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3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸化合物及其醫(yī)藥用途的制作方法

文檔序號:957677閱讀:163來源:國知局

專利名稱::3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸化合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域,具體而言,本發(fā)明涉及3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物以及它們的醫(yī)藥用途,本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的關(guān)鍵中間體式(II)化合物。式(I)和式(II)化合物被發(fā)現(xiàn)具有抑制乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)復(fù)制和降低乙肝病毒表面抗原(HBsAg)表達(dá)的功能,該類化合物可以預(yù)期用于制備治療相關(guān)的乙型肝炎病毒感染性疾病的藥物用途。
背景技術(shù)
:我國是病毒性肝炎的高發(fā)地區(qū),以乙型肝炎病毒HBV感染為主。乙肝病毒攜帶者超過1,2億,現(xiàn)有約3000萬患者需要治療,每年因肝病死亡約30萬人,至少帶來直接經(jīng)濟(jì)損失500億人民幣。此外,慢性乙肝病人經(jīng)520年后約有12%可發(fā)展為肝硬化,在肝硬化病人中大約20%患者最終發(fā)展成肝功能衰竭,約5%發(fā)展為肝癌。因此,慢性病毒性肝炎的治療不僅給國家和患者家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),同時(shí)也引起就業(yè)、升學(xué)等嚴(yán)重社會問題。肝炎病毒利用宿主細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白合成系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制,并將自身的核酸信息整合到宿主細(xì)胞的DNA中,與宿主細(xì)胞同期復(fù)制并在復(fù)制過程中不斷產(chǎn)生錯誤而形成變異,上述過程是肝炎病毒重要的分子生物學(xué)基礎(chǔ),也是抗肝炎病毒藥研制難以形成突破的重要原因。從認(rèn)識病毒的第一天起,人類就在不斷地尋找抗擊病毒的有效武器,但是病毒性疾病的治療,目前仍缺乏專屬性強(qiáng)的藥物。臨床上常用的藥物有如下幾類1、抑制病毒復(fù)制的抗病毒藥;2、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的免疫調(diào)節(jié)藥;3、針對臨床癥狀的止咳、鎮(zhèn)痛、退熱和消炎等治療藥;4、防止繼發(fā)感染的抗感染藥;5、預(yù)防病毒感染的疫苗;6、阻斷病毒傳播的消毒藥。目前臨床眾多用于慢性病毒性肝炎的治療藥物,包括抗病毒、保肝(抗纖維化)、免疫調(diào)控和中草藥等仍存在諸多問題。核苷類藥物及干擾素為主的藥物雖具有一定的抗病毒作用,但其對共價(jià)閉環(huán)HBVDNA的清除作用尚不確定,停藥后易反跳,況且用藥后發(fā)生不同程度的病毒變異。干擾素臨床上有效率僅有3050%,且與核苷類一樣有副作用。從我國遼闊藥用資源發(fā)掘活性天然產(chǎn)物,研制新型特色抗乙肝病毒藥物是尋找具有自主知識產(chǎn)權(quán)新藥的關(guān)鍵和突破口。綠原酸(chlorogenicacid)是由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸,quinicacid)組成的一取代的縮酚酸,異名咖啡鞣酸,化學(xué)名5-氧-咖啡??崴?5-0-Caffeoylquinicacid),是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。綠原酸為眾多藥材(如金銀花、茵陳、杜仲)以及中成藥(如復(fù)肝寧、雙花注射液、粉剌口服液)中抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分,同時(shí)是某些中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì),具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用,尤其是在病毒防治領(lǐng)域有重要用途[趙昱等"咖啡酰奎尼酸類化合物研究進(jìn)展",中國中藥雜志,2006,31(11),869-874;李國雄等,JournalofNaturalProducts,1990,53(3),587-595;馬雙成等,藥物分析雜志,2005,25(7),751-755;左建平、趙維民等,"綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途",國家發(fā)明專利,公開號CN1449753A;左建平、趙維民等,"一類苯丙烯??鼘幩狨パ苌?、制備方法及用途";國家發(fā)明專利,公開號CN1552690A等]。在自然界中廣泛存在著二苯烯丙酰奎尼酸類化合物,特別是二咖啡??崴犷惢衔铩6Х弱?崴?dicaffeoylquinicacids,DCQ)是一類由奎尼酸(quinicacid)與兩個咖啡酸(caffeicadd)通過酯化反應(yīng)縮合而成的酚酸類天然成分,廣泛存在于植物界如金銀花、旋覆花、蒼耳等中藥及茶葉、山楂等果樹中。該類化合物具有諸多藥理活性,如抗氧化、抗炎、抗纖維化、抑制平滑肌收縮、降血脂等,尤其是在病毒防治領(lǐng)域有重要用途。董俊興等人研發(fā)的中國國內(nèi)第一個具有自主知識主權(quán)的抗乙肝和愛滋病病毒的化學(xué)藥物一1,5-二-氧-咖啡??崴嵋呀?jīng)于2005年年底臨床研究成功。作為對抗病毒類藥物研究的一部分工作,我們對這類重要的天然產(chǎn)物進(jìn)行了研究。目前綠原酸及其衍生物如DCQ等主要靠從植物中提取而得,但其在植物中含量不高,同時(shí)考慮到綠原酸對人有致敏作用,因此本發(fā)明的目的在于對這類DCQ化合物進(jìn)行合成和結(jié)構(gòu)改造,合成了一系列3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物,并測試了其對HBVDNA和/或H^sAg的抑制活性,以期尋找對乙肝病毒生長顯示抑制作用的先導(dǎo)化合物。