專利名稱：：龍葵提取物、其制備方法及其藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物龍葵提取物，其制備方法，和作為活性成分制備預(yù)防和治療腫瘤、糖尿病、哮喘病、冠心病等疾病的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：龍葵&/"/"附^^";丄.是一年生茄屬草本植物，在國內(nèi)大部分省區(qū)均有生長。全草供藥用，性寒，味苦辛微甘，有小毒，歸肺、膀胱經(jīng)。能散瘀消腫，清熱解毒。對金色葡萄球菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、綠濃桿菌、豬霍亂桿菌均有較強(qiáng)的抑菌作用，有抑制癌細(xì)胞以及泌尿系統(tǒng)感染和白帶等功效，常用治療癰腫，腫瘤，痢疾等，民間用于治療糖尿病療效顯著。此外龍葵還有一定的食療作用，因此具有很好的藥用價值。植物體內(nèi)富含甾體類生物堿，如澳洲茄堿(solasonine)、澳洲茄邊堿(solamargine)、澳洲茄明堿(solasodamine)、￡-龍葵堿(e-solanigrine)、S-龍葵堿(5-solanigrine)、龍葵定堿(solanigridine)、刺茄堿solasurine等，這些甾體類生物堿均以苷的形式存在于龍葵莖、葉、根、果，苷元是澳洲茄胺(solasodine)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>澳洲茄堿]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>茄邊堿<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>刺茄堿solasurine澳洲茄堿和茄邊堿是龍葵中主要的兩個生物堿成分，在體外試驗中，兩個化合物均表現(xiàn)出對細(xì)胞膜脂的破壞性，兩者表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)，茄邊堿的破壞性更強(qiáng)，其中的鼠李糖可能在引導(dǎo)糖苷生物堿與細(xì)胞的結(jié)合中起了重要作用；一些對茄邊堿的研究表明，茄邊堿能夠調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子受體的表達(dá)從而引起癌細(xì)胞凋亡，2位的鼠李糖可能在觸發(fā)細(xì)胞凋亡中起決定性作用。其它糖苷生物堿也表現(xiàn)出近似的生理活性。因此，摸索出合適的工藝，從龍葵中提取出糖苷總生物堿部位，進(jìn)行藥效研究，可以作為抗腫瘤新藥研究的一個方向。對龍葵粗提物的預(yù)防治療糖尿病、哮喘病和冠心病等活性的研究也是目前國外的關(guān)注點，但目前還沒有研究確切地表明是粗提物中哪些化學(xué)成分在起作用。中國專利授權(quán)公告號CN1329038C公開的茄屬植物的水溶性萃取物、其制備方法及其藥學(xué)組合物，其中水溶性萃取物是基本上是由60%-90%的澳洲茄堿及茄邊堿所構(gòu)成。目前使用的龍葵提取方法成本較高，有效成分含量較低，雜質(zhì)較多，且制備過程中產(chǎn)生的污染較大。經(jīng)提取后得到的產(chǎn)物有效成分的含量限制了其在藥學(xué)組合物中的使用，尚不能滿足高效藥學(xué)組合物的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的第一方面是提供了一種龍葵提取物。本發(fā)明的目的第二方面是提供上述龍葵提取物的制備方法。本發(fā)明的目的第三方面是提供上述龍葵提取物在藥物中的應(yīng)用。作為本發(fā)明第一方面的龍葵提取物，包含澳洲茄堿和茄邊堿，還包含刺茄堿，其中澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三者的總含量為80wt%99wt%。澳洲茄堿含量為30wt°/。50wt%，茄邊堿含量為10wt%30wt%，剌茄堿含量為30wt%50wt%。作為本發(fā)明第二方面的龍葵提取物的制備方法，包括以下步驟-(1)龍葵全草與/或果實，加乙醇提取，收集提取液A;(2)回收提取液中的乙醇至無醇味，得濃縮液B;(3)濃縮液B用陽離子交換樹脂吸附，依次用水、乙醇和含堿乙醇進(jìn)行洗脫，收集含堿乙醇洗脫部分C;(4)含堿乙醇洗脫部分C，回收乙醇得濃縮液D;(5)濃縮液D離心分離，棄上清液，得沉淀物E;(6)沉淀物E用水洗滌至近白色且上清液pH值小于9，沉淀干燥后即得龍葵提取物。在上述步驟(1)中，乙醇的用量每次為生藥量的28倍體積；乙醇的重量百分比濃度為50%95%。