專利名稱：：2’,5,6’，7-四羥基二氫黃酮醇及其衍生物用于治療膿毒癥的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種2，，5，6，，7-四羥基二氫黃酮醇及其衍生物用于治療膿毒癥的用途。技術(shù)背景膿毒癥是感染因素介導(dǎo)的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),是燒傷、創(chuàng)傷和感染性疾病患者的常見(jiàn)并發(fā)癥。流行病學(xué)資料顯示，每年全球有超過(guò)1800萬(wàn)的膿毒癥病例，且患者數(shù)目每年以1.0%速度遞增。重癥膿毒癥和膿毒性Y木克是重癥監(jiān)護(hù)病房(intensivecareunits,ICU)病人死亡的首要因素，死亡率高達(dá)50%-60°/。。LPS是G-菌外膜的主要成分，是介導(dǎo)細(xì)菌膿毒癥的重要病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)。LPS進(jìn)入機(jī)體內(nèi)后,首先與內(nèi)毒素結(jié)合蛋白(lipopolysaccharide-bindingprotein,LBP)結(jié)合，在LBP的作用下，LPS與單核/巨噬細(xì)胞膜上的受體CD14結(jié)合形成LPS-CD14復(fù)合物，復(fù)合物中的LPS與跨膜受體TLR4(Tol'llikereceptor4,TLR4)結(jié)合，將信號(hào)轉(zhuǎn)入胞內(nèi)，導(dǎo)致靶細(xì)胞的活化，釋放TNF-cx、IL-6等炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)膿毒癥的發(fā)生。因此，LPS介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)是導(dǎo)致免疫細(xì)胞活化，進(jìn)而介導(dǎo)膿毒癥發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近十余年來(lái)，國(guó)際上膿毒癥的防治研究，主要有抗各種細(xì)胞因子的抗體及其受體拮抗劑，如抗TNF抗體、抗白細(xì)胞介素1(IL-1)抗體、抗IL-6抗體以及N0拮抗劑等。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，上述制劑對(duì)膿毒癥所致的臟器損傷有一定的保護(hù)作用，但在臨床試驗(yàn)中都因療效不確切而未獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)，表明僅針對(duì)某個(gè)或數(shù)個(gè)細(xì)胞因子調(diào)控的策略并不能從根本上解決膿毒癥防治的問(wèn)題。目前，針對(duì)細(xì)菌膿毒癥開發(fā)成功的唯一上市的藥物為重組人活化蛋白C(recombinanthumanactivatedprotein,rhAPC)，APC通過(guò)負(fù)反4赍才卬制凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟竵?lái)調(diào)控凝血過(guò)程，適用于血凝紊亂的膿毒癥病人。但經(jīng)過(guò)6年來(lái)的多國(guó)家多中心雙盲臨床試驗(yàn)，其療效已被否定。中藥黃茶為唇形科植物黃茶(5^Wei7ar/a^/ca/e/w/sGeorgi)的干燥才艮，具有清熱燥濕、瀉火解毒、涼血止血、除熱安胎之功效，是臨床上用于抗菌、消炎的常用中藥。THF是黃茶中含有的一種黃酮類化合物，THF及其衍生物、類似物具有相同的母核結(jié)構(gòu)總結(jié)既往的文獻(xiàn)報(bào)道和專利，二氫黃酮醇類化合物及衍生物、類似物的生物活性主要在于抗氧化、抗肺瘤、抗炎免疫、抗病毒、抗真菌以及防治心血管疾病等。迄今未見(jiàn)THF及其衍生物、類似物中和LPS、制備治療膿毒癥藥物的報(bào)道。本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，相比較于已有藥物，THF及其衍生物、類似物用于中和LPS、制備用于治療膿毒癥的藥物，具有藥物耙點(diǎn)明確、活性高、安全性好的優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇(2，，5，6，，7-tetrahydroxynavanonol，THF)及其書t生物用于治療膿毒癥的用途。采用本發(fā)明所述的2，，5,6，，7-四羥基二氫黃酮醇及其衍生物制備的藥物，用于治療膿毒癥具有毒副反應(yīng)小、療效高的優(yōu)點(diǎn)，可用于膿毒癥的治療。在目前臨床上缺乏有效治療膿毒癥的手段的情況下，應(yīng)用前景好。