據(jù)此完成本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類新的抗乙肝病毒藥物,具體而言,本發(fā)明提供了一類具有式(I)所示的3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物及其可藥用鹽其中取代基R選自2-呋喃環(huán)基,2,6-二鹵代苯基,2,4-二卣代苯基,4-甲氧基苯基,含1~3個碳原子之烷氧基取代的苯甲酰基或未取代的苯甲?;?。本發(fā)明優(yōu)選的式(I)化合物是選自I-a.3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸;I-b.3,4-二-氧-[3-(2-呋喃基)烯丙酰]-奎尼酸;I-c.3,4-二-氧-[3-(2,6-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸;I~d.3,4-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸;I_e.3,4-二-氧-[3-苯甲?;?烯丙酰]-奎尼酸。I一a本發(fā)明的又一目的是提供了式(I)化合物及其可藥用鹽用于制備抗乙肝病毒藥物的用途。本發(fā)明的再一目的是提供了化合物(I-f)即3,4-二-氧-[3-(3,4-二甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸用于制備抗乙肝病毒藥物的用途。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>此外,本發(fā)明還提供了一種如式(II)所示的制備式(I)化合物的關(guān)鍵中間體化合物及其可藥用鹽其中取代基R選自2-呋喃環(huán)基,2,6-二鹵代苯基,2,4-二鹵代苯基,4-甲氧基苯基,含1~3個碳原子之烷氧基取代的苯甲?;蛭慈〈谋郊柞;?。本發(fā)明優(yōu)選的式(I)化合物是選自,式(II)化合物選自II-a.3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II-b.3,4-二-氧-[3-(2-呋喃基)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II~c.3,4-二-氧-[3-(2,6-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II"d.3,4-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II~e.3,4-二-氧-[3-苯甲酰基-烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯。式(II)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>本發(fā)明的又一目的是提供了式(II)化合物及其可藥用鹽用于制備抗乙肝病毒藥物的用途。本發(fā)明還提供了制備化合物(I-f)的關(guān)鍵中間體(II-f),即3,4-二-氧-[3-(3,4-二甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-l,5-內(nèi)酯。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula本發(fā)明的再一個目的是提供了一種含有式(I)化合物或化合物(I-f)或式(II)化合物或它們的混合物,以及它們的可藥用鹽的用于抗乙肝病毒疾病的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明,該藥物組合物中可加入各種藥用賦形劑,添加劑及載體。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種由中間體式(ID化合物即3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-l,5-內(nèi)酯制備式(I)化合物的方法。該合成工藝路線特征是奎尼酸在高溫下脫水生成奎尼酸內(nèi)酯化合物,再與各種本發(fā)明中所涉及到的取代3-烯丙酸在N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)存在下或在l,l'-二羰基咪唑(CDI),1,8-二氮雜雙環(huán)[5,4,0]11烷國7-烯(DBU)存在下通過酯化反應(yīng)制備得到中間體式(II)化合物即雙取代奎尼酸內(nèi)酯,將其在酸性條件下水解得到式(I)化合物。具體制備過程如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中取代基R選自3,4-二甲氧基苯基,2-呋喃環(huán)基,2,6-二卣代苯基,2,4-二鹵代苯基,4-甲氧基苯基,含1~3個碳原子之垸氧基取代的苯甲酰基或未取代的苯甲?;?。本發(fā)明的式(I)化合物及其關(guān)鍵中間體式(II)化合物對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)有良好的抑制作用。根據(jù)本發(fā)明,式(I)和式(II)化合物及其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合,制備得到具有抗乙型肝炎病毒活性從而可以用于防治乙型肝炎病毒引起的疾病的藥物組合物。下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例給出了代表性化合物的合成及相關(guān)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)。必須說明,下述實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例1:化合物3,4-二羥基奎尼酸內(nèi)酯的制備向厚底錐形瓶中稱取奎尼酸(900毫克,4.7毫摩爾),將其在電爐上加熱至熔融狀態(tài)保持?jǐn)?shù)分鐘,迅速放入干燥器中放置冷卻,呈玻璃狀透明固體,用冰醋酸作重結(jié)晶,得到白色固體400毫克,產(chǎn)率為49.7°%。