專利名稱：：T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用某些二酮哌。秦類來治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病和抑制T-細(xì)胞的激活。本發(fā)明也涉及包含某些二酮哌噢類的藥物組合物并且涉及合成二酮哌嗪類的方法。本發(fā)明還涉及制備蛋白和肽的改良藥物組合物的方法以增加或減少組合物中二酮哌。秦類的含量，并且涉及所得的改良藥物組合物。發(fā)明背景T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病代表了大量的免疫系統(tǒng)疾病。具體地，T-細(xì)胞被認(rèn)為是引發(fā)和保持自身免疫性疾病的細(xì)胞。自身免疫性疾病為只在美國就折磨著數(shù)百萬人的一組80種嚴(yán)重的慢性疾病。自身免疫性疾病的特征在于免疫系統(tǒng)與內(nèi)源性(自身)抗原的反應(yīng)性。這些對(duì)自身抗原的免疫應(yīng)答被自我-反應(yīng)的T-細(xì)胞的持續(xù)或再發(fā)激活所維持，并且直接地或間接地，該自我-反應(yīng)的T-細(xì)胞對(duì)自身免疫性疾病中所見的特征組織損傷和破壞負(fù)責(zé)。盡管已提出了自身免疫性疾病和其他T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的很多種療法，仍然存在對(duì)于其他療法的需要。發(fā)明概述l)本發(fā)明提供治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法。該方法包括對(duì)需要其的動(dòng)物給予有效量的具有下式的二酮哌嗪或其生理學(xué)上可接受的鹽其中R'和R2,可以相同或不同，每個(gè)為(a)氨基酸的側(cè)鏈，其中該氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基異丁酸、2,4-二氨基丁酸、2，3-二氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、絲氨酸、高絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、苯丙氨酸、對(duì)-氨基苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱狀腺素、半胱氨酸、高半胱氨酸、曱硫氨酸、青霉胺或鳥氨酸；然而條件是，當(dāng)R'為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈時(shí)，那么112不能為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈，并且當(dāng)R'為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈時(shí)，R2不能為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈；(b)R'為-CH2-CH2-CH2-或-CHrCH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸，和/或R2為-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸；或(c)氨基酸的側(cè)鏈的衍生物，其中該氨基酸為(a)中所述的那些之一，并且該衍生化的側(cè)鏈具有以下基團(tuán)(i)-NH2基團(tuán)被-NHR3或-N(R3)2基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(ii)-OH基團(tuán)被-0-P03H2或-OR3基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(iii)-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(iv)-COOH基團(tuán)被-CON(R、基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R"可以獨(dú)立地為H或被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(v)-SH基團(tuán)被-S-S-CH2-CH(NH2)-COOH或-S-S-CH2-CHrCH(NH2)-COOH所代替；(vi)-CH2-基團(tuán)被-CH(NH2)-或-CH(OH)-基團(tuán)所代替；(vii)-CH3基團(tuán)被-CH2-NH2或-CH2-OH基團(tuán)所代替；和/或(viii)連在碳原子上的H被卣素所代替。2).根據(jù)l)的方法，其中R1、W或這二者為天冬氨酸的側(cè)鏈、谷氨酸的側(cè)鏈，或者天冬氨酸或谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，該衍生物中-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R4)2基團(tuán)所代替。3).根據(jù)2)的方法，其中R1為天冬氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R、基團(tuán)所代替的天冬氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為丙氨酸的側(cè)4連。4).根據(jù)2)的方法，其中R1為天冬氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R4)2基團(tuán)所代替的天冬氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為酪氨酸的側(cè)《連。5).根據(jù)2)的方法，其中R1為谷氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R、基團(tuán)所代替的谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。6).根據(jù)2)的方法，其中R'為谷氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R基團(tuán)所代替的谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為酪氨酸的側(cè)鏈。7).根據(jù)2)的方法，其中R'為天冬氨酸的或谷氨酸的側(cè)鏈，并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。8).根據(jù)2)的方法，其中R'為天冬氨酸的或谷氨酸的側(cè)鏈，并且R2為酪氨酸的側(cè)《連。9).根據(jù)1)的方法，其中R'和W都為疏水性側(cè)鏈或疏水性側(cè)鏈的衍生物。10).根據(jù)9)的方法，其中(a)R'和R2，可以相同或不同，每個(gè)為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈；(b)R'為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且R2為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸；或(c)R1為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈，并且R"為-CHrCH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸。11).根據(jù)10)的方法，其中R"為甘氨酸的側(cè)鏈，并且R"為亮氨酸的側(cè)鏈。12)根據(jù)10)的方法，其中R'為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且112為苯丙氨酸的側(cè)鏈。13).根據(jù)10)的方法，其中R'為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。14).根據(jù)l)的方法，其中R1、W或這二者為曱硫氨酸的側(cè)鏈、精氨酸的側(cè)4連或這些側(cè)4連的A't生物。15).根據(jù)14)的方法，其中R'為曱硫氨酸的側(cè)鏈，并且W為精氨酸的側(cè)鏈。16).根據(jù)l)~15)中任一項(xiàng)的方法，其中所述動(dòng)物為人。17).根據(jù)1)~15)中任一項(xiàng)的方法，其中所述丁-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病為移植排斥、移植物抗宿主病、不需要的遲發(fā)型超敏反應(yīng)、T-細(xì)胞介導(dǎo)的肺部疾病或自身免疫疾病。18).根據(jù)1)~15)中任一項(xiàng)的方法，其中所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病為多發(fā)性硬化癥、神經(jīng)炎、多發(fā)性肌炎、牛皮癬、白斑病、舍格倫綜合癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、l型糖尿病、自身免疫胰腺炎、炎性腸疾病、克隆病、潰瘍性結(jié)腸炎、腹部疾病、腎小球腎炎、硬皮病、結(jié)節(jié)病、自身免疫性曱狀腺病、橋本曱狀腺炎、格雷夫斯病、重癥肌無力、艾迪生病、自身免疫眼色素視網(wǎng)膜炎、尋常性天皰瘡、原發(fā)性膽汁性肝硬變、惡性貧血、或全身性紅斑狼瘡。19).根據(jù)1)~15)中任一項(xiàng)的方法，其中所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病為肺纖維化或特發(fā)性肺纖維化。