專利名稱：：一種銀杏內(nèi)酯b原料及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥制藥領域，具體涉及一種銀杏內(nèi)酯B原料及其制備方法。
背景技術：
：銀杏內(nèi)酯是目前強有力的特異性血小板活化因子(PAF)受體阻斷劑之一，銀杏內(nèi)脂B是銀杏內(nèi)酯中對PAF受體阻斷作用最強的，可劑量依賴性的消除PAF所引起的血小板聚集作用，從而防止血栓的形成，而對由二磷酸腺苷、花生四烯酸、膠原和腎上腺素誘導的血小板聚集無作用。最新藥理研究表明銀杏內(nèi)酯B具有抗過敏、抗炎癥、抗休克作用，對缺血損傷及器官移植的排斥反應也有保護作用。銀杏內(nèi)酯B在銀杏葉和銀杏葉提取物中含量很低，目前市場上出現(xiàn)的銀杏類制劑主要以銀杏總內(nèi)酯和總黃酮為有效部位，尚未出現(xiàn)單體的銀杏類制劑，目前銀杏內(nèi)酯B單體的獲取主要通過液相制備，并且轉(zhuǎn)移率很低，難以形成產(chǎn)業(yè)化。經(jīng)文獻査閱公開的專利CN101054384A工藝中需要經(jīng)過兩次柱層析，而且最終的轉(zhuǎn)移率還不到2%,整個工藝的效率和最終的得率低，導致單位重量的銀杏內(nèi)酯B成本比較高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、銀杏內(nèi)酯B純度高、工藝簡單且適用于工業(yè)產(chǎn)的銀杏內(nèi)酯B原料。本發(fā)明的另一目的在于提供該銀杏內(nèi)酯B原料的制備方法。一種銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于該銀杏內(nèi)酯B原料是通過以下方法制備得到的取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮，浸煮液過濾后采用有機溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100200目硅膠混合干燥，以100200目硅膠作為層析填料，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結晶得到銀杏內(nèi)酯B原料；其中，銀杏內(nèi)酯B原料中銀杏內(nèi)酯B含量》90%。上述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為0.11%，用量為銀杏葉或銀杏葉提取物質(zhì)量的5~50倍(每lkg加入5-50L)，銀杏葉或銀杏葉提取物在鹽酸溶液中浸煮時間30180min;所述的有機溶劑為乙酸乙酯、丙酮、正丁醇中的一種，用量為浸煮液體積的25倍(L/L);硅膠柱層析時00~200目硅膠的用量與銀杏葉或銀杏葉提取物的質(zhì)量比為1:0.5~1:10;硅膠柱層析時使用的流動相為乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、環(huán)己烷、丙酮中的兩種或兩種以上混合溶劑。柱層析時流動相的流速控制在每公斤銀杏葉或銀杏葉提取物18360ml/min。上述銀杏內(nèi)酯B原料在制備治療瘀血阻絡引起的胸痹、心痛、缺血性腦中風的藥物中應用。一種銀杏內(nèi)酯B原料的制備方法，可按照以下步驟制備.取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮30180min，浸煮液過濾后采用有機溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結晶得到銀杏內(nèi)酯B原料。其中，所述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為0.1~1%，用量為原料質(zhì)量的550倍；所述的有機溶劑為乙酸乙酯、丙酮、正丁醇中的一種，用量為浸煮液體積的25倍；所述的100200目硅膠的用量與原料的質(zhì)量比為1:0.51:10;硅膠柱層析時使用的流動相為乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、環(huán)己垸、丙酮中的兩種或兩種以上混合溶劑。柱層析時流動相的流速控制在每公斤銀杏葉或銀杏葉提取物18~360ml/min。本發(fā)明的有益效果(1)本發(fā)明銀杏內(nèi)酯B原料提取該工藝包括提取、層析、結晶，具有過程簡單、成本低、銀杏內(nèi)酯B純度高、適用工業(yè)大生產(chǎn)的特點。(2)選用鹽酸溶液浸煮提取，有效保證有效成分提出；通過使用硅膠柱層析的方法，有效地將銀杏內(nèi)酯B與其他物質(zhì)分離，使得銀杏內(nèi)酯B在最終轉(zhuǎn)移率達到15%以上，為工業(yè)化生產(chǎn)節(jié)約成本。