實(shí)施例2:化合物II-a即3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯的制備向反應(yīng)瓶中加入對甲氧基苯烯丙酸(103毫克,0.58毫摩爾),羰基二咪唑(190毫克,1.17毫摩爾),四氫呋喃8毫升,加熱到回流反應(yīng)2小時(shí),再向其中加入3,4-二輕基奎尼酸內(nèi)酯(40毫克,0.23毫摩爾),1,8-二氮雜雙環(huán)[5,4,0]11烷-7-烯(DBU,90毫克,0.58毫摩爾),整個溶液在回流條件下反應(yīng)8小時(shí)。減壓蒸除溶劑后得淡黃色粘稠狀固體,用葡聚糖凝膠SephadexLH-20(IOO毫升,甲醇洗脫)柱層析分離得到白色固體43毫克,產(chǎn)率為38.6%。白色固體,熔點(diǎn)147150。C(氯仿);i/(石油醚/乙酸乙酯-3/l):0.28;核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇)32.162.61(4H,多重峰,H-2,6),3.82(3H,單峰,00/》,3.84(3H,單峰,00/3),4,95(1H,雙雙峰,H-4),5.17(1H,多重峰,H-5),5,38(1H,雙雙雙峰,H畫3),6.30(1H,雙峰,聲16.0Hz,H-2'),6.54(1H,雙峰,J^6.0Hz,H-2"),6.89(2H,雙峰,>8.8Hz,H-6',8'),6,99(2H,雙峰,《/=8.8Hz,H國6",8〃),7.55(2H,雙峰,《/=8.8Hz,H-5',9'),7.57(1H,雙峰,7=16.0Hz,H-3'),7.68(2H,雙峰,《/=8.8Hz,H隱5",9"),7.76(1H,雙峰,戶16.0Hz,H-3〃);電噴霧質(zhì)譜ESI-MSm/z:512.06([M+H20〗+)。實(shí)施例3:化合物II-a即3,4-二氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯的制備向反應(yīng)瓶中加入對甲氧基苯烯丙酸(87毫克,0.49毫摩爾),二環(huán)己基碳二亞胺(100毫克,0.49毫摩爾),二氯甲烷8毫升,在室溫下攪拌20分鐘,出現(xiàn)白色混濁后,加入3,4-二羥基奎尼酸內(nèi)酯(34毫克,0.19毫摩爾),4-二甲氨基吡啶(DMAP,IO毫克,0.049毫摩爾),整個溶液在室溫下反應(yīng)過夜,抽濾除去不溶物,蒸去溶劑,減壓蒸除溶劑后得到白色固體,用SephadexLH-20(100毫升,甲醇洗脫)柱層析分離得到白色固體37毫克,產(chǎn)率為39.6%?;衔颕I-a,白色固體,熔點(diǎn)、核磁共振氫譜等數(shù)據(jù)與實(shí)施例2中的相同。根據(jù)實(shí)施例3相同的方法制備表一所示之實(shí)施例4~8化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>表一<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>下面列出表一中各化合物的理化數(shù)據(jù)化合物II-b:黃色固體,熔點(diǎn)156157。C(氯仿);^(石油醚/乙酸乙酯=3/1):0.21;核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇):31.57-2.54(4H,多重峰,H-2,6),4.84(1H,雙雙峰,H-4),5.06(1H,多重峰,H-5),5.47(1H,雙雙雙峰,H-3),6.03(1H,雙峰,7=16.0Hz,H誦2'),6.25(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H畫2"),6.45(1H,單峰,H-6'),6.51(1H,單峰,H-6"),6.69(1H,單峰,H-5'),6.80(1H,單峰,H-5"),7.31(1H,雙峰,Hz,H國3'),7.50(1H,雙峰,《/=16.0Hz:H-3"),7.57(1H,單峰,H-7'),7.65(1H,單峰,H-7〃);電噴霧質(zhì)譜ESI-MS附/z:449.26([M+H20]+)。化合物II"C:白色固體,熔點(diǎn)176177。C(氯仿);i/(石油醚/乙酸乙酯-3/l):0.25;核磁共振氫譜(400MHz,氖代甲醇)32.27~2.62(4H,多重峰,H-2,6),4.99(1H,雙雙峰,H-4),5.33(1H,多重峰,H誦5),5.72(1H,雙雙雙峰,H-3),6.54(1H,雙峰,《/=16.4Hz,H-2'),6.68(1H,雙峰,J=16.4Hz,H誦2"),7.19(2H,多重峰,H-7',7〃),7.35(4H,多重峰,H-6',8',6",8"),7.77(1H,雙峰,Hz,H畫3'),7.88(1H,雙峰,J=16,4Hz,H-3")。化合物II-d:淡黃色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇)j2.06-2.86(4H,多重峰,H-2,6),4.89(1H,雙雙峰,H-4),5.30(1H,多重峰,H-5),5.58(1H,雙雙雙峰,H-3),6.94(1H,雙峰,/=16.0Hz,H-2'),6.89(1H,雙峰,/=16.0Hz,H國2"),7.31(1H,雙峰,J=8.4Hz,H-8'),7.41(1H,雙峰,《/=8.4Hz,H誦8"),7.50(1H,H-6'),7.61(1H,H國6"),7.50(1H,雙峰,/=8.4Hz,H-9'),7.61(1H,雙峰,戶8.4Hz,H國9"),7.69(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H國3'),7.86(1H:雙峰,聲16.0Hz,H-3")?;衔颕1-e:黃色固體,&(石油醚/乙酸乙酯6/1):0.43;核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇)S2.26-2.98(4H,多重峰,H-2,6),4.98(1H,雙雙峰,H畫4),5.07(1H,多重峰,H陽5),5.76(1H,雙雙雙峰,H誦3),6.95(1H,雙峰,J=16.0Hz,H-2'),7.08(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H-2"),7.49(2H,多重峰,H國7',9'),7.58(2H,多重峰,H-7",