專利名稱：：治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療動物疾病的醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
：目前，在治療禽類病毒性疾病方面通常以抗生素治療為主，這樣不但毒副作用較大，如對禽類的肝腎功能有一定的副作用，易造成禽類體內(nèi)藥物殘留；同時還將環(huán)境污染，且治療費(fèi)用較高。黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。其主要成份為俄類、多糖、氨基酸及微量元素。具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、利尿、抗衰老、保肝、降壓、強(qiáng)心、擴(kuò)張冠狀血管及全身末梢血管、抗茵等作用，是常用的中藥之一。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為黃芪既可以單獨(dú)入藥，也可以與其它藥材聯(lián)合使用，以達(dá)到臨床所需的療效。雙黃連是一種中藥制劑，主要成份為金銀花、黃連、連翹。雙花就是金銀花，性寒味甘、氣味芒香、既可清風(fēng)溫之熱，又可解血中之毒，適用于溫病發(fā)熱、斑滲、咽痛。黃連味苦性寒，瀉心中之余火，清腸中濕熱，適用于心火旺盛，腸胃濕熱、濕熱瘋毒。連翹性涼味苦，清,。瀉火，去上焦各種熱癥，適用于溫病初起、頭痛、發(fā)熱、煩渴，以及熱毒郁結(jié)引起的癰瘡腫痛、丹毒、斑滲等。若采用中藥原料制成片劑、散劑等，由于有的中藥材水溶性活性成分體內(nèi)半衰期較短，需頻繁給藥，因此使用不便；同時吸收效果欠佳，治療效果不夠理想。因此，如何提供一種防治效果顯著、工藝簡單的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球及其制備方法，是該
技術(shù)領(lǐng)域：
科研人員急需開發(fā)的新課題之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種全新的緩釋、高生物利用度的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用孩O求。本發(fā)明的另一目的在于提供這種治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微^求的制備方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于包括2~60%的由中藥材的提取物為活性成分和微球重量的39~95%的分子量范圍在4,000-9000,OOO之間的可生物降解的藥用高分子輔^H"組成，其中藥材的組成按重量％配比為黃連13%~40%，金《艮花15%~45%,連翹25%~61%,黃芪11%~40%。所述活性成分原藥材的優(yōu)選重量百分含量為黃連24.7%,金銀花26.7%，連翹26.3%,黃芪22.3%。所述的藥用高分子輔料選自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羥基丁酸酯、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚鄰酯、聚內(nèi)酯、聚酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸.聚乙二醇其中的一種或一種以:上混合。所述的藥用高分子輔料優(yōu)選自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羥乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物其中的一種或一種以上混合。所述藥用高分子輔料為聚丙交酯-乙交酯；所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在9000~13000道爾頓之間；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60~60:40之間。上述藥物成分配比為所使用生藥的重量％配比，將其制成制劑需要對所述黃連、金銀花、連翹、黃芪等進(jìn)一步的單獨(dú)或混合提取加工制成提取物與適當(dāng)輔料制成凝膠片。其中的提取方法通常包括水提取法、水提醇沉法或微波提取法等。為了便于理解，將本
技術(shù)領(lǐng)域：
現(xiàn)有的提取方法舉例描述如下黃連微波提取法取黃連粉碎后，放火燒瓶，'并將此燒瓶放人微波反應(yīng)器中，乙醇回流提取，調(diào)整微波功率進(jìn)行提取,收集提取液，得黃連提取物。金銀花水提法取金銀花藥材，20目篩粉碎，加水提取兩次，第一次加9~10倍量的水浸泡，加熱才是取1.5小時，第二次加5~7倍量水，加熱提取l小時，合并提取液，適當(dāng)濃縮，力。95%乙醇，使含醇量到達(dá)50-70%，濃縮回收乙醇，得金銀花提取物。連翹的乙醇提取法耳又連翹藥材，20目篩粉石爭，力口7-9倍量50%濃度的乙醇提取三次，加熱回流8小時，合并提取液，濃縮回收乙醇，得連翹提取物。黃芪水提取醇沉淀法取黃芪，20目篩粉碎，加水提取，濾過，適當(dāng)濃縮后采用乙醇進(jìn)行沉淀，上清液適當(dāng)濃縮后再醇沉，上清液回收乙醇，濃縮得黃芪提取物。除上述藥材單獨(dú)提取外，所述黃連、金銀花、連翹還可以混合提取，主要為取經(jīng)粉碎的黃連、金銀花、連翹藥材，沸水煮提，濾過，合并濾液，并將濾液適當(dāng)濃縮；在濃縮液中加入乙醇進(jìn)行醇沉，靜置，上清液回收乙醇，濃縮成浸膏，得藥材提取物。