專利名稱：一種抗腫瘤中藥組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種抗腫瘤中藥組合物的質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：
惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康與生命，其死亡率居各種疾病之首。目前，對惡性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷尚未妥善解決，亦缺乏有效的治療方法。近二十余年來，中醫(yī)藥在防治腫瘤方面的作用越來越引起人們的重視。隨著對中醫(yī)藥治療腫瘤研究的深入，療效的提高，應(yīng)用中醫(yī)藥配合西醫(yī)方法治療惡性腫瘤已獲得廣泛開展。過去治療惡性腫瘤“無瘤生存”的治療目的，正向“帶瘤生存”、提高生存質(zhì)量的方向轉(zhuǎn)變。充分發(fā)揮中醫(yī)藥的優(yōu)勢，可以調(diào)動宿主的潛能參與對腫瘤的調(diào)控，促進(jìn)腫瘤患者的康復(fù)。
由藤黃20～60重量份，仙鶴草700～1000重量份，豬苓500～800重量份所制備的中藥組合物具有扶正祛邪的功效，適用于治療手術(shù)、放化療前后與不宜手術(shù)及放化療之惡性腫瘤患者，并且安全、無明顯毒副作用。目前還未有完備的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來控制該組合物制劑的質(zhì)量，本發(fā)明提供了該組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，能全面、有效的控制其質(zhì)量，進(jìn)一步保障該藥物組合物的有效性和安全性。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗腫瘤中藥組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明所涉及的藥物組合物的原料藥組成及配比為藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份、豬苓500～800重量份，優(yōu)選配比為藤黃40重量份、仙鶴草833重量份、豬苓667重量份。
按藥劑學(xué)制劑方法，上述原料藥制劑形式可為任何一種藥劑上所說的劑型，包括但不僅限于顆粒劑、片劑、口服固體制劑、散劑、丸劑、口服液等。
該藥物組合物的制備方法可以為 a.稱取藤黃20～60重量份加95％乙醇回流提取三次，合并回流液，濾過，濾液濃縮得浸膏A； b.稱取仙鶴草700～1000重量份、豬苓500～800重量份，加水煎煮三次，合并煎液，濾過，濾液濃縮得浸膏B； c.將浸膏A和浸膏B分別干燥至干膏，粉碎成細(xì)粉，合并，加入輔料，按照常規(guī)工藝制成各種劑型。
本組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別和含量測定。
一種由藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份和豬苓500～800重量份三味中藥為原料藥制成抗腫瘤藥物組合物的口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中含量測定方法為 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為70～90∶10～20∶0.01～1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為350～380nm；理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000； 對照品溶液的制備取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.3～0.5mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取上述藥物組合物口服固體制劑適量，精密稱定，研細(xì)，取0.14～0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲3～15分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10～20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
一種由藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份和豬苓500～800重量份三味中藥為原料藥制成抗腫瘤藥物組合物的口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中含量測定方法具體為 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為362nm；理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000； 對照品溶液的制備取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取上述藥物組合物口服固體制劑適量，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
上述含量測定方法中，組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg。