9"),7.64(1H,三重峰,H-8'),7.70(1H,三重峰,H-8"),8.17(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H醫(yī)3'),8.04(2H,多重峰,H國6',10'),8.10(2H,多重峰,H-6",10〃),8.22(1H,雙峰,/=16.0Hz,H-3")?;衔颕I-f:白色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇):32.14-2.58(4H,多重峰,H-2,6),3.82(3H,單峰,OC//3),3.84(6H,單峰,OC//3),3.88(3H,單峰,00^3),4.96(1H,雙雙峰,H-4),5.14(1H,多重峰,H-5),5.35(1H,雙雙雙峰,H-3),6.28(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H-2'),6.39(1H,雙峰,《/=16.0Hz,H-2"),6.91(1H,雙峰,《/=8.8Hz,H-8'),7.07(1H,雙峰,J-8.8Hz,H誦8"),7,18(1H,雙峰,《/=8.8Hz,H-5'),7.26(1H,雙峰,《/=8.8Hz,H誦5"),7.38(1H,雙雙峰,H國9'),7.46(1H,雙雙峰,H誦9"),7.50(1H,雙峰,J-16.0Hz,H國3'),7.68(1H,雙峰,異16.0Hz,H畫3")。實(shí)施例9:化合物I-a即3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>在二頸瓶中加入3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-l,5-內(nèi)酯II-a(50毫克,0.101毫摩爾),加入3毫升四氫呋喃溶解,滴加0.5N的鹽酸1毫升在室溫下攪拌8天,由薄層色譜檢測到產(chǎn)物和原料比不再變化,向反應(yīng)體系中加入食鹽飽和,用氯仿萃取(20毫升x4),合并氯仿層用大量水洗,飽和食鹽水洗滌,無水硫酸鈉干燥。用SephadexLH-20(100毫升,甲醇洗脫)柱層析分離得到白色固體17mg,產(chǎn)率為33.8%。熔點(diǎn)120~122°C,及/(氯仿/甲醇/甲酸50/2/1):0.38;核磁共振氫譜!HNMR(400MHz,氘代甲醇)S2.46-2.76(4H,多重峰),3.67(6H,單峰),4.15(1H,雙雙峰),4.98(1H,多重峰),5.34(1H,雙雙峰),6.39(2H,雙峰),6.84(4H,單峰),7.29(4H,單峰),7.69(2H,雙峰)。根據(jù)實(shí)施例9相同的方法制備得到表二所示實(shí)施例10-14化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>表二_<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>下面列出表二中各化合物的理化數(shù)據(jù)化合物I-b:黃色固體,熔點(diǎn)184~187°C(氯仿);&(氯仿/甲醇/甲酸=50/2/1):0.20;核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇)32.80~3.20(4H,多重峰,H曙2,6),4.37(1H,多重峰,H-5),4.70(1H,單峰,OH-5),4.97(1H,雙雙峰,H-4),5.40(1H,雙雙雙峰,H曙3),5.56(2H,雙峰,《/=16.0Hz,H-2',2"),5.74(1H,單峰,OH-l),6.19(2H,多重峰,H-6',6"),6.62(2H,多重峰,H-5',5"),6.94(2H,多重峰,H-7',7"),7.44(2H,雙峰,盧16.0Hz,H陽3',3")?;衔颕-c:白色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇)J2.313.07(4H,多重峰,H-2,6),4.49(1H,多重峰,H-5),5.01(1H,雙雙峰,H鍾4),5.50(1H,雙雙雙峰,H-3),6.92(2H,雙峰,J-16.0Hz,H國2',2"),7.09(2H,多重峰,H-7',7"),7.28(2H,多重峰,H-5',5"),7.80(2H,雙峰,盧16.0Hz,H-3',3")?;衔颕-d:白色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇):(52.20-3.02(4H,多重峰,H-2,6),4.48(1H,多重峰,H-5),4.95(1H,雙雙峰,H-4),5.42(1H,雙雙雙峰,H-3),6.88(1H,雙峰,J-16.0Hz,H-2'),7.19(1H,雙峰,《/=8.4Hz,H-8'),7.32(1H,單峰,H誦6'),7.46(1H,雙峰,盧8.4Hz,H-9'),7.98(1H,雙峰,力16.0Hz,H國3')。化合物I-e:黃色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇):(52.38~3.13(4H,多重峰,H-2,6),4.49(1H,多重峰,H-5),5.01(1H,雙雙峰,H-4),5.50(1H,雙雙雙峰,H-3),6.92(2H,雙峰,《/=16.0Hz,H-2',2"),7.39(4H,多重峰,H-7',9'),7.66(2H,三重峰,H-8',8"),8.01(4H,多重峰,H-6',6",10',10"),8.08(2H,雙峰,盧16.0Hz,H-3',3")。化合物I-f:白色固體,核磁共振氫譜(400MHz,氘代甲醇):32.11-2.56(4H,多重峰,H誦2,6),3.80(6H,單峰,OC//3),3.87(6H,單峰,007》,4.46(1H,多重峰,H-5),5.10(1H,雙雙峰,H-4),5.24(1H,雙雙雙峰,H-3),6.21(2H,雙峰,《/=16.0Hz,H畫2',2"),6.97(2H,雙峰,《/=8.8Hz,H國8',8"),7.07(2H,雙峰,J=8.8Hz,H畫5',5〃),7.30(2H,雙雙峰,H-9',9"),7.52(2H,雙峰,7=16.0Hz,H-3',3")。本發(fā)明的式(I)所示之3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物、化合物(I-f),以及式(II)所示的3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制,降低乙肝病毒表面抗原(HBsAg)表達(dá)的功能;可以用于治療相關(guān)的乙肝病毒感染性疾病。