本發(fā)明的技術(shù)方案是2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇及其衍生物在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述2，，5,6，，7-四羥基二氫黃酮醇，分子式為dAA,分子量為304.1，英文名稱為2，，5,6，，7-tetrahydroxyflava隱ol,英文縮寫為THF。其衍生物、類似物是指以兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過(guò)中央三個(gè)碳原子相互聯(lián)結(jié)而成的一系列二氫黃酮和二氬黃酮醇類化合物。所述2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇的書f生物、類似物的通式為其中A、A、lA、lW洛自獨(dú)立地是一H或一0H;以及A、i洛自獨(dú)立地是一0H。表1為本發(fā)明所述的THF的衍生物、類似物。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>8OHOHOHHOHHOHH9OHOHOHOHOHHOHH10OHOHOHOHOHHHOH11OHOHOHOHHOHHOH12OHOHOHHOHOHHOH13HOHOHHHHHH14HOHOHHHOHHH15HOHOHHOHOHHH16HOHOHOHHHHH17HOHOHHOHHHH18HOHOHOHHOHHH19HOHOHOHHHOHH20HOHOHHOHHOHH21HOHOHOHOHHOHH22HOHOHOHOHHHOH23HOHOHOHHOHHOH24HOHOHHOHOHHOH上述THF與其衍生物化學(xué)結(jié)構(gòu)區(qū)別僅在于酚羥基的位置不同，根據(jù)藥學(xué)上所知的黃酮類化合物構(gòu)效關(guān)系認(rèn)為上述THF的衍生物、類似物與THF在中和LPS、治療膿毒癥方面可具有相同(或相似)的生物活性。本發(fā)明所述的用THF及其衍生物用于治療膿毒癥的藥物，可不經(jīng)口服給藥，以注射劑或輸液劑等形式給藥，給藥量因藥物不同而各有不同，對(duì)成人而言，用藥量為每公斤體重每天l~lOmg為宜。上述THF可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域熟知的天然藥物提取、分離方法從中藥黃茶中獲得，藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員也能夠理解，THF及其衍生物、類似物也可以通過(guò)化學(xué)合成的方法獲得。制備THF的方法，有以下步驟(1)取黃茶水提液，采用大孔吸附樹脂分離法提取、分離，得到含有THF的有效成份的凍干粉；(2)將凍干粉經(jīng)溶解、過(guò)濾后,用超濾膜進(jìn)行分離，收集含有THF的分子量小于5000Da的溶液;(3)將步驟(2)所得的溶液用高效液相色譜儀進(jìn)行液相色譜分離與純化。本發(fā)明以LipidA為靶點(diǎn)的藥物篩選平臺(tái)，利用現(xiàn)代色譜分離方法，從唇形科植物黃茶(5^""/hr/a^3/"/e/w/sGeorgi)的干燥才艮中^是取、分離出凄t個(gè)有效成份，通過(guò)體內(nèi)外藥理試驗(yàn)，篩選出藥理活性最好的有效成份THF?，F(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞活化的抑制作用也呈現(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；在體內(nèi)THF可P爭(zhēng)低LPS血癥模型動(dòng)物血中的LPS水平；對(duì)致死劑量熱滅活大腸埃希氏菌攻擊所致的細(xì)菌膿毒癥模型小鼠具有顯著的保護(hù)作用，并且其理化性質(zhì)穩(wěn)定，毒副作用小，因此可制備成用于膿毒癥治療的藥物。圖1為12種中藥水煎液與LipidA的結(jié)合反應(yīng)曲線，其中各曲線表示如下1.黃茶；2.大黃；3.雷公藤；4.兩面針；5.黃連；6.板藍(lán)根；7.連翹；8.金銀花；9.魚腥草；10.柴胡；11.丹參；12.黃柏；圖2為SbG-1~5與LipidA的結(jié)合反應(yīng)曲線；圖3為5KH、5KL與LipidA的結(jié)合反應(yīng)曲線；圖4為5KL組分的高效液相色譜分析圖；圖5為5KL組分與LipidA的結(jié)合活性;險(xiǎn)測(cè)；圖6為THF對(duì)LPS的中和作用；圖7為THF對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞釋放TNF-a和IL-6的影響；圖8為THF對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響；圖9為THF的體內(nèi)中和LPS作用；圖10為THF對(duì)熱滅活大腸桿菌C5:co//)^r(Xlfi7《攻擊小鼠的保護(hù)作用。