本發(fā)明所述雙黃連注射用孩i球直徑為1250iam,由樣O求總重量39~95%的分子量范圍在4,000~9000,OOO之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成。法制成，實(shí)施步驟包括用二氯曱烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙醚、丙酮、四氳吹喃、冰醋酸以及由它們所組成的混合酸4巴藥材提取物和可生物降解的藥用輔料溶解，其中藥用輔料在有機(jī)溶劑中的重量體積百分?jǐn)?shù)為1~30%,有機(jī)相采用的乳化劑為HLB:4.56.0的非離子型乳化劑，用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮，用量為有機(jī)相的0.01~12%;另外聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉、羧曱基纖維素鈉水溶液，配制連續(xù)水相，其中它們在水相中的重量百分?jǐn)?shù)為O.Ol~10.0，水相中的乳化劑為HLB:14.0~15.5的非離子型乳化劑，用量為水相的O.Ol~12%，有機(jī)相與水相的體積比為1:4~100;將分散相通過細(xì)管慢慢注入到連續(xù)相中，充分乳化后，過篩分離所形成的微球，干燥即^曰付。本發(fā)明所述的雙黃連微球是將制好的微球無菌粉末先在無菌的0.9%的生理鹽水溶劑中混懸均勻后肌注給藥進(jìn)行治療的。大多數(shù)傳統(tǒng)劑型的釋藥過程均按一級動力學(xué)進(jìn)行，其藥物的血藥濃度有可能低于最低有效血藥濃度和在治療濃度內(nèi)維持時間短的缺點(diǎn)。為達(dá)到治療目的和降低副作用常釆取多次服藥方式，這樣使得患者服藥的依從性下降。緩釋制劑正是克服了傳統(tǒng)制劑的不足，提供了平穩(wěn)、持久的血藥濃度。本發(fā)明的有益效果是將黃連、金銀花、連翹、黃芪藥材提取后與適當(dāng)輔料制成微球，可以達(dá)到緩慢地非恒速釋放，減少服用次數(shù)，提高患者順應(yīng)性的目的。運(yùn)用先進(jìn)的提取工藝分離藥材中有效單體，提取后與適當(dāng)輔料制成微球。使中草藥中的有效成分緩慢釋放。組方中提取的有效成分能直接阻斷病毒核酸的形成，抑制病毒的復(fù)制和增殖，并可增強(qiáng)才幾體的體液免疫和細(xì)胞免疫，同時該發(fā)明藥物具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素，促進(jìn)抗體形成，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對病原體的吞噬作用，從而有效殺滅病毒。本發(fā)明藥物體外對雞法氏嚢病毒有直接的殺滅作用；對人工感染雞法氏'嚢病毒的模型亦有顯著的保護(hù)和治療作用。臨床研究證實(shí)本發(fā)明藥物對雞法氏囊病毒有良好的治療效果，尤其能迅速解除病毒感染引起的發(fā)熱、改善癥狀、促進(jìn)病禽恢復(fù)采食、促進(jìn)產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)恢復(fù)，一般用藥后第二天臨床癥狀迅速緩解，3~5天疾愈，療效非常顯著。該藥物能有效提高機(jī)體免疫力，抗病毒能力強(qiáng)，臨床主要用于治療禽傳染性法氏嚢病、非典型新城疫、傳染性支氣管炎等病毒性疾病。組方合理，清熱途徑多樣化，充分考慮了禽類體溫調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，散熱、祛痙，減輕機(jī)體的不適感，從而在很大程度上緩解疾病的癥狀，增加病禽食欲，促進(jìn)病禽康復(fù)。，歸纟內(nèi)^口下(1)為臨床開發(fā)出一種防治禽類病毒性疾病、提高機(jī)體抗病力的新制劑。(2)組方合理，吸收利用率高，緩釋藥效持久，抗病毒能力強(qiáng)，所選藥物均為治療禽類病毒性疾病的高效藥物。(3)工藝先進(jìn)，制備簡單，制劑穩(wěn)定，藥效持久，貯存期長。(4)藥物來源廣泛、成本低，安全、無毒副作用，不易產(chǎn)生耐藥性，符合國際衛(wèi)生檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。特別用于治療禽類傳染性法氏嚢病、非典型新城疫、傳染性支氣管炎等效果顯著。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳述如下取黃連247g，金銀花267g,連翹263g,黃芪223g,將經(jīng)粉碎的金銀花、連翹，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至900ml，加入95%乙醇，使醇濃度達(dá)到70%，l爭置1224小時，濾過，回收乙醇；繼續(xù)濃縮成金銀花連翹提取物；將經(jīng)粉碎的黃芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小時、l小時，合并濾液，濃縮至1500ml左右時，力。95%乙醇使醇濃度為60%，靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至400ml左右時，力。95%乙醇使醇濃度為80%,靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，并繼續(xù)濃縮成黃芪提取物；按量取黃連加5倍量水，回流提取5小時，收集揮發(fā)油。