專利名稱：：一種蟲草注射用微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明公開一種蟲草注射用微球，同時(shí)還提供了其制備方法，屬于中醫(yī)制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：蟲草(冬蟲夏草)是一種貴重的中藥材，中醫(yī)認(rèn)為蟲草性味甘、平，入肺、腎經(jīng)，功能宜肺腎、止咳嗽、補(bǔ)虛損、宜精氣?！侗静菥V目拾遺》記載蟲草"保肺氣，實(shí)腠理。"《藥性考》記載蟲草"秘精益氣，專補(bǔ)命門"?！侗静輳男隆酚涊d蟲草"保肺宜腎，止血化痰。"現(xiàn)代藥理月研究表明，蟲草具有提高和促進(jìn)機(jī)體的免疫功能、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗腫瘤作用、抗病原微生物、抗炎、改善腎臟功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能等作用。在現(xiàn)有的技術(shù)中，蟲草和人工培育的蟲草菌絲體、子實(shí)體被廣泛用于醫(yī)藥和保健品配方中。因蟲草為貴重藥材，目前以單味蟲草制藥或蟲草加入復(fù)方制藥，其不足之處在于口服制劑作用緩慢、生物利用度低、療程長(zhǎng)、療效差。而對(duì)于普通的制劑，起活性成分面臨著一系列的問題，如臨床給藥次數(shù)頻繁，使用不方便，患者的順應(yīng)性差等缺點(diǎn)。傳統(tǒng)劑型，大多數(shù)的釋藥過程均按一級(jí)動(dòng)力學(xué)進(jìn)行，其藥物的血藥濃度有可能低于最低有效血藥濃度和在治療濃度內(nèi)維持時(shí)間短的缺點(diǎn)。為達(dá)到治療目的和降低副作用常采取多次服藥方式，這樣使得患者服藥的依從性下降。緩釋制劑正是克服了傳統(tǒng)制劑的不足，提供了平穩(wěn)、持久的血藥濃度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供了一種蟲草注射用微球，為緩釋、高生物利用度的注射用中藥微球。本發(fā)明的另一目的在于提供了這種注射用微球的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明所述微球?yàn)橐韵滤幬锝M合物按重量份數(shù)比制成的包括0.250%的由蟲草提取物為活性成分和微球重量的5099.8%的分子量范圍在5，0001,000，000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，其中藥材的組成按重量配比為蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物3090份，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油150份。優(yōu)選為-蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物4080，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油1040。最佳為-蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物80，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油20。本發(fā)明的微球制備方法，包括以下兩種方法噴霧干燥法和溶劑揮發(fā)法，優(yōu)選噴霧干燥法。一、溶劑揮發(fā)法采用溶劑揮發(fā)法制備本發(fā)明的微球時(shí)，首先用有機(jī)溶劑把蟲草提取物以及可生物降解的高分子藥用輔料和其他藥用輔料溶解，配制成有機(jī)相。另外，用可藥用水溶性高分子化合物配制連續(xù)水相，將有機(jī)相通過細(xì)管注入到連續(xù)水相中，在機(jī)械攪拌或者超聲波作用等劇烈攪拌作用下，充分乳化以形成微球，然后使有機(jī)溶劑揮發(fā)至千，過濾分離所形成的微球并干燥即得。在必要的情況下，也可以按照常規(guī)方法對(duì)微球進(jìn)行水洗、分級(jí)等后處理，進(jìn)行減壓烘干或者凍干等干燥處理，然后分裝。在以上操作中，從操作角度而言,使用的有機(jī)溶劑應(yīng)為具有足夠的揮發(fā)性、低殘留且低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑，例如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚以及它們的混合溶劑等。配制連續(xù)水相的可藥用水溶性高分子包括但不限于例如聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉等。在配制有機(jī)相的時(shí)，對(duì)于蟲草提取物、可生物降解高分子藥用輔料在有機(jī)溶劑中的含氬只要它們能夠溶解于有機(jī)溶劑就沒有限制，不過從可行濃度及粘度的平衡以及盡可能少用有機(jī)溶劑的角度出發(fā)，優(yōu)選可生物降解高分子藥用輔料濃度為l-30。/。(w/v)。在用聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉配制連續(xù)水相時(shí)，其濃度也沒有特別限制，但根據(jù)它們?cè)谒械娜芙舛?，?yōu)選的含量為0.01-12.0%(w/v)，更優(yōu)選0.01-10,0%(w/v)，最優(yōu)選0.1-5%(w/v)。在將有機(jī)相注入水相并劇烈攪拌以形成微球時(shí)，有機(jī)相和水相的體積比應(yīng)足以使有機(jī)相在水相中充分分散以形成足夠細(xì)的粒度和均勻度的微球，但如果水相過多，后處理復(fù)雜，成本提高。綜合以上兩方面,有機(jī)相與水相的體積比大致為1:4-1:100。二、噴霧干燥法采用噴霧萃取法制備蟲草提取物微球時(shí)，可用有機(jī)溶劑將蟲草提取物、可生物降解的藥用高分子輔料以及其他藥用輔料充分溶解配制成有機(jī)溶液，在常溫或高溫或低溫下將其噴霧至一有機(jī)非溶劑或水中，經(jīng)萃取而制成微球，在必要的情況下，也可按照常規(guī)方法對(duì)微球進(jìn)行水洗，分級(jí)等的處理，然后分裝。