式(i)和式(n)化合物及其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合,用制藥領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)制備得到具有抗乙肝病毒活性從而可以用于防治乙肝病毒引起的疾病的藥物組合物。上述藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物,也可以使用目前公認(rèn)的控釋或緩釋劑型或納米制劑。本發(fā)明的式(I)所示之3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物、化合物(I-f)和式(II)所示的3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯或其可藥用鹽可以與現(xiàn)已上市的治療乙型病毒性肝炎藥物如拉米呋啶(lamivuding)、阿德福韋及其二匹伏酉旨(adevovir/adevovirdipivoxil)、恩替卡韋(entecavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、克來福定(clevudine)、泛昔絡(luò)韋(famciclovir)、洛布卡韋(lobucavir)、干擾素(IFN)等聯(lián)合使用,制備得到具有治療乙型病毒性肝炎的藥物組合物。上述各類藥物組合物均可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物,也包括使用目前公認(rèn)的控釋或緩釋劑型或納米制劑。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì),下面分別用藥理實(shí)施例的形式示出式(I)和式(II)化合物對乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)表達(dá)和對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的抑制之藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果,以說明其在抗病毒藥物開發(fā)領(lǐng)域中的用途。藥理實(shí)施例給出了部分化合物的代表性活性數(shù)據(jù)。同樣必須說明,本發(fā)明的藥理實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。17藥理實(shí)施例h化合物I-c對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抑制作用試驗(yàn)1.1細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清,100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素,100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中,置37'C,5%二氧化碳(302,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2采用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]法測定化合物I-c對H印G2.2.15細(xì)胞生長的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細(xì)胞,用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋成"105/毫升,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔100微升,在37"C,5%二氧化碳(:02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-c,濃度分別為100微克/毫升,20微克/毫升,和4微克/毫升,每孔200微升,每個濃度設(shè)三個復(fù)孔,置于37°C,5%C02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)72小時(shí)后,每孔加入5毫克/毫升MTT試劑10微升,繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí),棄去培養(yǎng)基,每孔加入DMSO200微升,用振蕩器振蕩20分鐘,在570nm波長下用酶標(biāo)儀測定OD值。以只加培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔為對照孔。抑制率(%)二(對照孔OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對照孔OD值X100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。1.3測定化合物I-c對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細(xì)胞,用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋成"105/毫升,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔100微升,在37X:,5%C02,100。%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-c化合物,濃度分別為100微克/毫升,20微克/毫升和4微克/毫升,每孔200微升,每個濃度設(shè)三個復(fù)孔,置于37°C,5%C02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每4天換含相同濃度樣品的培養(yǎng)基,將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻,作為待測樣品。用ELISA試劑盒測定培養(yǎng)基中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)濃度,以P/N表示;以拉米呋啶G-TC)為陽性對照。