上述質(zhì)量控制方法該方法還包括如下鑒別方法中的一種或兩種 a、取上述藥物組合物口服固體制劑內(nèi)容物0.3～0.5克，研細(xì)，加甲醇2～10ml，超聲處理20～40分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材5～15mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10～20∶0.5～3∶0.5～3的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
b、取上述藥物組合物口服固體制劑1～5克，研細(xì)，加三氯甲烷20～60ml，超聲處理5～20分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇20～60ml，水浴回流10～30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～1.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取仙鶴草對照藥材1～3g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3～8∶2～7∶0.5～2的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
上述質(zhì)量控制方法具體可包括如下鑒別方法中的一種或兩種 a、取上述藥物組合物口服固體制劑0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄IV B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
b、取上述藥物組合物口服固體制劑3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄IV B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法還可以為 含量測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相，檢測波長為362nm，理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得對照品溶液；取組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg。
鑒別a、取上述藥物組合物口服固體制劑0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄IV B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。b、取上述藥物組合物口服固體制劑3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄IV B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
該藥物組合物主要扶正祛邪，應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。適用于治療手術(shù)、放化療前后與不宜手術(shù)及放化療之惡性腫瘤患者，療效顯著，并且安全、無明顯毒副作用。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法適用于該抗腫瘤藥物組合物臨床可接受的口服固體制劑，包括但不限于膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑等，優(yōu)選膠囊劑，每日服用量相當(dāng)于原生藥量4g～8g。本發(fā)明質(zhì)量控制方法分離效率高、穩(wěn)定性好、分析速度快，是控制該抗腫瘤中藥組合物口服固體制劑質(zhì)量可靠的方法。本發(fā)明通過試驗例進(jìn)行具體闡述(以下稱復(fù)方仙鶴草膠囊)。
試驗例1.含量測定選擇實驗 處方中藤黃為君藥，其中藤黃酸為其主要活性成分，因此選用藤黃酸為含量測定的指標(biāo)成分。
儀器與試藥 高效液相色譜儀SPD-10Avp；紫外檢測器PDA2996；對照品藤黃酸(江蘇漢邦科技有限公司提供，供含量測定用)；供試品復(fù)方仙鶴草膠囊(采用實施例1方法制備)，批號20060201，20060202，20060203。
(1)色譜條件的選擇試驗 ①檢測波長的確定 根據(jù)紫外檢測器檢測，藤黃酸的紫外最大吸收波長為362nm，故選用362nm為檢測波長。②色譜柱、柱溫和流動相的考察 對系統(tǒng)適應(yīng)性進(jìn)行了以下試驗考察，結(jié)果見表1。
表1.系統(tǒng)適應(yīng)性考察試驗結(jié)果
③提取溶劑和時間的考察 取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，分別用流動相和無水乙醇作提取劑，不同時間超聲后測定結(jié)果見表2。
表2.提取劑及時間的考察
確定供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。
色譜條件 色譜柱C18柱；柱溫20℃；流動相甲醇∶水∶冰醋酸為83∶17∶0.1；流速1.0ml/min；檢測波長362nm。