優(yōu)選為乙醇的用量每次為生藥量的5倍體積；乙醇的重量百分比濃度為90%。在上述步驟(1)中，采用回流或超聲方式提取，提取次數(shù)為25次，每次13小時。優(yōu)選為采用回流方式提取，提取次數(shù)為3次，每次1.5小時。當(dāng)生藥材為龍葵全草，在上述步驟(2)中，增加一個對濃縮液B用石油醚萃取脫脂的步驟。優(yōu)選為對濃縮液B用等體積石油醚萃取3次脫脂。在上述步驟(3)中，陽離子交換樹脂的用量為生藥量的0.55倍體積。優(yōu)選為生藥量的1倍體積。所述陽離子交換樹脂的功能基為磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚羥基之中的一種。優(yōu)選為磺酸基。在上述步驟G)中，優(yōu)選的洗脫方法為依次用水洗樹脂至流出液近無色，110倍樹脂體積的重量百分比濃度為30%90%的乙醇洗脫，0.510倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。更優(yōu)選的洗脫方法為依次用水洗樹脂至流出液近無色，12倍樹脂體積的重量百分比濃度為30%60%的乙醇洗脫，15倍樹脂體積的重量百分比濃度為90%的乙醇洗脫，15倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。最優(yōu)選的洗脫方式為依次用水洗樹脂至流出液近無色，1倍樹脂體積的重量百分比濃度為40%的乙醇洗脫，2倍樹脂體積的重量百分比濃度為卯％的乙醇洗脫，3倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。在上述步驟(3)中，所述含堿乙醇是重量百分比濃度為5095%乙醇與堿的混合溶液，其中堿為氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉以及其它工業(yè)生產(chǎn)常用的堿之中的一種。優(yōu)選的含堿乙醇是重量百分比濃度為90%乙醇與重量百分比濃度為25%氨水按體積比10:1混合的溶液。在上述步驟(6)中，如果沉淀物E顏色較深，增加一用丙酮洗滌沉淀至近白色的步驟。在上述步驟(3)中，所述的陽離子交換樹脂可以再生，其再生的方法是用2%氫氧化鈉水溶液加熱浸泡樹脂；裝柱，用2%的氫氧化鈉水溶液800ml洗脫；用水洗至流出液呈中性；用1N鹽酸洗樹脂至流出液pH值為2;用去離子水洗樹脂至流出液pH值為6，即可投入重復(fù)使用。根據(jù)本發(fā)明制備方法獲得的龍葵提取物中澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三者的總含量為80wt%99wt%，澳洲茄堿含量為30wt%50wt%，茄邊堿含量為10wt%30wt%，刺茄堿含量為30wt%50wt%。作為本發(fā)明第三方面的上述龍葵提取物的藥物用途是以所述的龍葵提取物中的澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿作為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料，制成的任何一種劑型的藥物。優(yōu)選的劑型為注射劑。作為本發(fā)明第三方面的龍葵提取物在作為活性成分在制備預(yù)防與治療腫瘤、糖尿病、哮喘病、心臟病等疾病的藥物中的應(yīng)用。上述龍葵提取物作為活性成分的具體藥物用途如下，但不限于下述藥物用途1、以龍葵提取物作為活性成分可以在制備預(yù)防和治療腫瘤藥物中應(yīng)用。2、以龍葵提取物作為活性成分可以在制備預(yù)防和治療糖尿病藥物中應(yīng)用。3、以龍葵提取物作為活性成分可以在制備預(yù)防和治療哮喘病藥物中應(yīng)用。4、以龍葵提取物作為活性成分可以在制備預(yù)防和治療冠心病藥物中應(yīng)用。本發(fā)明的龍葵提取物含有活性成分澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿，其在預(yù)防與治療腫瘤、糖尿病、哮喘病、冠心病等疾病方面有一定療效。本發(fā)明的制備方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，該方法工藝先進(jìn)，大生產(chǎn)實用性強(qiáng)，成本相對較低。有機(jī)溶劑主要為乙醇，使用后的酸堿均經(jīng)處理后排放，環(huán)境污染小。所得提取物雜質(zhì)少，有效成分含量高。