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表三所示,化合物I-c有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表達(dá)的作用。在高、中、低劑量下,其對HepG2,2.15細(xì)胞分泌的HBsAg抑制活性都高于拉米呋啶。表三.化合物I-c對H印G2.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原抑制率(%)樣品編號濃度(微克/毫升)4天8天10033.5043.24I-c2018.7722.62410.8513.183-TC拉米呋啶10020412.12〃〃11.37〃〃無抑制活性。1.5結(jié)論乙型肝炎表面抗原(HBsAg)指標(biāo)是判斷乙型肝炎病毒感染的重要標(biāo)志,抑制HBsAg表達(dá)并使該指標(biāo)轉(zhuǎn)陰是治療乙型肝炎中的直接目的之一。該實(shí)施例結(jié)果說明化合物I-c在第八天對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用,說明此類3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實(shí)施例2:化合物II-b對H印G2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抑制作用試驗(yàn)2.1細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清,100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素,100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中,置37°。,5%二氧化碳(:02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.2采用MTT法測定化合物II-b對HepG2.2.15細(xì)胞生長的抑制作用方法同藥理實(shí)施例1。2.3測定化合物II-b對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用方法同藥理實(shí)施例l。以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表四所示,化合物II-b有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表達(dá)的作用。其對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的HBsAg在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表四.測試化合物對HepG2.2.15分泌的HBsAg抑制率(%)樣品編號濃度(微克/毫升)4天8天10036.6758.74II-b2019.9638.85411.7322.913-TC拉米呋啶10020412.12〃〃11.37〃〃無抑制活性。2.5結(jié)論乙型肝炎表面抗原(HBsAg)指標(biāo)是判斷乙型肝炎病毒感染重要標(biāo)志,有效抑制HBsAg的表達(dá)是治療乙型肝炎中的直接目的之一。該實(shí)施例結(jié)果說明化合物II-b在第八天對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原具有顯著的抑制作用,說明此類3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實(shí)施例3:化合物II-f對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抑制作用試驗(yàn)3.1細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清,100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素,100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中,置37。C,5%二氧化碳0)2,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.2釆用MTT法測定化合物II-f對HepG2.2.15細(xì)胞生長的抑制作用方法同藥理實(shí)施例1。3.3測定化合物II-f對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用方法同藥理實(shí)施例l。以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。3.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表五所示,化合物n-f有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表達(dá)的作用。其對HepG2,2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表五,測試化合物對HepG2.2.15分泌的HBsAg抑制率(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>無抑制活性。3.5結(jié)論乙型肝炎表面抗原(HBsAg)指標(biāo)是判斷乙型肝炎病毒感染重要標(biāo)志,有效抑制HBsAg在血清中的表達(dá)是治療乙型肝炎中的直接目的之一。該實(shí)施例結(jié)果說明化合物II-f在第八天對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的HBsAg具有顯著的抑制作用,說明此類3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯'類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實(shí)施例4:化合物I-f對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制作用試驗(yàn)4.1儀器與試劑PE7700自動熒光PCR儀,美國PerkinElmer公司生產(chǎn);HBVDNA熒光定量檢測試劑盒由中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供,胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均購自Gibco公司。