具體實(shí)施方式下面的實(shí)施例科可詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇及其衍生物在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的用THF及其衍生物用于治療膿毒癥的藥物，可不經(jīng)口服給藥，給藥量因藥物不同而各有不同，對(duì)成人而言，用藥量為每公斤體重每天l10mg為宜。不經(jīng)口服給藥時(shí)，可以注射劑或輸液劑等形式給藥。制備上述制劑時(shí)，可采用常規(guī)的制注射劑或輸液劑技術(shù)。實(shí)施例1:12種中藥水煎液與LipidA的結(jié)合反應(yīng)測(cè)定結(jié)果1.1實(shí)驗(yàn)方法(1)應(yīng)用生物傳感器技術(shù)，將類脂A(LipidA)包被于親和型特異選擇性生物傳感器IAsysPlus(Affinity—sensorIAsysplus)的才羊品池作為固定相酉己基；使類脂A(LipidA)結(jié)構(gòu)上發(fā)揮重要生物學(xué)作用的陰離子基團(tuán)外露，以此作為與中藥中治療疾病的活性物質(zhì)發(fā)生結(jié)合作用的靶點(diǎn)；(2)制備12種中藥水煎液，分別取5iaL上樣，測(cè)定其與LipidA的結(jié)合反應(yīng)，具體操作步驟如下①結(jié)合反應(yīng)加入pH6.0、20mMPBS45|iL,再加入5pL待測(cè)樣品，結(jié)合反應(yīng)平tf后吸出；②解離反應(yīng)pH6.0、20mMPBS沖洗50juLx3,解離反應(yīng)平衡后吸出；③再生反應(yīng)0.1N的HC150nLx3，再生反應(yīng)平tf后吸出；④PBS沖洗50iaLx3，曲線回至基線后加入45juLPBS和5yL另一待測(cè)樣品，開始新的循環(huán)。；險(xiǎn)測(cè)結(jié)束后，采用FASTplot軟件分析數(shù)據(jù)。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果12種中藥中，黃茶與LipidA結(jié)合活性最高，提示其含抗LPS活性物質(zhì)的可能性較其它中藥大，結(jié)果參見(jiàn)圖1。實(shí)施例2:黃茶抗LPS有效成份THF的提取與分離2.1大孔吸附樹脂分離及活性部位篩選2.1.1實(shí)驗(yàn)方法黃茶約500g，加5.0L蒸餾水浸泡24h，IO(TC煎煮lh,4且濾紙濾過(guò)，9000rpm/min離心35min，收集上清液減壓濃縮至約1.0L;然后上樣于AB-8型大孔吸附樹脂，分別以蒸餾水和10°/。、20%、40°/。、60°/的乙醇依次梯度洗脫，收集各洗脫液，分別減壓濃縮后冷凍抽干，得到5種組分，按洗脫先后順序依次命名為SbG-l~5,將SbG各組分以PBS溶解成2.0g/L,取5上樣，按l.1方法;f企測(cè)其與LipidA的結(jié)合活性。2.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果5種組分中，SbG-4與LipidA結(jié)合活性較高，提示其為SbG組分的主要活性部位，因此，選擇SbG-4進(jìn)一步分離。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖2所示。2.2超濾膜分離及活性部位篩選2.2.1實(shí)驗(yàn)方法SbG-4凍干粉加超純水稀釋成200g/L，經(jīng)O.45pm濾紙過(guò)濾后上樣于分子截流儀，采用UF5K超濾膜(截流分子量=5000Da)進(jìn)行分離，收集分子量小于5000Da的成份。2.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果獲得5KH(分子量〉5000Da)和5KL(分子量<5000Da)2個(gè)組分，按l.l方法4全測(cè)與LipidA的結(jié)合活性，篩選出與LipidA結(jié)合活性較高5KL組分。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖3所示。2.3制備液相色譜分離及活性部位篩選2.3.1實(shí)-險(xiǎn)方法①色譜條件選擇儀器采用Agilent1200Series高效液相色譜儀(分析型)，5KL用流動(dòng)相(0.5%醋酸水溶液:曱醇=75:25)配制成O.5mg/mL濃度。色譜柱ODS/C18柱(150x4.6mm，5|iim);流動(dòng)相0.5%醋酸水溶液曱醇(75:25);4全測(cè)波長(zhǎng)290nm;流速1mL/min;柱溫35°C;進(jìn)樣量10jaL;②高效液相色語(yǔ)制備儀器采用Agilent1100Series高效液相色譜儀(制備型)，根據(jù)①所述色譜條件進(jìn)行放大制備，色譜柱ODS/C18柱(200x20mm,10nm);流動(dòng)相0.5°/。醋酸水溶液曱醇(75:25);才全測(cè)波長(zhǎng)290nm;流速15mL/min;柱溫室溫；進(jìn)樣量20mL;進(jìn)樣濃度200mg/mL;收集各色譜峰餾分，負(fù)壓抽干。