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1龍葵提取物的制備(1)龍葵全草400g,力B90%乙醇2000ml，回流提取3次，每次1.5小時；(2)提取液回收乙醇至無醇味，得濃縮液約300ml，石油醚萃取3次，每次用量為300ml;(3)濃縮液用400ml處理成H+型的HD-8強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂(上海華震科技有限公司)裝柱吸附，依次用水洗脫至流出液近無色，40%乙醇400ml洗脫，90%乙醇800ml洗脫，含氨水乙醇(90%乙醇25°/。氨水為10:1)1200ml洗脫；(4)收集含氨水乙醇洗脫部分，回收乙醇；(5)濃縮液5000rpm離心IO分鐘，棄上清液；(6)少量水洗滌沉淀，5000rpm離心IO分鐘，如此用水洗滌2次，再用少量丙酮洗滌一次，沉淀減壓干燥后即得龍葵提取物0.17g，收率0.04%。其中樹脂再生過程如下用2W氫氧化鈉水溶液800ml加熱浸泡樹脂；裝柱，用2%的氫氧化鈉水溶液800ml洗脫；用水洗至流出液呈中性；用1N鹽酸洗樹脂至流出液pH值為2;用去離子水洗樹脂至流出液pH值為6，即可投入重復(fù)使用。實施例2龍葵提取物的制備(1)龍葵果實1000g，加卯o/o乙醇5000ml，回流提取3次，每次1.5小時；(2)提取液回收乙醇至無醇味，得濃縮液約800ml;(3)濃縮液用1000ml處理成H+型的HD-8強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂(上海華震科技有限公司)裝柱吸附，依次用水洗脫至流出液近無色，40%乙醇1000ml洗脫，90%乙醇2000ml洗脫，含氨水乙醇(卯％乙醇25%氨水為10:1)3000ml洗脫；(4)收集含氨水乙醇洗脫部分，回收乙醇；(5)濃縮液5000rpm離心IO分鐘，棄上清液；(6)少量水洗滌沉淀，5000rpm離心IO分鐘，如此用水洗滌2次，再用少量丙酮洗滌一次，沉淀減壓干燥后即得龍葵提取物1.5g，收率0.15%。其中樹脂再生過程如下用2%氫氧化鈉水溶液2000ml加熱浸泡樹脂；裝柱，用2%的氫氧化鈉水溶液2000ml洗脫；用水洗至流出液呈中性；用lN鹽酸洗樹脂至流出液pH值為2;用去離子水洗樹脂至流出液pH值為6，即可投入重復(fù)使用。實施例3龍葵提取物的制備(1)龍葵全草400g，加卯。/。乙醇2000ml，超聲提取3次，每次1.5小時；(2)提取液回收乙醇至無醇味，得濃縮液約300ml，石油醚萃取3次，每次用量為300ml;(3)濃縮液用400ml處理成H+型的HD-8強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂(上海華震科技有限公司)裝柱吸附，依次用水洗脫至流出液近無色，40%乙醇400ml洗脫，卯％乙醇800ml洗脫，含0.1%氫氧化鈉的80%乙醇1200ml洗脫；(4)收集含氫氧化鈉乙醇洗脫部分，回收乙醇；(5)濃縮液5000rpm離心IO分鐘，棄上清液；(6)少量水洗滌沉淀，5000rpm離心IO分鐘。如此用水洗滌4次后，上清液pH值約為8。沉淀干燥后即得龍葵提取物0.13g，收率0.03%。其中樹脂再生過程如下用2。/。氫氧化鈉水溶液800ml加熱浸泡樹脂；裝柱，用2°/。的氫氧化鈉水溶液800ml洗脫；用水洗至流出液呈中性；用1N鹽酸洗樹脂至流出液pH值為2;用去離子水洗樹脂至流出液pH值為6，即可投入重復(fù)使用。實施例4龍葵提取物中生物堿的鑒別測定(液質(zhì)聯(lián)用法)實驗儀器液質(zhì)聯(lián)用儀，Agilent1200LC/MSD/VL蒸發(fā)光散射檢測器，SoftA300A迪馬C18鉆石柱，250X4.6mmHPLC條件甲醇:0.2%乙酸，梯度0min，5:95;10min，5:95;15min，90:10;25min，100:0。流速0.8ml/min，柱溫35。C。蒸發(fā)光散射檢測器檢測條件DT=70'C，SC=35°C，GAS:50psi實驗方法和結(jié)果取龍葵提取物10mg，精密稱定，置25ml量瓶中，少量甲醇溶解，甲醇稀釋至刻度，0.45pm微孔濾膜過濾，l(Hil進(jìn)樣。保留時間在1620分鐘之間的一組峰為糖苷生物堿，峰面積之和占總峰面積的85%。HPLC-MS檢測出分子離子峰17.5min，884(澳洲茄堿，M+l);17.8，868(茄邊堿，M+l);18.2，722(剌茄堿，M+l)。實施例5龍葵提取物中生物堿含量的測定(薄層掃描法)實驗儀器島津CS-9310型雙波長薄層掃描儀TLC條件高效硅膠G板10cmX20cm;展開劑為正丁醇:氨水(4:1)上層液；碘化鉍鉀顯色；AS=468nm掃描。實驗方法和結(jié)果取龍葵提取物10.05mg，精密稱定，置5ml量瓶中，少量甲醇溶解，甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5nl點樣，展開，顯色，掃描，澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三個點的面積百分比為40.5%、25.4%和34.1%。