專利名稱：：一種消炎抗菌藥物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬中藥質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體來說涉及一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：以黃柏、大黃、黃茶、板藍根、黃連制成的炎可寧制劑具有清熱瀉火、消炎止痢。用于急性扁桃腺炎，細菌性肺炎，急性結(jié)膜炎，中耳炎，疔癰瘰病，急性乳腺炎，腸炎，細菌性痢疾及急性尿道感染。效果明顯。由于復(fù)方制劑中藥成分復(fù)雜，原部頒標準中僅有草酸鉀顯微鑒別，黃酮及生物堿定性鑒別，而無定量指標，因此該方法專屬性差，不能很好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服上述缺點而提供的能定量控制炎可寧制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又操作筒便的一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法。一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)鑒別:a、大黃的鑒別稱取本品粉末O.lg,加甲醇20ml，浸泡1小時，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水10ml使其溶解，再加鹽酸lml,加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷lml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材0.lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取上述供試品4;al、對照藥材3yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30~60°C)-曱酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色i普中，在與對照藥材色"i普相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；b、黃柏、黃連的鑒別取本品粉末0.3g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使其溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液。吸取上述兩種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)為展開劑，展開，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色i瞽相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；(2)黃芩苷的含量測定a、供試品溶液的制備取本品細粉O.lg，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入50%乙醇50ml，稱定重量，超聲(功率260w,頻率40KHz)30分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；b、對照品溶液的制備精密稱取黃茶苷對照品14.98mg置于25ml容量瓶中，力口50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml至10ml容量瓶中，力口50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1毫升含59.92jug的對照品溶液;加50%乙醇溶液制成每lml含黃茶苷90jig的對照品溶液；c、色謙條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；曱醇-0.2%磷酸(40:60)為流動相；控制波長為280nm,理論板數(shù)按黃茶苷峰計算應(yīng)不低于3000。d、含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10jul，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中黃茶普含量；計算公式炎可寧片中黃芩苷含量限度(mg/g)=黃芩投料量(g)X黃芩藥材中黃芩苷含量限度(mg/g)x平均收率(y。)+成品量(g)。上述的一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法，其中本品每片含黃芩以黃茶芬(dOn)計應(yīng)不低于9.85mg。本發(fā)明的方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，從以上技術(shù)方案可知，現(xiàn)我們增加了炎可寧制劑中大黃、黃柏、黃連的薄層鑒別，通過反復(fù)試驗選擇色譜條件，采用高效液相色譜法測定本品中黃芩苷的含量。黃芩苷與其他組份分離度好，方法精密度高，重現(xiàn)性、回收率均好，因此既能定量控制炎可寧制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又操作簡便。附圖為黃芩苷標準曲線。具體實施例方式以下通過試驗例和實施例來進一步說明本發(fā)明的有益效果。試驗例本品的制備取黃柏413.8g、大黃82.8g、黃芩310.3g、板藍根310.3g、黃連20.7g，以上五味，黃連、大黃粉碎成細粉；黃芩、板藍根加水煎煮三次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；黃柏加水煎煮三次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至原生藥量的1.5倍，加入乙醇使含醇量為70%，攪拌，靜置，濾過，回收乙醇，濃縮成稠膏，與上述粉末及稠膏混勻，干燥，制粒，壓制成IOOO片，包糖衣，即得。