得到5種組分，按保留時(shí)間先后順序依次命名為5KL-1~5,將5KL各組分以PBS溶解成1.0g/L,取5inL上樣，按l.1方法檢測(cè)其與LipidA的結(jié)合活性。2.3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果5KL-1~5的保留時(shí)間如說(shuō)明書附圖4所示。其中，5KL-1與LipidA結(jié)合活性較高，表明其為5KL組分的主要活性部位。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖5所示。5KL-l經(jīng)熔點(diǎn)、薄層色譜(ThinLayerChromatography,TLC)和高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)檢觀寸可以確認(rèn)為一單一化合物(純度大于98%)。2.4化合物5KL-1化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定2.4.1實(shí)驗(yàn)方法對(duì)5KL-1進(jìn)行紫外吸收光譜、紅外吸收光譜、核磁共振波譜以及質(zhì)譜4企測(cè)。2.4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物5KL-1,黃色塊狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為221~224。C(分解)。紫外吸收光譜入阻nm324,287(曱醇);快速原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)m/z(%):305.1[M+H]+(100);電子轟擊質(zhì)譜(EI-MS)m/z:304.1(M+);紅外吸收光譜(KBr)cnf1:3392.8(0H),1639.7(C=0)，1467.8(苯環(huán))；'H-NMR(D20)5:5.82(d,1H,J=12.0Hz,H—2),5.49(d,1H,J=12.0Hz,H—3),6.03(d,1H，J=1.8Hz，H-6),5.96(d,1H，J=l.8Hz,H—8)，6.54(t，2H，J=8.4Hz,H-3，，5，)，7.20(d，1H,J=8.4Hz，，H-4，);13C-麗R(D20)5:78.4(2-0，72.0(3-C),201.1(4—C),165.6(5-C),99.6(6—C)，168.6(7-C),98.6(8—C),166.1(9-C),104.1(10-0，111.4(1，—C)，159.7(2，-C,6，—C)，111.0(3，—C,5，一C),134.5(4，-C)。故確定5KL-1化合物為2，，5,6，，7-四羥基二氫黃酮醇(2，，5,6，,7-tetrahydroxyflavanonol，THF)。實(shí)施例3:THF體外中和LPS的活性3.1實(shí)-驗(yàn)方法將相應(yīng)濃度的THF和PMB(均為1.0、2.0、4.0、8.Omg/L)分別與終濃度為0.2ng/mL的LPS37°C孵育30min,LPS對(duì)照組加等量無(wú)熱原水，采用動(dòng)態(tài)法度法鱟試驗(yàn)檢測(cè)孵育后的LPS值，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)4次。具體操作按EDS-99細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定系統(tǒng)說(shuō)明書進(jìn)行。3.2實(shí)r結(jié)果THF具有中和LPS的活性，其中和作用弱于PMB。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明THF在2.Omg/L水平對(duì)0.2ng/ml的LPS有顯著的中和作用(P<0.05)，在8.0mg/L水平其中和作用非常顯著差異(P<0.01)。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖6所示。實(shí)施例4:THF對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞釋放TNF-a和IL-6的影響4.l實(shí)驗(yàn)方法采用DMEM培養(yǎng)液將RAW264.7細(xì)胞稀釋至1x107mL，加入96孔板(200iliL/孔)，在37。C、體積分?jǐn)?shù)為5。/。的C02條件下孵育4h后；更換細(xì)胞上清為200)aL無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)液，加入終濃度為O、10、20、40、80、160mg/L的THF，繼續(xù)孵育O.5h;然后加入LPS(終濃度IOOpg/L),同時(shí)設(shè)不加任何藥物的空白對(duì)照組(medium),繼續(xù)孵育4h;取上清按照ELISA試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行操作，檢測(cè)TNF-ct和IL-6濃度，結(jié)果以均值表示。