20)本發(fā)明也提供抑制T-細(xì)胞激活的方法。該方法包括對(duì)需要其的動(dòng)物給予有效量的式I二酮哌。秦或其生理學(xué)上可接受的鹽。21).根據(jù)20)的方法，其中R1、W或這二者為天冬氨酸的側(cè)鏈、谷氨酸的側(cè)鏈或者天冬氨酸或谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，該衍生物中-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R4)2基團(tuán)所代替。22).根據(jù)21)的方法，其中R1為天冬氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-(300113基團(tuán)或-(:0!^(114)2基團(tuán)所代替的天冬氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。23).根據(jù)21)的方法，其中R1為天冬氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-000113基團(tuán)或-(^^(114)2基團(tuán)所代替的天冬氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為酪氨酸的側(cè)鏈。24).根據(jù)21)的方法，其中R1為谷氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R4)2基團(tuán)所代替的谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。25).根據(jù)21)的方法，其中R1為谷氨酸的側(cè)鏈或-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)或-CON(R、基團(tuán)所代替的谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，并且R2為酪氨酸的側(cè)鏈。26).根據(jù)21)的方法，其中R1為天冬氨酸的或谷氨酸的側(cè)鏈，并且112為丙氨酸的側(cè)鏈。27).根據(jù)21)的方法，其中R1為天冬氨酸的或谷氨酸的側(cè)鏈，并且112為酪氨酸的側(cè)鏈。28).根據(jù)21)的方法，其中R'和R2都為疏水性側(cè)鏈或疏水性側(cè)鏈的杉亍生物。29).根據(jù)28)的方法，其中(a)R"和R2，可以相同或不同，每個(gè)為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈；(b)R1為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且R2為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸；或(c)R1為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈，并且I^為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸。30),根據(jù)29)的方法，其中R"為甘氨酸的側(cè)鏈，并且R"為亮氨酸的側(cè)鏈。31).根據(jù)29)的方法，其中R'為-CH2-CHrCH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸并且R2為苯丙氨酸的側(cè)鏈。32).根據(jù)29)的方法，其中R1為-C!VCH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸并且R2為丙氨酸的側(cè)鏈。33).根據(jù)20)的方法，其中R'、112或這二者為甲硫氨酸的側(cè)鏈、精氨酸的側(cè)鏈或這些側(cè)鏈的衍生物。34).根據(jù)33)的方法，其中R1為曱硫氨酸的側(cè)鏈，并且R2為精氨酸的側(cè)鏈。35).根據(jù)20)~34)中任一項(xiàng)的方法，其中所述動(dòng)物為人。36),根據(jù)20)~34)中任一項(xiàng)的方法，其中所述二酮旅噢用于治療至少是部分地由于T-細(xì)胞的激活而？I起或加重的炎癥或炎性疾病。37)本發(fā)明還提供包含藥學(xué)上可接受的載體和具有下式的二酮哌。秦或其生理學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物RS和R6，可以相同或不同，每個(gè)為(a)氨基酸的側(cè)鏈，其中該氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基異丁酸、2,4-二氨基丁酸、2,3-二氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、絲氨酸、高絲氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、笨丙氨酸、對(duì)-氨基苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱狀腺素、或鳥氨酸；然而條件是，當(dāng)W為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈時(shí)，那么W不能為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈，并且當(dāng)RS為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈時(shí)，W不能為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈；(b)R5為-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸，和/或R6為-CHrCH2-CH2-或-CH2-CH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸；或(c)氨基酸的側(cè)鏈的衍生物，其中該氨基酸為(a)中所述的那些之一，并且該衍生化的側(cè)鏈具有以下基團(tuán)(i)-NH2基團(tuán)被-NHR3或-N(R3)2基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(ii)-OH基團(tuán)被-0-P03H2或-OR3基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(iii)-CH2-基團(tuán)被-CH(NH2)-或-CH(OH)-基團(tuán)所代替；(iv)-CH3基團(tuán)被-CH2-NH2或-CH2-OH基團(tuán)所代替；和/或其中:(v)連在碳原子上的H被卣素所代替。38).根據(jù)37)的組合物，其中115和W都為疏水性側(cè)鏈或疏水性側(cè)鏈的衍生物。39).根據(jù)38)的組合物，其中(a)RS和R6，可以相同或不同，每個(gè)為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈；(b)R5為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且R6為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸；或(c)R5為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈，并且I^為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸。40).根據(jù)39)的組合物，其中RS為甘氨酸的側(cè)鏈，并且116為亮氨酸的側(cè)《連。41).根據(jù)39)的組合物，其中RS為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且W為苯丙氨酸的側(cè)鏈。42)根據(jù)39)的組合物，其中RS為-CH2-CH2-CH2-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸，并且W為丙氨酸的側(cè)鏈。43).根據(jù)37)的組合物，其中R5、116或這二者為曱硫氨酸的側(cè)鏈、精氨酸的側(cè)鏈或這些側(cè)鏈的衍生物。44).根據(jù)43)的組合物，其中RS為曱硫氨酸的側(cè)鏈，并且R"為精氨酸的側(cè)鏈。45)本發(fā)明提供治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的另一種方法。該方法包括對(duì)需要其的動(dòng)物給予有效量的包含在動(dòng)物中正常發(fā)現(xiàn)的蛋白或肽的藥物組合物，所述蛋白或肽已經(jīng)被處理了，使所述組合物也包含至少一種衍生于該蛋白或肽的二酮哌。秦。46)根據(jù)45)的方法，其中所述蛋白為白蛋白。47)根據(jù)45)的方法，其中所述蛋白為免疫球蛋白。48)根據(jù)45)的方法，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。49)根據(jù)45)~48)中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物組合物為口服給藥。50)根據(jù)45)~48)中任一項(xiàng)的方法，其中所述動(dòng)物為人，并且所述蛋白或肽為人蛋白或肽。51)本發(fā)明還提供一種抑制T-細(xì)胞激活的方法。該方法包括對(duì)需要其的動(dòng)物給予有效量的包含在動(dòng)物中正常發(fā)現(xiàn)的蛋白或肽的藥物組合物，所述蛋白或肽已經(jīng)被處理了，使所述組合物也包含至少一種衍生于該蛋白或肽的二酮口底喚。52)根據(jù)51)的方法，其中所述蛋白為白蛋白。