專利名稱：延胡索水溶性部位藥物及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及延胡索(Corydalis YanhusuoW.T.Wang)的干燥塊莖制備的延胡索水溶性部位藥物及制備方法；還涉及該延胡索水溶性部位藥物在治療心血管疾病中的用途。
背景技術(shù)：
冠心病、心絞痛等心血管疾病是嚴(yán)重危害人類生命和健康的常見病，據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，在美國(guó)每3個(gè)死亡的人中有1個(gè)死于冠心病，每年有50多萬人死于心肌梗塞。在我國(guó)，心血管疾病的發(fā)病率也在不斷升高，以冠心病為例，發(fā)病率約為2.5％，每年有150萬新發(fā)病人，10年間其死亡率增加了2-3倍。隨著我國(guó)工業(yè)現(xiàn)代化程度的提高，生活節(jié)奏的加快，膳食結(jié)構(gòu)及生活習(xí)慣的改變，冠心病、心絞痛等心血管疾病發(fā)病率還將不斷上升。
延胡索具有活血、理氣、止痛等作用，已有的研究結(jié)果及文獻(xiàn)認(rèn)為，延胡索提取物中生物堿是其活性部位，生物堿中脫氫延胡索、延胡索乙素、原阿片堿等這些已知生物堿是有效成分，延胡索的專著、文獻(xiàn)大都認(rèn)為脫氫延胡索堿一類的季銨堿是治療心肌梗塞的有效成份。本發(fā)明改變了以前的研究觀點(diǎn)，延胡索生物堿不是延胡索中具有最佳心血管作用的活性部位，新發(fā)現(xiàn)了一個(gè)更安全、更有效的活性部位，即延胡索水溶性部位藥物。本發(fā)明的一個(gè)特點(diǎn)，除去了脫氫延胡索堿、延胡索乙素、原阿片堿等所有的生物堿，顯著減小了毒性，提高了藥品的安全性，本發(fā)明的另一個(gè)特點(diǎn)，制備的延胡索水溶性部位藥物，心血管作用得到了進(jìn)一步加強(qiáng)，與延胡索、延胡索生物堿相比，顯著提高了延胡索提取物的心血管作用。
本發(fā)明與可達(dá)靈片不同，可達(dá)靈片是用80％乙醇回流提取，其有效成分是脫氫延胡索堿、延胡索乙素等一類生物堿，生物堿是其有效成分，本發(fā)明除去了所有的延胡索生物堿，發(fā)明了延胡索新的活性部位，該部位的心血管作用比延胡索提取物中延胡索生物堿強(qiáng)，給予小鼠最大耐受量，也沒有發(fā)現(xiàn)毒性。
本發(fā)明與專利《元胡多糖、生產(chǎn)方法和用途》CN1660914A不同，本發(fā)明為延胡索提取物經(jīng)過大孔樹脂分離后得到的水溶性部位，CN1660914A為元胡多糖，二者物質(zhì)基礎(chǔ)不一樣。
本發(fā)明與專利《延胡索滴丸及其制備》CN1730026A不同，本發(fā)明提取工藝與CN1730026A的工藝完全不同，活性部位也不一樣。經(jīng)毒性試驗(yàn)比較，本發(fā)明的延胡索水溶性部位藥物安全性得到了極大的提高。
本發(fā)明從延胡索藥材中提取得到的延胡索水溶性部位藥物，改變了這之前的研究結(jié)果和傳統(tǒng)觀點(diǎn)，有望獲得更安全、有效的具有心血管作用的新藥，這是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化過程中的偉大成果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)是提供延胡索水溶性部位藥物及其制備方法和用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案為 一種延胡索水溶性部位藥物的制備方法， 1)以延胡索(Corydalis Yanhusuo W.T.Wang)塊莖為原料，粉碎成粗粉，約為10-30目，用6倍量80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時(shí)，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.02-1.06(50℃)，得到延胡索提取液； 2)延胡索提取液經(jīng)大孔樹脂柱吸附，大孔樹脂的量為延胡索提取液重量的3-6倍； 3)然后用6-8倍柱體積的水洗脫，收集水洗脫液，合并水洗脫液，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6％～8％，其中主要成份總黃酮含量大于15％。
所述的大孔樹脂選自D201、D101、AB-8、X-5中任一種，樹脂柱床徑高比為1∶4。
用大孔樹脂柱純化分離過程中，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h；至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附。
用水洗脫大孔樹脂柱過程中，水流速度1BV/h。
本發(fā)明制備方法制備的延胡索水溶性部位藥物，用于制備治療心血管疾病藥物的用途，根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“心血管疾病”是指例如冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞等疾病。
本發(fā)明方法制備的延胡索水溶性部位藥物，加入一定比例的常規(guī)藥用輔料，制成的制劑劑型可選自膠囊、片劑、滴丸、口服液中的任一種，制劑中延胡索水溶性部位藥物的用藥劑量為200-300mg。
本發(fā)明制備方法得到的延胡索水溶性部位藥物得率為6％～8％，主要成分為黃酮類成分，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮含量大于15％。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
本發(fā)明以延胡索藥材為原料，延胡索(Corydalis Yanhusuo W.T.Wang)為多年生草本植物，地下塊莖為入藥部位，分布于浙江、江蘇、山東、河北等地。
本發(fā)明人經(jīng)過研究意外發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明方法制備的延胡索水溶性部位藥物，總黃酮含量大于15％，穩(wěn)定性好，適合制備藥物，用于治療心血管疾病。本發(fā)明的有益效果主要有(1)提供了延胡索水溶性部位藥物的方法；(2)去除了毒性成分，提高了用藥安全性；(3)本發(fā)明方法設(shè)計(jì)先進(jìn)、合理、穩(wěn)定，操作方便，具有較強(qiáng)的實(shí)用性；(4)有望獲得更安全、有效的具有心血管疾病防治作用的新藥。
(四)具體實(shí)施方案 下面的實(shí)施例，用于進(jìn)一步說明和描述本發(fā)明，但并不意味著本發(fā)明僅限于此。
實(shí)施例1 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，每次4小時(shí)，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.04(50℃)，得到延胡索提取液； 延胡索提取液經(jīng)重量為3kg大孔樹脂D201柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用6倍柱體積水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.54％；采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮16.5％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成膠囊，規(guī)格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物制劑。