(2)專屬性考察 取陰性樣品(不含藤黃)約0.15g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取20μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。結(jié)果在藤黃酸相應(yīng)處無吸收峰出現(xiàn)。(3)線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對照品儲備溶液(1.2mg/ml)適量，用流動相稀釋成濃度為13.13μg/ml，26.25μg/ml，52.5μg/ml，105μg/ml，210μg/ml，420μg/ml的對照品溶液。各精密吸取20μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣2次，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，以對照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸計算，得回歸方程Y＝26198X+53122，(相關(guān)系數(shù)r＝1，n＝6)。線性范圍為13.13-420ug/ml，結(jié)果見表3。
表3.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制試驗結(jié)果表
(4)精密度試驗 照上述色譜條件，精密吸取對照品溶液(濃度為1.2mg/ml)20μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定。計算平均峰面積為1410951，其RSD值為1.41％，符合試驗要求。結(jié)果見表4。
表4.精密度試驗結(jié)果表
(5)重復(fù)性試驗 取本品內(nèi)容物適量(批號20060201)，研細(xì)，稱取6份，每份約0.15g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備。照上述色譜條件，精密吸取各20μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣2次測定。RSD值為1.18％，符合實驗要求。結(jié)果見表5。
表5.重復(fù)性試驗結(jié)果表
(6)穩(wěn)定性試驗 取本品內(nèi)容物適量(批號20060201)，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備，照上述色譜條件，精密吸取20μl注入液相色譜儀，每隔2.5h進(jìn)樣1次，測定供試品溶液12h的穩(wěn)定性。其RSD值為.0.2％，符合實驗要求。結(jié)果見表6。
表6.穩(wěn)定性試驗結(jié)果表
(7)加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號20060201)，研細(xì)，取約0.075g，精密稱定，各加入已知含量的80、100、120％對照品貯備液。再按供試品溶液制備方法制備，共9份。精密吸取各20μl注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣3次，測定。計算平均加樣回收率為99.94％，其RSD值為1.57％，符合各實驗要求。結(jié)果見表7。
表7.加樣回收率試驗結(jié)果表
(8)藥材含量測定 取各藥材粗粉約0.025g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，每次進(jìn)樣20μl測定。結(jié)果見表8。
表8.藥材含量測定結(jié)果
(9)樣品含量測定試驗 ①對照品溶液的制備 精密稱取置干燥器減壓干燥48小時以上的藤黃酸對照品10.5mg，置25ml容量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濃度為0.420mg/ml。
②供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。
分別取批號20060201，20060202，20060203的樣品3粒，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，即得。精密吸取供試品溶液各20μl注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣2次，測定，即得。結(jié)果見表9。
表9.三批樣品含量測定結(jié)果
實驗結(jié)果可見該方法準(zhǔn)確度較高，可用于復(fù)方仙鶴草膠囊中藤黃酸的含量測定。三批樣品(20060201，20060202，20060203)其含量分別為7.09mg/粒、7.41mg/粒7.14mg/粒，平均含量為7.21mg/粒，藥材藤黃酸含量為229.33mg/g，其制劑中藤黃酸的轉(zhuǎn)移率分別為77.3％、80.7％、77.8％，平均轉(zhuǎn)移率為78.6％。根據(jù)平均含量7.21mg/粒，考慮藥材及工藝提取可能引起含量的浮動，因此將樣品平均含量下浮20％，每粒藤黃酸的含量為5.77mg，取整數(shù)為5.8mg/粒作為限度，成品含量限度確定為即本組合物膠囊劑每粒含藤黃以藤黃酸(C38H44O8)計，不得少于5.8mg。
試驗例2、復(fù)方仙鶴草膠囊的藥效學(xué)實驗研究 1、復(fù)方仙鶴草膠囊灌胃對小鼠移植瘤S180的抑制作用 試驗材料 名稱復(fù)方仙鶴草膠囊，批號20060201；環(huán)磷酰胺(CTX)，規(guī)格200mg/瓶，批號06060121，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司。
實驗方法 取ICR種小白鼠50只，18-22g，雌雄各半，按移植性腫瘤研究法接種S180實體型，接種后24小時稱鼠重，并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，空白對照組與CTX組分別為陰、陽性對照組。接種24小時后給藥，ig給藥，給藥體積0.4ml/20g，每天一次，共給藥7次，于停藥后第2天小鼠稱重，處死荷瘤小鼠并分離瘤塊，稱瘤重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗)。
