專利名稱：小柴胡湯減毒配伍組方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，更具體地涉及一種新的小柴胡湯減毒配伍組方。
背景技術(shù)：
小柴胡湯出自《傷寒論》，由柴胡、黃芩、人參、半夏、炙甘草、生姜、大棗七味藥組成，是和解少陽的代表方劑，在臨床內(nèi)科上應(yīng)用非常廣泛，常用小柴胡湯加減治療消化系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病與精神病[1]。
近年有關(guān)小柴胡湯的肝臟毒副作用受到越來越多的關(guān)注。國外Itoh等[陳達民.草藥小柴胡湯引起的肝損害.國外醫(yī)學(xué)消化系統(tǒng)疾病分冊1996;16(l):61-65]報道40例服用小柴胡湯患者，有9例在服用過程中轉(zhuǎn)氨酶升高及出現(xiàn)黃疸，肝組織活檢證實為急性肝損害，停藥后肝功能恢復(fù)正常，其中4例再次服藥后又出現(xiàn)肝損傷，表明小柴胡湯能誘發(fā)急性肝炎，其機制可能與柴胡或黃芩的原藥材的毒性有關(guān)。據(jù)報道[金航.日本漢方藥制劑副作用分析.國外醫(yī)學(xué)屮醫(yī)中藥分冊1997;19(3):62-66][甘典輝,鄧嫦.部分中草藥致藥物性肝損害的報道綜述[J].廣西中醫(yī)藥，2004,6:5-7]，將小柴胡湯作為抗肝損傷的藥物長期廣泛的用于慢性肝病病人，結(jié)果在平均2個月的潛伏期后引起急性肝炎，組織學(xué)檢查顯示肝小葉中央性壞死、微囊泡狀的脂肪樣病變和纖維化，在兩個活檢肝組織中有膽汁淤積的表現(xiàn)[3,4]。也有學(xué)者報道[顧文君,劉春紅,沈錫中.草藥的肝毒性[J].世界臨床藥物,2003,24:217-226.]小柴胡湯及其類似方提取劑的不良反應(yīng)，其中多例為肝功能損害(小柴胡湯5例，小柴胡合柴樸湯、小柴胡加桔梗石膏湯各l例)。
鑒于目前對小柴胡湯中各單味藥材的研究多集中在化學(xué)成分分析和藥理研究方面，對各味單藥的毒理研究鮮見報道，未見其致毒成分及致毒機理的研究。同時鑒于目前臨床上小柴胡湯出現(xiàn)的肝臟毒副作用，因此，本領(lǐng)域需要開發(fā)新的減毒的小柴胡湯配伍組方，在保證小柴胡湯原有功效的基礎(chǔ)上，大大降低其肝臟毒性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明對小柴胡湯組方的肝毒性進行了確認，并明確了該組方中導(dǎo)致肝毒性的藥材。
本發(fā)明的目的就是提供一種新的小柴胡湯減毒配伍組方。
在本發(fā)明中，提供了一種小柴胡湯配伍組方，該組方包含的藥材及其重量比例如下， 柴胡2.143份，黃苳1.107份，人參1.107份，半夏2.107份，生姜1.107份，甘草0.893 份，大棗1.536份
在另一優(yōu)選例中，所述的組方對肝臟的毒性減弱。


圖l MTT法檢測不同制法小柴胡湯對人肝癌細胞株活性的影響 圖2MTT法檢測不同配伍減方水煎液對人肝癌細胞株活性的影響
具體實施例方式
實施例l.不同配伍組方小柴胡湯的人肝細胞毒性體外檢測 1.材料與儀器
1.1藥物和試劑柴胡、制半夏、炎甘草、大棗購自上?？禈蛑兴庯嬈邢薰荆?黃芩購自上海德華國藥制品有限公司；人參購自上海信德中藥公司飲片廠；生姜購于 市場；對乙酰氨基酚、三苯氧胺和四甲基偶氮唑鹽(MTT)購自Sigma公司；RPMI 1640 培養(yǎng)基和小牛血清購自Gibco公司；青霉素和鏈霉素購自華北制藥有限公司；二甲亞 砜(DMSO)購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
1.2細胞株人肝癌細胞株SMMC-7721購自中國科學(xué)院上海細胞資源中心，正常 人肝細胞由瑞德肝臟疾病研究所(上海)提供。