a、鑒別(1)稱取本品粉末O.lg，加曱醇20ml，浸泡1小時，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水10ml使其溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次振搖提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯曱烷lml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材O.lg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色i普法(附錄VIB)試驗，吸取上述供試品4ja1、對照藥材3nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30~60°C)-曱酸乙酯-曱酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下枱r視。供試品色語中，在與對照藥材色語相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點。(2)取本品粉末0.3g，加曱醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加曱醇lml使其溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加曱醇制成每lml含0.5mg的溶液。吸取上述兩種溶液各5ia1,分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)為展開劑，展開，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色語中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點。含量測定方法的選擇為炎可寧制劑黃茶所含有效成分，參照黃茶藥材中黃茶苷的含量測定方法，采用高效液相色譜法測定本品中黃茶苷的含量。色譜條件選擇如下，黃芩苷與其他組份分離度好，方法精密度高，重現(xiàn)性、回收率均好，故釆用高效液相色i普法測定本品中黃茶苷的含量。①儀器與試劑高效液相色語儀島津LC-10AT型輸液泵、SPD-10A型紫外控制器、WML-2006C-4型威瑪龍色i普數(shù)據(jù)工作站、HT-230A色鐠柱恒溫箱。色譜柱依利特HypersilODS2柱(4.6mmx250mm,5|am)。分析天平LIBRORAEL-160型萬分之一電子分析天平，TG332A型十萬分之一分析天平。超聲儀HS10260D(功率260w,頻率40KHz)型超聲清洗儀。試劑黃芩苷對照品購于中國生物制品;險定所(批號110715-200212),曱醇為色"^普純，其它試劑均為分析純。②系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色鐠柱依利特HypersilODS2柱(4.6mmx250mm,5(im)，流動相0.2%磷酸-甲醇(60:40)?？刂撇ㄩL280nm,柱溫30°C，進樣量:10pl。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于3000。③控制波長選擇取黃茶苦對照品溶液進行UV光譜掃描，在280nm處有最大吸收波長，故選4奪280nm作為控制波長。④鐠條件篩選選用多種流動相系統(tǒng)，進行HPLC色譜條件篩選試驗，結(jié)果見表1。5表l色語條件考察數(shù)據(jù)統(tǒng)計表方法編號色譜條件結(jié)果10.2%磷酸-曱醇(53:47)0.2%磷酸-曱醇(55:45)0.2%磷酸-曱醇(58:42)0.2%砩酸-曱醇(59:41)0.2%磷酸-曱醇(60:40)雜質(zhì)峰千擾大，重現(xiàn)性不好雜質(zhì)峰干擾大，分離差雜質(zhì)峰干擾大，分離差陰性無干擾，分離效果較好陰性無干擾，分離效果好通過以上對比試^r結(jié)果分析，方法5具有保留時間適當(dāng)，樣品分離效果好、陰性無干擾等特點，因此作為正文收載。同時根據(jù)后續(xù)試驗分析總結(jié)，樣品中黃茶苷能達到分離的最低分離度1.5時的理論塔板數(shù)為3000,因此規(guī)定黃茶苷的理論塔板數(shù)不低于3000。⑤供試品溶液制備按中國藥典2005版黃茶藥材中黃茶苷供試品溶液制備方法的溶劑，即70%乙醇提取后再用甲醇溶解；由于本品雜質(zhì)干擾大，經(jīng)過試驗結(jié)果表明，用50%乙醇作為供試品溶液制備中的提取溶劑較好，雜質(zhì)峰干擾小，故選用50%乙醇為^是取溶劑。超聲時間選擇用50%乙醇作為提取溶劑，對不同超聲時間進行考察，以黃茶苦含量作為指標，選擇最佳提取時間，結(jié)果見表2。表2超聲時間選擇數(shù)據(jù)統(tǒng)計表對照品溶液HPLC測定對照品溶液含量(yg/ml)進樣量(P1)峰面積平均峰面積l號59.9210275636627030482號59.92102649729供試品溶液HPLC測定編號稱樣量(g)超聲時間min黃茶苷峰面積黃芩苷含量Ug/g)10,112710327049332.164520.102220333604436.180030.104130344668736.697740.103740343518436.7163試驗結(jié)果表明，超聲30分鐘后含量均一，故超聲時間選用30分鐘為宜。將此方法列入正文，即取本品細粉0.1g,精密稱定，置50ml具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入50%乙醇50ml，稱定重量，超聲(功率260w,頻率40KHz)30分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。⑦陰性對照實驗及溶劑峰的測定取缺黃茶陰性制劑，照供試品溶液，同法制成缺黃茶陰性樣品溶液。分別取溶劑(50%乙醇溶液)、缺黃芩陰性樣品溶液、供試品及黃芩普對照品溶液各10ia1,注入液相色i普儀，按正文方法進行試驗，結(jié)果表明陰性溶液在與對照品、供試品色語峰相應(yīng)的位置上無干擾。