53)根據(jù)51)的方法，其中所述蛋白為免疫球蛋白。54)根據(jù)51)的方法，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。55)根據(jù)51)54)中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物組合物為口服給藥。56)根據(jù)51)54)中任一項(xiàng)的方法，其中所述動(dòng)物為人，并且所述蛋白或肽為人蛋白或肽。57)此外，本發(fā)明提供合成二酮哌嗪類的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在有效地引起二酮哌嗪形成的條件下加熱蛋白或肽溶液。在第二個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在有效產(chǎn)生二酮哌嗪類的條件下，使蛋白或肽溶液與切斷該蛋白或肽的兩個(gè)N-末端或兩個(gè)C-末端氨基酸的酶相接觸。58)根據(jù)57)的方法，其中所述蛋白為白蛋白。59)根據(jù)57)的方法，其中所述蛋白為免疫球蛋白。60)根據(jù)57)的方法，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。61)根據(jù)57)的方法，其中所述二酮哌嗪從溶液中純化。62)根據(jù)57)~61)中任一項(xiàng)的方法，其中所述加熱為將蛋白或肽溶液于6(TC加熱4天。63)根據(jù)57)的方法，其中所述酶為二肽基肽酶。64)根據(jù)57)的方法，其中所述酶為羧肽酶。65)本發(fā)明也提供蛋白或肽的改良藥物組合物。所述改良在于該組合物包含降低含量的二酮哌嗪類。66)根據(jù)65)的組合物，其中所述蛋白為白蛋白。67)根據(jù)65)的組合物，其中所述蛋白為免疫球蛋白。68)根據(jù)65)的組合物，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。69)此外，本發(fā)明提供制備蛋白或肽的改良藥物組合物的方法。該方法包括從該組合物中除去在該組合物中存在的至少一些二酮哌嗪類。70)根據(jù)69)的方法，其中所述蛋白為白蛋白。71)根據(jù)69)的方法，其中所述蛋白為免疫球蛋白。72)根據(jù)69)的方法，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。73)本發(fā)明還提供制備蛋白或肽的改良藥物組合物的方法。該方法包括將該蛋白或肽的溶液進(jìn)行處理以提高該組合物中二酮哌。秦類的含量。74)根據(jù)73)的方法，其中所述溶液在引起二酮哌。秦類形成的條件下加熱。75)根據(jù)74)的方法，其中所述溶液于60。C加熱4天。76)根據(jù)73)的方法，其中在有效地產(chǎn)生二酮哌。秦類的條件下所述溶液與切斷該蛋白或肽的兩個(gè)N-末端或兩個(gè)C-末端氨基酸的酶相接觸。77)根據(jù)76)的方法，其中所述酶為二肽基肽酶。78)根據(jù)76)的方法，其中所述酶為羧肽酶。79)根據(jù)73)的方法，其中所述蛋白為白蛋白。80)根據(jù)73)的方法，其中所述蛋白為免疫球蛋白。81)根據(jù)73)的方法，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。82)本發(fā)明也提供蛋白或肽的改良藥物組合物。所述改良在于該組合物包含增加含量的二酮哌嗪類。83)根據(jù)82)的組合物，其中所述蛋白為白蛋白。84)根據(jù)82)的組合物，其中所述蛋白為免疫球蛋白。85)根據(jù)82)的組合物，其中所述蛋白為促紅細(xì)胞生成素。86)根據(jù)82)-85)中任一項(xiàng)的組合物，其適合于口服給藥。圖1:TriPS(從流感免疫供體中分離得的對(duì)血凝素特異性的CD牡T-細(xì)胞株)細(xì)胞的計(jì)數(shù)對(duì)ERK1/2濃度描記圖，該TriPS細(xì)胞是以抗-CD30KT3抗體刺激后第20天分離得到的并且用25ng佛波豆蔻酸(phorbalmyristicacid)(PMA),以1:10稀釋的HC-RBL(被加熱的人初乳部分，分子量小于3kD并且含有MR-DKP)以及0.5mM的DA-DKP于37。C培養(yǎng)了15分鐘。圖2:柱形圖顯示的是用抗-CD30KT3抗體刺激后12天對(duì)TriPS細(xì)胞分泌肺瘤壞死因子ot(TNFot)和IL-16的抑制。顯示了人初乳(HC)2626(含有MR-DKP)DA-DKP帶對(duì)TNFa和IL-16L兩者分泌的抑制。使用以1:100和1:1000稀釋的HC2626觀察到的最大釋放是歸因于高濃度的人初乳的裂解作用。使用0.5mM的DA-DKP時(shí)沒有，見察到裂解，并且TNFa和IL-16L分泌被減少了。圖3:柱形圖顯示用抗CD3OKT3抗體刺激后10天，對(duì)TriPS細(xì)胞分泌TNFa的抑制。顯示了需要進(jìn)一步考察HCRBL和DA-DKP的如同用HC2626所見的滴定反應(yīng)(titratableresponseasseenwithHC2626)?？赡鼙砻髁藵撛诘幕钚?Mayindicatedapotentactivity)。圖4:柱形圖顯示用抗-CD30KT3抗體刺激后不同時(shí)間對(duì)TriPS細(xì)胞分泌TNFct的抑制。顯示了在刺激周期的早期，DA-DKP和HCRBL是抑制作用的，而在該周期的晚期(第14天)是激活作用的。HC2626在所有時(shí)間都是抑制作用的，這大概是歸因于其他的成分。圖5:柱形圖顯示對(duì)用抗-CD3OKT3抗體刺激后第7-10天的H4#9.25細(xì)胞(從多發(fā)性硬化癥病人的尸體腦組織中分離得的對(duì)髓鞘堿性蛋白特異性的CD4+T-細(xì)胞抹)分泌TNFot抑制情況。顯示了在TNFa從該丁-細(xì)胞抹中的分泌也被HC2626、HCRBL和DA-DKP所抑制。目前優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)說明本發(fā)明提供治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法。本文所用的"治療"是指減少(完全地或部分地)疾病的癥狀、持續(xù)時(shí)間或嚴(yán)重性，包括治愈該疾病，或者防止該疾病。T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病包括移植排斥、移植物抗宿主病、不需要的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(比如遲發(fā)型變應(yīng)性反應(yīng))、T-細(xì)胞介導(dǎo)的肺部疾病和自身免疫疾病。丁-細(xì)胞介導(dǎo)的肺部疾病包括結(jié)節(jié)病、超敏性肺炎、急性間質(zhì)性肺炎、肺泡炎、肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化和以炎性肺損傷為特征的其他疾病。自身免疫疾病包括多發(fā)性硬化癥、神經(jīng)炎、多發(fā)性肌炎、牛皮癬、白斑病、舍格倫綜合癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、l型糖尿病、自身免疫胰腺炎、炎性腸疾病(例如克隆病和潰瘍性結(jié)腸炎)、腹部疾病、腎小球腎炎、硬皮病、結(jié)節(jié)病、自身免疫性曱狀腺病(例如橋本曱狀腺炎和格雷夫斯病)、重癥肌無力、艾迪生病、自身免疫眼色素視網(wǎng)膜炎(uveoretinitis)、尋常性天皰瘡、原發(fā)性膽汁性肝硬變、惡性貧血、和全身性紅斑狼瘡。通過對(duì)需要其的動(dòng)物給予有效量的具有下式的二酮艱。秦類或其生理學(xué)上可接受的鹽來治療所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病R'和R2，可以相同或不同，每個(gè)為(a)氨基酸的側(cè)鏈，其中該氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基異丁酸、2，4-二氨基丁酸、2,3-二氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、絲氨酸、高絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、苯丙氨酸、對(duì)-氨基苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲狀腺素、半胱氨酸、高半胱氨酸、曱硫氨酸、青霉胺或鳥氨酸；然而條件是，當(dāng)R"為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈時(shí)，那么112不能為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈，并且當(dāng)R'為賴氨酸或鳥氨酸的側(cè)鏈時(shí)，R2不能為天冬酰胺或谷氨酰胺的側(cè)鏈；(b)R1為-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸，和/或R2為-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CH(OH)-CH2-并且與鄰近環(huán)氮形成脯氨酸或羥脯氨酸；或(c)氨基酸的側(cè)鏈的衍生物，其中該氨基酸為(a)中所述的那些之一，并且該衍生化的側(cè)鏈具有以下基團(tuán)(i)-NH2基團(tuán)被-NHR3或-N(R、基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R"可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(ii)-OH基團(tuán)被-0-P03H2或-OR3基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(iii)-COOH基團(tuán)被-COOR3基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R3可以獨(dú)立地為被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(iv)-COOH基團(tuán)被-CON(R"2基團(tuán)所代替，其中每個(gè)R"可以獨(dú)立地為H其中或被取代的或未被取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、烷芳基、芳烷基或雜芳基；(v)-SH基團(tuán)被-S-S-CH2-CH(NH2)-COOH或-S-S-CH2-CH2-CH(NH2)-COOH所代替；(vi)-CH2-基團(tuán)被-CH(NH2)-或-CH(OH)-基團(tuán)所代替；(vii)-CH3基團(tuán)被-CH2-NH2或-CH2-OH基團(tuán)所代替；和/或(viii)連在碳原子上的H被卣素所代替。"