結(jié)果表明，與空白對照組相比，復(fù)方仙鶴草膠囊(300，150mg/kg)組均可顯著地抑制動物抑制性肉瘤S180的生長(P＜0.01)，同時對實驗小鼠的體重影響較小。陽性藥CTX組對S180腫瘤的抑制作用和對實驗動物的體重影響顯著(P＜0.01)。實驗重復(fù)三次，結(jié)果相近。見表10。
表10復(fù)方仙鶴草膠囊ig對小鼠移植瘤S180的抑制作用(X±SD)(n＝10) *P＜0.05**P＜0.01與空日對照組比較 2、復(fù)方仙鶴草膠囊灌胃對小鼠移植瘤EC的抑制作用 實驗方法 取上述規(guī)格小鼠50只按移植性腫瘤研究法接種EC實體型，接種后24小時稱鼠重，并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，空白對照組與CTX組分別為陰、陽性對照組。接種24小時后給藥，ig給藥，給藥體積0.4ml/20g 每天一次，共給藥7次，于停藥后第2天小鼠稱重，處死荷瘤小鼠并分離瘤塊，稱瘤重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗)。
結(jié)果表明，與空白對照組相比，復(fù)方仙鶴草膠囊(300，150mg/kg)組均可顯著地抑制動物抑制腫瘤EC的生長(P＜0.01)，同時對實驗小鼠的體重影響較小。陽性藥CTX組對EC腫瘤的抑制作用和對實驗動物的體重影響顯著(P＜0.01)。實驗重復(fù)三次，結(jié)果相近。見表11。
表11復(fù)方仙鶴草膠囊ig對小鼠移植瘤EC的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01與空白對照組比較 3、復(fù)方仙鶴草膠囊灌胃對小鼠移植瘤Heps的抑制作用 實驗方法 取上述規(guī)格小鼠50只按移植性腫瘤研究法接種Heps實體型，接種后24小時稱鼠重，并隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，空白對照組與CTX組分別為陰、陽性對照組。接種24小時后給藥，ig給藥，給藥體積0.4ml/20g 每天一次，共給藥7次，于停藥后第2天小鼠稱重，處死荷瘤小鼠并分離瘤塊，稱瘤重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗)。
結(jié)果表明，與空白對照組相比，復(fù)方仙鶴草膠囊(300，150mg/kg)組均可顯著地抑制動物抑制肝癌腫瘤Heps的生長(P＜0.01)，同時對實驗小鼠的體重影響較小。陽性藥CTX組對Heps腫瘤的抑制作用和對實驗動物的體重影響顯著(P＜0.01)。實驗重復(fù)三次，結(jié)果相近。見表12。
表12復(fù)方仙鶴草膠囊ig對小鼠移植瘤Heps的抑制作用(X±SD)(n＝10)
*P＜0.05**P＜0.01與空白對照組比較 結(jié)論 復(fù)方仙鶴草膠囊(300，150，75mg/kg)灌胃(ig)給藥對小鼠移植性腫瘤S180，EC，Heps的生長均有明顯的抑制作用，其中復(fù)方仙鶴草膠囊(300mg/kg)ig對小鼠移植性腫瘤S180，EC，Heps的生長抑制率最高分別可達(dá)53.4％，55.98％和56.62％，同時對實驗小鼠的體重影響較小。但同樣條件下CTX對移植性腫瘤S180，EC，Heps的抑制作用和對實驗動物的體重影響顯著。
試驗例3、本發(fā)明藥物急性毒性實驗 實驗材料 復(fù)方仙鶴草膠囊，每克浸膏粉相當(dāng)于9.49克生藥材，批號20060201；0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液。
試驗動物 健康ICR小鼠40只，清潔級，雌雄各半，體重18-22g；健康SD大鼠40只，清潔級，雌雄各半，體重130～150g。由浙江省實驗動物中心供應(yīng)，動物質(zhì)量合格證SCXK(浙)2003-0001。
劑量組別及確定依據(jù) 根據(jù)小鼠、大鼠急性毒性預(yù)試結(jié)果及毒性反應(yīng)情況，小鼠急毒預(yù)試口服復(fù)方仙鶴草膠囊全死劑量為10.0g/kg，全活劑量為6.0g/kg；大鼠急毒預(yù)試口服復(fù)方仙鶴草膠囊全死劑量為10.0g/kg，全活劑量為4.5g/kg。小鼠以組距0.84、大鼠以組距0.8分別設(shè)置以下劑量組別。
小鼠 第1組復(fù)方仙鶴草膠囊6.0g/kg 第2組復(fù)方仙鶴草膠囊7.1g/kg 第3組復(fù)方仙鶴草膠囊8.4g/kg 第4組復(fù)方仙鶴草膠囊10.0g/kg 大鼠 第1組復(fù)方仙鶴草膠囊5.1g/kg 第2組復(fù)方仙鶴草膠囊6.4g/kg 第3組復(fù)方仙鶴草膠囊8.0g/kg 第4組復(fù)方仙鶴草膠囊10.0g/kg 以上劑量組臨用時用0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液配制成不同濃度、同等容量的復(fù)方仙鶴草膠囊混懸液，供小鼠、大鼠灌胃用。給藥容量小鼠0.8ml/20g體重；大鼠2.0ml/100g體重。
試驗方法 取ICR小鼠40只，SD大鼠40只，隨機分成以上各劑量組，每組10只，雌雄各半。各劑量組給藥前禁食不禁水12小時以上(前一天晚上十八點三十分始禁食，次日上午九點前給藥)。分別空腹灌胃給予以上各劑量組復(fù)方仙鶴草膠囊，給藥后即刻觀察動物的反應(yīng)情況，包括動物外觀、行為活動、精神狀態(tài)、食欲、大小便及其顏色、皮毛、鼻、眼、口有無異常分泌物以及死亡情況，死亡動物及時尸檢，若肉眼觀察有明顯病變臟器則進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。并給藥第1天每隔30分鐘到1小時觀察1次，連續(xù)觀察6h，以后每天觀察1次，連續(xù)觀察14天，記錄動物毒性反應(yīng)及死亡分布情況。根據(jù)死亡率用NDST統(tǒng)計軟件處理，按Bliss法計算出小鼠、大鼠口服的急性半數(shù)致死劑量(LD50)及95％可信限值、列表表示。