.1.3儀器超凈工作臺(蘇凈集團)，二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo Forma),倒置 顯微鏡(重慶光電儀器總公司)，酶標儀(上海雷勃分析儀器有限公司)，超聲波清 洗儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。
1.4藥材水煎液和超聲萃取液的制備
1.4.1小柴胡湯原方水煎液(《傷寒論》張仲景方)精密稱取柴胡4.286g,黃芩 3.214g，人參2.143g，制半夏3.214g，炙甘草1.786g，生姜3.214g，大棗2.143g，加10 倍量水200ml，浸潤過夜；加熱沸騰，小火微沸煎lh，收集煎液，4層紗布過濾，得濾 液；剩余藥渣加8倍量水160ml，同前述提取方法得濾液；合并濾液，單層濾紙過濾，加熱濃縮至20ml，分別經(jīng)0.45^im和0.22pm的微孔濾膜濾過。
1.4.2六味減方水煎液六味(無柴胡)、六味(無黃芩)、六味(無半夏)、 六味(無人參)、六味(無甘草)、六味(無生姜)、六味(無大棗)7種水煎液， 藥材量及制法同1.4.1。
1.4.3兩味減方水煎液黃芩分別與柴胡、半夏、人參、甘草、生姜、大棗合煎， 共6種水煎液，藥材量及制法同1.4.1。
1.4.4單味藥材水煎液柴胡、黃芩、半夏、人參、甘草、生姜、大棗7種水煎液， 藥材量及制法同1.4.1。
1.4.5原方超聲萃取液精密稱取1.4.1藥材量，力n5倍量水100ml，浸潤過夜；超 聲30min， 4層紗布過濾，單層濾紙過濾，加熱濃縮至20ml，分別經(jīng)0.45nm和0.22imi 的微孔濾膜濾過。
1.4.6柴胡超聲萃取液藥材量及制法同1.4.5。
1.4.7黃芩超聲萃取液藥材量及制法同1.4.5。
1.4.8黃芩+柴胡超聲萃取液藥材量及制法同1.4.5。
2.方法與結(jié)果
2.1藥物溶液所有實驗藥物在96孔細胞培養(yǎng)板中終濃度分別為5、 10、 20、 30、 40mg.mr1 (相當于原方藥材濃度)；陽性對照為對乙酰氨基酚(八八？)(511111101丄-1);陰 性對照為PBS (磷酸鹽緩沖液)。
2.2細胞活性檢測方法采用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清、100U'mr1 青霉素、100嗎'ml"鏈霉素)，將濃度5xl04'ml"的人肝癌細胞接種于96孔板，每孔 200^11，于37X:， 5。/。C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。棄去板上各孔內(nèi)原有液體，分別加入含 有相應(yīng)濃度藥物的細胞培養(yǎng)液，每藥物每濃度4個復(fù)孔，于37'C, 5。/。C02培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。24h后，加MTT (5mg'mr1) 20pl/孔。37°C， 5% C02培養(yǎng)箱中溫孵4h后，棄板上 各孔內(nèi)原有液體，加DMSO 200nl/孔以溶解甲臜(formazan)沉淀。室溫置30min后，用 酶標儀在570nm波長下測定各孔光密度值(OD)。計算細胞活性細胞活性(cell viability, %)=實驗組光密度值/對照組光密度值xlOOe/。。
2.3統(tǒng)計處理采用方差齊性檢驗和t檢驗。方差齊性檢驗的檢驗水準01=0.1， t 檢驗的檢驗水準a-0.05。
2.4結(jié)果
2.4.1小柴胡湯原方水煎液對人肝癌細胞株生長有顯著抑制，小柴胡湯原方水煎液的20、 30、 40mg'mrt濃度組的細胞相對活性分別為66.3。/。、 50.1%和35.1% (圖l， 表l);
2.4.2原方和柴胡超聲萃取液無顯著抑制，黃芩、黃芩+柴胡超聲萃取液有顯著 抑制(圖l，表l);
2.4.3六味減方水煎液中，不含黃芩的水煎液無顯著抑制，其他6種含有黃芩的 水煎液均有顯著抑制(圖2，表2);
2.4.4單味藥水煎液中，僅黃吝有顯著抑制，其他6種單味藥均無顯著抑制作用 (圖2，表2)