實施例6龍葵提取物注射劑的制備取龍葵提取物2000mg，加注射用水900ml，1,2-丙二醇50ml，氯化鈉9g，用0.1N的鹽酸調(diào)pH值至4.0，加注射用水至1000ml，用0.2pm微孔濾膜過濾，灌封，濕熱滅菌，得龍葵提取物注射劑。實施例7龍葵提取物灌胃給藥對小鼠肝癌H22影響的實驗研究選取18~20g雌性C57BL/6小鼠，取生長良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理鹽水稀釋成12xl(^個/ml濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2ml，隨機(jī)分組，每組動物數(shù)10只，對照組15只，設(shè)空白對照組(相應(yīng)溶劑，25ml/kg，igx7)注射用環(huán)磷酰胺(30mg/kg，ipx7)龍葵提取物(50mg/kg，igx7)龍葵提取物(100mg/kg，igx7)龍葵提取物(200mg/kg，igx7)龍葵提取物用數(shù)滴吐溫-80助溶后用0.5%CMC配成混懸液，注射用環(huán)磷酰胺用生理鹽水配制成所需濃度。接種后次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)經(jīng)口灌胃7天。接種后10日脫頸處死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。試驗結(jié)果見表l，龍葵提取物在50、100、200mg/kg的水平上經(jīng)口灌胃給藥時可以明顯降低小鼠肝癌H22組織水平。給藥7天后，各給藥組與對照組相比，瘤重有顯著差異(PO.Ol)。表1.龍葵提取物灌胃給藥對小鼠肝癌H22的抑瘤作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例8龍葵提取物灌胃給藥對小鼠Lewis肺癌影響的實驗研究選取18~20g雌性C57BL/6小鼠，取生長良好的小鼠Lewis肺癌瘤塊，用生理鹽水勻漿法制備成12xI(T個/ml濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2ml，隨機(jī)分組，各組動物數(shù)6只，對照組12只，設(shè)空白對照組(相應(yīng)溶劑，25ml/kg)注射用環(huán)磷酰胺(30mg/kg，ipx7)龍葵提取物(50mg/kg，igx10)龍葵提取物(100mg/kg，igx10)龍葵提取物(200mg/kg,igx10)龍葵提取物用數(shù)滴吐溫-80助溶后用0.5。/。CMC配成混懸液，注射用環(huán)磷酰胺用生理鹽水配制成所需濃度。接種次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)經(jīng)口灌胃10天。接種后14日脫頸處死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。試驗結(jié)果見表2，龍葵提取物在50、100、200mg/kg的水平上經(jīng)口灌胃給藥時可以明顯降低小鼠Lewis肺癌組織水平。給藥10天后，各給藥組與對照組相比，瘤重有顯著差異(PO.Ol)。表2.龍葵提取物灌胃給藥對小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與對照組比較*P<0.05,**P<0.01。實施例9龍葵提取物皮下、腹腔給藥對小鼠肝癌H22影響的實驗研究選取1820g雌性C57BL/6小鼠，取生長良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理鹽水勻漿法制備成12xl(^個/ml濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2ml，隨機(jī)分組，各組動物數(shù)10只，對照組15只，設(shè)空白對照組(相應(yīng)溶劑，25ml/kg)注射用環(huán)磷酰胺(30mg/kg，ipx7)龍葵提取物(40mg/kg，scx10)龍葵提取物(40mg/kg，ipx10)龍葵提取物用數(shù)滴吐溫-80助溶后用0.5%CMC配成混懸液，注射用環(huán)磷酰胺用生理鹽水配制成所需濃度。接種次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)皮下、腹腔給藥7天。接種后10日脫頸處死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。