試驗結(jié)果 1.小鼠分別單次經(jīng)口(po)(與臨床給藥途徑一致)給予復(fù)方仙鶴草膠囊6.0、7.1、8.4、10.0g/kg劑量，給藥即刻各組均未出現(xiàn)異常反應(yīng)，給藥2～3小時后出現(xiàn)藥物樣稀便、尿失禁(尿淋漓)、活動減少、閉眼等消化、泌尿及精神神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)，給藥后24小時和48小時分別觀察，6.0、7.1、8.4g/kg劑量組各存活小鼠已逐步恢復(fù)正?；顒?。給藥23小時后開始出現(xiàn)死亡，死亡時間在給藥后23小時至72小時之間，各組死亡率分別為0％、30％、70％、100％。其反應(yīng)出現(xiàn)率、反應(yīng)程度、反應(yīng)持續(xù)時間、死亡出現(xiàn)率和死亡出現(xiàn)時間均與劑量呈相應(yīng)關(guān)系，劑量高反應(yīng)重、出現(xiàn)時間早、持續(xù)時間長、死亡率也高，劑量低則相反。用NDST統(tǒng)計軟件處理，按Bliss法計算得小鼠單次經(jīng)口給予復(fù)方仙鶴草膠囊的急性半數(shù)致死劑量(LD50)及95％可信限值為7.7257(7.2403～8.2437)g/kg。死亡動物病理解剖肉眼檢查，除胃內(nèi)藥物殘留外未見明顯異常，試驗結(jié)束剖檢所有存活小鼠也未見明顯肉眼可見的臟器病理改變。
2.大鼠分別單次經(jīng)口(po)給予復(fù)方仙鶴草膠囊5.1、6.4、8.0、10.0g/kg劑量，給藥后即刻各組均未出現(xiàn)異常反應(yīng)，給藥30分鐘～1小時后出現(xiàn)流涎、藥物樣稀便、尿失禁(尿淋漓)、活動減少、精神萎靡等消化、泌尿及精神系統(tǒng)反應(yīng)，給藥2小時后出現(xiàn)豎毛、弓背、俯臥等反應(yīng)，給藥6小時以后出現(xiàn)口腔鼻腔有血色分泌物現(xiàn)象，給藥第2天后各劑量組大鼠均出現(xiàn)消瘦現(xiàn)象(尤其10.0g/kg劑量明顯)。5.1g/kg劑量組給藥后48小時，6.4、8.0g/kg劑量組給藥后72小時各存活大鼠上述毒性反應(yīng)逐漸消失。給藥8小時后開始出現(xiàn)死亡，死亡時間在給藥后8小時至72小時之間，各組死亡率分別為10％、30％、80％、90％。其反應(yīng)出現(xiàn)率、反應(yīng)程度、反應(yīng)持續(xù)時間、死亡率和死亡出現(xiàn)時間均與劑量呈相應(yīng)關(guān)系，劑量高反應(yīng)重、出現(xiàn)時間早、持續(xù)時間長、死亡率也高，劑量低則相反。用NDST統(tǒng)計軟件處理，按Bliss法計算得大鼠口服復(fù)方仙鶴草膠囊的急性半數(shù)致死劑量(LD50)及95％可信限值為6.9931(6.2545～7.819)g/kg。死亡動物病理解剖肉眼檢查，除胃內(nèi)藥物殘留外未見明顯異常，試驗結(jié)束剖檢所有存活大鼠未見明顯肉眼可見的臟器病理改變。試驗例4、本發(fā)明藥物長期毒性實驗 試驗材料 復(fù)方仙鶴草膠囊，每克浸膏粉相當(dāng)于9.49克生藥材，批號20060201，由中國藥科大學(xué)研制提供；0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液。
試驗動物 SD大鼠，清潔級，年齡5-6周齡，體重♂86～104g，±s94.9±4.6；♀85～103g，±s94.6±4.8；共120只，♀♂各60只。由浙江省實驗動物中心供應(yīng)，動物質(zhì)量合格證號SCXK(浙)2003-0001。
劑量分組 高劑量組復(fù)方仙鶴草膠囊1.0g/(kg·d)×180d 中劑量組復(fù)方仙鶴草膠囊0.5g/(kg·d)×180d 低劑量組復(fù)方仙鶴草膠囊0.25g/(kg·d)×180d 對照組 0.5％CMC-Na溶液 10ml/(kg·d)×180d 以上各組臨用前用0.5％CMC-Na溶液配制成不同濃度、同等容量的混懸液，供大鼠灌胃用，給藥容量為1.0ml/100g體重，各組給藥容量相同。
劑量確定依據(jù) 1.根據(jù)人臨床擬用劑量1.953g/人·d(按60kg體重計算，即0.03g/kg·d)； 2.根據(jù)急性毒性預(yù)試驗小鼠單次經(jīng)口(po)給藥全活劑量為6.0g/kg，大鼠單次經(jīng)口(po)給藥全活劑量為4.5g/kg。
試驗方法 取清潔級SD大鼠120只，編號，雄性為奇數(shù)，雌性為偶數(shù)，按隨機區(qū)組法分成四個試驗組，即復(fù)方仙鶴草膠囊高、中、低三個劑量組和一個對照組，每組30只，雌雄各15只。試驗前觀察一周，記錄大鼠的行為活動、攝食、飲水、精神、毛發(fā)、體重等。試驗期間，每天上午同一時間經(jīng)口灌胃(po)給藥一次(與臨床給藥途徑一致)，每周給藥6天，連續(xù)180天(6個月)。每周稱體重一次，隨體重增減調(diào)整給藥量。每天上午觀察記錄大鼠的一般體征(包括行為、運動功能、呼吸、毛色、口、眼、鼻、耳、糞、尿等)、攝食量、飲水量和死亡情況，發(fā)現(xiàn)有中毒反應(yīng)的動物取出單籠飼養(yǎng)，重點觀察，發(fā)現(xiàn)有死亡或瀕死動物及時尸檢，作大體觀和病理組織學(xué)檢查。
