專利名稱：一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取熊果酸的方法，尤其涉及一種從茜草科植 物滇丁香中提取分離熊果酸的方法。
背景技術(shù)：
熊果酸(ursolic acid, UA)，別名烏索酸，在自然界分布很廣，存在于杜 鵲花科植物熊果的葉、果實(shí)，選森參植物毛泡桐的葉，茜草科植物梔子的果 實(shí)，龍膽科植物濕生蕾、木樨科植物女貞的葉等植物中。熊果酸具有廣泛的 生物學(xué)效應(yīng)，1990年被日本列為最有希望的腫瘤預(yù)防藥物之一。它對(duì)中樞神 經(jīng)系統(tǒng)有明顯的安定與降溫作用；體外對(duì)6+和G -菌及酵母菌均有抗菌活 性；有抗糖尿病、抗?jié)兗敖档脱淖饔?；?duì)多種致癌、促癌物有抵抗作 用；對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞有抑制生長(zhǎng)作用；熊果酸及其衍生物對(duì)病毒具有抑 制活性；另外，可誘導(dǎo)F9畸胎瘤細(xì)胞成為內(nèi)胚層細(xì)胞及抗血管生成。由于熊 果酸在自然界分布廣泛，存在于很多植物中，且有良好的生物活性。通常情 況下，熊果酸是通過化學(xué)方法合成的，采用化學(xué)方法合成存在有"三廢"處 理量大且處理困難，易對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染，并且成本較高。到目前為止，有關(guān) 從其他植物中提取分離熊果酸的報(bào)道有很多，但大多都是從木樨科植物及杜 鶻藥科植物中提取，從茜草科植物滇丁香中得到熊果酸尚未有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從茜草科植物滇丁香中提取分離熊果酸的方 法，其提取方法簡(jiǎn)單、成本低、產(chǎn)率高。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種從植物滇丁香中提取 熊果酸的方法，包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95%的 乙醇10L重復(fù)冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮液；(2) 將得到的乙醇濃縮液進(jìn)行試驗(yàn)；
(3) 將步驟(2)得到的濃縮物進(jìn)行SephadexLH-20凝膠柱層析，以 甲醇為洗脫劑，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，分離得到純品。
所述的步驟(2)對(duì)乙醇濃縮液進(jìn)行試驗(yàn)的步驟為將乙醇浸膏用10%乙 醇水(體積比)分散，按照浸膏與D101大孔樹脂重量比為1: 30;將分 散了浸膏的10%乙醇水溶液加入樹脂柱，水-乙醇溶劑梯度洗脫，60%乙 醇水部分進(jìn)行濃縮得濃縮物。
所述的步驟(2)對(duì)乙醇濃縮液進(jìn)行試驗(yàn)的步驟為將濃縮的提取物分
散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物進(jìn)行200—300目硅膠
中壓柱層析，用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: l)洗脫，以薄層層析參照
標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，合并該化合物的部位，減壓蒸發(fā)得濃縮物。
本發(fā)明所采用的滇丁香awcw/^;^"Vm" Hook.)為茜草科滇丁香屬植物， 分布于喜馬拉雅山至我國(guó)云南和廣西，具有較高的園林、藥用價(jià)值。由于滇 丁香株型優(yōu)美，枝葉繁茂，翠綠光亮，花期長(zhǎng)，花絮密集而繁茂，花色艷麗 而芳香，目前主要作為觀賞花木。但其在民間作為中藥材也具有悠久的歷史。 據(jù)記載丁香葉，即家中盆內(nèi)栽者是也，其味苦、辛，性微溫；芳香入肺， 止肺寒咳嗽、或咳血、或痰上帶血。關(guān)于滇丁香屬植物的藥用價(jià)值，吳征鎰 主編的《新華本草綱要》有詳細(xì)記載根有活血調(diào)經(jīng)、消炎止痛、降壓功能。
可用于月經(jīng)不調(diào)、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷、偏頭痛、心慌等，外用可治毒蛇咬
傷；花果有止咳化痰功能，可用于百日咳、慢性支氣管炎、肺結(jié)核；葉有消
腫功能，可敷外傷腫痛。滇丁香原料來源豐富，提取熊果酸的成本低。本發(fā) 明的提取方法中使用到的分離材料有大孔吸附樹脂和凝膠，它們不僅理化性 質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸，堿及有機(jī)溶媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及
強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響；并且易于洗脫再生，有益于多次循環(huán)利用。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
取干燥滇丁香20kg，粉碎，用95。/。工業(yè)乙醇10L冷浸3次，每次7天， 過濾，減壓回收乙醇得濃縮液，將濃縮的提取物分散在2L水中，依次用乙酸乙酯，正丁醇各萃取三次，乙酸乙酯提取物進(jìn)行200—300目硅膠中壓柱層析， 用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: 1)洗脫，以薄層層析參照標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)， 合并該化合物的部位，進(jìn)行SephadexLH-20凝膠柱層析以甲醇洗脫，得到該 化合物純品。 實(shí)施例2
大孔樹脂的預(yù)處理D101樹脂裝柱，用5% NaOH浸泡2 h后，以每小 時(shí)4個(gè)柱體積的流速洗脫2個(gè)柱體積，再用蒸餾水洗至PH值中性；加乙醇 浸泡lh，以每小時(shí)2個(gè)柱體積的流速洗脫3.5個(gè)柱體積，最后用蒸餾水洗至 無醇味。樣品溶液的制備取干燥滇丁香20kg，粉碎后，用95%工業(yè)乙醇冷 浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮液，加水至適宜濃度按照h 30 (浸膏與大孔樹脂重量比)；將樣品溶液加入樹脂柱，水一乙醇溶劑梯度洗 脫，60%乙醇水部分濃縮成浸膏，進(jìn)行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇
