專利名稱：：舒肝顆粒及其在治療乳腺增生中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)是舒肝顆粒及其在治療乳腺增生中的應(yīng)用。技術(shù)背景舒肝顆粒系由昆明中藥廠有限公司生產(chǎn)的中藥復(fù)方制劑，由當(dāng)歸、白芍、白術(shù)等中藥組成。它用于肝氣不舒的兩脅疼痛，胸腹脹悶，月經(jīng)不調(diào)，頭痛目眩，心煩意亂，口苦咽干，以及肝郁氣滯所致的面部黧黑斑(黃褐斑)等癥的治療。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種舒肝顆粒的藥物配方及新用途，即用于治療乳腺增生疾病。本發(fā)明的舒肝顆粒原料組方和重量配比(重量份)為當(dāng)歸(蒸)200250、白芍(酒炙)133150、白術(shù)(麩炒)133150、醋香附67100、柴胡(醋炙)93140、茯苓133150、薄荷67100、梔子(炒)4060、牡丹皮4060、甘草94120。本發(fā)明的舒肝顆粒用來(lái)治療乳腺增生疾病。成人每次2袋，每天2次(按成人60kg體重計(jì)算)，一般服用30天為一個(gè)療程(月經(jīng)前服用15天，二個(gè)月經(jīng)周期)，服用2-3個(gè)療程。以下為本發(fā)明的主要藥效學(xué)試驗(yàn)采用雌激素造成大鼠乳腺增生模型，觀察乳腺的形態(tài)學(xué)改變、性激素水平及細(xì)胞增殖核抗原，以評(píng)價(jià)舒肝顆粒對(duì)大鼠乳腺小葉增生的治療作用，此外，采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)，及腎上腺素致小鼠二廓微循環(huán)障礙等試驗(yàn)，對(duì)舒肝顆粒進(jìn)行抗炎、鎮(zhèn)痛及改善微循環(huán)等藥效學(xué)研究，以期為舒肝顆粒應(yīng)用于臨床提供藥效學(xué)依據(jù)。結(jié)果表明1.舒肝顆粒明顯減輕乳腺增生模型大鼠導(dǎo)管上皮的增生程度，中高劑量組大鼠的腺泡數(shù)、腺腔分泌物亦明顯少于模型組，且優(yōu)于等臨床劑量倍數(shù)的乳康片。表明舒肝顆粒對(duì)雌激素所致的大鼠乳腺增生有明顯治療作用。其作用機(jī)制與抑制PCNA的表達(dá)和降低雌激素水平有關(guān)。2.舒肝顆粒中、高劑量組(3.2、6.4g/kg;相當(dāng)于臨床推薦劑量的42和84倍)灌胃給藥后，明顯抑制二甲苯所致的小鼠3耳殼腫脹，抑制率分別為27.7和32.4%，提示舒肝顆粒具有明顯的抗炎作用3.舒肝顆粒灌胃給藥劑量依賴性地顯著減少醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)，與等臨床劑量的乳康片組相比藥效相當(dāng)，提示舒肝顆粒對(duì)化學(xué)性的剌激劑引起的疼痛反應(yīng)有一定的對(duì)抗作用。4.舒肝顆粒能擴(kuò)張小鼠耳廓微動(dòng)脈管徑(高劑量組，6.4g/kg)，對(duì)小鼠耳廓微靜脈也有舒張作用，其中低、中劑量組(1.6、3.2g/kg)分別自20min和10min開始，靜脈管徑明顯舒張；腹腔注射腎上腺素之后，溶媒對(duì)照組小鼠耳廓微動(dòng)靜脈明顯收縮，造成了小鼠耳廓的微循環(huán)障礙。而舒肝顆粒則明顯減輕腎上腺素所致的微循環(huán)障礙，對(duì)微靜脈的舒張作用更強(qiáng)；提示舒肝顆粒對(duì)正常小鼠耳廓的微動(dòng)、靜脈有一定的擴(kuò)張作用，對(duì)腎上腺素致小鼠耳廓的微循環(huán)障礙有一定的改善作用。以上試驗(yàn)結(jié)果為本品擬用于治療乳腺小葉增生提供了藥效學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)?zāi)康膶?duì)昆明中藥廠有限公司提供的舒肝顆粒進(jìn)行藥效學(xué)研究，為舒肝顆粒臨床用于治療乳腺小葉增生提供藥效學(xué)依據(jù)。。受試藥物1)舒肝顆粒舒肝顆粒干膏粉由昆明中藥廠有限公司提供，每g干膏粉相當(dāng)于8.83g原藥材。成品規(guī)格3g/袋；10g/袋，相當(dāng)于原藥材10g，批號(hào)060101，臨床推薦用量每次2袋，每天2次，按成人60kg體重計(jì)算，臨床用量為0.2g/kg(相當(dāng)于生藥量0.67g/kg)。臨用前用羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配制成適宜濃度備用。