4.2細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞接種于DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清,380微克/毫升G418),置5XC0237"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng),具體方法同藥理實(shí)施例1。4.3采用MTT法測定化合物I-f對HepG2.2.15細(xì)胞生長的抑制作用方法同藥理實(shí)施例1。4.4測定化合物I-f對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的抑制作用取對數(shù)生長期的HepG2.2.15細(xì)胞,用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋成口105/毫升,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔100微升,在37"C,5%C02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-f,濃度分別為100微克/毫升,20微克/毫升和4微克/毫升,每孔200微升,每個濃度設(shè)三個復(fù)孔,置于37"C,5%C02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每4天換含相同濃度樣品的培養(yǎng)基,將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻,作為待測樣品。第8天時(shí)用定量PCR儀測定培養(yǎng)基中HBVDNA濃度按試劑說明書操作,50微升反應(yīng)體積中含30微升反應(yīng)緩沖液,5微升氯化鎂,5微升引物和探針,7微升樣品處理上清液和3微升Taq酶。各反應(yīng)管放入PCR儀中,按下列條件擴(kuò)增92°C2分鐘預(yù)變性,然后按93"C45秒-55°C120秒,共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后,由電腦自動分析計(jì)算出結(jié)果。實(shí)驗(yàn)以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表六所示,化合物I-f具有強(qiáng)效的抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的作用。表六.對HepG2.2.15分泌的HBVDNA以及對細(xì)胞生長的抑制率(%)樣品編號濃度(微克/毫升)8天12天12天的MTT化合物I-f10021.7642.0214.632013.91228.2312.72411.8413.5512.21拉米呋啶10081.2583.569.772072.8576.316.13437.2737.814.224.5試驗(yàn)結(jié)果說明第八天和第十二天的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物I-f對HBVDNA均顯示出一定的抑制活性,屬于有較強(qiáng)活性的HBVDNA抑制劑。此外,第十二天時(shí)的MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示:化合物I-f對HepG2.2.15細(xì)胞不具有強(qiáng)的細(xì)胞毒性。4.6結(jié)論化合物I-f能較顯著地抑制HBVDNA的復(fù)制,且用藥安全范圍較大,說明此類3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物可以預(yù)期發(fā)展成為治療病毒性乙型肝炎疾病的藥物。藥理實(shí)施例5:化合物II~e對HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)的抑制作用試驗(yàn)5.1儀器與試劑PE7700自動熒光PCR儀,美國PerkinElmer公司生產(chǎn);HBVDNA熒光定量檢測試劑盒由中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供,胎牛血清、DMEM、G418、胰蛋白酶均購自Gibco公司。5.2細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞接種于DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清,380微克/毫升G418),置5XC0237'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng),具體方法同藥理實(shí)施例1。5.3采用MTT法測定化合物II~e對HepG2.2.15細(xì)胞生長的抑制作用方法同藥理實(shí)施例l。5.4測定化合物II~e對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)復(fù)制的抑制作用-實(shí)驗(yàn)具體方法同藥理實(shí)施例4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表七所示,化合物II—具有強(qiáng)效的抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸復(fù)制的作用。表七.對HBVDNA以及對HepG2.2.15細(xì)胞生長的抑制率(%)樣品編號<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>5.5試驗(yàn)結(jié)果說明第八天和第十二天的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物II-e對HBVDNA顯示出一定的抑制活性,雖然比陽性對照藥品拉米呋啶對HBVDNA的抑制活性要弱,但仍屬于有較強(qiáng)活性的HBVDNA抑制劑。