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果THF在40~160mg/L能夠顯著抑制LPS刺激的TNF-a和IL-6釋放，量效關(guān)系明顯。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖7所示。實(shí)施例5:THF對(duì)細(xì)胞活力影響的測(cè)定(MTT法)5.l實(shí)驗(yàn)方法采用四氮噻唑藍(lán)(MTT)法，用DMEM培養(yǎng)液將RAW264.7細(xì)胞稀釋至lxl0VmL，加入96孔板(200jaL/孔)，置37。C,5%0)2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h后，實(shí)驗(yàn)組依次加入終濃度為0、10、20、40、80、160、32。mg/L的THF;正常對(duì)照組不加任何試劑。各組均設(shè)6個(gè)平行孔。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，棄上清，每孔加入180iLiL培養(yǎng)液和20iLiLMTT溶液(5g/L)，再繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，每孔加入150(iL二甲基亞砜，振蕩10min使結(jié)晶充分溶解，以490nm處測(cè)定的各孔吸光度(OD柳)值表示RAW264.7細(xì)胞活力。5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0~320mg/LTHF對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力無(wú)影響(P>0.05),表明小于320mg/L的THF對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)明顯的毒性作用。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖8所示。實(shí)施例6:THF的體內(nèi)中和LPS作用6.l實(shí)驗(yàn)方法昆明小鼠20只，雌雄各半，稱重后分為生理鹽水對(duì)照組，LPS組和不同劑量THF處理組，每組4只。生理鹽水組由尾靜脈緩'f曼注入生理鹽水200juL/20g，LPS組注入LPS0111:B450jig/kg及生理鹽水100|aL/20g，不同劑量THF處理組于LPS注入后，立即注入IO、20、40mg/kg的THF,每只動(dòng)物液體注入總量為200)aL/20g，30min后，動(dòng)物頸推脫臼處死，心臟取血20juL，生理鹽水l:40稀釋后(為使測(cè)定結(jié)果在儀器設(shè)定的線性范圍)，動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定內(nèi)毒素值。6.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果THF40mg/kg可顯著降低內(nèi)毒素血癥小鼠的LPS水平。結(jié)果示意圖如說(shuō)明書附圖9所示。實(shí)施例7:THF對(duì)熱滅活大腸桿菌U"/"力7TCJJTi7》攻擊小鼠的保護(hù)作用7.1實(shí)—驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)制備熱滅活A(yù)co/7懸液，于波長(zhǎng)600nm處^r測(cè)懸液吸光度值(OD綱值l.01.0xl(TCFU/mL);昆明小鼠100只，雌雄各半，隨機(jī)分為熱滅活五co/7對(duì)照組(A)，THF10mg/Kg(B)、20mg/Kg(C)、40mg/Kg(D)處理組和單純THF組(E)、每組各10只。動(dòng)物稱重后，單純THF組只注入100mg/Kg的THF;熱滅活￡co/7對(duì)照組注入熱滅活A(yù)co//(1.3x1011CFU/Kg);THF處理組于熱滅活i".c。//(1.3xl0"CFU/Kg)注入10min后分別注射10、20、40mg/Kg的THF。每只動(dòng)物液體注入總量為200fiL/20g,觀察72h內(nèi)動(dòng)物的存活情況。7.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果如說(shuō)明書附圖10所示，熱滅活A(yù)co/7對(duì)照組小鼠多數(shù)在14—24h內(nèi)死亡，33h后無(wú)一存活；與熱滅活互co/"于照組相比，THF組小鼠死亡時(shí)間有后延的趨勢(shì)，多數(shù)在24h后死亡，死亡時(shí)間不集中，48h一72h仍有少量小鼠死亡，72h后未再出現(xiàn)動(dòng)物死亡；小鼠存活率隨THF注射劑量的增加而升高，其"h存活率在"一55。