2)乳康片安康正大制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20003237,規(guī)格每片重0.35g,批號(hào)20060106，有效期2008年12月。用法口服，一次23片，一日3次。按成人60kg體重計(jì)算，臨床用量為0.0525g/kg。臨用前用CMC-Na配制成適宜濃度備用。動(dòng)物健康ICR小鼠、SD大鼠均由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滇)2005-2008]。飼養(yǎng)條件室溫為20土2。C，相對(duì)濕度6070%。實(shí)驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)依據(jù)舒肝顆粒設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)溶媒對(duì)照組和乳康片陽(yáng)性對(duì)照組。參照文獻(xiàn)[陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué).北京.人民衛(wèi)生出版社.第一版.2000，pll03]按動(dòng)物體表面積比率換算各種動(dòng)物的等效劑量，詳見表l:表1各種動(dòng)物按等效劑量設(shè)計(jì)的用藥劑量組別劑量(g/kg)相當(dāng)于生藥量(g/kg)相當(dāng)于臨床劑量倍數(shù)小鼠大鼠小鼠大鼠小鼠大鼠空白對(duì)照CMC-Na舒肝顆粒1.60.7514.16.621103.21.528.213.242206.43.056.526.58440乳康片2.241.054220注1.首先參照人用推薦劑量設(shè)置大鼠的試用劑量.2.小鼠試用劑量=1.5g/kg(大鼠劑量)x6.4(大鼠轉(zhuǎn)換因子)+3.0(小鼠轉(zhuǎn)換因子)=3.2g/kg3.以2.0為劑間比設(shè)置舒肝顆粒的低、中、高劑量組.試驗(yàn)對(duì)照空白對(duì)照CMC-Na已知陽(yáng)性對(duì)照藥及選擇理由鑒于乳康片具有疏肝解郁、理氣止痛、活血破瘀、消積化痰、軟堅(jiān)散結(jié)、補(bǔ)氣健脾的功效，臨床用于治療乳腺小葉增生，與本品類似，且為國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)藥品，故以此作為陽(yáng)性對(duì)照藥進(jìn)行對(duì)比研究。乳康片每片重0.35g，一次23片，一日3次，按成人60kg體重計(jì)算，臨床用量為0.0525g/kg。大鼠用劑量采用臨床劑量的20倍，即1.05g/kg。給藥方法給藥途徑灌胃，與臨床用藥途徑一致。以上藥物均按20mi/kg體重灌胃給藥。每組IO只動(dòng)物。儀器XSZ-hs7型微循環(huán)顯微鏡(中國(guó)重慶)，微循環(huán)測(cè)量分析系統(tǒng)(成都儀器廠)，切片機(jī)(LeicaRM2135,德國(guó))，顯微鏡(NIKONE200,日本)，MP4R型離心機(jī)(美國(guó)IEC公司)，F(xiàn)T-Y計(jì)數(shù)儀(北京核儀器廠)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。結(jié)果采用Student'sf檢驗(yàn)、單尾方差分析(ANOVA)或秩和檢驗(yàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。試驗(yàn)方法與結(jié)果51.舒肝顆粒對(duì)大鼠乳腺增生的影響取雌性大鼠80只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n40)、模型組(n-70)。除正常對(duì)照組動(dòng)物外，模型組動(dòng)物每鼠肌肉注射(i.m.)苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg/d，每天1次，連續(xù)25天，繼而改用im黃體酮4mg/kg/d，連續(xù)5天，此時(shí)大鼠乳頭出現(xiàn)紅、腫和增大，提示大鼠乳腺增生模型形成[葉其正，沈明勤，石磊，等.乳康舒膠囊治療大鼠乳腺增生病的實(shí)驗(yàn)研究.中成藥.2005.27(3):309-311.李桂霞，柳濱.