被代替"是指，根據(jù)氨基酸的側(cè)鏈的式子，所述特定基團(tuán)被所述其他特定基團(tuán)代替。例如，異亮氨酸的側(cè)鏈的式子為-CH(CH3)-CH2-CH3。如果該末端-CH3基被-CH2-OH基代替，那么所得的衍生異的亮氨酸側(cè)鏈的式子就是-CH(CH3)-CH2-CH2-OH。作為另一個(gè)實(shí)例，丙氨酸的側(cè)鏈?zhǔn)阶訛?CH3。如果所述氬原子之一被氯原子代替，那么所得的衍生丙氨酸的側(cè)鏈就是-CH2-Cl。注意甘氨酸的側(cè)鏈?zhǔn)?H,并且如果該H被氯(或其他卣素)原子代替，所得的側(cè)鏈就是-Cl，該氯原子連到環(huán)碳上(例如R1=-Cl)。優(yōu)選的是如下二酮哌嗪類，其中R1、R2或這二者為天冬氨酸或谷氨酸的側(cè)鏈，或這樣側(cè)鏈的-COOH基團(tuán)被-COOR"基團(tuán)或-CON(R、基團(tuán)所代替的衍生物，其中R和R"在上面定義了。在這組化合物中，最優(yōu)選的是如下二酮哌嗪類，其包括天冬氨酸和丙氨酸的側(cè)鏈(Asp-AlaDKP或DA-DKP)、谷氨酸和丙氨酸的側(cè)鏈(Glu-AlaDKP或EA-DKP)、酪氨酸和天冬氨酸的側(cè)鏈(Tyr-AspDKP或YD-DKP)、酪氨酸和谷氨酸的側(cè)鏈(Tyr-GluDKP或YE-DKP)和這四種二酮哌。秦類的天冬氨酸或谷氨酸的側(cè)鏈的衍生物，這些衍生物中-COOH基團(tuán)^皮-COOR3基團(tuán)或-CON(R4)2基團(tuán)所代替，其中R3和R4在上面定義了。還有，優(yōu)選的是如下二酮哌嗪類，其中R'和I^二者都為疏水性側(cè)鏈(例如笨丙氨酸的側(cè)鏈)或疏水性側(cè)鏈衍生物。"疏水性側(cè)鏈衍生物"是指被衍生的側(cè)鏈為疏水性。具體地，優(yōu)選的是如下二酮哌。秦類，其中R'和/或I^可以相同或不同，R"和I^各為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、a-氨基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸或苯丙氨酸的側(cè)鏈、和/或R1和/或R2為-012-012-0"12-并且與鄰近的氮原子一起形成脯氨酸。這組化合物中，最優(yōu)選的是包含甘氨酸和亮氨酸(Gly-LeuDKP或GL-DKP)、脯氨酸和苯丙氨酸(Pro-PheDKP或PF-DKP)、以及丙氨酸和脯氨酸(Ala-ProDKP或AP-DKP)的側(cè)鏈的二酮哌。秦類。此外優(yōu)選的二酮哌噪類為如下那些，其中R1、R"或這二者為曱硫氨酸的側(cè)鏈、精氨酸的側(cè)鏈或這些側(cè)鏈的衍生物。這組中最優(yōu)選的是R1為曱硫氨酸的側(cè)鏈并且R2為精氨酸的側(cè)鏈的二酮哌。秦類(Met-ArgDKP或MR-DKP)。氨基酸的"側(cè)鏈"是指連接到上面列出所有氨基酸的共同骨架NH2-CH-COOH上的氨基酸部分。例如，甘氨酸的側(cè)鏈為-H，丙氨酸的側(cè)鏈為-CH3，以及絲氨酸的側(cè)鏈為-CH2OH。"疏水性"是指側(cè)鏈或側(cè)鏈衍生物在生理pH下不帶電并且被水性溶液排斥。"烷基，，是指含有1~10個(gè)，優(yōu)選1~6個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈烴。"低級(jí)烷基"是指含有1-6個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈烴。"環(huán)烷基，，是指含有至少一個(gè)環(huán)的飽和環(huán)烴，每個(gè)環(huán)含有至少三個(gè)碳原子。優(yōu)選地，該環(huán)烷基含有一個(gè)48個(gè)碳原子的環(huán)。"雜環(huán)烷基"是指至少一個(gè)環(huán)的一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳原子被O、S或N代替的環(huán)烷基。"芳基'，是指具有至少一個(gè)芳香環(huán)(例如苯基)的芳香基團(tuán)。"烷芳基，，是指H被芳基代替的低級(jí)烷基(例如-CH2-C6H5或-CH3CH(C6H5)CH3)。"芳烷基，，是指H被低級(jí)烷基代替的芳基(例如-C6H4-CH3)。"雜芳基"是指至少一個(gè)環(huán)的一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳原子被O、S或N代替的芳基。"被取代"是指所述部分被選自下述基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代-OH、NH2、-SH、-COOH和/或鹵素原子。"卣素"是指氯、氟、溴或碘。優(yōu)選的是氯或溴。式I的二酮哌。秦類在治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病方面是有效的，因?yàn)樗鼈円种芓-細(xì)胞的活化。因此，式I的二酮哌嗪類也能夠用來治療由活化的T-細(xì)胞引起的、加重的、或牽涉到T-細(xì)胞的炎癥或炎性疾病。本文所用的"抑制"是指降低(完整地或部分地)或防止。制備二酮哌嗪類的方法是本領(lǐng)域中所熟知的，并且這些方法可以用來合成本發(fā)明的二酮哌嗪類。見例如美國專利號(hào)4,694,081、5,817,751、5,990,112、5,932,579和6,555,543,美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/0024180,PCT申請(qǐng)WO96/00391和W097/48685,以及Smith等Bioorg.Med.Chem.Letters,8，2369-2374(1998),這些文獻(xiàn)完整公開內(nèi)容在此S1入作為參考。例如，二酮哌嗪類能夠通過首先合成二肽來制備。該二肽能夠通過本領(lǐng)域中熟知的方法使用L-氨基酸、D-氨基酸或D-和L-氨基酸的組合來合成。優(yōu)選的是固相多肽合成方法。當(dāng)然，二肽也能夠從大量的來源處商業(yè)獲得，包括DMISynthesisLtd.,Cardiff,UK(委托合成)，Sigma-Aldrich，St.Louis,MO(主要地委托合成)，PhoenixPharmaceuticals,Inc.,Belmont,CA(委托合成)，F(xiàn)isherScientific(委托合成)和AdvancedChemTech,Louisville,KY.所述二肽被合成或買到之后，被環(huán)化形成二酮哌。秦。這能夠通過許多種技術(shù)來完成。例如，美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/0024180說明了一種環(huán)化二肽的方法。簡要地，將所述二肽在有機(jī)溶劑中加熱同時(shí)通過蒸餾除去水份。優(yōu)選地，該有機(jī)溶劑為水低沸共沸物，比如乙腈、烯丙醇、苯、苯曱醇、正-丁醇、2-丁醇、叔-丁醇、乙酸丁酯、四氯化碳、氯苯氯仿、環(huán)己胺、1,2-二氯乙烷、二乙基乙縮醛、二甲基乙縮醛、乙酸乙酯、庚烷、曱基異丁基酮、3-戊醇、型。反應(yīng)優(yōu)選在50200。C進(jìn)行，更優(yōu)選80150。C。環(huán)化發(fā)生所在的pH范圍能夠容易地被本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定。有利的是，pH為2-9，優(yōu)選3-7。當(dāng)所述二肽的一個(gè)或兩個(gè)氨基酸在其側(cè)鏈上具有或衍生為具有羧基時(shí)(例如天冬氨酸或谷氨酸)，所述二肽優(yōu)選按照美國專利號(hào)6,555,543所說明的進(jìn)行環(huán)化。簡要地，將側(cè)鏈羧基仍然被保護(hù)著的該二肽在中性條件下加熱。典型地，將該二肽于大約80°C~大約180。C加熱，優(yōu)選大約12(TC。所述溶劑為中性溶劑。例如，所述溶劑可以包括醇(比如丁醇、曱醇、乙醇、和高級(jí)醇，但不為苯酚)和共沸共溶劑(比如曱苯、苯、或二曱苯)。優(yōu)選地，所述醇為丁—2-醇，并且所述共沸共溶劑為曱苯。加熱一直持續(xù)到反應(yīng)完全，并且這些時(shí)間能夠憑經(jīng)驗(yàn)確定。典型地，所述二肽通過回流大約8~24小時(shí)優(yōu)選18小時(shí)來環(huán)化。最后，將所述保護(hù)基團(tuán)從該二酮哌嗪上除去。在這樣做的時(shí)候，應(yīng)該避免使用強(qiáng)酸(無機(jī)酸，比如硫酸或鹽酸)、強(qiáng)堿(堿金屬的堿(alkalinebases)，比如氫氧化鉀或氫氧化鈉)、和強(qiáng)還原劑(例如氫化鋁鋰)，以保持最終化合物的手性。固相樹脂上制備的二肽能夠通過一步來環(huán)化并從樹脂上釋放。見例如美國專利號(hào)5,817,751。例如，將附有N-烷基化二肽的樹脂懸浮于有乙酸(例如1%)或三乙胺(例如4%)存在的曱苯或曱苯/乙醇中。