中的應(yīng)用。4.權(quán)利要求1所述的3，4-二乙氧基苯乙酸-2-(乙氧羰基甲基)苯酚酯在制備非甾體類(lèi)抗炎藥物中的應(yīng)用。全文摘要一類(lèi)縮酚酸類(lèi)化合物，它有如右通式，式中R₁＝-CH₃或-CH₂CH₃；R₂＝H、F、Cl或Br；R₃＝H、Cl、Br、OCH₃、OCH₂CH₃或NO₂；R₄＝H、F、Cl、Br、OCH₃、OCH₂CH₃或CH₃；R₅＝H或OCH₃；n＝0或1。本發(fā)明的縮酚酸類(lèi)化合物不僅可以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌株，而且有些還可以抑制革蘭氏陰性菌株，后者是以前的文獻(xiàn)未曾報(bào)道過(guò)的。本發(fā)明還對(duì)抗菌篩選出的活性好的化合物進(jìn)行了抑制由細(xì)菌引起的IL-8產(chǎn)生量的測(cè)試，結(jié)果表明其中一個(gè)化合物具有較強(qiáng)的抑制由大腸桿菌刺激產(chǎn)生的IL-8，因而可以有潛力成為一類(lèi)非甾體類(lèi)抗炎藥。文檔編號(hào)A61K31/216GK101333166SQ20081002099公開(kāi)日2008年12月31日申請(qǐng)日期2008年8月5日優(yōu)先權(quán)日2008年8月5日發(fā)明者呂鵬程,宋忠誠(chéng),朱海亮申請(qǐng)人:南京大學(xué)