乳康丸對(duì)大鼠乳腺增生PCNA及ER表達(dá)的影響.中華中西醫(yī)雜志.2003，4(18):100103]。從模型組中挑選乳腺增生大鼠分組，每組10只，即模型對(duì)照組、舒肝顆粒低、中、高劑量組和乳康片陽(yáng)性對(duì)照組，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組灌胃給予等體積的CMC-Na，各用藥組分別給予舒肝顆粒0.75、1.5和3.0g/kg(相當(dāng)于臨床推薦用量的IO、20和40倍)和乳康片1.05g/kg(相當(dāng)于臨床用量的20倍)，均按20mL/kg灌胃給藥，每天1次，連續(xù)30天。同時(shí)，除正常對(duì)照組外，繼續(xù)依次i.m.苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/d和黃體酮4mg/kg/d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，脫頸處死動(dòng)物，股動(dòng)脈取血，分離血清，-20°0冰箱保存，備測(cè)血清激素水平；同時(shí)取大鼠左側(cè)第l對(duì)乳腺，10M甲醛PBS固定，石蠟切片，HE染色，用生物顯微鏡觀察乳腺增生情況，并計(jì)數(shù)每高倍(100倍)視野的腺泡數(shù)。腺泡和導(dǎo)管腔分泌物按分泌物量分4級(jí)[李衛(wèi)民，李廷冠，李敏江，尹雪曼，秦明芳.乳腺康膠囊對(duì)乳腺增生大鼠乳腺組織和性激素的影響.中成藥，2003，25(10):817-819]:-為腔內(nèi)無(wú)分泌物十為有分泌物，占腔內(nèi)體積1/4以下；++為分泌物占腔內(nèi)體積的1/41/2;+++為分泌物占腔內(nèi)體積1/2以上。導(dǎo)管上皮增生按增生程度分4級(jí)-為無(wú)增生；+為上皮細(xì)胞層次2層以上；++為導(dǎo)管上皮呈乳頭狀突起；+++為實(shí)性增生,上皮細(xì)胞充滿腔內(nèi)；對(duì)應(yīng)取值l、2、3、4、5計(jì)分。用免疫組化方法測(cè)定細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)的表達(dá)情況，細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃棕褐色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞。采用文獻(xiàn)報(bào)道的半定量積分法[24.FujitaN，SatoS，TsuruoT.Phosphorylationofp27Kiplatthreonine198byp90ribosomalproteinS6kinasespromotesitsbindingto14-3-3andcytoplasmiclocalization.JBiolChem,2003.278(49):49254-625.TsvetkovLM，YehKH,LeeSJ,etal.p27(Kipl)ubiquitinationanddegradationisregulatedbytheSCF(Skp2)complexthroughphosphorylatedThrl87inp27.CurrBiol，1999.9(12):661-4]判斷結(jié)果。具體標(biāo)準(zhǔn)為(1)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)《5%為0分，6%25%為1分，26%50%為2分，51%75%為3分，>75%為4分；(2)陽(yáng)性強(qiáng)度(以多數(shù)細(xì)胞判定)淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色6頁(yè)為3分。以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性強(qiáng)度的乘積判斷陽(yáng)性等級(jí)0分為陰性(-)，14分為弱陽(yáng)性(+)，58分為陽(yáng)性(++)，912分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。