2.4.5兩味減方水煎液中，僅黃芩+半夏合煎液無顯著抑制，其他5種均有顯著抑 制作用，其中黃芩+柴胡的抑制作用最強，其各濃度組的細胞相對活性均低于黃芩、 柴胡分別單獨作用時的細胞相對活性，提示柴胡可能與黃芩協(xié)同作用并增強黃芩的毒 性(圖2，表2)。
表l MTT法檢測小柴胡湯原方、柴胡、黃芩、黃苓+柴胡超聲萃取液 作用于人肝癌細胞株的570nm光密度值(OD值)(x±s,n=4)
藥物OD(陰性對照)OD(5mg'mr1)OD(10tng'mr1)
小柴胡湯原方超聲0.882±0.0410.898±0.0320.928±0.069
柴胡超聲1.363±0.0791.385±0.1141.396±0.246
黃芩超聲1.039±0.0790.997幼.2610.712±0.277
黃芩+柴胡超聲1.431±0.1331.405±0.1010.987±0.043**
對乙酰氨基酚 (5mmol.L-1)0.946±0.0630.194±0.079**
藥物OD(20mg'mr1)OD(30mg.ml匿1)OD(40mg.mr1)
小柴胡湯原方超聲O廁士O.llO0.908±0.0650.828±0.044
柴胡超聲1,483±0.0971.512±0.1761.768±0.438
黃芩超聲0.409±0細**0.381±0.030**0.390幼.033**
黃芩+柴胡超聲0.530±0.062**0.410土0.075"0.413±0.221**
對乙酰氨基酚 C5imno1.1/1)0.194±0.079**
注*P<0.05，** PO.01
6表2 MTT法檢測小柴胡湯原方、六味減方、兩味減方及各單味藥材水煎液 作用于人肝癌細胞株的570nm光密度值(OD值)(x±s, n=4)
藥物OD(陰性對照)OD(5mg-mr1)OD(10mg.mr1)
小柴胡湯原方水煎0.833±0.0450.870±0.0400.820±0.042
六味(無柴胡)水煎1.196±0.0541.283±0.0971.075±0.153
六味(無黃芩)水煎、1.201±0.1331.345±0.1141.595±0.101
六味(無半夏)水煎1.255±0.0491.003±0.029**0.937±0.104*
六味(無人參)水煎1.199±0.0451.144±0.1181.171±0.261
六味(無甘草)水煎1.090±0.0350.994±0.1100.746±0.147*
六味(無生姜)水煎0.835±0.0990.774±0.3000.711±0.095
六味(無大棗)水煎1.102±0.0491.012±0.1410.712±0.091**
柴胡'水煎0.963±0.0721.002±0.0491.104±0.120
黃苓水煎1.025±0.0510.608土0.060"0.384±0.071**
半夏水煎0.931±0.0261.144±0.088*1.144±0.071**
人參水煎1.016±0.0540.980±0.0970.948±0.035
甘草水煎0.894±0.0131.177±0.166*1.077±0.087*
生姜水煎'1.375±0.3921.205±0.0971.053±0.031
大棗水煎1.332±0.1631.346±0.1601.274±0.200
黃芩+柴胡水煎0.981±0.0980.610±0.087**0.316±0細**
黃芩+半夏水煎0.939±0.0461.001±0.0350.972±0.053
黃吝+人參水煎0.939±0.0460.346±0.089 **0.260±0.011 **
黃芩+甘草水煎0.939±0馬0.272±0.024 **0.281±0.023 **
黃芩+生姜水煎0.939±0.0460.402±0.027 **0.222±0.008 **
黃芩+大棗水煎0.939±0.0460.344±0.082 **0.254±0駕**
對乙酰氨基酚(5mM)0.946±0扁0.194±0.079**藥物OD(20mg'mr1)OD(30mg.m1-1)OD(40mg'mr