50%乙醇在與對照品、供試品色鐠峰相應(yīng)的位置上無吸收峰，方法可行。⑧方法學(xué)考察線性關(guān)系考察精密量取不同濃度的黃茶普對照溶液10|i1注入液相色語儀，進行黃茶苷測定，以黃茶苷峰面積A黃茶苷對黃茶苷濃度C黃茶苷進行線性回歸，線性回歸方程A黃芩苷=46426C黃芩苷-30962,黃荅苷線性范圍0.2986-1.4980jig,黃茶苷相關(guān)系數(shù)r=0.9999;擬合過原點方程A黃茶苷=46144C黃茶苷，用最低點峰面積代進原方程與擬合過原點方程，黃芩苷相對偏差為0.82%,相對標準偏差小于1%，因此可視原方程截距趨近于零，可以用外標一點法計算含量。根據(jù)實驗結(jié)果，黃芩苷在0.2986~1.4980叱范圍內(nèi)，峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表3，附圖。表3黃芩苷線性關(guān)系考察數(shù)據(jù)統(tǒng)計表黃芩苷濃度(pg/ml)29.8659.9289,88119,84149.8黃苳苷峰面積l13579532752143414796354831386919112黃芩苷峰面積213572622743650415613355411496950310黃芩苷平均峰面積13576082747897415204855121446934711精密度試驗精密量取黃芩苷對照品溶液(89.88iag/ml)10m1注入液相色語儀，重復(fù)進樣5次，以黃茶苷的峰面積計算，黃芩苷RSD為0.97%。結(jié)果見表45。表4精密度考察數(shù)據(jù)統(tǒng)計表測定次數(shù)12345平均RSD(%)黃芩苷峰面積4087298411344141864634149182416775841408280.97重復(fù)性試驗取同一批號供試品，照[含量測定]方法制備供試品溶液5份，以黃芩苷的含量計算，黃芩苷RSD4.69。/。。結(jié)果見表5。表5重復(fù)性考察數(shù)據(jù)統(tǒng)計表對照品溶'^HPLC測定對照品溶液含量(jig/ml)峰面積平均峰面積黃芩苷l號89.88404429840327442號89，884021189供試品的測定<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>加樣回收率試-驗取本品粉末0.05g,6份，精密稱定，于50ml具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入用50%乙醇溶解的黃茶苷對照品溶液(41.9440jug/ml)50ml,照供試品處理方法及[含量測定]方法，進行黃芩苷含量測定，結(jié)果列于表7。表7黃茶苷加樣回收率考察數(shù)據(jù)統(tǒng)計表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>試驗結(jié)果表明，黃茶苷加樣平均回收率為98.98%,RSD為1.76。/。。達到標準要求，方法可行。實施例1一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)鑒別a、大黃的鑒別稱取本品粉末0.lg，加甲醇20ml，浸泡1小時，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水10ml^f吏其溶解，再加鹽酸lml,加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯曱烷使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材0.lg,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取上述供試品4jil、對照藥材3ni1,分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30~60°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色i普相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；b、黃柏、黃連的鑒別取本品粉末0.3g，加曱醇20ml,超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加曱醇lml使其溶解,作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加曱醇制成每lml含0.5mg的溶液。吸取上述兩種溶液各5|ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)為展開劑，展開，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色i普相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；(2)黃茶苷的含量測定a、供試品溶液的制備取本品細粉O.lg,精密稱定，置50ml具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入50%乙醇50ml,稱定重量，超聲(功率260w，頻率40KHz)30分鐘，；改冷至室溫，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。b、對照品溶液的制備精密稱取黃茶香對照品14.98mg置于25ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml至10ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1毫升含59.92jig的對照品溶液;加50%乙醇溶液制成每lml含黃茶苷90jug的對照品溶液；c、色鐠條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；曱醇-0.2%磷酸(40:60)為流動相；控制波長為280nm，理論板數(shù)按黃茶苷峰計算應(yīng)不低于3000。