此外,第十二天時(shí)化合物II-e對對HepG2.2.15細(xì)胞未顯示出細(xì)胞毒性。5.6結(jié)論化合物II-e能較顯著地抑制HBVDNA的復(fù)制,且用藥安全范圍較大,說明此類3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯類化合物可以預(yù)期發(fā)展成為治療病毒性乙型肝炎疾病的藥物。在上述說明書闡述本發(fā)明時(shí),同時(shí)提供了實(shí)施例和藥理實(shí)施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實(shí)際操作過程和本發(fā)明的意義。在進(jìn)入本發(fā)明權(quán)利要求和其等同物范圍內(nèi)時(shí),本發(fā)明的實(shí)際應(yīng)用包括所有一般變化、配合,或改進(jìn)。權(quán)利要求1.具有式(I)所示結(jié)構(gòu)的3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]奎尼酸類化合物及其可藥用鹽id="icf0001"file="A2008100625510002C1.tif"wi="66"he="39"top="46"left="60"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式(I)其中取代基R選自2-呋喃環(huán)基,2,6-二鹵代苯基,2,4-二鹵代苯基,4-甲氧基苯基,含1~3個碳原子之烷氧基取代的苯甲酰基或未取代的苯甲?;?。2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物,其特征為式(I)化合物是選自下列化合物I-a.3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸;I-b.3,4-二-氧-[3-(2-呋喃基)烯丙酰]-奎尼酸;I-c.3,4-二-氧-[3-(2,6-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸;;M.3,4-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸;j_e.3,4-二-氧-[3-苯甲?;?烯丙酰]-奎尼酸。3.—種具有式(II)所示的制備式(I)化合物的關(guān)鍵中間體3,4-二-氧-[3-取代烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯及其可藥用鹽其中取代基R選自2-呋喃環(huán)基,2,6-二鹵代苯基,2,4-二鹵代苯基,4-甲氧基苯基,含13個碳原子之垸氧基取代的苯甲?;蛭慈〈谋郊柞;?。式(II)4.根據(jù)權(quán)利要求3的式(II)化合物,其特征為式(II)化合物是選自下列化合物II-a.3,4-二-氧-[3-(4-甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II-b.3,4-二-氧-[3-(2-呋喃基)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II~c.3,4-二-氧-[3-(2,6-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II-d.3,4-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯;II~e.3,4-二-氧-[3-苯甲酰基-烯丙酰]-奎尼酸-1,5-內(nèi)酯。5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任一所述之式(I)化合物、式(II)化合物及其可藥用鹽用于制備治療乙型病毒性肝炎藥物的用途,其特征為該類藥物具有抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制和/或降低乙型肝炎病毒表面抗原表達(dá)的功效。6.化合物3,4-二-氧-[3-(3,4-二甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸用于用于制備治療乙型病毒性肝炎藥物的用途,其特征為該類藥物具有抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制的功效。。7.—種用于制備治療乙型病毒性肝炎藥物的藥物組合物,其含有治療有效量的作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1~4任一所述的化合物、3,4-二-氧-[3-(3,4-二甲氧基苯)烯丙酰]-奎尼酸,或者它們的混合物及其可藥用鹽和可藥用輔料。8.根據(jù)權(quán)利要求57的藥物和藥物組合物,其劑型是注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑,或控釋或緩釋或納米制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種具有抗乙型肝炎病毒活性的式(I)所示的3,4-二-氧-[3-取代苯烯丙酰]奎尼酸類化合物及其醫(yī)藥用途,本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的關(guān)鍵中間體式(II)化合物,以及式(I)和式(II)化合物的藥物用途和含有該類化合物的藥物和藥物組合物。本發(fā)明的式(I)和式(II)化合物具有抑制乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)復(fù)制和降低乙肝病毒表面抗原(HBsAg)表達(dá)的功能,式(I)和式(II)化合物及其可藥用可以預(yù)期用于制備治療乙肝病毒感染性疾病的藥物用途。文檔編號A61P31/12GK101293834SQ20081006255公開日2008年10月29日申請日期2008年6月24日優(yōu)先權(quán)日2008年6月24日發(fā)明者巫秀美,李校堃,偉熊,驊白,佳瞿,胡利紅,胡明輝,昱趙,郝小江,韓方方,黃可新申請人:溫州醫(yī)學(xué)院
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