試驗例銀杏內(nèi)酯B原料對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的影響地點山東大學目的觀察銀杏內(nèi)酯B原料對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用，探討其治療缺血性腦病及腦血栓的療效。方法取健康雄性Wistar大鼠，適應性喂養(yǎng)一周后進行試驗。設假手術組、模型組、銀杏內(nèi)酯B原料低、中、高劑量組和金納多注射液陽性對照組，共9組。采用改進的ZeaLonga，s大腦中動脈內(nèi)栓線阻斷法(MCAO)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，并于缺血1.5h后進行再灌注。除銀杏內(nèi)酯B給藥組外，其余各組分別于腦缺血即刻尾靜脈注射(iv)相應藥物，假手術組和模型組給予相應體積0.9%氯化鈉注射液，銀杏內(nèi)酯B原料低、中、高劑量組于缺血實驗前0.5h灌胃(ig)給予相應體積藥物。金納多注射液陽性對照組給藥劑量為3mlkg—'，空白對照組給予等體積0.9%氯化鈉注射液，銀杏內(nèi)酯B原料低、中、高劑量分別ig給予15、30和60mgkg—'銀杏內(nèi)酯B原料。腦缺血1.5h再灌注24h后，各組動物進行神經(jīng)病學檢査，繼而取腦進行TTC染色，拍照后測定缺血側腦梗死體積。實驗過程中，MCAO手術失敗、造模不成功及24h內(nèi)死亡的動物均棄之不用，不足預定數(shù)額者按照隨機抽樣原則補齊動物并重新造模。結果見表1和表2表1銀杏內(nèi)酯B原料對大鼠神經(jīng)行為學改變的影響(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>'尸<0.05，**尸<0.01，與模型對照組比較；Af<0.05，"<0.01，與金納多組比較。結果(1)神經(jīng)行為學的影響大鼠缺血1.5h再灌注24h后，假手術組無明顯神經(jīng)功能缺損，神經(jīng)功能學評分均為0。模型組則出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損體征，銀杏內(nèi)酯B原料和金納多注射液組神經(jīng)功能缺損癥狀有明顯改善。缺血1.5h再灌注24h后，各用藥組祌經(jīng)功能評分與模型組相比，銀杏內(nèi)酯B原料中、高劑量組具有顯著統(tǒng)計學差異(P0.01)，金納多注射液組有明顯統(tǒng)計學差異(P<0.05)。(2)腦大體形態(tài)學變化大鼠缺血1.5h再灌注24h后，假手術組大鼠大腦外觀光潔，顏色、形態(tài)正常，無蒼白、水腫、充血等變化，雙側腦組織結構對稱；模型組缺血側大腦半球明顯水腫，體積較對側明顯增大，中線向右側偏移。缺血側大腦半球頂葉呈脂肪樣蒼白色，腦組織軟化易碎，腦膜血管高度充血；各用藥組缺血側大腦半球水腫減輕或明顯減輕，腦膜血管充血減輕，梗死體積較模型組有明顯減小。具體實施方式以下通過實施例，對本發(fā)明作進一步說明，下述實施例對本發(fā)明沒有限制。實施例1稱取銀杏葉10kg，加入500Ll。/。的鹽酸浸煮30min，過濾，得到浸煮液480L，用2400L正丁醇萃取，將萃取液濃縮到適量，加入適量100-200目硅膠，混勻烘干，上硅膠柱(徑高比為1:1，硅膠用量3kg)，以乙酸乙酯丙酮為4:6的比例配制流動相，控制流速180ml/min，收集含銀杏內(nèi)酯B的40L流出液，濃縮干得到6g干膏，力卩180ml95%乙醇結晶，得到2.3g銀杏內(nèi)酯B原料，其中，銀杏內(nèi)酯B含量為91.5%。實施例2稱取銀杏葉20kg，加入700L0.5。/。的鹽酸浸煮150min，過濾，得到濾液650L，用1300L丙酮萃取，將萃取液濃縮到適量，加入適量100~200目硅膠，混勻烘干，上硅膠柱(徑高比為l:1，硅膠用量5.7kg)，以乙酸乙酯石油醚為7:3的比例配制流動相，控制流速410ml/min，收集70L流出液，濃縮干得到10g千膏，力Q300ml95%乙醇結晶，得到4.1g銀杏內(nèi)酯B原料，其中，銀杏內(nèi)酯B含量為92.0%。實施例3稱取銀杏葉提取物(符合《中國藥典》2000版要求，太原興遠生化有限公司)lkg，加入5L0.1。/。的鹽酸浸煮60min,過濾，得到濾液4.8L，用9.6L乙酸乙酯萃取，將萃取液濃縮到適量，加入適量100200目硅膠，混勻烘干，上硅膠柱(徑高比為l:1,硅膠用量2.5kg)，以正丁醇石油醚為8:2的比例配制流動相，控制流速360ml/min，收集35L流出液，濃縮干得到5g干膏，力!H50ml95%乙醇結晶，得到1.7g銀杏內(nèi)酯B原料，其中，銀杏內(nèi)酯B含量為90.7%。實施例4稱取銀杏葉提取物(符合《中國藥典》2000版要求)3kg，加入400).5%的鹽酸浸煮30min，過濾，得到濾液36L，用108L正丁醇萃取，將萃取液濃縮到適量，加入適量100200目硅膠，混勻烘干，上硅膠柱(徑高比為l:1，硅膠用量6kg)，以乙酸乙酯環(huán)己烷為6:4的比例配制流動相，控制流速600ml/min，收集100L流出液，濃縮干得到12g干膏，加360ml95。