d、含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOial,注入液相色語儀，測定，計算樣品中黃芩苷含量；結(jié)果見表8計算公式炎可寧片中黃芩苷含量限度(mg/g)=黃芩投料量(g)X黃芩藥材中黃芩苷含量限度(mg/g)x平均收率(y。)+成品量(g)。實施例2-10同實施例1結(jié)果見表8表8樣品黃茶苷含量考察統(tǒng)計表實施例黃芩苷含量(mg/g)樣品黃芩苷平均含量(mg/g)黃芩藥材中黃芩苷含量(mg/g)收率(%)實施例l133.085133.169790.918831.4433.2543實施例2139.100139.138591.644337.0439.1770實施例3135.230935.586190.564933.8735.9413實施例4134.918134.759791.062232.9034.6013實施例5138.447138.5.49094.609735.1238.6，實施例6140.581740.380193.137337.3740.1784實施例7140.126140.488090.141938.7140.8500實施例8140.593040.431390.488738.4340.2697實施例9130.404730.442391.138128.7930.4799實施例10140.899240.874590.381338.98240.8498炎可寧片中黃芩苷含量限度(mg/g)=黃芩投料量(g)X黃芩藥材中黃芩苷含量限度(mg/g)X平均收率(90+成品量(g)=310.3gx90mg/gx35.27%+340g=28.97mg/g，即9.85mg/片。由此可知，本品每片含黃茶以黃茶苷(C2孔80n)計不得少于9.85mg。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。10權(quán)利要求1、一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)鑒別a、大黃的鑒別稱取本品粉末0.1g，加甲醇20ml，浸泡1小時，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水10ml使其溶解，再加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品4μl、對照藥材3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸、其體積比為15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；b、黃柏、黃連的鑒別取本品粉末0.3g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使其溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液；吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，置波長為365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點；(2)黃芩苷的含量測定a、供試品溶液的制備取本品細粉0.1g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入50％乙醇50ml，稱定重量；超聲30分鐘，功率260w，頻率40KHz；放冷至室溫，再稱定重量，用50％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；b、對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品14.98mg置于25ml容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml至10ml容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1毫升含59.92μg的對照品溶液；加50％乙醇溶液制成每1ml含黃芩苷90μg的對照品溶液；c、色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為40∶60的甲醇-0.2％磷酸為流動相；控制波長為280nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于3000；d、含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中黃芩苷含量；計算公式炎可寧片中黃芩苷含量限度＝黃芩投料量×黃芩藥材中黃芩苷含量限度×平均收率÷成品量。2、如權(quán)利要求1所述的一種炎可寧制劑的質(zhì)量控制方法，其中本品每片含黃茶以黃茶香計應(yīng)不低于9.85mg。全文摘要本發(fā)明公開了一種消炎抗菌藥物的質(zhì)量控制方法，包括下述步驟(1)鑒別a.大黃的鑒別；b.黃柏、黃連的鑒別。(2)黃芩苷的含量測定a.供試品溶液的制備；b.對照品溶液的制備；c.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶0.2％磷酸(40∶60)為流動相；控制波長為280nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于3000；d.含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中黃芩苷含量。本發(fā)明的方法能定量控制炎可寧制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又操作簡便。文檔編號A61K36/756GK101461859SQ200810068918公開日2009年6月24日申請日期2008年9月19日優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日發(fā)明者劉文煒,楊迺嘉,昕霍,高玉瓊申請人:貴州省科暉制藥廠