結(jié)果表明模型組大鼠乳腺腺體明顯增大，顏色稍紅，鏡下觀察:乳腺小葉數(shù)目略增多，腺泡數(shù)明顯增多，腺腔明顯擴(kuò)張呈囊狀，少數(shù)分支增多呈扭曲狀，部分腺上皮細(xì)胞增生呈假?gòu)?fù)層排列，細(xì)胞約24層，腺腔內(nèi)可見大量均質(zhì)紅染的分泌物，小葉的腺泡數(shù)、腺腔的平均直徑比正常對(duì)照組均有顯著增加(圖l)。給大鼠灌胃高、中、低劑量的舒肝顆粒4周后，上皮增生程度均明顯減輕，與模型對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0.05，0.01);此外，高劑量組大鼠的腺泡數(shù)、中高劑量組的腺腔分泌物亦明顯少于模型組(表6)，且優(yōu)于等臨床劑量倍數(shù)的乳康片(表l，2;圖l)。表明舒肝顆粒對(duì)雌激素所致的大鼠乳腺增生有明顯治療作用。表l舒肝顆粒灌胃給藥對(duì)雌激素致大鼠乳腺增生的影響組另lj劑量(g/kg)生藥量(g'kg-1)臨床推薦劑量倍數(shù)小葉腺泡數(shù)(個(gè)/視野)正常對(duì)照CMC墨Na—-…11.0±2.6模型對(duì)照CMC-Na——-27.6±9.9b舒肝顆粒0.756.61020.9±9.4a1.513.22020.4±6.1be3.026.54015.3±2.2bde乳康片1.05—2024.8±8.2b注^±5,=8."尸<0.05，*尸<0.01與正常對(duì)照組比較；d尸〈0.01與模型對(duì)照組比較；e尸〈0.05與乳康片組比較(Student，s"檢驗(yàn)).表2舒肝顆粒灌胃給藥對(duì)乳腺增生大鼠腺腔分泌物和導(dǎo)管上皮增生的影響生藥量臨床推薦腺腔分泌物導(dǎo)管上皮增生組別劑量(g/kg)(g-kg")劑量倍數(shù)(平均積分)(平均積分)正常對(duì)照CMC-Na—-—1.13±0.351.13±0.35模型對(duì)照CMC-Na—-—3.38±0.74b3.63±0.52b舒肝顆粒0.756.6103.25±1.04b2.50±0.76bd1.513.2202.25±0.46bd2.63±0.92bc3.026.5402.25±0.46bd2.13±0.35bd乳康片1.05—202.63±0.74b2.25±0.46bd注^±，"=8.*尸<0.01與正常對(duì)照組比較；CP<0.05,dJP<0.01與模型對(duì)照組比較(Student，s~檢驗(yàn)).PCNA免疫組化染色結(jié)果顯示乳腺組織在上皮細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色陽(yáng)性顆粒分布，細(xì)胞漿呈陰性染色，方差分析或秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組PCNA的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，而用藥各組明顯降低增生乳腺組織中PCNA的表達(dá)，與模型組相比，差異有顯著性(見表3;圖2)。表3舒肝顆粒灌胃給藥對(duì)乳腺增生大鼠細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)的影響組別劑量Cg/kg)生藥量(g-kg-')臨床推薦劑量倍數(shù)陽(yáng)性率(%)PCNA陽(yáng)性等級(jí)++++++尸正常對(duì)照CMC-Na—-—16.3±5.20080模型對(duì)照CMC-Na—-—50.0±10.7b0044bd舒肝顆粒0.756.61030.0±5.3ade0071d1.513.22029.4±5.6ad0080d3.026.54024.4±6.2bd0080d乳康片1.05—2016.3±5.2d0080d注x±s，"=8.陽(yáng)性率3尸<0.05,^<0.01與正常對(duì)照組比較；dp〈0.01與模型對(duì)照組比較;e尸〈0.05，與乳康片組比較(ANOVA)。陽(yáng)性強(qiáng)度b/><0.01與正常對(duì)照組比較；><0.01與模型對(duì)照組比較(秩和檢驗(yàn))。模型組大鼠血清雌激素和孕激素水平均顯著高于正常對(duì)照組，雌激素水平增加尤其明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P<0.01)。給用藥組大鼠灌胃給藥4周后，均明顯降低雌激素和孕激素水平，與模型組比較有顯著性差異(戶<0.05;戶<0.01)，舒肝顆粒組尚有一定的量效關(guān)系(表4)。