典型地，優(yōu)選堿性環(huán)化條件，因?yàn)樗鼈兙哂懈斓沫h(huán)化時(shí)間。為了制備式I和II的氨基酸的側(cè)鏈被衍生的二酮哌。秦，在二肽的合成中可以使用氨基酸衍生物，二肽能夠被衍生化和/或二酮哌。秦類能夠被衍生化，如本領(lǐng)域公知的那樣。見例如上述^1用的那些參考文獻(xiàn)。環(huán)化二肽和制備二酮哌。秦類的其他方法是本領(lǐng)域已知的，并且能夠在對(duì)本發(fā)明實(shí)踐中有用的二酮哌嗪類的制備中使用。見例如上述引用的那些參考文獻(xiàn)。此外，適合于在本發(fā)明中使用的很多二酮哌。秦類能夠按照下面的說明由蛋白和肽制備。還有，在本發(fā)明實(shí)踐中使用的二酮哌。秦類能夠從例如DMISynthesisLtd.,Cardiff,UK(委托合成)商業(yè)獲得。式I和II的二酮。底唪類除包括能夠通過變化個(gè)體手性中心、軸線或表面的構(gòu)型得到的之外，還包括所有可能的立體異構(gòu)體。用另一種說法，式I和II的二酮哌溱類包括所有可能的非對(duì)映體和所有的光學(xué)異構(gòu)體(對(duì)映體)。本發(fā)明二酮哌。秦類的生理學(xué)上可接受的鹽也可以在本發(fā)明實(shí)踐中使用。生理學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)的非毒性鹽，比如衍生于無機(jī)酸(比如鹽酸的、氫溴酸的、硫酸的、磷酸的、硝酸等)的鹽，衍生于有機(jī)酸(比如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸(glycolic)、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯曱酸、水楊酸、草酸、抗壞血酸等)的鹽，或衍生于堿(比如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的或衍生于N,N-二芐基乙二胺、D-葡糖胺或乙二胺的有機(jī)陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)。這些鹽以常規(guī)的方法制備，例如通過用酸中和所述化合物的游離堿形式。如上說明的，本發(fā)明的二酮哌。秦或其生理學(xué)上可接受的鹽能夠用來治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或用來抑制T-細(xì)胞的活化。為了這樣做，對(duì)需要治療的動(dòng)物給予二酮哌。秦或其生理學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選地，所述動(dòng)物為哺乳動(dòng)物，比如家兔、山羊、狗、貓、馬或人。本發(fā)明化合物的有效劑型、給藥方式和劑量可以憑經(jīng)驗(yàn)決定，并且做出這樣決定是在本領(lǐng)域的技術(shù)之內(nèi)的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解劑量將隨著具體使用的化合物、所要治療的疾病或病癥、疾病或病癥的嚴(yán)重性、給予的途徑、化合物的排泄速度、治療的持續(xù)時(shí)間、對(duì)所述動(dòng)物給予的其他藥物的鑒定、所述動(dòng)物的年齡、尺寸和種類等醫(yī)藥和獸醫(yī)領(lǐng)域公知的因素而變化。一般地，本發(fā)明化合物的適合日劑量為該化合物有效產(chǎn)生治療效果的最低劑量。然而，該日劑量將由主治醫(yī)師或獸醫(yī)在合適的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)決定。如果期望，有效日劑量可以以二、三、四、五、六或更多的分次劑量全天以適當(dāng)?shù)拈g隔地分別地給予。該化合物的給予應(yīng)當(dāng)持續(xù)到達(dá)到了可接受的應(yīng)答為止。本發(fā)明化合物(即二酮哌嗪類和其生理學(xué)上可接受的鹽)可以以任何適合的給藥途徑給予治療的動(dòng)物患者，給藥途徑包括口服、經(jīng)鼻、直腸、陰道、非經(jīng)腸(例如靜脈、脊柱內(nèi)、腹腔、皮下、或肌肉)、腦內(nèi)、經(jīng)皮、顱內(nèi)、大腦內(nèi)、和局部(包括向頰和舌下)給藥。優(yōu)選的給藥途徑為口服和靜脈給藥。盡管單獨(dú)給予本發(fā)明化合物是可能的，仍然優(yōu)選以藥物制劑(組合物)的形式給予該化合物。本發(fā)明藥物組合物包括在一種或多種藥學(xué)上可接受的栽體以及任選地一種或多種其他化合物、藥物或其他材料的混合物中作為活性成分的本發(fā)明一種化合物或多種化合物。每種載體必須是"可接受的"意味著與制劑中的其他成分相容并且對(duì)所述動(dòng)物無害。藥學(xué)上可接受的載體在本領(lǐng)域中是熟知的。不管選擇何種給藥途徑，本發(fā)明化合物都通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)方法來制成藥學(xué)上可接受的劑型。見例如Remington'sPharmaceuticalSciences。適合于口服給予的本發(fā)明制劑可以為膠嚢、扁膠嚢、丸劑、片劑、散劑、顆粒劑的形式或作為溶液或在水性或非水性液體中的懸浮劑、或水包油或油包水乳劑的形式，或作為酏劑或糖漿的形式，或錠劑(使用惰性基質(zhì)，比如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)等的形式，每個(gè)含有預(yù)定量的本發(fā)明一種或多種化合物作為活性成分。本發(fā)明的一種或多種化合物也可以作為大丸、藥糖劑、或膏給予。口服給藥的本發(fā)明的固體劑型中(膠嚢、片劑、丸劑、錠劑、散劑、顆粒劑等)，活性成分(即一種或多種本發(fā)明的二酮哌嗪類和/或其生理學(xué)上可接受的鹽)與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體相混合，比如檸檬酸鈉或璘酸二鈣，和/或下列任一(l)填充劑或補(bǔ)充劑、比如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和/或硅酸；(2)粘合劑，比如，例如羧曱基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)濕潤劑，比如甘油；(4)崩解劑，比如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽、和碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，比如石蠟；(6)吸收促進(jìn)劑，比如季胺類化合物；(7)濕潤劑，比如，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，比如高呤土和膠質(zhì)陶土；(9)潤滑劑，比如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和其混合物；以及(10)著色劑。在膠嚢、片劑和丸劑的情況下，該藥物組合物也可以包含緩沖劑。相似類型的固體組合物可以用作填裝入使用乳糖或乳糖類(milksugars)及高分子量聚乙二醇等輔料的軟和硬明膠膠嚢的填料。片劑可以任選地與一種或多種配合劑一起壓制或模塑來制備。壓制的片劑可以使用粘合劑(例如明膠或羥丙曱基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如乙醇酸淀粉鈉或交聯(lián)羧曱基纖維素鈉)、表面活性劑或分的粉末化合物混合物進(jìn)行模塑來制備。本發(fā)明藥物組合物的片劑和其他固體劑型，比如錠劑、膠囊、丸劑和顆粒劑，可以任選地用包衣和殼來壓痕或制備，比如腸溶衣和藥學(xué)制劑領(lǐng)域中熟知的其他包衣。它們也可以制劑以提供活性成分的緩慢或控制釋放，在其中使用例如不同比例的羥丙曱基纖維素以提供期望的釋放分布型、其他聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球。它們可以例如通過除菌過濾器過濾來滅菌。這些組合物也可以任選地含有遮光劑并且也可以是只在或優(yōu)先在胃腸道的某個(gè)部分任選地以延遲的方式釋放活性成分的組合物。能夠使用的埋置組合物的實(shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟。該活性成分也能夠存在于微嚢形式中。本發(fā)明化合物的口服給藥液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑和酏劑。除了活性成分外，該液體劑型可以含有本領(lǐng)域中通常的惰性稀釋劑，比如，例如水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，比如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯曱酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其是綿籽、落花生、玉米、種子、橄欖、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氫呋喃基曱醇、聚乙二醇和脫水山梨醇脂肪酸酯和其混合物。除了惰性稀釋劑外，所述口服組合物也能包括輔助劑比如濕潤劑、乳化劑和懸浮化劑、增甜劑、調(diào)味劑、著色劑、加香劑和防腐劑。懸浮劑，除了所述活性成分外，例如可以含有懸浮化劑，如異硬脂醇乙氧基化物、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminummetahydroxide)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠和其混合物。