上述噴霧萃取法制備微球時(shí)，可以使用的有機(jī)溶劑包括但不限于二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙醚、丙酮、四氫呋喃、冰醋酸以及由它們組成的混合溶劑。采用上述噴霧萃取法制備微球時(shí)，可使用的有機(jī)非溶劑包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、石油醚、烷烴、石臘油等以及由它們組成的混合非溶劑。在配制有機(jī)相的時(shí)候，只要有機(jī)溶劑能夠溶解所述的藥用輔料，對(duì)其在有機(jī)溶劑中的含量就沒有限制，不過從可行濃度和少用有機(jī)溶劑的平衡角度出發(fā)，優(yōu)選可生物降解高分子藥用輔料濃度為1-30%(w/v)。本發(fā)明所述注射用微球直徑為1250pm，由微球總重量0.2%~50%(w/w)的活性成分及其衍生物和微球總重量50%99.8%(w/w)的分子量在5000-1000000道爾頓的可生物降解的高分子要用輔料組成。其中所述的可生物降解的高分子要用輔料選自于聚丙交酯、乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羥基丁酸酯、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚鄰酯、聚內(nèi)酯、聚酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸，聚乙二醇中的一種；優(yōu)選聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物，最佳為聚丙交酯、乙交酯，分子量為12000-15000道爾頓；聚丙交酯-乙交酯的聚合比例為40:60~60:40。本發(fā)明所述的微球是將制好的微球無菌粉末先在無菌的0.9%的生理鹽水溶劑中混懸，均勻后肌注來給藥的。本發(fā)明中藥微球采用了西藥緩釋制劑設(shè)計(jì)原理，在輔料選擇、質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面取得了成果，為中藥緩釋制劑的研究借鑒。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，下述該實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而對(duì)本發(fā)明沒有限制。實(shí)施例1將蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物0.64g，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油0.16g，9.2g聚丙交酯-乙交酯(丙交酯乙交酯=50:50,分子量25，000),棕櫚酸300毫克溶于50ml二氯甲垸中，在劇烈攪拌(1200-1600rpm)下將其滴至2500ml0.5%PVA水溶液中，滴完后繼續(xù)劇烈攪拌3-10分鐘，然后降低攪拌速度到300rpm,揮發(fā)溶劑4-6小時(shí)，過濾，用蒸餾水洗微球三次，凍干。粒徑為1-200um,藥物含量5.4重量％，包埋率為69.5%。在同樣條件下，如果不加入棕櫚酸，則化合物Ia的包埋率僅為34%。所得的緩釋微球?qū)Ρ雀袢M(jìn)行體內(nèi)釋放試驗(yàn)。將微球混懸于注射用生理鹽水中，肌注一次性給藥，劑量為2.4mg/kg，在給藥后的第1到15日內(nèi)取血并進(jìn)行HPLC-MS檢領(lǐng)"血藥濃度為0.2至5ng/ml。證明該緩釋微球在至少15日可以實(shí)現(xiàn)平穩(wěn)釋放。實(shí)施例2稱取蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物0.45g，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油0.05g、9.5g聚丙交酯-乙交酯(丙交酯乙交酯=50:50,分子量13,000),按實(shí)施例l的方法制備得藥物含量4.7重量％、粒徑為1-200iim的微球,其包埋率為94%。實(shí)施例3稱取蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物0.64g，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油0.16g，9.4g聚丙交酯-乙交酯(丙交酯乙交酯=50:50,分子量35,000)，400毫克棕櫚酸，按實(shí)施例1的方法制備得藥物含量3.8重量％，粒徑為1-200um的微球，其包埋率為51%。在同樣條件下，如果不加入棕櫚酸，則化合物Ia的包埋率僅為2P/。。所得的緩釋微球?qū)Ρ雀袢M(jìn)行體內(nèi)釋放試驗(yàn)。將微球混懸于注射用生理鹽水中，肌注一次性給藥，劑量為3.2mg/kg，在給藥后的第1到20日內(nèi)，取血并HPLC-MS檢測(cè)，血藥濃度為0.2至5ng/ml。證明該緩釋微球在至少20日可以實(shí)現(xiàn)平穩(wěn)釋放。實(shí)施例4稱取蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物0.8g，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油0.2g,9.0g聚丙交酯-乙交酯(丙交酯丙交酯=50:50，分子量為25000)，400毫克棕櫚酸，加二氯甲烷200ml，攪拌至充分溶解，采用常規(guī)噴霧干燥法制備得藥物含量10重量％、粒徑為1-100txm的微球，滅菌，分裝。實(shí)施例5稱取蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物0.8g，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油0.2g，9.0g聚丙交酯-乙交酯(丙交酯乙交酯=50:50,分子量25000)，300毫克棕櫚酸,加二氯甲烷100ml，攪拌至充分溶解，采用常規(guī)噴霧法噴入2000ml石油醚中，萃取然后過濾，干燥制備得藥物含量10重量％、粒徑為1-100"m的微球，滅菌，分裝。