給藥中期(給藥三個月)、停藥次日(給藥六個月)及停藥一個月(恢復(fù)期結(jié)束)分別進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)、臟器重量、系數(shù)及病理形態(tài)學(xué)和組織學(xué)檢查。檢查前禁食不禁水12小時以上(前一晚上二十點開始禁食，次日上午八點三十分左右采血)，用乙醚麻醉后，腹主動脈采血，EDTA-K2抗凝全血用莎莉全自動血細(xì)胞分析儀測定紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅素(HGB)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、平均血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞體積分布密度(RDW)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、血小板比容(PCT)及淋巴細(xì)胞(Lym#)、中值細(xì)胞(Mid#)和粒細(xì)胞(Grn#)。用CA-100血凝儀測定凝血酶原時間(PT)。用煌焦油藍(lán)試管染色法測定網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)。血清用HITACHI7020全自動生化分析儀及配對試劑測定天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、總蛋白(T.P)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、總膽紅素(T.BIL)、總膽固醇(T.CHO)，肌酸磷酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)，用NOVA 10電解質(zhì)儀及配對試劑測定Na+、K+、Cl-、TCa濃度。給藥中期、停藥次日和恢復(fù)期結(jié)束分別處死1/3大鼠作系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué)檢查，測定心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上腺、甲狀腺、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢的臟器重量和系數(shù)(％)；同時取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、垂體、腦、脊髓、胸骨、胸腺、淋巴結(jié)、膀胱、子宮、卵巢、睪丸連附睪、前列腺作石蠟切片、HE染色，用尼康熒光攝影顯微鏡及病理組織學(xué)圖像分析系統(tǒng)作病理組織學(xué)檢查、觀察和分析。以上各項觀察指標(biāo)(原始數(shù)據(jù))均用NDST軟件包及EXCEL相應(yīng)的統(tǒng)計程序進(jìn)行統(tǒng)計分析和處理，以統(tǒng)計學(xué)意義、一般反應(yīng)情況、病理組織學(xué)檢查結(jié)果結(jié)合本實驗室建立的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，綜合評價試驗結(jié)果。
試驗結(jié)果 結(jié)果顯示，在本試驗劑量條件下，SD大鼠連續(xù)六個月分別經(jīng)口給予批號為20060201的復(fù)方仙鶴草膠囊1.0、0.5和0.25g/(kg·d)劑量，其主要毒副反應(yīng)為高劑量組部分大鼠活動減少、藥物樣稀便、尿淋漓、豎毛、脫毛、體重增長緩慢或減輕等毒副反應(yīng)，對給藥期間死亡大鼠的中毒靶器官主要為肝臟、腸、胃、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)和骨髓；對活檢大鼠的中毒靶器官為肝臟、小腸，并屬可逆性影響(停藥一個月檢查未見類似情況)。中毒死亡劑量為1.0g/(kg·d)，安全劑量為0.5g/(kg·d)，無毒劑量為0.25g/(kg·d)。

具體實施例方式 以下通過實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。
實施例1組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法 藤黃40g、仙鶴草833g、豬苓667g，以上三味a.稱取藤黃加95％乙醇回流提取三次，第一次6倍量、第二次3倍量、第三次3倍量，每次0.5小時，合并回流液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏A。b.稱取仙鶴草、豬苓，加水煎煮三次，第一次12倍量，第二次10倍量，第三次10倍量，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏B。c.將浸膏A和浸膏B分別干燥至干膏，粉碎成細(xì)粉，合并，加入輔料，制成1000粒膠囊劑，以下稱復(fù)方仙鶴草膠囊。含量測定 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相，檢測波長為362nm，理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.42mg的溶液，即得對照品溶液；取復(fù)方仙鶴草膠囊20粒內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本組合物制劑中每粒含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于5.8mg。
鑒別 a.取復(fù)方仙鶴草膠囊內(nèi)容物0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
b.取復(fù)方仙鶴草膠囊內(nèi)容物3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