本發(fā)明藥物組合物用于直腸或陰道給藥的制劑可以是栓劑，該栓劑可以通過將一種或多種本發(fā)明化合物與一種或多種適合的非刺激性賦形劑或栽體混合來制備，該賦形劑或載體包含例如可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸鹽，并且在室溫時(shí)是固體而在體溫時(shí)是液體，因此在直腸或陰道腔內(nèi)融化并且釋放活性化合物。本發(fā)明適合陰道給藥的制劑也包括含有本領(lǐng)域公知為適當(dāng)?shù)妮d體的陰道栓劑、擦劑、乳膏劑、凝膠劑、膏劑、泡沫劑或噴霧劑。本發(fā)明化合物用于局部或經(jīng)皮給予的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏劑、膏劑、乳膏劑、洗劑、凝"交劑、容液劑、貼劑、滴劑和吸入劑?；钚猿煞挚梢栽跓o菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體混合，并且與任何需要的緩沖劑或推進(jìn)劑混合。軟膏劑、膏劑、乳膏劑和凝膠劑除了活性成分外還可以包含賦形劑，比如動(dòng)物或植物脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨潤土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或其混合物。散劑和噴霧劑除了活性成分外還能夠含有賦形劑，比如乳糖、滑石粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚胺粉末或這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑能夠還含有常用的推進(jìn)劑比如氯氟烴和揮發(fā)性的未被取代的烴比如丁烷和丙烷。經(jīng)皮貼劑具有提供使本發(fā)明化合物可控遞送到人體的額外優(yōu)點(diǎn)。這樣的劑型能夠通過將一種或多種本發(fā)明化合物溶解、分散或以其他形式？1入到適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)比如彈性基質(zhì)材料中來制備。也能夠用吸收促進(jìn)劑來提高所述化合物透過皮膚的流量。該流量的速度能夠通過提供可控速膜或?qū)⒃摶衔锓稚⒌骄酆衔锘|(zhì)或凝膠中來進(jìn)行控制。藥物制劑包括適合于吸入或吹入給予或者經(jīng)鼻或眼內(nèi)給予的那些。對(duì)于通過吸入給予到上(鼻)或下呼吸道的，本發(fā)明化合物方便地從吹入器、噴霧器或加壓包裝或其他遞送噴霧劑便利的裝置中遞送。加壓包裝可以包含適合的推進(jìn)劑比如二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合的氣體。在加壓氣溶膠的情況下，劑量單位可以通過提供閥以遞送計(jì)量的量的方式來測定?；蛘?，對(duì)于吸入或吹入給藥，所述組合物可以采用干粉的形式，例如本發(fā)明一種或多種化合物與適合的粉末基質(zhì)比如乳糖或淀粉的粉末混合物。該粉末組合物可以以單位劑量的形式存在于例如膠嚢或藥筒或例如明膠或水泡包裝中，該粉末可以在吸入器、吹入器或計(jì)量劑量吸入器的幫助下從上述中給藥。對(duì)于鼻內(nèi)給藥，本發(fā)明化合物可以通過滴鼻或液體噴霧的方法給予，比如憑借塑料瓶噴霧器或計(jì)量劑量吸入器。典型的噴霧器為Mistometer(Wintrop)和Medihaler(Riker)。滴劑，比如滴眼劑或滴鼻劑，可以用也包含一種或多種分散劑、增溶劑或懸浮化劑的水性或非水性基質(zhì)來制備。液體噴霧劑方便地從加壓包裝中遞送。滴劑能夠憑借簡單的加蓋滴眼瓶或塑料瓶來給藥，該塑料瓶是以特殊形狀閉合物的方式適應(yīng)于液體內(nèi)容物的滴加。適合于非經(jīng)腸給予的本發(fā)明藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明化合物聯(lián)合一種或多種藥學(xué)上可接受的無菌等滲水性或非水性溶液、分散體、懸浮液或乳劑，或恰恰在使用前可以被再分散到無菌可注射溶液或分散體中的粉末，它們可以含有抗氧劑、緩沖劑、使制劑與受試者血液等滲的溶質(zhì)、或懸浮化劑或增稠劑?？梢栽诒景l(fā)明藥物組合物中使用的適合的水性或非水性載體的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(比如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和其適合的混合物，植物油比如橄欖油和可注射的有機(jī)酯比如油酸乙酯。適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性能夠例如通過使用包衣材料比如卵磷脂、如果是分散體的話通過保持其所需的顆粒大小以及通過使用表面活性劑來保持。這些組合物也可以含有輔助劑比如濕潤劑、乳化劑和分散劑。在組合物中也期望包括等滲劑比如蔗糖、氯化鈉等。此外，延遲吸收劑比如單硬脂酸鋁和明膠的加入可以使該可注射藥物制劑產(chǎn)生延長吸收。在一些情況下，為了延長藥物的效果，期望延緩藥物從皮下或肌肉注射劑中的吸收。這可以通過使用具有弱水溶性的晶形或非晶形物質(zhì)的液體懸浮劑來實(shí)現(xiàn)。那么藥物吸收的速率就依賴于溶出速率，依次地溶出速率可以依賴于晶粒大小和晶型?；蛘?，非經(jīng)腸給予藥物的延遲吸收是通過將該藥物溶解于或懸浮于油載體中來實(shí)現(xiàn)?？勺⑸涞膬?chǔ)庫(depot)制劑通過在生物可降解聚合物比如聚乳酸-聚乙醇酸中形成藥物的微囊基質(zhì)來制備。依賴于藥物與聚合物的比率和具體使用的聚合物的性質(zhì)，能夠控制藥物釋放的速率。其他生物可降解聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。可注射的儲(chǔ)庫制劑也通過將藥物包埋至與機(jī)體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。所述可注射的材料能夠以例如通過除菌過濾器過濾的方法來滅菌。制劑可以存在于單位劑量或多劑量密封的容器例如安瓿和管形瓶中，并且可以以只需恰在使用前添加無菌液體載體例如注射用水的凍干的條件儲(chǔ)存。臨時(shí)注射溶液和懸浮劑可以由上述說明類型的無菌粉末、顆粒劑和片劑來制備。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)適合于本發(fā)明應(yīng)用的二酮哌。秦類出現(xiàn)在含有白蛋白、免疫球蛋白和促紅細(xì)胞生成素的一些可購得的靜脈給予藥物組合物中。在這些藥物制劑中出現(xiàn)的二酮哌。秦類是通過制備這些藥物組合物中常用的加熱步驟來形成的。加熱導(dǎo)致蛋白的兩個(gè)N-末端和/或兩個(gè)C-末端氨基酸斷裂和環(huán)化形成二酮旅。秦類。據(jù)此，在本發(fā)明中使用的二酮哌。秦類能夠通過加熱白蛋白、免疫球蛋白、促紅細(xì)胞生成素和其他蛋白和肽的溶液來制備。例如制備了白蛋白、免疫球蛋白、促紅細(xì)胞生成素或其他蛋白質(zhì)或肽的中性pH磷酸鹽緩沖液溶液。優(yōu)選地，該溶液為濃縮溶液(例如大約100-500mM)以實(shí)現(xiàn)N-末端和/或C-末端氨基酸的質(zhì)子化。將該溶液在60。C加熱大約2小時(shí)~幾天，優(yōu)選大約4天，以引起二酮哌溱類的形成。優(yōu)選地應(yīng)當(dāng)避免蛋白變性。這能夠通過使用縮短的時(shí)間和/或通過加入辛酸或N-乙?；彼岣鞔蠹s0.02M來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明使用的二酮哌嗪類也能夠通過使白蛋白、免疫球蛋白、促紅細(xì)胞生成素或其他蛋白或肽的溶液與能從該蛋白或肽切斷兩個(gè)N-末端氨基酸的酶(例如二肽基肽酶)或能從該蛋白或肽切斷兩個(gè)C-末端氨基酸的酶(羧肽酶)相接觸來制備。適合的二肽基肽酶和羧肽酶可購得，例如購自sigma。反應(yīng)應(yīng)該在pH6~8，優(yōu)選在緩沖液比如磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行，溫度足夠高到加速該反應(yīng)但不夠高到使蛋白變性(例如37。C)。大量的蛋白和肽的氨基S吏序列是已知的，并且能夠使用任一方法來選擇具有期望的N-末端和/或C-末端序列的蛋白或肽用來產(chǎn)生期望的二酮哌嗪(類)。具有期望序列的肽也能夠用熟知的方法來合成并且使用。所述二酮哌。秦類能夠從含有它們的溶液中包括從含有白蛋白、免疫球蛋白和促紅細(xì)胞生成素的藥物組合物中純化，通過熟知的方法比如分子篩析色語法(例如Centricon濾過)、親合色譜(例如使用在珠粒(beads)上附有針對(duì)期望的二酮艱。秦類的一種抗體或多種抗體或針對(duì)截短的蛋白或肽的一種或多種抗體的柱子)、陰離子交換或陽離子交換。純化了的二酮哌。秦類能夠被使用或引入到上述說明的藥學(xué)組合物中。取代對(duì)二酮哌。秦類的純化，包含白蛋白、免疫球蛋白和促紅細(xì)胞生成素和通常在受試動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的其他蛋白和/或肽的藥學(xué)組合物能夠用于治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病并且能夠用來抑制T-細(xì)胞的活化。盡管包含這些蛋白和/或肽的當(dāng)前可購得的組合物如果含有二酮哌。秦類就能夠被使用，但高度優(yōu)選的是在給予這些改良組合物之前按照上述說明對(duì)白蛋白、免疫球蛋白和促紅細(xì)胞生成素和/或其他蛋白和/或肽進(jìn)行處理以提高期望的二酮哌。秦類的含量。動(dòng)物優(yōu)選是人，并且所述蛋白和/或肽優(yōu)選人蛋白和/或肽。組合物的口服給藥是優(yōu)選的。所述蛋白和/或肽組合物的有效劑量能夠憑經(jīng)驗(yàn)決定，并且作這樣的決定是本領(lǐng)域的技術(shù)之內(nèi)的。尤其，為了決定蛋白和/或肽組合物的有效劑量，能夠測量所述組合物中存在的一種或多種二酮哌。