/。之間，其中40mg/kg的THF處理組72h存活率達(dá)55。/。，顯著高于熱滅活互c^7對(duì)照組(代0.05),表明THF對(duì)致死劑量熱滅活丑co/7攻擊的小鼠具有保護(hù)作用。此外，單純THF(100mg/Kg)組小鼠72h內(nèi)無(wú)一死亡，表明即使高劑量的THF在小鼠體內(nèi)也無(wú)明顯副作用，結(jié)合體夕卜MTT實(shí)驗(yàn)提示本法制備的THF毒副作用極低。因各組小鼠72h后均未再出現(xiàn)死亡，其生存曲線圖以84h為限制作。結(jié)論2，，5，6，，7-四羥基二氬黃酮醇在體內(nèi)外對(duì)LPS均具有拮抗作用，對(duì)膿毒癥模型小鼠具有保護(hù)作用。本發(fā)明所述THF在體外對(duì)LPS具有直接的中和作用，且呈現(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；THF對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞活化的抑制作用也呈現(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；在體內(nèi)THF可降低LPS血癥模型動(dòng)物血中的LPS水平；對(duì)致死劑量熱滅活大腸埃希氏菌攻擊所致的細(xì)菌膿毒癥模型小鼠具有顯著的保護(hù)作用。從中藥黃芩中提取的2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇(2，，5,6，，7-tetrahydroxyflavanonol，THF)及其衍生物通過(guò)中和內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS),以抑制內(nèi)毒素介導(dǎo)的單核-巨嗟細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，達(dá)到保護(hù)膿毒癥動(dòng)物模型的作用。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非用來(lái)限定本發(fā)明的實(shí)施范圍；如果不脫離本發(fā)明的精神和范圍，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或者等同替換的，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求的保護(hù)范圍當(dāng)中。權(quán)利要求1.一種2’，5，6’，7-四羥基二氫黃酮醇及其衍生物在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述2，，5,6，，7-四羥基二氫黃酮醇的衍生物、類似物的通式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中A、A、A、兄、A、W洛自獨(dú)立地是一H或一OH;以及A、W洛自獨(dú)立i也是一0H。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于用2，，5，6，，7-四羥基二氫黃酮醇及衍生物制備的藥物以注射劑或輸液劑給藥。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于用2，，5,6，，7-四羥基二氬黃酮醇及衍生物制備的藥物用藥量為每公斤體重每天l~10mg。全文摘要本發(fā)明涉及一種2’，5，6’，7-四羥基二氫黃酮醇(2’，5，6’，7-tetrahydroxyflavanonol，THF)及其衍生物用于治療膿毒癥的用途。本發(fā)明從中藥黃芩中提取與分離得到的二氫黃酮醇類化合物THF，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明THF在體外對(duì)LPS具有直接的中和作用，且呈現(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；THF對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞活化的抑制作用也呈現(xiàn)出較好的劑量效應(yīng)關(guān)系；在體內(nèi)THF可降低LPS血癥模型動(dòng)物血中的LPS水平；對(duì)致死劑量熱滅活大腸埃希氏菌攻擊所致的細(xì)菌膿毒癥模型小鼠具有顯著的保護(hù)作用。在目前臨床上缺乏有效治療膿毒癥的手段的情況下，應(yīng)用前景好。文檔編號(hào)A61K31/352GK101264075SQ20081006960公開日2008年9月17日申請(qǐng)日期2008年4月30日優(yōu)先權(quán)日2008年4月30日發(fā)明者伏建峰,鑫劉,紅周,曹紅衛(wèi),寧王,江鄭,鄭新川,魯永玲申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院