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用一定pH值(pH7.4)的緩沖溶液(磷酸鈉緩沖溶液)，藥物釋放行為與體內(nèi)類似，雖然其環(huán)境與人體內(nèi)環(huán)境不完全相同，但是大致認(rèn)為可以表現(xiàn)體內(nèi)的釋放模式。采用實(shí)施例1-5的微球，通過模擬體內(nèi)條件進(jìn)行釋放試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)儀器恒溫振蕩器、離心機(jī)。實(shí)驗(yàn)條件溫度37土0,5。C,轉(zhuǎn)速30rpm。實(shí)驗(yàn)方法精密稱取實(shí)驗(yàn)樣品約1呵，置于容積為5ml的具蓋塑料離心管中，加5ml釋放介質(zhì)(pH-7.4磷酸鈉緩沖溶液)置于恒溫振蕩器中，保持一定的溫度和轉(zhuǎn)速，按時(shí)取樣。取樣方法:使離心管在3600rpm條件下離心20min，精確吸取3ml溶液，同時(shí)向離心管中再補(bǔ)加3ml的釋放介質(zhì)，取出液用HPLC檢測(cè)。取樣時(shí)間點(diǎn)(天)0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22。其中第0天是指給藥當(dāng)天的給藥前的藥物濃度。試驗(yàn)結(jié)果歸納于表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表1可以看出，本發(fā)明的蟲草提取物的緩釋微球制劑可以在長(zhǎng)達(dá)14天以上的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定釋放藥物。因此對(duì)于提高和促進(jìn)機(jī)體的免疫功能、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗腫瘤作用、抗病原微生物、抗炎、改善腎臟功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能等，可以大大減少給藥次數(shù)，同時(shí)有效控制了劑量，避免了副作用的出現(xiàn)。權(quán)利要求1.一種蟲草緩釋微球，包括0.2～50％的由蟲草提取物為活性成分和微球重量的50～99.8％的分子量范圍在5,000～1,000,000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，其中藥材的組成按重量配比為蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物30～90份，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油1～50份。2.權(quán)利要求1所述的微球，其中所述的藥用高分子輔料選自于聚丙交酯乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羥基丁酸酯、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸、乙醇酸、聚鄰酯、聚內(nèi)酯、聚酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羥基乙酸，聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸、聚乙二醇其中的一種或其中的兩種或兩種以上混合。3.權(quán)利要求1所述的微球，其中的活性成分原藥材的重量百分含量為蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物80份，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油20份。4.權(quán)利要求1所述的微球的制備方法，它是采用溶劑揮發(fā)法制成，包括以下步驟用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙醚、丙酮、四氫呋喃、冰醋酸以及由它們所組成的混合酸把藥材提取物和可生物降解的藥用輔料溶解，其中藥用輔料在有機(jī)溶劑中的重量體積百分?jǐn)?shù)為130%，有機(jī)相采用的乳化劑為HLB=4.56.0的非離子型乳化劑，用量為有機(jī)相的0.0112%;另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯垸酮、聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素鈉水溶液，配制連續(xù)水相，其中他們?cè)谒嘀械闹亓堪俜謹(jǐn)?shù)0.0110.0，水相中的乳化劑為HLB=14.015.5的非離子型乳化劑，用量為水相的0.0112%:將分散相通過細(xì)管慢慢注入到連續(xù)相中，充分入畫，然后減壓揮發(fā)溶劑，離心分離，干燥即得。5.權(quán)利要求1所述的微球的制備方法，它是采用噴霧干燥法制成，包括以下步驟-用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙醚、丙酮、四氫呋喃、冰醋酸以及由它們所組成的混合酸溶解0.250%藥材提取物及其衍生物和5099.8%的分子量范圍在5，0001,000,000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，攪拌充分溶解后，過濾，采用噴霧干燥法制得微球。全文摘要本發(fā)明公開了一種蟲草注射用微球及其制備方法，一種注射用微球，包括蟲草菌絲體或子實(shí)體水提取物30～90％，蟲草菌絲體或子實(shí)體揮發(fā)油1～50％為活性成分和微球重量的50～99.8％的分子量范圍在5,000～1,000,000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成。微球含有蟲草的兩種不同方法提取的有效成分，兩種成分相輔相成，使其達(dá)到更佳的治療效果。文檔編號(hào)A61K47/34GK101406493SQ20081005147公開日2009年4月15日申請(qǐng)日期2008年11月26日優(yōu)先權(quán)日2008年11月26日發(fā)明者孟慶繁,滕利榮,王貞佐,晶謝,逯家輝,丹鄭,璐金,閆國(guó)棟申請(qǐng)人:吉林大學(xué)