試驗結(jié)果見表3，龍葵提取物在40mg/kg的水平上皮下和腹腔給藥時可以明顯降低小鼠肝癌H22組織水平。給藥7天后，龍葵提取物40mg/kg皮下給藥組、腹腔注射給藥組與對照組相比，瘤重有顯著差異(PO.Ol)。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與對照組比較*P<0.05，**P<0.01。實施例10龍葵提取物皮下、腹腔給藥對小鼠Lewis肺癌影響的實驗研究選取1820g雄性C57BL/6小鼠，取生長良好的小鼠肺癌瘤塊，用生理鹽水勻漿法制備成l2xl(^個/ml濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.21111，隨機(jī)分組，各組動物數(shù)IO只，對照組15只，設(shè)空白對照組(相應(yīng)溶劑，25ml/kg)注射用環(huán)磷酰胺(30mg/kg，ipx7)龍葵提取物(40mg/kg，scx10)龍葵提取物(40mg/kg，ipx10)龍葵提取物用數(shù)滴吐溫-80助溶后用0.5。/。CMC配成混懸液，注射用環(huán)磷酰胺用生理鹽水配制成所需濃度。接種次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)皮下、腹腔給藥10天。接種后14曰脫頸處死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。試驗結(jié)果見表4，龍葵提取物在40mg/kg的水平上皮下和腹腔給藥時可以明顯降低小鼠Lewis肺癌組織水平。給藥10天后，龍葵提取物40mg/kg腹腔注射給藥組與對照組相比，瘤重有顯著差異(PO.Ol)。表4.龍葵提取物皮下、腹腔給藥對小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與對照組比較*P<0.05,**PO.01。實施例11龍葵提取物對正常小鼠餐后血糖的影響選取1820g雄性昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分為空白對照組(生理鹽水)、正對照組(格列本脲2.5mg/kg)、給藥組I(龍葵提取物10mg/kg)和給藥組II(龍葵提取物20mg/kg)，每組各6只，試驗前18h禁食不禁水，灌胃給藥后l、2、4、8、10h尾靜脈采血，離心分離血漿后，用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)法測定葡萄糖水平。試驗結(jié)果見表5，龍葵提取物在10、20mg/kg的水平上可以明顯降低正常小鼠餐后血糖水平。給藥8h、10h后，20mg/kg劑量組與對照組相比，血糖值有顯著差異(P《.01)。表5.龍葵提取物對正常小鼠餐后血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與對照組比較*P<0.05，**P<0.01(n=6)。實施例12龍葵提取物對實驗性糖尿病小鼠餐后血糖的影響選取1820g雄性昆明種小鼠，24h禁食不禁水，按120mg/kg腹腔注射四氧嘧啶生理鹽水液，lh后喂食，48h后尾靜脈采血測定血糖水平，當(dāng)血糖值達(dá)到200mg/100ml以上的小鼠定為糖尿病模型鼠。將其按體重隨機(jī)分為空白對照組(生理鹽水)、正對照組(格列本脲2.5mg/kg)、給藥組I(龍葵提取物10mg/kg)和給藥組II(龍葵提取物20mg/kg)，每組各6只，灌胃給藥后1、2、4、8、10h尾靜脈采血，離心分離血漿后，用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)法測定葡萄糖水平。試驗結(jié)果見表6，龍葵提取物在10、20mg/kg的水平上可以明顯降低實驗性糖尿病小鼠餐后血糖水平。給藥4h、8h和10h后，各劑量組與對照組相比，血糖值有顯著差異(PO.Ol)。表6.龍葵提取物對實驗性糖尿病小鼠餐后血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與對照組比較*P<0.05,**P<0.01(n=6)。實施例13龍葵提取物對豚鼠實驗性哮喘的影響選取200250g健康豚鼠隨機(jī)分為正常對照組、哮喘模型組、給藥組I(龍葵提取物10mg/kg)和給藥組II(龍葵提取物20mg/kg)，每組各6只。以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和霧化吸入激發(fā)建立哮喘豚鼠模型。檢測血清NO、T-NOS、iNOS水平。試驗結(jié)果見表7，龍葵提取物在10、20mg/kg的水平上可以明顯降低血清NO、T-NOS及iNOS水平，與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。