包括2~60%的由中藥材的提取物為活性成分和樣i球重量的39~95%的分子量范圍在4，000-9000,OOO道爾頓之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，所述的藥用高分子輔料選自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羥基丁酸酯、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚鄰酯、聚內(nèi)酯、聚酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸.聚乙二醇其中的一種或一種以上混合。微球的制備將上述100mg藥材提取物、200mg聚丙交酉旨-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，選4%聚丙交酯-乙交酯其分子量在9000~13000道爾頓之間；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60~60:40之間；用針筒在激烈攪拌下將其滴至裝有300ml內(nèi)含3.5Ghlb=14乳化劑的10%PVA的三頸瓶中，充分乳化l小時后，在3(TC0.03MPa的壓力下，揮發(fā)溶劑1.5小時，離心分離，用蒸餾水洗反應(yīng)物三次，在30。C真空烘箱內(nèi)烘干，用環(huán)氧乙烷在30。C滅菌48小時，確保殘留環(huán)氧乙烷含量在5ppm以下，灌裝，采用乳化分散法制成微球；測得粒徑l50iam,平均粒徑13.26iam,滅菌，分裝。實(shí)施例2取黃連149g，金銀花422g，連翹264g,黃芪165g,將經(jīng)粉碎的金銀花、連翹，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至900ml，加入95%乙醇，使醇濃度達(dá)到70%,靜置1224小時，濾過，回收乙醇；繼續(xù)濃縮成金銀花連翹提取物；將經(jīng)粉碎的黃芪，加水煎煮2次，每次力口6倍量水，依次提取2小時、1小時，合并濾液，濃縮至1500ml左右時，加95%乙醇使醇濃度為60%,靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至400ml左右時，力。95%乙醇使醇濃度為80%,靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，并繼續(xù)濃縮成黃芪提取物；按量取黃連加5倍量水，回流提取5小時，收集揮發(fā)油。微球的制備將上述100mg藥材提取物、200mg聚丙交酯-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，用針筒在激烈攪拌下將其滴至裝有300ml內(nèi)含3.5GhU^14乳化劑的10。/。PVA的三頸瓶中，充分乳化l小時后，在30。C0.03MPa的壓力下，揮發(fā)溶劑1.5小時，離心分離，用蒸餾水洗反應(yīng)物三次，在30。C真空烘箱內(nèi)烘干，用環(huán)氧乙烷在30。C滅菌48小時，確保殘留環(huán)氧乙烷含量在5ppm以下，灌裝，采用乳化分散法制成微球；測得粒徑l-50jum，平均粒徑13.26jum,滅菌，分裝。其它同實(shí)施例l。實(shí)施例3取黃連331g，金銀花165g，連翹312g，黃芪192g，將經(jīng)粉碎的金銀花、連翹，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至900ml，加入95%乙醇，4吏醇濃度達(dá)到70%,*爭置12~24小時，濾過，回收乙醇；繼續(xù)濃縮成金銀花連翹提取物；將經(jīng)粉碎的黃芪，加水煎煮2次，每次力口6倍量水，依次提取2小時、l小時，合并濾液，濃縮至1500ml左右時，力。95%乙醇使醇濃度為60%,靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至400ml左右時，力。95%乙醇使醇濃度為80%,靜置12~24小時，濾過，濾液回收乙醇，并繼續(xù)濃縮成黃芪提取物；按量取黃連加5倍量水，回流提取5小時，收集揮發(fā)油。微球的制備將上述100mg藥材提取物、200mg聚丙交酉旨-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，用針筒在激烈攪拌下將其滴至裝有300ml內(nèi)含3.5Ghlb:14乳化劑的10。/oPVA的三頸瓶中，充分乳化l小時后，在30。C0.03MPa的壓力下，揮發(fā)溶劑1.5小時，離心分離，用蒸餾水洗反應(yīng)物三次，在30。C真空烘箱內(nèi)烘干，用環(huán)氧乙烷在30。C滅菌48小時，確保殘留環(huán)氧乙烷含量在Sppm以下，灌裝，采用乳化分散法制成微球；測得粒徑l50lim,平均粒徑13.26Mm,滅菌，分裝。其它同實(shí)施例l。應(yīng)用實(shí)例200只25日齡肉雞(經(jīng)過健康4企查無菌)分為A、B、C、D、E共5組，B、C、D、E組經(jīng)過人工感染0.5ml雞法氏嚢病毒強(qiáng)毒攻毒后作實(shí)驗(yàn)。A組為健康組，不感染病毒，不給藥；B組陰性對照組，感染病毒，不給藥；C組為藥物組合物低劑量組，按0.2g/雞/天注射；D組為藥物組合物高劑量組，按0.4g/雞/天注射；E組為黃芪多糖注射液組(大連三儀有限公司)，按0.3g/雞/天拌料飼喂。結(jié)果表明，采用本發(fā)明雙黃連注射用微球治療雞法氏嚢病毒病有著明顯的療效。