表4舒肝顆粒灌胃給藥對(duì)乳腺增生大鼠血清激素水平的影響生藥量臨床推薦雌二醇孕酮組別劑量(g/kg)(g-kg")劑量倍數(shù)(ng/ml)(ng/ml)正常對(duì)照CMC-Na——0.54±0.200.51±0.36模型對(duì)照CMC-Na——1.74±1.13bl,41±0.70b舒肝顆粒0.756.6100.87±0.44ac0.72±0.34e81.513.2203.026.540乳康片1.05—-20注c±s,"=10.^<0.01，，<0.01與正常對(duì)照組比較；c尸〈0.05，d尸〈0.01與模型對(duì)照組比較(Student's/-檢驗(yàn))2.舒肝顆粒對(duì)二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響雄性ICR小鼠50只，體重25~28g,隨機(jī)分為5組，每組10只，即溶媒對(duì)照組、舒肝顆粒低、中、高劑量組和乳康片組。分別灌胃給予蒸餾水、舒肝顆粒1.6、3.2、6.4g-kg—1(相當(dāng)于生藥量14.1、28.2禾B56.5g/kg，為臨床推薦劑量的21、42和84倍)和乳康片2.24g'kg"(相當(dāng)于臨床用量的42倍)，每天2次，共5個(gè)劑量，末次給藥后1h，參照文獻(xiàn)[TangXC，LinZG,CaiW,ChenN,ShenL.Anti-inflammatoryeffectof3-acetylaconitine.ActaPharmacolSin.1984,5:85]每只小鼠右耳涂擦二甲苯0.03ml致耳殼腫脹。15min后處死小鼠，用直徑8mm的打孔器打下雙耳耳片稱重，以左右耳重量差為腫脹度，并進(jìn)行Student's,-檢驗(yàn)。結(jié)果表明，舒肝顆粒中、高劑量組(3.2、6.4g/kg;相當(dāng)于臨床推薦劑量的42和84倍)灌胃給藥后，對(duì)二甲苯所致小鼠耳殼腫脹有明顯的抑制作用，并呈量效關(guān)系，抑制率分別為27.7和32.4%,與溶媒對(duì)照組比較，差異有選擇性(尸<0.05);乳康片有減輕二甲苯所致小鼠耳殼腫脹的趨勢(shì)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(i><0.05)，提示舒肝顆粒具有明顯抗炎作用(表5)。表5舒肝顆粒灌胃給藥對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響組別劑量(g/kg)生藥量(g'kg-1)臨床推薦劑量倍數(shù)腫脹度(mg)抑制率(%)溶媒對(duì)照組等容CMC-Na—_—■22.4±5.7舒肝顆粒1.614.12119.4±5.013.63.228.24216.2±4.9a27.76.456.58415,2±8.0a32.4乳康片2.24—_4218.1±9.819.5阿司匹林0.2……9.9±3.8b49.2注x±s，"=10.aP<0.01，V<0.01與溶媒對(duì)照組比較(Student'sf-檢驗(yàn)).0.50±0.33'0.57±0.25'0.81±0.68'0.69±0.48c0.53±0.22c0.50±0.3193.舒肝顆粒對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響ICR小鼠60只，雌雄兼用，體重1822g，隨機(jī)分成6組，每組10只，組別同耳廓腫脹試驗(yàn)。分別灌胃給予等體積CMC-Na、舒肝顆粒1.6、3.2、6.4g/kg(相當(dāng)于生藥量14.1、28.2和56.5g/kg，為臨床推薦劑量的21、42和84倍)、乳康片2.24g/kg(臨床用量的42倍)和阿司匹林0.2g/kg，按20mL/kg每天給藥2次，連續(xù)5個(gè)劑量。末次給藥后1小時(shí)，腹腔注射0.6%醋酸0.1ml/10g體重，并立即計(jì)數(shù)15min內(nèi)動(dòng)物的扭體次數(shù)徐叔云等.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第二版，人民衛(wèi)生出版社，1994，pp.700]，結(jié)果見表6。表6舒肝顆粒對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響組另u劑量(g/kg)生藥量(g'kg")臨床推薦劑量倍數(shù)扭體次數(shù)(次/15min)溶媒對(duì)照等容CMC-Na——_42.6±13.7舒肝顆粒1.614.12135.9±7.7cd3.228.24231.5±8.0ad6.456.58430.2±9.1ad乳康片2.24—4224.9±9.8bd阿司匹林0.2—-—-9.8±3.8b注x±s，"=10.3尸<0.05，V<0.01與溶媒對(duì)照組比較；c尸〈0.05，與乳康片組比較;<0.01與阿司匹林對(duì)照組比較(StudentP檢驗(yàn)).