表7.龍葵提取物對豚鼠實驗性哮喘的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>與模型組比較*P<0.05(n=6)。實施例14龍葵提取物對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用采用離體大鼠灌流心臟(Langendorffheart)缺血再灌注模型，用含龍葵提取物的K-H氏緩沖液灌注心臟，檢測心肌組織中MDA含量和再灌15min灌流液中LDH活性，此兩指標(biāo)能間接反映與心肌損傷密切相關(guān)的氧自由基水平變化。記錄各組的室顫發(fā)生率。再灌注引起的結(jié)果如表8、9、10所示。表8.龍葵提取物對離體大鼠灌流心臟室顫發(fā)生率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注與陰性對照組相比，*P<0.05，**P<0.01("=12)。表9.龍葵提取物對離體心肌組織MDA含量的影響組別MDA(mmol/g心肌組織)陰性對照0.33±0.05正常對照0.16±0.02**龍葵提取物(0.2g/L)0.24±0.03*龍葵提取物(2.0g/L，)0.18±0.02**注與陰性對照組相比，*P<0.05,**P<0.01(w=12)。表10.龍葵提取物提取物對再灌灌流液中LDH活性的影響組別LDH(units/100ml)陰性對照144.2±11.7龍葵提取物(0.2g/L)105.5±7.9*龍葵提取物(2.0g/L)64.3±4.7**注與陰性對照組相比，*P<0.05,**P<0.01("=12)。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。權(quán)利要求1、龍葵提取物，包含澳洲茄堿和茄邊堿，還包含刺茄堿，其中澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三者的總含量為80wt％～99wt％。2、如權(quán)利要求1所述的龍葵提取物，其特征在于，澳洲茄堿含量為30wt%50wt%，茄邊堿含量為10wt%30wt%，刺茄堿含量為30wt%50wt%。3、一種制備權(quán)利要求1所述的龍葵提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)龍葵全草與/或果實，加乙醇提取，收集提取液A;(2)回收提取液中的乙醇至無醇味，得濃縮液B;(3)濃縮液B用陽離子交換樹脂吸附，依次用水、乙醇和含堿乙醇進(jìn)行洗脫，收集含堿乙醇洗脫部分C;(4)含堿乙醇洗脫部分C，回收乙醇得濃縮液D;(5)濃縮液D離心分離，棄上清液，得沉淀物E;(6)沉淀物E用水洗滌至近白色且上清液pH值小于9，沉淀干燥后即得龍葵提取物。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(1)中，乙醇的用量每次為生藥量的28倍體積；乙醇的重量百分比濃度為50%95%。5、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(1)中，乙醇的用量每次為生藥量的5倍體積；乙醇的重量百分比濃度為90%。6、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(1)中，采用回流或超聲方式提取，提取次數(shù)為25次，每次13小時。7、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(1)中，采用回流方式提取，提取次數(shù)為3次，每次1.5小時。8、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，當(dāng)生藥材為龍葵全草，在上述步驟(2)中，增加一個對濃縮液B用石油醚萃取脫脂的步驟。9、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，當(dāng)生藥材為龍葵全草，在上述步驟(2)中，增加一個對濃縮液B用等體積石油醚萃取3次脫脂的步驟。10、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，所述陽離子交換樹脂的用量為生藥量的0.55倍體積。11、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，所述陽離子交換樹脂的用量為生藥量的1倍體積。12、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，所述陽離子交換樹脂的功能基為磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚羥基之中的一種。