專利名稱：p16INK4a抗體用于治療宮頸癌的制作方法
pl6INK4a抗體用于治療宮頸癌 技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明涉及治療宮頸癌藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
宮頸癌的發(fā)生是由于人類乳頭狀瘤病毒感染引起的，高危型人 類乳頭狀瘤病毒感染宮頸上皮后與宿主細胞基因整合，經(jīng)過一系列 的生物反應(yīng)，導(dǎo)致pl6INK4a在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的病灶細 胞中過度表達，而在正常的宮頸上皮中不表達，是宮頸癌及宮頸上 皮內(nèi)瘤變的特異性生物標志物。近幾年國內(nèi)外均將pl6INK4a抗體 用于宮頸癌的診斷，能預(yù)測高級別宮頸上皮內(nèi)瘤。目前國內(nèi)外尚未 有pl6INK4a抗體藥物治療宮頸癌的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供pl6INK4a抗體的新用途。 本發(fā)明是將pl6INK4a抗體用來治療宮頸癌。 本發(fā)明的優(yōu)點是用pl6INK4a抗體藥物靶向治療宮頸癌， 在動物模型中已經(jīng)獲得成功。我們在無菌條件下將人宮頸癌組 織接種于SCID鼠背部皮下， 一次接種ll只，成功建立人宮頸 癌聯(lián)合免疫缺陷鼠荷瘤模型。接種50天后測量11只小鼠腫瘤 體積差異無顯著性。隨機取其中6只作為實驗組給予背部注射 鼠pl6INK4a抗體治療，另外5只注射生理鹽水作為對照組。結(jié) 果顯示，給予pl6INK4a抗體治療組腫瘤體積比對照組小，差異 有顯著性。證明pl6INK4a抗體藥物能夠有效治療宮頸癌?，F(xiàn)有 的技術(shù)能夠較容易地生產(chǎn)pl6INK4a的抗體，它們特異性高且缺 乏對人類的免疫遺傳性，不易被宿主的免疫系統(tǒng)攻擊。它是小 分子蛋白，易于滲透進入腫瘤細胞。
具體實施例方式
一、材料與方法1. 主要材料及動物來源新鮮宮頸癌組織來自一位晚期宮頸癌 患者手術(shù)切除標本，術(shù)前未接受任何抗癌治療，宮頸組織病理診斷 為宮頸中分化鱗狀細胞癌。雌性聯(lián)合免疫缺陷鼠(SCID鼠)購自中 山醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，清潔級，飼養(yǎng)在無特定病原體環(huán)境中， 所用飼料、飲水及墊料均經(jīng)高壓滅菌處理。
2. 藥物處理將市售的pl6INK4a抗體置于4。C高速離心1小 時，收集上清到無菌離心管中，加入適量的無菌PBS和鼠血清，使 抗體濃度為lmg/ml，鼠血清終濃度為0.05%。
3. 人宮頸癌荷瘤鼠模型的建立在無菌條件下，將新鮮宮頸癌
組織浸泡于RPMI-1640細胞培養(yǎng)液中，在超凈臺中清除血塊和壞死
組織，盡量剪碎腫瘤組織。用戊巴比妥腹腔注射麻醉小鼠然后固定
于操作板上，背部碘酒消毒備皮，并做一條長約0.5cm的小口，將
準備好的腫瘤組織種植于背部皮下，無菌絲線縫合， 一次接種11 只。
4. pl6INK4a抗體藥物治療宮頸癌荷瘤鼠腫瘤組織種植25天 后在SCID鼠后背部可觸及明顯腫瘤生長。將荷瘤鼠隨機分為2組 進行腫瘤局部注射治療對照組5只，給予安慰劑(加入鼠血清的 PBS);治療組6只，給予pl6INK4a抗體藥物治療。治療方案每 次于腫瘤局部注射藥物或安慰劑200ul，隔天一次，4次為一個療 程，間歇一周后進行第二個療程治療。
5. 療效觀察每天觀察荷瘤鼠狀態(tài)，3 4天一次測量腫瘤大 小，按照公式"V二n/6X長X寬X高"估算腫瘤體積。記錄荷瘤鼠
生存時間。
6. 統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)以M土SD表示。采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件 進行分析，以P〈0.05為差異具有顯著性，p〈0.()l為差異具有高度 顯著性。
二、實驗結(jié)果
l.成瘤率ll只小鼠全部成活，成瘤率為100%。腫瘤組織種
植25天時在SCID鼠后背部可觸及明顯腫瘤生長。將荷瘤鼠隨機分為2組，對照組5只和治療組6只，腫瘤體積差異無顯著性(p =0. 465)。2. 腫瘤生長體積測量腫瘤種植60天時腫瘤體積，治療組 (337. 98±21. 28) mm3明顯小于對照組(511. 48± 19. 94) mm3，差異有高度顯著性(p = 0.000)。測量腫瘤種植85天時腫瘤體積，治 療組(1289. 90± 157. 56) mm3明顯小于對照組(2678. 75± 148. 64) mm3，差異有高度顯著性(p = 0.000)。3. 小鼠存活時間從腫瘤種植之日開始計算，對照組存活時間 平均為(92. 0±3.2)天，治療組存活時間為(142. 0士4. 8)天， 兩者相比差異有高度顯著性(p = 0.000)。三、結(jié)論實驗表明，給予pl6INK4a抗體局部注射治療人宮頸癌荷瘤鼠， 治療組腫瘤體積比對照組小，差異具有高度顯著性(p二0.000); 治療組存活時間比對照組明顯延長，差異具有高度顯著性(P = 0.000)。證明pl6INK4a抗體藥物能夠有效治療宮頸癌，延長其生 存時間。
權(quán)利要求
1. p16INK4a抗體用于治療宮頸癌，其特征在于將p16INK4a抗體用來治療宮頸癌。
全文摘要
p16INK4a抗體用于治療宮頸癌，其特征在于將p16INK4a抗體用來治療宮頸癌。優(yōu)點是用p16INK4a抗體藥物靶向治療宮頸癌，在動物模型中已經(jīng)獲得成功。將人宮頸癌組織接種于SCID鼠背部皮下，給予背部注射鼠p16INK4a抗體治療，結(jié)果顯示，給予p16INK4a抗體治療組腫瘤體積比對照組小，差異有顯著性。證明p16INK4a抗體藥物能夠有效治療宮頸癌?，F(xiàn)有的技術(shù)能夠較容易地生產(chǎn)p16INK4a的抗體，它們特異性高且缺乏對人類的免疫遺傳性，不易被宿主的免疫系統(tǒng)攻擊。它是小分子蛋白，易于滲透進入腫瘤細胞。
文檔編號A61P35/00GK101293100SQ20081004745
公開日2008年10月29日 申請日期2008年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月20日
發(fā)明者莉 丁, 鄒先進 申請人:鄒先進