實施例2組合物片劑的質(zhì)量控制方法 藤黃40g、仙鶴草833g、豬苓667g，以上三味a.稱取藤黃加95％乙醇回流提取三次，第一次6倍量、第二次3倍量、第三次3倍量，每次0.5小時，合并回流液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏A。b.稱取仙鶴草、豬苓，加水煎煮三次，第一次12倍量，第二次10倍量，第三次10倍量，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏B。c.將浸膏A和浸膏B分別干燥至干膏，粉碎成細(xì)粉，合并，加入輔料，壓制成1000片，以下稱復(fù)方仙鶴草片。
含量測定 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相，檢測波長為362nm，理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.42mg的溶液，即得對照品溶液；取復(fù)方仙鶴草片適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本組合物片劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg。
鑒別 a.取復(fù)方仙鶴草片0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
實施例3組合物顆粒劑的質(zhì)量控制方法 藤黃40g、仙鶴草833g、豬苓667g，以上三味a.稱取藤黃加95％乙醇回流提取三次，第一次6倍量、第二次3倍量、第三次3倍量，每次0.5小時，合并回流液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏A。b.稱取仙鶴草、豬苓，加水煎煮三次，第一次12倍量，第二次10倍量，第三次10倍量，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏B。c.將浸膏A和浸膏B分別干燥至干膏，粉碎成細(xì)粉，合并，加入輔料，制成1000袋顆粒，以下稱復(fù)方仙鶴草顆粒。
含量測定 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相，檢測波長為362nm，理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.42mg的溶液，即得對照品溶液；取復(fù)方仙鶴草顆粒適量，研細(xì)，取約0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本組合物制劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg。
實施例4組合物丸劑的質(zhì)量控制方法 藤黃40g、仙鶴草833g、豬苓667g，以上三味a.稱取藤黃加95％乙醇回流提取三次，第一次6倍量、第二次3倍量、第三次3倍量，每次0.5小時，合并回流液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏A。b.稱取仙鶴草、豬苓，加水煎煮三次，第一次12倍量，第二次10倍量，第三次10倍量，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.30的浸膏B。c.將浸膏A和浸膏B分別干燥至干膏，合并，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，制1000丸，以下稱復(fù)方仙鶴草丸。
鑒別 a.取復(fù)方仙鶴草丸0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液。另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
b.取復(fù)方仙鶴草丸3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
權(quán)利要求
1.一種由藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份和豬苓500～800重量份三味中藥為原料藥制成抗腫瘤藥物組合物的口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中含量測定方法為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為70～90∶10～20∶0.01～1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為350～380nm；理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；
對照品溶液的制備取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.3～0.5mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取上述藥物組合物口服固體制劑適量，精密稱定，研細(xì)，取0.14～0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲3～15分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10～20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種由藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份和豬苓500～800重量份三味中藥為原料藥制成抗腫瘤藥物組合物的口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中含量測定方法為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為362nm；理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；