結(jié)果顯示舒肝顆粒劑量依賴性地顯著減少醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)，與溶媒對(duì)照組比較，尸<0.05，乳康片和阿司匹林亦明顯減少扭體次數(shù)，舒肝顆粒與等臨床劑量的乳康片組相比藥效相當(dāng)(表5)，提示舒肝顆粒對(duì)化學(xué)性的刺激劑引起的疼痛反應(yīng)有一定的對(duì)抗作用。4.舒肝顆粒對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響ICR小鼠50只，體重1822g，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為溶媒對(duì)照組、舒肝顆粒低、中、高劑量組和乳康片組，分別灌胃給予等體積溶媒(0.5%CMC-Na)、舒肝顆粒1.6、3.2、6.4g/kg(相當(dāng)于生藥量14.1、28.2和56.5g/kg，為臨床推薦劑量的21、42和84倍)、乳康片2.24g/kg(臨床用量的42倍)，均按20mL/kg每天給藥2次，連續(xù)5個(gè)劑量。實(shí)驗(yàn)前每鼠右耳用8%硫化鈉脫毛，再用溫水洗凈，24h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。25X烏拉坦2.5g/kg腹腔麻醉動(dòng)物，參照文獻(xiàn)方法[聶紅.CM揮發(fā)油對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的作用研究.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志.2005，18(2):166-167]將小鼠固定在觀察臺(tái)上(耳托上和耳廓表面滴加少許香柏油)，用XSZ-hs7型微循環(huán)顯微鏡(中國(guó)重慶)和微循環(huán)測(cè)量分析系統(tǒng)(成都儀器廠)觀察小鼠耳廓微循環(huán)。記錄灌胃給藥后0、5、10、20、30min及腹腔注射(ip)鹽酸腎上腺素注射液(1.0mg/kg)后5、10、20和30min小鼠耳廓微動(dòng)脈、靜脈的管徑。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，并采用EXCEL軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(差值f-檢驗(yàn))。結(jié)果表明，給予舒肝顆粒后，高劑量組(6.4g/kg)小鼠的耳廓微動(dòng)脈管徑呈增大趨勢(shì)，5、10min時(shí)管徑明顯大于同時(shí)間點(diǎn)的溶媒組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異CPO.05);對(duì)小鼠耳廓微靜脈有舒張作用，其中低、中劑量組(1.6、3.2g/kg)分別自20min和10min開始，靜脈管徑明顯舒張，與給藥前相比差異有顯著性(尸<0.05，0.01)，與同時(shí)間點(diǎn)的CMC組比較也有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義0PO.05，0.01);給予乳康片后有擴(kuò)張小鼠微動(dòng)、靜脈的趨勢(shì)，但未達(dá)到顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表7，8);提示舒肝顆粒對(duì)正常小鼠耳廓的微動(dòng)、靜脈有一定的擴(kuò)張作用。表7舒肝顆粒對(duì)正常小鼠耳廓微動(dòng)脈的影響組別劑量正常值微動(dòng)脈管徑變化值(Hm)(g/kg)((xm)5102030(min)溶媒對(duì)照CMC陽(yáng)Na6.22士0.94-0.56±0.62-0.40±0.57-0.11±0.460.24±0.64舒肝顆粒1.66.12±0.98-0.01±0.83-0.01±0.920.61±1.260.63±1.043.26.58土1.410.24±U90.02±1.49-0.05±1.43-0.04±1.296.46.19±1.610.12±0.66a0.33±0.76a0.35±0.900.34±1.52乳康片2.246.39±1.29-0.34±0.51-0.12±0.850.50±0.980.52±0.74注；c±S，w=10,aP<0.05，與同時(shí)間點(diǎn)的溶媒對(duì)照組比較(差值"檢驗(yàn)).