桊類的量，并且能夠?qū)?dòng)物給予足夠產(chǎn)生該有效量二酮艱n秦類的量的組合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解劑量將隨著具體使用的化合物、所要治療的疾病或病癥、疾病或病癥的嚴(yán)重性、給予的途徑、化合物的排泄速度、治療的持續(xù)時(shí)間、對(duì)所述動(dòng)物給予的其他藥物的鑒定、所述動(dòng)物的年齡、尺寸和種類等醫(yī)藥和獸醫(yī)領(lǐng)域公知的因素而變化。一般地，蛋白和/或肽組合物的適合日劑量為有效產(chǎn)生治療效果的最低劑量。然而，該日劑量將由主治醫(yī)師或獸醫(yī)在合適的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)決定。如果期望，有效日劑量可以以二、三、四、五、六或更多的分次劑量全天以適當(dāng)?shù)拈g隔分別地給予。給藥應(yīng)當(dāng)持續(xù)到達(dá)到了可接受的應(yīng)答為止。如上說明的，已知可購得的包含白蛋白、免疫球蛋白和促紅細(xì)胞生成素的靜脈給予藥物組合物中發(fā)現(xiàn)了二酮哌嗪類，這些組合物的制備中涉及一個(gè)或多個(gè)加熱步驟(例如滅菌)。二酮哌噪類也可能出現(xiàn)在組合物的制備中涉及加熱步驟的其他蛋白和肽藥物組合物中。如本文說明的，很多二酮哌嗪類具有抑制T-細(xì)胞活化的能力。因此，在很多條件下不希望對(duì)病人給予白蛋白、免疫球蛋白、促紅細(xì)胞生成素或含有二酮哌嗪類的其他蛋白或肽的組合物。例如，白蛋白經(jīng)常給予那些患有外傷的病人，免疫球蛋白經(jīng)常給予患有傳染或免疫缺陷的病人，以及促紅細(xì)胞生成素給予免疫系統(tǒng)經(jīng)常妥協(xié)的貧血癌癥或慢性病病人。據(jù)此，本發(fā)明提供了從這些組合物中除去至少一些優(yōu)選基本上全部除去二酮哌嗪類的方法。該二酮哌嗪類可以按照上面的說明來除去例如分子篩析色譜法(例如Centricon濾過)、親合色譜(例如使用在珠粒上附有針對(duì)期望的二酮哌嗪類的一種抗體或多種抗體或針對(duì)截短的蛋白或肽的一種或多種抗體的柱子)、陰離子交換或陽離子交換以產(chǎn)生白蛋白、免疫球蛋白、促紅細(xì)胞生成素和其他蛋白或肽的改良組合物。實(shí)施例實(shí)施例1:AspAlaDKP(DA陽DKP)和GluAlaDKP(EA-DKP)從大鼠腸的吸收將大鼠腸的幽門括約肌至直腸段游離并通過腸系膜動(dòng)脈用以紅細(xì)胞為基礎(chǔ)的含有牛血清白蛋白的灌流液灌流。用門靜脈插管收集從腸中流出的灌流液并且再循環(huán)(再充氧之后)。平衡期過后，將含有大約lmg的Asp-Ala二酮哌溱(DA-DKP)或1.4mg的Glu-Ala二酮哌嗪(EA-DKP)的溶液大約1ml注射給予到該十二指腸的管腔中。在給藥之后，按照一定時(shí)間隔收集一系列的灌流液樣品直到給藥后2小這兩種環(huán)二肽的分析。結(jié)果顯示，在灌流后僅2小時(shí)，DA-DKP和EA-DKP從腸腔吸收入循環(huán)的量分別達(dá)到了給予劑量的95%和100%(事實(shí)上是112%)。因此，兩種環(huán)二肽都快速地被吸收并且有效地從腸腔進(jìn)入到了血液，在從腸壁轉(zhuǎn)運(yùn)的過程中沒有代謝的證明。因此可以通過口服來進(jìn)行這些潛在的治療。無變化的DA-DKP和EA-DKP從胃腸道進(jìn)入到血液中的快速吸收并且在分離的灌流的大鼠肝臟中兩種化合物都缺乏首過肝清除(沒有列出數(shù)據(jù))，顯示系統(tǒng)前清除較低。因此口服給藥將是理想的給藥途徑。此外，對(duì)分離的灌流大鼠腎臟的研究顯示，不象很多被腎肽酶廣泛代謝的直鏈肽，兩種環(huán)二肽的腎臟清除率相對(duì)較低。所有這些數(shù)據(jù)提示二酮哌嗪類低日劑量給藥范圍對(duì)于治療目的可能是足夠的。大鼠口服給藥后的初步藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)與兩種二肽的上述數(shù)據(jù)一致，在口服劑量1.1-3.7mg/kg體重(DA-DKP)和1,5-4.8mg/kg體重(EA-DKP)后，Tmax值為30~60分鐘并且C巾ax值為4~61ag/ml(DA-DKP)和0.61.1昭/ml(EA-DKP),(T巾肌是達(dá)到最大濃度的時(shí)間，Cm狄是達(dá)到的最大濃度；這兩者都是由所得數(shù)據(jù)的曲線相應(yīng)的方程計(jì)算得來的。)初步數(shù)據(jù)提示DA-DKP和其他二酮哌嗪類通過血腦屏障。因此，DA-DKP和本發(fā)明的其他二酮哌噪類應(yīng)該對(duì)治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病比如多發(fā)性硬化癥是有用的。實(shí)施例2:含有Met-ArgDKP(MR-DKP)的人初乳部分和Asp-AlaDKP(DA-DKP)在體外抑制人T-淋巴細(xì)胞因子的產(chǎn)生A材料該實(shí)施例例證了DA-DKP、含有MR-DKP的人初乳(HC2626)和也含有MR-DKP的人初乳的低分子量部分(HCRBL;含有通過脫脂初乳Centricon產(chǎn)生。DA-DKP和MR-DKP為從DMISynthesis,Ltd.,Cardiff,UK.得到的。這兩種二酮艱。秦類為對(duì)炎癥的生理應(yīng)答過程中產(chǎn)生的小的天然產(chǎn)生化合物。它們也有時(shí)在人靜脈給予的免疫球蛋白(IVIg)、人白蛋白和其他生物制品中被發(fā)現(xiàn)。B.抑制T-細(xì)胞因子產(chǎn)生對(duì)兩種不同CD-4陽性人T-淋巴細(xì)胞克隆進(jìn)行了試驗(yàn)。這些細(xì)胞抹的一種(TRiPS)是從流感免疫供體中分離得的并且對(duì)血球凝集素肽307~319是特異性的。另外一種細(xì)胞抹(H4#9.25)是從多發(fā)性硬化癥的供體的尸體解剖腦組織中分離得的并且對(duì)髓鞘質(zhì)堿性蛋白(氨基酸87~99)是特異性的。在用(1)特異性抗原加HLA-DR2-顯陽性細(xì)胞或(2)抗-CD3加抗-CD28抗體在體外刺激后，兩種T-淋巴細(xì)胞克隆都產(chǎn)生白介素8(IL-8)、IL-16、干擾素-Y(IFN-力和腫瘤壞死因子a(TNF-a)。在預(yù)先刺激后第1820天用大約4x105個(gè)細(xì)胞進(jìn)行所述丁-淋巴細(xì)胞抹的刺5敫傳4義。用冷的IscoveModifiedDulbeccoMinimalEssentialMedium(IMDM，Sigma)力a10%的胎牛血清(FBS;美國菌種保藏中心(ATCC))將細(xì)胞洗滌一次，并且重懸于含有1:500稀釋的抗-CD3單克隆抗體OKT3(由小鼠腹水液體制備)的l.Oml冷IMDM培養(yǎng)基中。細(xì)胞在冰上與抗體培養(yǎng)30分鐘，然后用無FBS的冷培養(yǎng)基洗滌，并在加入了50U/ml人IL-2(Xenometrix)的培養(yǎng)基中，作為飼養(yǎng)細(xì)胞，與大約2x106個(gè)4000R-照射的正常人供體的外周血白細(xì)胞(PBL)合并。通過在第三天加入含有FBS加IL-2的新鮮IMDM培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)的天數(shù)從用OKT3刺激的當(dāng)天計(jì)算。從第7天(最大增殖)開始細(xì)胞能夠用于實(shí)驗(yàn)，典型地是在第14天(對(duì)再刺激最敏感)并且直到第21天(靜息細(xì)胞臨近衰老)。對(duì)于每個(gè)特異性試驗(yàn)，將2x105個(gè)活細(xì)胞在含有特定量處理添加劑(例如，HC2626，DA-DKP,PMA等)的總體積0.9ml的溫IMDM培養(yǎng)基中于37。C預(yù)培養(yǎng)15分鐘。之后加入具有2x105個(gè)CD3/CD28Dynabeads(Dynal)作為活化刺激物的溫IMDM0.1ml并且所述培養(yǎng)物于37t:過夜培養(yǎng)(18小時(shí))。在通過離心使細(xì)胞沉淀后收集細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液。以特異性ELISA(例如，TNFoc，IFNy，IL-8，IL-16;Endogen)分析細(xì)胞因子含量。如圖1~5顯示的，人初乳(HC2626)以劑量依賴的方式抑制這兩種T-淋巴細(xì)胞抹的體外細(xì)胞因子的產(chǎn)生。也如圖1-5顯示的，HCRBL和DA-DKP以劑量依賴的方式在刺激周期的早期抑制這兩種T-細(xì)胞株的體外細(xì)胞因子的產(chǎn)生。然而，HCRBL和DA-DKP在該周期晚期(第14天或更遲)是刺激作用的(見圖4)。HC2626和HCRBL都含有MR-DKP(如用質(zhì)譜法確定的)，但HC2626除了可能對(duì)細(xì)胞周期晚期抑制作用負(fù)責(zé)的MR-DKP外，含有其他組分(包括為相應(yīng)脫磷酸化蛋白因而可抗炎的酪蛋白，如在2003年11月25日提交的共同在審申請(qǐng)10/723,247中說明)。據(jù)此，HCRBL和HC2626(兩者都含有MR-DKP)、MR-DKP和DA-DKP應(yīng)該對(duì)在T-細(xì)胞介導(dǎo)的和/或自身免疫疾病比如多發(fā)性硬化癥中的炎癥細(xì)胞因子應(yīng)答的下調(diào)是有用的，因?yàn)樗鼈冊(cè)诖碳ぶ芷谠缙诙家种芓-細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生。這些結(jié)果也提示HCRBL、HC2626、MR-DKP和DA-DKP選擇性地影響抗原-特異性T-細(xì)胞而不影響靜息T-細(xì)胞。C.作用機(jī)理對(duì)DA-DKP和HC2626(含有MR-DKP)的作用機(jī)理進(jìn)行了研究。為了這樣做，將1x106個(gè)第18天TRiPS細(xì)胞于37。C培養(yǎng)30分鐘，同時(shí)什么都不加("全無")，加入CD3/CD28Dynabeads(CD3/CD28珠粒)，加入CD3/CD28珠粒和0.5mMDA-DKP，或者加入CD3/CD28珠粒和1:500稀釋的HC2626。