實(shí)施例2 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.02(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)重量為4kg大孔樹脂D201柱吸附，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h；至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用8倍量柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.83％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮15.8％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成片劑，規(guī)格，每片含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物制劑。
實(shí)施例3 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.06(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)6kg大孔樹脂D101柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用7倍量柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.97％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮在15.6％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成口服液，規(guī)格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物制劑。
實(shí)施例4 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.05(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)5kg大孔樹脂D101柱吸附，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.92％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮在15.8％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成膠囊，規(guī)格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例5 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.03(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)重量為4kg的大孔樹脂AB-8柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用6倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.16％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮在15.9％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成滴丸，規(guī)格，每次服用量含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例6 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.06(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)6kg的大孔樹脂AB-8柱吸附，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.99％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮在16.4％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成口服液，規(guī)格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例7 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.02(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)5kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用7倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.13％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮含量為15.7％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成膠囊，規(guī)格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例8 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.05(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)3.8kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用6倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.02％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮含量為15.6％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的稀釋劑，制成片劑，規(guī)格，每片含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例9 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.04(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經(jīng)6kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進(jìn)入樹脂床，靜止1小時(shí)，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合并水洗脫液，濃縮、減壓干燥(70℃)，粉碎成細(xì)粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.83％，采用紫外分光光度法測(cè)定，總黃酮含量為15.9％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規(guī)藥用輔料，制成口服液，規(guī)格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物制劑。