為洗脫劑，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，分離得到純品。
采用本發(fā)明的方法提取到的熊果酸，其性狀為白色粉末。分子式:(:30仏803, 分子量456。
儀器材料熔點(diǎn)用四川科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的XRC-1型顯微熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫
度計(jì)未校正；旋光用SPEA-300儀測(cè)定；紅外在Bio-Rad FTS-135紅外光譜測(cè) 定；紫外在UV-210A紫外光譜測(cè)定儀上測(cè)定；1H， 13C醒R圖譜由Bruker am-400 MHz核磁共振儀測(cè)定。TMS為內(nèi)標(biāo)；二維核磁共振圖譜由DRX-500 M Hz核磁共振儀測(cè)定；質(zhì)譜由VG.AUTOSpec-3000型質(zhì)譜儀測(cè)定。
測(cè)定條件及結(jié)果Mp: 305-308°C; Optical Rotat-ion: [a]2;| -8.8(c
0. 25， CHCU。 EIMS仿/z (%): 456 (M+, 20) ， 410(8)， 248(100)， 233(30)， 213 (75), 175(33)， 131(30)， 119(40)， 105(45)，91 (35)。 'H麗R (400MHz， C5D5N) 《3. 38 GH，dd，,ll,3，3.4Hz，H-3) ，5. 57(1H，brs， H-12) ， 2. 42 (1H， d，力l
1. 32 Hz, H-18) ， 0. 67 (3H， s， H-23) ， 0. 63 (3H， s， H-24), 0. 84 (3H， s， H-25) ， 0. 81 (3H, s，H-26)，1.03(3H，d， /=5. 9 Hz， H—29)， 1. 01 (3H， d， ,6.1 Hz，H-30).13C NMR(125MHz， "n ppm， pyridine-4) 5:39. 2(C-l)， 29. 1 (C-2)， 77. 9(C-3)， 3
9. 8 (C-4) ， 55. 6 (C-5) ， 18. 6 (C-6， 32. 6 (C-7) ， 37. 0 (C-8) ， 53. 3 (C-9) ， 37. 0 (C-l 0) ， 23. 1 (C-11) ， 125. 4 (C-12) ， 139. 04 (C-13) ，41.6 (C-14) ， 27. 9 (C-15) ， 42. 3 ( C-16)，47. 8 (C-17) ，39.3 (C-18) ，39.2 (C-19) ，33.4 (C-20) ，30.9 (C-21) ，33.0 (C-22) ,24.7 (C-23) ，16.3 (C-24) ，15.5 (C-25) ，17.2 (C-26 )，23.7 (C-27) ，179.7 (C-28) ，28.5 (C-29) ，24.7 (C-30)。
最后所應(yīng)說明的是以上實(shí)施例僅用以說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案 ，盡管參照上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng) 當(dāng)理解依然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神 和范圍的任何修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
權(quán)利要求
1、一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95％的乙醇10L重復(fù)冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮浸膏；(2)將得到的乙醇浸膏進(jìn)行試驗(yàn)；(3)將步驟(2)得到的濃縮物進(jìn)行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇為洗脫劑，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，分離得到純品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步驟(2)對(duì)乙醇浸膏進(jìn)行試驗(yàn)的步驟為將乙醇浸膏用10%乙醇 水(體積比)分散，按照浸膏與D101大孔樹脂重量比為1: 30;將分散 了浸膏的10%乙醇水溶液加入樹脂柱，水-乙醇溶劑梯度洗脫，60%乙醇水部分進(jìn)行濃縮得濃縮物。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，其特征在于所述的步驟(2)對(duì)乙醇濃縮液進(jìn)行試驗(yàn)的步驟為將濃縮的提取物 分散在2L水中，用乙酸乙酯萃取三次；乙酸乙酯提取物進(jìn)行200—300目硅膠中壓柱層析，用石油醚一丙酮溶劑(體積比為30: l)洗脫，以薄層層析參照標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，合并該化合物的部位，減壓蒸發(fā)得濃縮物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物滇丁香中提取熊果酸的方法，包括以下步驟(1)取干燥滇丁香，粉碎，用濃度為95％的乙醇10L重復(fù)冷浸3次，每次7天，過濾，減壓回收乙醇得濃縮浸膏；(2)將得到的乙醇浸膏進(jìn)行試驗(yàn)；(3)將步驟(2)得到的濃縮物進(jìn)行Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇為洗脫劑，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，分離得到純品。本發(fā)明的提取方法中使用到的分離材料有大孔吸附樹脂和凝膠，它們不僅理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響；并且易于洗脫再生，有益于多次循環(huán)利用。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101544679SQ20081004940
公開日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2008年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日
發(fā)明者姬志強(qiáng), 宋艷麗, 康文藝, 王金梅 申請(qǐng)人:河南大學(xué)