本發(fā)明藥物注射用微球?qū)Ρ痊F(xiàn)有藥物實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本次試驗(yàn)結(jié)果表明，藥物組合物低、高劑量治療組與對照組差異非常顯著(P<0.01),說明本發(fā)明藥物組合物對病毒引起的雞法氏嚢病毒病具有顯著的治療作用；特別是高劑量應(yīng)用明顯優(yōu)于"黃芪多糖注射液，，治療組療效(P<0.01)。上述參照實(shí)施例對治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用孩i球及其制備方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的4呆護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于包括2～60％的由中藥材的提取物為活性成分和微球重量的39～95％的分子量范圍在4,000～9000,000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，其中藥材的組成按重量％配比為黃連13％～40％，金銀花15％～45％，連翹25％～61％，黃芪11％～40％。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于所述活性成分原藥材的優(yōu)選重量百分含量為黃連24.7%,金銀花26.7%,連翹26.3%,黃芪22.3%。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于所述的藥用高分子輔料選自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚_3-羥基丁酸酯、聚乳酸-聚羥乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚鄰酯、聚內(nèi)酯、聚酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸.聚乙二醇其中的一種或一種以上混合。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于所述的藥用高分子輔料優(yōu)選自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羥乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯共聚物其中的一種或一種以上混合。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球，其特征在于所述藥用高分子輔料為聚丙交酯-乙交酯；所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在9000~13000道爾頓之間；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60—60:40之間。6、一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球的制備方法，即采用乳化分散法制成，其特征在于實(shí)施步驟包括用二氯曱烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙醚、丙酮、四氫呋喃、冰醋酸以及由它們所組成的混合酸把藥材提取物和可生物降解的藥用輔料溶解，其中藥用輔料在有機(jī)溶劑中的重量體積百分?jǐn)?shù)為l~30%,有機(jī)相釆用的乳化劑為HLB=4.56.0的非離子型乳化劑，用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮，用量為有機(jī)相的0.01~12%;另外聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉、羧曱基纖維素鈉水溶液，配制連續(xù)水相，其中它們在水相中的重量百分?jǐn)?shù)為0.01~10.0，水相中的乳化劑為HLB-14.0~15.5的非離子型乳化劑，用量為水相的0.01~12%,有機(jī)相與水相的體積比為1:4~100;將分散相通過細(xì)管慢慢注入到連續(xù)相中，乳化，然后過篩，干燥即得。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療禽類病毒性疾病的雙黃連注射用微球及其制備方法，包括重量比為2～60％的由中藥材的提取物為活性成分和微球重量的39～95％的分子量范圍在4,000～9000,000之間的可生物降解的藥用高分子輔料組成，其中藥材組成按重量％為黃連13％～40％，金銀花15％～45％，連翹25％～61％，黃芪11％～40％；并采用乳化分散法制成微球。有益效果是(1)為臨床開發(fā)出一種防治禽類病毒性疾病、提高機(jī)體抗病力的新制劑。(2)組方合理，抗病毒能力強(qiáng)。(3)工藝先進(jìn)，制劑穩(wěn)定，貯存期長。(4)藥物來源廣泛，無毒副作用，不易產(chǎn)生耐藥性，符合國際衛(wèi)生檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。特別用于治療禽類傳染性法氏囊病、非典型新城疫、傳染性支氣管炎等效果顯著。文檔編號A61K47/34GK101347523SQ200810054140公開日2009年1月21日申請日期2008年8月15日優(yōu)先權(quán)日2008年8月15日發(fā)明者王連民,田杏芳申請人:天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司