實(shí)施例10 延胡索水溶性部位藥物的心血管保護(hù)作用的藥效學(xué)試驗(yàn)1儀器ALC-V8動(dòng)物呼吸機(jī)，ALC-MPA多道生物信號(hào)分析系統(tǒng)，上海奧爾科特生物技術(shù)有限公司制造；圖像分析系統(tǒng)，江蘇捷達(dá)科技有限公司提供。冰醋酸，杭州大方化學(xué)試劑廠，批號(hào)20040907；氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)，中國(guó)前進(jìn)化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)20040602；戊巴比妥鈉，中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20030816；理鹽水，浙江平湖莎普愛思制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)040711。
2方法 2.1延胡索水溶性部位藥物抗大鼠心肌缺血試驗(yàn) 2.1.1對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響、對(duì)心肌梗死大鼠心電圖的影響、大鼠心率的影響 取SD大鼠，雄性，體重160-180g，隨機(jī)分為以下各組，每組8只，模型對(duì)照組、051901組(延胡索水溶性部位藥物)、061129組(延胡索乙醇提取物)、061130組(延胡索總堿)、鹽酸地爾硫卓陽(yáng)性對(duì)照組(給藥劑量見表1)。模型組造模后給以2ml生理鹽水。上述受試藥物均于手術(shù)后2min灌胃給藥。具體實(shí)驗(yàn)步驟取SD大鼠，1％戊巴比妥鈉40mg/kg(ip)麻醉，仰臥固定，記錄II導(dǎo)聯(lián)ECG，消毒胸部皮膚，胸骨左側(cè)作2厘米的縱切口，鈍性分離肌肉，行人工呼吸(呼吸比1∶2，呼吸頻率53次/分，通氣量0.25～0.49ml/min)，開胸，剪開心包膜，輕壓胸廓右側(cè)，擠出心臟，于動(dòng)脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎冠脈左前降支，(根據(jù)心臟結(jié)扎部位以下的顏色和心電圖變化判斷心肌缺血)，閉胸，測(cè)II導(dǎo)聯(lián)ECG。各組手術(shù)后2min灌胃給藥。手術(shù)后4小時(shí)，取心，4℃生理鹽水沖洗，將結(jié)扎部位以下心臟切成0.1cm左右厚度的薄片，置于37℃0.1％NBT中染色10min，用圖像分析軟件計(jì)算梗死區(qū)和非梗死區(qū)面積。觀察II導(dǎo)聯(lián)ECG ST段抬高程度和心率變化。
2.2延胡索水溶性部位藥物對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛的影響 2.2.1醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 取小鼠，隨機(jī)分為以下各組，每組10只，雌雄各半。模型對(duì)照組、051901組(延胡索水溶性部位藥物)、061129組(延胡索乙醇提取物)、061130組(延胡索總堿)、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組、消炎痛(給藥劑量見表2)。給藥組分別灌胃給予受試物，連續(xù)給藥3天。于末次給藥后30min，各小鼠均腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，觀察出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間，計(jì)算潛伏期，并記錄1 5min內(nèi)的扭體次數(shù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
2.2.2熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 調(diào)節(jié)金屬板的溫度為55±0.5℃，每次取雌性小鼠1只，放在金屬板上，記錄小鼠出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間，作為該小鼠的痛閾值，凡5s內(nèi)舔后足或30s內(nèi)不出現(xiàn)舔后足者，棄之不用。實(shí)驗(yàn)前再測(cè)痛閾1次，將兩次痛閾的平均值作為該鼠給藥前的痛閾值?？瞻讓?duì)照組給予N.S，給藥組分別灌胃給予受試物及陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林。給藥后30min，小鼠置于55℃(±0.5℃)恒溫?zé)岚迳?，以小鼠舔后足反?yīng)的潛伏期為痛閾指標(biāo)，截止時(shí)間為60S。給藥后10、30、60、120min測(cè)定小鼠的痛閾值，與給藥前和對(duì)照組比較。若小鼠在熱板上60s仍無痛覺，立即取出，按60s計(jì)算。
3.結(jié)果 3.1延胡索水溶性部位藥物抗大鼠心肌缺血試驗(yàn) 3.1.1對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響 結(jié)果見表一。
表一 延胡索水溶性部位藥物對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；有顯著性差異 3.1.2延胡索水溶性部位藥物對(duì)心梗大鼠心電圖的影響 結(jié)果見表二。
表二 延胡索水溶性部位藥物對(duì)心梗大鼠心電圖ST段抬高程度的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；有顯著性差異 3.1.3延胡索水溶性部位藥物對(duì)大鼠心率的影響 結(jié)果見表三。
表三 延胡索水溶性部位藥物對(duì)心梗大鼠心率的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01，有顯著性差異 3.2延胡索水溶性部位藥物對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛的影響 3.2.1延胡索水溶性部位藥物對(duì)小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表四。
表四 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果
與生理鹽水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001 3.2.2延胡索水溶性部位藥物對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表五。
表五 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用的影響(x±s)