13、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，所述陽離子交換樹脂的功能基為磺酸基。14、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，采用的洗脫方法為依次用水洗樹脂至流出液近無色，110倍樹脂體積的重量百分比濃度為30°/。90%的乙醇洗脫，0.510倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。15、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，采用的洗脫方法為依次用水洗樹脂至流出液近無色，12倍樹脂體積的重量百分比濃度為30%60%的乙醇洗脫，15倍樹脂體積的90%的乙醇洗脫，15倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。16、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(3)中，采用的洗脫方式為依次用水洗樹脂至流出液近無色，l倍樹脂體積的重量百分比濃度為40。/。的乙醇洗脫，2倍樹脂體積的90%的乙醇洗脫，3倍樹脂體積的含堿乙醇洗脫。17、如權(quán)利要求3或12或13或14所述的方法，其特征在于，所述含堿乙醇是重量百分比濃度為5095%乙醇與堿的混合溶液，其中堿為氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉以及其它工業(yè)生產(chǎn)常用的堿之中的一種。18、如權(quán)利要求3或12或13或14所述的方法，其特征在于，所述的含堿乙醇是重量百分比濃度為90%乙醇與重量百分比濃度為25%氨水按體積比10:1混合的溶液。19、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在上述步驟(6)中，如果沉淀物E顏色較深，增加一用丙酮洗滌沉淀至近白色的步驟。20、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的陽離子交換樹脂可以再生，其再生的方法是用2%氫氧化鈉水溶液加熱浸泡樹脂；裝柱，用2%的氫氧化鈉水溶液800011洗脫；用水洗至流出液呈中性；用1N鹽酸洗樹脂至流出液pH值為2;用去離子水洗樹脂至流出液pH值為6，即可投入重復(fù)使用。21、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)獲得的龍葵提取物中澳洲茄堿含量為30wt%50wt%，茄邊堿含量為10wt°/。30wt°/。，刺茄堿含量為30wt°/。50wt%，澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三者的總含量為80wt%99wt%。22、一種權(quán)利要求12所述的龍葵提取物的藥物用途是以所述的龍葵提取物中的澳洲茄堿、琉邊堿和剌茄堿作為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料，制成的任何一種劑型的藥物。23、如權(quán)利要求22所述的用途，其特征在于，所述的劑型為注射劑。24、一種權(quán)利要求12所述的龍葵提取物作為活性成分在制備預(yù)防和治療腫瘤藥物中應(yīng)用。25、一種權(quán)利要求1~2所述的龍葵提取物作為活性成分在制備預(yù)防和治療糖尿病藥物中應(yīng)用。26、一種權(quán)利要求12所述的龍葵提取物作為活性成分在制備預(yù)防和治療哮喘病藥物中應(yīng)用。27、一種權(quán)利要求12所述的龍葵提取物作為活性成分在制備預(yù)防和治療冠心病藥物中應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及龍葵提取物、其制備方法及其藥物用途。其中澳洲茄堿、茄邊堿和刺茄堿三者的總含量為80wt％～99wt％，澳洲茄堿含量為30wt％～50wt％，茄邊堿含量為10wt％～30wt％，刺茄堿含量為30wt％～50wt％。本發(fā)明還涉及到這種龍葵提取物制備方法和作為活性成分制備預(yù)防和治療腫瘤、糖尿病、哮喘病、冠心病等疾病的藥物的用途。文檔編號A61P35/00GK101337000SQ200810033619公開日2009年1月7日申請日期2008年2月15日優(yōu)先權(quán)日2008年2月15日發(fā)明者妍王,秦繼紅申請人:上海海天醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司