/。乙醇結晶，得到4.8g銀杏內(nèi)酯B原料；其中，銀杏內(nèi)酯B含量為91.9%。實施例5稱取銀杏葉提取物(符合《中國藥典》2000版要求)2kg，加入60L0.3。/。的鹽酸浸煮180min，過濾，得到濾液47L，用188L乙酸乙酯萃取，將萃取液濃縮到適量，加入適量100200目硅膠，混勻烘干，上硅膠柱(徑高比為l:1，硅膠用量5kg)，以乙酸乙酯石油醚為7:3的比例配制流動相，控制流速200ml/min，收集80L流出液，濃縮干得到9g干膏，加270ml95%乙醇結晶，得到3.4g銀杏內(nèi)酯B原料，其中，銀杏內(nèi)酯B含量為92.2%。權利要求1.一種銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于該銀杏內(nèi)酯B原料是通過以下方法制備得到的取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮，浸煮液過濾后采用有機溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100～200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結晶得到銀杏內(nèi)酯B原料；其中，銀杏內(nèi)酯B原料中銀杏內(nèi)酯B含量≥90％。2、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于所述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為0.1~1%，用量為銀杏葉或銀杏葉提取物質(zhì)量的550倍。3、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于所述銀杏葉或銀杏葉提取物在鹽酸溶液中浸煮的時間為30180min。4、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于所述的有機溶劑為乙酸乙酯、丙酮、正丁醇中的一種，用量為浸煮液體積的25倍。5、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于所述的100-200目硅膠的用量與銀杏葉或銀杏葉提取物的質(zhì)量比為1:0.5~1:10。6、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于柱層析時使用的流動相為乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、環(huán)己烷、丙酮中的兩種或兩種以上混合溶劑。7、根據(jù)權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于柱層析時流動相的流速控制在每公斤銀杏葉或銀杏葉提取物18~360ml/min。8、權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料在制備治療瘀血阻絡引起的胸痹、心痛、缺血性腦中風的藥物中的應用。.9、一種權利要求1所述的銀杏內(nèi)酯B原料的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮30180min，浸煮液過濾后采用有機溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結晶得到銀杏內(nèi)酯B原料。全文摘要本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯B原料，其特征在于該銀杏內(nèi)酯B原料是通過以下方法制備得到的取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮，浸煮液過濾后采用有機溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100～200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結晶得到銀杏內(nèi)酯B原料；其中，銀杏內(nèi)酯B原料中銀杏內(nèi)酯B含量≥90％。采用該方法制得的銀杏內(nèi)酯B原料，銀杏內(nèi)酯B純度高；制備工藝過程簡單、轉(zhuǎn)移率高、成本低、適用工業(yè)大生產(chǎn)。文檔編號A61K36/16GK101302222SQ20081002420公開日2008年11月12日申請日期2008年5月21日優(yōu)先權日2008年5月21日發(fā)明者張朝波,林徐,敬朱,許益清申請人:南京海陵中藥制藥工藝技術研究有限公司;揚子江藥業(yè)集團有限公司;揚子江藥業(yè)集團南京海陵藥業(yè)有限公司