與對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01 結(jié)果 動(dòng)物試驗(yàn)表明延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)與延胡索總堿(061130組)均能顯著降低大鼠心肌梗死面積，能顯著降低心肌梗塞大鼠ST段抬高的程度，維持正常心率，能顯著提高小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值，能顯著減輕小鼠因注射醋酸而引起的疼痛。
結(jié)論 從以上藥效試驗(yàn)比較，延胡索水溶性部位藥物(051901組)在心血管藥效方面其藥效較延胡索乙醇提取物(061129組)與延胡索總堿(061130組)作用強(qiáng)。因而是目前延胡索水溶性部位的藥效新發(fā)現(xiàn)。
實(shí)施例11 延胡索水溶性部位藥物急毒試驗(yàn) 1.實(shí)驗(yàn)材料 1.1.動(dòng)物ICR小鼠，體重18～22g，24只，雌雄各半 1.2.藥物 1)延胡索水溶性部位藥物(051901組) 2)延胡索乙醇提取物(061129組) 3)延胡索總堿(061130組) 2.器材灌胃器、燒杯、注射器 3.實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù)鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的死亡情況及當(dāng)時(shí)的給藥量，受試物延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總堿(061130)各設(shè)計(jì)1個(gè)劑量組即3g/kg，每組各4只，雌雄兼半。小鼠禁水不禁食6-12小時(shí)后，稱重，分別按所設(shè)劑量灌胃給予受試物延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總堿(061130)，給藥體積分別為0.2ml/10g，給受試藥物后應(yīng)立即觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況，持續(xù)觀察30分鐘，第1-4小時(shí)各觀察一次，特別要注意給藥后6小時(shí)內(nèi)的動(dòng)物中毒癥狀及死亡原因并詳細(xì)記錄，一般要觀察給藥后7-14天內(nèi)的動(dòng)物死亡數(shù)和中毒反應(yīng)，逐天觀察并詳細(xì)記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)表現(xiàn)和特點(diǎn)，毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間、死亡時(shí)間及各劑量組內(nèi)死亡動(dòng)物的分布，每天稱重并觀察兩次。觀察癥狀包括行動(dòng)、神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)及死亡。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總堿(061130組)各組小鼠給藥45分鐘后均出現(xiàn)不同程度的癥狀，癥狀表現(xiàn)為起先躁動(dòng)不安，2小時(shí)后出現(xiàn)懶動(dòng)，精神萎靡。延胡索水溶性部位藥物(051901組)小鼠給藥2小時(shí)內(nèi)未出現(xiàn)癥狀。藥后8小時(shí)內(nèi)061129組死亡2只，061130組死亡4只，051901組沒有死亡，均做解剖未見異常。藥后48小時(shí)后各組存活小鼠，逐漸恢復(fù)正常。
小鼠藥后死亡情況詳見下表
結(jié)果 毒性試驗(yàn)表明，本發(fā)明所制備的延胡索水溶性部位藥物毒性低，安全性高，有很好的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種延胡索水溶性部位藥物的制備方法，其特征是，所述方法包括如下步驟
(1)將延胡索藥材粉碎成粗粉，用6倍量的80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時(shí)，合并三次提取液，回收、濃縮，得到相對(duì)密度在50℃為1.02-1.06的延胡索提取液；
(2)將步驟(1)的提取液經(jīng)大孔樹脂柱純化分離，大孔樹脂選自D201、D101、AB-8、X-5中任一種，大孔樹脂的用量與延胡索提取液的重量比為3-6∶1；
(3)將步驟(2)吸附了延胡索活性部位的大孔樹脂柱用6-8倍柱體積的水進(jìn)行洗脫，收集水洗脫液，回收水份、干燥，即得延胡索水溶性部位藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，步驟(2)所述的樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經(jīng)過大孔樹脂柱的速度為1BV/h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，步驟(3)所述的洗脫水的流速度為1BV/h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是該方法制備的延胡索水溶性部位藥物，得率為6％～8％，其中主要成份總黃酮含量大于15％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法制備的延胡索水溶性部位藥物，在制備用于治療冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞的藥物中用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4或5所述的制備方法制備的延胡索水溶性部位藥物，加入常規(guī)藥用輔料制備藥物制劑，該藥物制劑可以是藥劑學(xué)可以實(shí)現(xiàn)的劑型，選自膠囊、片劑、滴丸、口服液中的任一種，制劑中含有延胡索水溶性部位藥物的劑量為200-300mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種延胡索水溶性部位藥物及其制備方法，將延胡索藥材粉碎成粗粉，用80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時(shí)，合并三次提取液，回收濃縮至相對(duì)密度1.02-1.06(50℃)，得到延胡索提取液，經(jīng)大孔樹脂柱吸附，用6-8倍量柱體積的水洗脫，收集水洗脫液，回收水份、干燥，即得延胡索水溶性部位藥物。還涉及延胡索水溶性部位藥物在心血管疾病方面的作用，尤其是用于制備治療冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K36/66GK101284050SQ20081006190
公開日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2008年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月9日
發(fā)明者胡季強(qiáng), 王如偉, 葉劍鋒, 健 吳, 姚建標(biāo), 胡江寧, 胡新龍, 燊 呂, 邱紅英 申請(qǐng)人:浙江康恩貝制藥股份有限公司, 浙江現(xiàn)代中藥與天然藥物研究院有限公司