培養(yǎng)之后，將細(xì)胞在細(xì)胞裂解的哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取試劑(Sigma)中裂解。然后將該細(xì)胞提取物于室溫用重復(fù)的Hypromatrix陣列分離地培養(yǎng)，之后按照制造廠家(Hypromatrix)的方案洗滌兩次。該Hypromatrix陣列是用表1中列出的轉(zhuǎn)錄因子的抗體印跡過的尼龍膜(Hypromatrix定做的)。加入對(duì)磷酸化酪氨酸、磷酸化絲氨酸和磷酸化蘇氨酸特異性的抗體混合物(Zymed)，培養(yǎng)1小時(shí)。然后加入用生物素標(biāo)記的抗-免疫球蛋白抗體。洗去該抗-免疫球蛋白-生物素后，加入鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶，并且在加入過氧化物酶-反應(yīng)發(fā)光底物之前對(duì)芯片進(jìn)行最后的洗滌。通過暴光膠片可以使結(jié)果直觀化并且如表2所示的將結(jié)果按照O(陰性)或+~++++(陽性)評(píng)分。如表2顯示的，一些細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的活化(ERKl/2)和預(yù)成(pe-formed)細(xì)胞因子的釋放被HC2626(含有MR-DKP)和DA-DKP所抑制。表l:Hypromatrix陣列(定做的)用于磷酸化的蛋白<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>:Gly-LeuDKP(GL-DKP)和Ala-ProDKP(AP-DKP)在體外抑制人T-淋巴細(xì)胞因子的產(chǎn)生按照實(shí)施例2中所說明的使用TRiPS和H4#9.25細(xì)胞林對(duì)GL-DKP和AP-DKP(從DMISynthesis,Ltd.,Cardiff,UK得到)進(jìn)行試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)GL-DKP該作用機(jī)理如實(shí)施例2中所述當(dāng)前處在研究中，并且細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄因子的激活和預(yù)成的細(xì)胞因子的釋放都被影響。實(shí)施例4:AspAlaDKP(DA-DKP)和TyrGluDKP(YE-DKP)在體外抑制30人T-淋巴細(xì)胞因子的產(chǎn)生用Histopaque(Sigma)從正常人供體的外周血液中分離正常人淋巴細(xì)胞。然后，將3-4x105個(gè)該淋巴細(xì)胞懸浮于lml無血清的IMDM中。通過加入25^1的1:2000稀釋的抗-CD3抗體(Pharmingen，SanDiego,CA)來刺激細(xì)胞，并于37。C培養(yǎng)18小時(shí)。然后將三種DKP制劑中的一種和地塞米松(終濃度為10^M)力口入到三份培養(yǎng)物中。所述三種DKP制劑為1.DA-DKP(從DMISynthesis,Ltd.,Cardiff,UK得到；在培養(yǎng)物中的終濃度為25pg/ml)。2.DKP-ZLB，一種25。/o白蛋白制劑(從ZLBBioplasma，AG3000Berne22Switzerland得到)，它于60。C加熱了4天，之后經(jīng)質(zhì)i普法測定發(fā)現(xiàn)其含有0.5mMDA-DKP(培養(yǎng)物中DA-DKP的終濃度為14昭/ml)。3.DKP-y-球蛋白---在pH7.4的磷酸鹽緩沖鹽水中含有12mg/mly-球蛋白的y-球蛋白制劑(從Sigma得到，編號(hào)G-4386)用Centricon3000過濾器過濾，并且使用該濾液(含有分子量小于3000的組分)。如陰離子交換HPLC與陰性電噴射質(zhì)鐠聯(lián)用所測定的，該濾液含有一個(gè)292的分子量，其為Tyr-GluDKP(YE-DKP)的分子量。該濾液在培養(yǎng)物中以l:4的最終稀釋液來使用。加入DKP制劑或地塞米松之后，該培養(yǎng)物于37。C培養(yǎng)18小時(shí)。然后用ELISA(PierceBiotechnology,Rockford,IL61105)測定釋放到每種培養(yǎng)物中的IL-2、IFNy和TNFot的量。結(jié)果在下面表3中顯示。如所見的，使用DKP卞球蛋白取得了所有這三種細(xì)胞因子釋放的最大減少。觀察〔069+T-細(xì)胞(CD69是在活化的T-細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記)數(shù)量的流式細(xì)胞術(shù)也顯示盡管T-細(xì)胞受體復(fù)合物內(nèi)化，DKP-y-球蛋白大約減少了90%的CD69+T-細(xì)胞數(shù)量，相比較地地塞米松減少了大約50%的。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>權(quán)利要求1.在動(dòng)物中正常發(fā)現(xiàn)的蛋白或肽在制備用于治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途，所述蛋白或肽被處理以使所述藥物包含至少一種衍生于該蛋白或肽的二酮哌嗪。2.權(quán)利要求1的用途，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。3.權(quán)利要求1~2中任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物為口服給藥的藥物。4.權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)的用途，其中所述蛋白或肽為人蛋白或肽。5.在動(dòng)物中正常發(fā)現(xiàn)的蛋白或肽在制備用于抑制T-細(xì)胞激活的藥物中的用途，所述蛋白或肽被處理以使所述藥物包含至少一種衍生于該蛋白或肽的二酮口底。秦。6.權(quán)利要求5的用途，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。7.權(quán)利要求5~6中任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物為口服給藥的藥物。8.權(quán)利要求5~7中任一項(xiàng)的用途，其中所述蛋白或肽為人蛋白或肽。9.一種合成二酮哌。秦的方法，其包括在有效地引起二酮哌。秦形成的條件下加熱蛋白或肽:容液。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。11.權(quán)利要求9的方法，其中所述二酮哌溱從溶液中純化。12.權(quán)利要求9~11中任一項(xiàng)的方法，其中所述溶液于60。C加熱4天。13.—種合成二酮哌。秦的方法，其包括在有效地產(chǎn)生二酮哌。秦的條件下使蛋白或肽溶液與切斷該蛋白或肽的兩個(gè)N-末端或兩個(gè)C-末端氨基酸的酶相4妾觸。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述酶為二肽基肽酶或羧肽酶。16.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的方法，其中所述二酮哌嗪從溶液中純化。17.—種蛋白或肽的改良藥物組合物，所述改良包括降低組合物中二酮哌嗪類的含量。18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。19.一種制備蛋白或肽的改良藥物組合物的方法，該方法包括從組合物中除去在組合物中存在的至少一些二酮哌。秦類。20.權(quán)利要求19的方法，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。21.—種制備蛋白或肽的改良藥物組合物的方法，該方法包括將該蛋白或肽的溶液進(jìn)行處理以提高二酮。底。秦類的含量。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述溶液在有效地引起二酮哌嗪類形成的條件下加熱。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述溶液于60。C加熱4天。24.權(quán)利要求21的方法，其中在有效地產(chǎn)生二酮哌嗪類的條件下所述溶液與切斷該蛋白或肽的兩個(gè)N-末端或兩個(gè)C-末端氨基酸的酶相接觸。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述酶為二肽基肽酶或羧肽酶。26.權(quán)利要求21的方法，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。27.—種蛋白或肽的改良藥物組合物，所述改良包括提高組合物中二酮哌。秦類的含量。28.權(quán)利要求27的組合物，其中所述蛋白為白蛋白，免疫球蛋白或促紅細(xì)胞生成素。29.權(quán)利要求27~28中任一項(xiàng)的組合物，其是口服給藥的組合物。全文摘要本發(fā)明提供使用某些二酮哌嗪類來治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法和抑制T-細(xì)胞激活的方法。本發(fā)明也提供合成二酮哌嗪類的方法和包含某些二酮哌嗪類的藥物組合物。本發(fā)明還提供通過增加或者減少組合物中二酮哌嗪類的含量來制備蛋白和肽的改良藥物組合物的方法和所得的改良藥物組合物。文檔編號(hào)A61K39/395GK101279094SQ20081008199公開日2008年10月8日申請(qǐng)日期2004年5月14日優(yōu)先權(quán)日2003年5月15日發(fā)明者戴維·巴-奧爾,拉斐爾·巴-奧爾,理查德·希蒙科維茨申請(qǐng)人:Dmi生物科學(xué)公司