表8舒肝顆粒對(duì)正常小鼠耳廓微靜脈的影響組別劑量正常值微靜脈管徑變化值(pm)(g/kg)5102030(min)溶媒對(duì)照CMC-Na12.77±1.540.10±0.920.08±0.700.14±0.720.16±0.74舒肝顆粒1.613.08±1.001.06±1.961.52±2.04a2.14±2.35ac2.45±2.73ac3.213.44±1.551.47±1.13b1.96±1.37bc2.25±1.56bc2.70±1.62bd6.412.92±U40.16±0.560.30±0.970.67±1.361.35±1.69乳康片2.2413.39±1.780.01±0.970.24±1.150.36±1.340.47±1.07注x±s,=10,3尸<0.05，biM).01與同時(shí)間點(diǎn)的溶媒對(duì)照組比較(差值"檢驗(yàn))；°P<0.05，diM).01與給藥前比較G-檢驗(yàn)).11腹腔注射腎上腺素之后，溶媒對(duì)照組小鼠耳廓微動(dòng)脈明顯收縮，與注射腎上腺素之前相比有顯著差異，微靜脈也有收縮趨勢(shì)，提示腎上腺素造成了小鼠耳廓的微循環(huán)障礙。而舒肝顆粒則明顯減輕腎上腺素所致的微循環(huán)障礙，對(duì)微靜脈的舒張作用更強(qiáng)，與同時(shí)間點(diǎn)的溶媒對(duì)照組比較有顯著差異(尸0.05，0.01);而乳康片僅明顯舒張微靜脈，對(duì)微動(dòng)脈無(wú)明顯影響(表9，10);提示舒肝顆粒對(duì)腎上腺素致小鼠耳廓的微循環(huán)障礙有一定的改善作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注Jc±s,"=10，a/<0.05，V<0.01與同時(shí)間點(diǎn)的溶媒對(duì)照組比較較(Z-檢驗(yàn));c尸〈0.05，，<0.01與給腎上腺素前比(差值"檢驗(yàn)).<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注x±s，"=10,a/><0.05,V<0.01與同時(shí)間點(diǎn)的溶媒對(duì)照組比較(差值f-檢驗(yàn)).試驗(yàn)結(jié)論與討論乳腺增生病屬于中醫(yī)"乳癖"、"乳中結(jié)核"范疇。中醫(yī)認(rèn)為，此病與精神因素有關(guān)，因肝郁氣滯，血瘀痰阻,沖任失調(diào)而成。西醫(yī)理論認(rèn)為乳腺增生是由于性激素代謝紊亂，卵巢內(nèi)分泌功能失調(diào)，雌激素相對(duì)或絕對(duì)過(guò)高而引起。中醫(yī)治療原則是疏肝解郁，理氣止痛，活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)。舒肝顆粒為昆明中藥廠有限公司生產(chǎn)的中藥復(fù)方制劑，由當(dāng)歸、白芍、白術(shù)等中藥組成。具有舒肝理氣，散郁調(diào)經(jīng)之功效，擬用于治療乳腺小葉增生。本研究進(jìn)行了相關(guān)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，并以乳康片為陽(yáng)性對(duì)照藥進(jìn)行了研究，結(jié)果表明1.舒肝顆粒明顯減輕乳腺增生模型大鼠導(dǎo)管上皮的增生程度，中高劑量組大鼠的腺泡數(shù)、腺腔分泌物亦明顯少于模型組，且優(yōu)于等臨床劑量倍數(shù)的乳康片。表明舒肝顆粒對(duì)雌激素所致的大鼠乳腺增生有明顯治療作用。其作用機(jī)制與抑制PCNA的表達(dá)和降低雌激素水平有關(guān)。2.舒肝顆粒中、高劑量組(3.2、6.4g/kg;相當(dāng)于臨床推薦劑量的42和84倍)灌胃給藥后，明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳殼腫脹，抑制率分別為27.7和32.4%，而乳康片組僅顯示出抑制腫脹趨勢(shì)，提示舒肝顆粒具有明顯的抗炎作用3.