對照品溶液的制備取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取上述藥物組合物口服固體制劑適量，精密稱定，研細(xì)，取0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于含量測定方法中，組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別方法中的一種或兩種
a、取上述藥物組合物口服固體制劑0.3～0.5克，研細(xì)，加甲醇2～10ml，超聲處理20～40分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液；另取藤黃對照藥材5～15mg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10～20∶0.5～3∶0.5～3的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點；
b、取上述藥物組合物口服固體制劑1～5克，研細(xì)，加三氯甲烷20～60ml，超聲處理5～20分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇20～60ml，水浴回流10～30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取仙鶴草對照藥材1～3g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為3～8∶2～7∶0.5～2的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別方法中的一種或兩種
a、取上述藥物組合物口服固體制劑0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液；另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點；
b、取上述藥物組合物口服固體制劑3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為
含量測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為83∶17∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相，檢測波長為362nm，理論板數(shù)按藤黃酸峰計算應(yīng)不低于3000；取藤黃酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得對照品溶液；取的本品20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.15g，精密稱定，置10ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲6分鐘，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取濾液2.0ml于10ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得，本組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含藤黃以藤黃酸C38H44O8計，不得少于23.2mg；
鑒別a、取上述藥物組合物口服固體制劑0.4克，研細(xì)，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取上清液作為供試品溶液；另取藤黃對照藥材10mg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶1∶1的三氯甲烷-甲醇-三乙胺為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點；b、取上述藥物組合物口服固體制劑3克，研細(xì)，加三氯甲烷40ml，超聲處理10分鐘，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣加甲醇40ml，水浴回流20分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取仙鶴草對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶4∶0.8的甲苯-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點，陰性樣品在相應(yīng)位置無斑點。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗腫瘤中藥組合物的質(zhì)量控制方法，該組合物由藤黃20～60重量份、仙鶴草700～1000重量份和豬苓500～800重量份為原料藥制成，本發(fā)明質(zhì)量控制方法中含量測定采用高效液相色譜法測定組合物中藤黃酸的含量，并建立仙鶴草薄層色譜鑒別方法和藤黃薄層色譜鑒別方法。本發(fā)明質(zhì)量控制方法分離效率高、穩(wěn)定性好、分析速度快，是控制該抗腫瘤中藥組合物口服固體制劑質(zhì)量可靠的方法。
文檔編號A61P35/00GK101554417SQ20081002332
公開日2009年10月14日 申請日期2008年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月8日
發(fā)明者錢一帆, 劉文英, 敏 馮, 華克偉, 建 沈, 朱韻韻 申請人:南京中科集團股份有限公司