小柴胡湯原方水煎0.552±0.157*0.418士0.126"0.292±0.050**
六味(無柴胡)水煎0.914±0.3020.469±0駕"0.280±0.082**
六味(無黃芩)水煎1.412±0.1461.316±0.173**1.401±0.207**
六味(無半夏)水煎0.431±0.039**0.267±0,075**0.227士0.019"
六味(無人參)水煎0.499±0.041**0.314士0.0821^0.250±0.064**
六味(無甘草)水煎0.319±0.068**0.233土0.020"0.233±0.023**
六味(無生姜)水煎0.408±0.046**0.267±0.049**0.266±0.039**
六味(無大棗)水煎0.280±0.075**0.206±0.011**0.226±0.020**
柴胡水煎1.043±0.0681.12U0.1221.061±0.111
黃芩水煎0.285±0.127**0.238±0.035**0.253±0.018**
半夏水煎1.152±0.1471.142±0.051**1.219±0.193
人參水煎0.953±0.0851.003±0.0590.929±0.032*
甘草水煎'1.202±0.159*1.106±0.073**0.930±0.100
生姜水煎1.085±0.1581.020±0.0280.984±0.169
大棗水煎1.334±0.1581.407±0.1571.536±0.080
黃芩+柴胡水煎0.174±0.021**0.177±0駕**0.178±0.017**
黃芩+半夏水煎0.卯7±0.1120駕±0.1780.879±0.083
黃芩+人參水煎0.300±0.013 **0.343±0.012 **0.364±0.010 **
黃芩+甘草水煎0.314±0.032 **0.374±0駕**0.328土0.026 **
黃芩+生姜水煎0.234±0.0160.256±0細**0.288±0.027 **
黃芩+大棗水煎0.287±0.0180.320±0.011 **0.346±0.023 **
對乙酰氨基酚(5mM)0.194±0.079**
注*P<0.05， ** PO.01
實施例2.重新配伍組方的小柴胡湯的人肝細胞毒性體外檢測
重新配伍的組方中減少了肝毒性藥材黃芩的比例，增加了半夏的比例，新的組 放中各藥材的組成比例如下柴胡2.143份，黃芩1.107份，人參U07份，半夏2.107份，生姜1.107份，甘草0.893 份，大棗1.536份。
采用實施例1中的方法進行MTT法檢測重新配伍的小柴胡湯水煎液對人肝細胞株的 作用，結(jié)果顯示重新配伍的小柴胡湯較《傷寒論》張仲景原方小柴胡湯的毒性大大減弱， 同時保持了小柴胡湯原有的療效。
權(quán)利要求
1.一種小柴胡湯配伍組方，其特征在于，包含的藥材及其重量比例如下，柴胡2.143份，黃芩1.107份，人參1.107份，半夏2.107份，生姜1.107份，甘草0.893份，大棗1.536份
2. 如權(quán)利要求l所述的小柴胡湯配伍組方,其特征在于，該組方對肝臟的毒性減弱。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的小柴胡湯減毒配伍組方，該組方減少了肝毒性藥材黃芩的比例，增加了半夏的比例，該組方具體包含柴胡2.143份，黃芩1.107份，人參1.107份，半夏2.107份，生姜1.107份，甘草0.893份，大棗1.536份。重新配伍的小柴胡湯較《傷寒論》張仲景原方小柴胡湯的肝毒性大大減弱，同時保持了小柴胡湯原有的療效。
文檔編號A61K36/9068GK101670077SQ20081004378
公開日2010年3月17日 申請日期2008年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月12日
發(fā)明者萌 戈, 謝天培 申請人:上海天甲生物醫(yī)藥有限公司