舒肝顆粒灌胃給藥后能劑量依賴性地顯著減少醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)，與等臨床劑量的乳康片組相比藥效相當(dāng)，提示舒肝顆粒對(duì)化學(xué)性的刺激劑引起的疼痛反應(yīng)有一定的對(duì)抗作用。4.舒肝顆粒能擴(kuò)張小鼠耳廓微動(dòng)脈管徑(高劑量組，6.4g/kg)，對(duì)小鼠耳廓微靜脈也有舒張作用，其中低、中劑量組(1.6、3.2g/kg)分別自20min和10min開始，靜脈管徑明顯舒張；腹腔注射腎上腺素之后，小鼠耳廓微動(dòng)靜脈明顯收縮，造成了小鼠耳廓的微循環(huán)障礙。而舒肝顆粒給藥后則明顯減輕腎上腺素所致的微循環(huán)障礙，對(duì)微靜脈的舒張作用更強(qiáng)；提示舒肝顆粒對(duì)正常小鼠耳廓的微動(dòng)、靜脈有一定的擴(kuò)張作用，對(duì)腎上腺素致小鼠耳廓的微循環(huán)障礙有一定的改善作用。綜上所述，舒肝顆粒對(duì)雌激素所致的大鼠乳腺增生有明顯的治療作用外，尚有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和改善微循環(huán)的作用，有利于乳腺小葉增生的綜合治療。圖l是大鼠乳腺組織圖(a—正常對(duì)照組，b—模型組，c一舒肝顆粒低劑量組，d一舒肝顆粒中劑量組，e—舒肝顆粒高劑量組，f一乳康片組)。圖2是大鼠乳腺組織細(xì)胞增殖核抗原(200倍)圖(a—正常對(duì)照組，b—模型組，c一舒肝顆粒低劑量組，d—舒肝顆粒中劑量組，e—舒肝顆粒高劑量組，f一乳康片組)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1:13藥物的制備處方當(dāng)歸(蒸)200克、白芍(酒炙)133克、白術(shù)(麩炒)133克、醋香附67克、柴胡(醋炙)93克、茯苓133克、薄荷67克、梔子(炒)4()克、牡丹皮40克、甘草94克。制法以上十味，取當(dāng)歸、牡丹皮、香附、薄荷、和50g白術(shù)用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，備用，剩余白術(shù)及其余白芍等五味與藥渣共同加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，濾液合并，濃縮成稠膏，干燥，加入適量輔料，制成顆粒，干燥，噴入備用的揮發(fā)油，混勻，即得。用于治療乳腺增生，成人每次2袋(10克/袋或3克/袋)，每天2次(按成人60kg體重計(jì)算)，一般服用30天為一個(gè)療程(二個(gè)月經(jīng)周期，經(jīng)前服用15天)，2-3療程治愈。實(shí)施例2:處方當(dāng)歸(蒸)250克、白芍(酒炙)148克、白術(shù)(麩炒)150克、醋香附90克、柴胡(醋炙)130克、茯苓150克、薄荷10()克、梔子(炒)60克、牡丹皮60克、甘草U5克。制備方法和服用方法與實(shí)施例1相同。權(quán)利要求1、一種舒肝顆粒，其特征在于藥物的原料組方和重量配比為當(dāng)歸200～250、白芍133～150、白術(shù)133～150、醋香附67～100、柴胡93～140、茯苓133～150、薄荷67～100、梔子40～60、牡丹皮40～60、甘草94～120。2、權(quán)利要求l所述的舒肝顆粒用于乳腺增生疾病的治療。全文摘要本發(fā)明是舒肝顆粒及其在治療乳腺增生中的應(yīng)用。其藥物組配為當(dāng)歸(蒸)200～250、白芍(酒炙)133～150、白術(shù)(麩炒)133～150、醋香附67～100、柴胡(醋炙)93～140、茯苓133～150、薄荷67～100、梔子(炒)40～60、牡丹皮40～60、甘草94～120。本發(fā)明進(jìn)行了相關(guān)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明舒肝顆粒對(duì)雌激素所致的大鼠乳腺增生有明顯的治療作用外，尚有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和改善微循環(huán)的作用，有利于乳腺小葉增生的綜合治療。文檔編號(hào)A61P15/14GK101564483SQ20081005831公開日2009年10月28日申請(qǐng)日期2008年4月23日優(yōu)先權(quán)日2008年4月23日發(fā)明者鍵劉,蓉孫,謝民秀申請(qǐng)人:昆明中藥廠有限公司