專利名稱：：羥油酸及相關(guān)化合物在制備藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及羥油(2-羥油)酸及類似結(jié)構(gòu)的分子作為抗腫瘤劑，作為具有降血壓活性的藥劑和作為引起體重減輕的藥劑的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及2-羥基油酸及類似化合物通過調(diào)節(jié)膜結(jié)構(gòu)，以控制膜結(jié)構(gòu)、控制G-蛋白的活性和/或定位G-蛋白、和控制與G-蛋白結(jié)合的受體的活性的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及2-羥基油酸及類似化合物制備供癌癥治療的藥物，治療心血管疾病的藥物和處理體重和肥胖癥的問題的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：脂肪酸是在食品和工業(yè)中廣泛應(yīng)用的分子。2-羥基油酸，其合成先前已經(jīng)描述(Adam等，1998，Eur.J.Org.Chem.9，2013-2018)，在工業(yè)上己經(jīng)被用作化妝品制劑的乳化劑。例如，在一方面，專利JP10182338涉及顯示低應(yīng)激性和與鹽的高相容性的水包油型乳化組合物，其包含[A]非離子表面活性劑如聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇單硬脂酸酯，[B]2-羥基C10-C22脂肪酸如2-羥基硬脂酸，[C]油和[D]水，其中A/B的比率在1:0.01和1:2之間。專利JP09110635也涉及可以用作藥劑，化妝品和食品的組合物，包含[A]聚脂肪酸甘油酯，[B]2-羥基C10-C22脂肪酸，[C]油和[D]水，其中A/C和B/C的重量比分別為2.0和0.5，并且具有10-300nm的平均粒徑。即使在酸性條件下或在低粘度下或在提高量的鹽存在下這些組合物顯示良好的穩(wěn)定性，因此與皮膚相容。在另一方面，該脂肪酸已經(jīng)被用作油酰胺水解酶的抑制劑，一種與該物質(zhì)的誘眠效果有關(guān)的作用(專利US6096784和WO9749667)。例如，專利US6096784涉及設(shè)計和合成油酰胺水解酶抑制劑，其負責(zé)誘眠脂(順-9-硬脂酰胺)的水解。最有效的抑制劑具有親電羰基，其能夠可逆地形成(硫代)半縮醛或(硫代)半縮醛以模仿由半胱氨酸或絲氨酸類型的蛋白酶催化的反應(yīng)的過渡態(tài)。除了抑制活性以外，一些抑制劑顯示誘導(dǎo)實驗動物睡眠的拮抗活性。六角膜結(jié)構(gòu)膜脂自身能夠以比蛋白質(zhì)和核酸更大量的二級結(jié)構(gòu)排列。生物膜的典型脂雙層只是這些二級構(gòu)型中的一種。關(guān)于活細胞中其它二級結(jié)構(gòu)的多度和作用了解的很少。這些結(jié)構(gòu)的一種功能在本發(fā)明人先前為增加G-蛋白與膜的結(jié)合親和力的工作(EscribiPV，OzaitaA，RibasC，MirallesA，F(xiàn)odorE，F(xiàn)arkas禾QGarda-SevillaJA;1997ProceedingoftheNationalAcademyofScienceofUSA94，11375-11380)中描述。膜結(jié)構(gòu)的概念超出在有些現(xiàn)有技術(shù)的專利中(WO87/04926和WO80/11286)所描述的范圍，在這些專利中只提及膜的流動性，而該概念延伸至廣泛得多的領(lǐng)域膜結(jié)構(gòu)。我們專利包含的分子作用于從片層結(jié)構(gòu)到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換或過渡(圖1)。研究現(xiàn)有技術(shù)，在現(xiàn)有技術(shù)中沒有其它與2-羥基油酸或類似化合物有關(guān)的應(yīng)用，所述2-羥基油酸或類似化合物在癌癥治療，心血管疾病和/或控制體重的領(lǐng)域中特別有價值。只描述食品(GB2140668，EP0611568和WO02/0042)或來自M.cryophilus的提取物(WO89/11286)，其由各種化合物的復(fù)雜混合物組成，所述化合物包括本發(fā)明所述中的一些，如脂肪酸，特別是例如油酸和棕櫚酸，和這些混合物在治療動脈性高血壓，控制肥胖癥或作為抗腫瘤劑中的應(yīng)用，但未將所述療效中的具體作用歸因于本發(fā)明考慮的混合物組分中的任何一種。僅WO02/051406和WO94/01100描述某些脂肪酸(C14-C2。)在治療前列腺癌中的應(yīng)用，其不是本發(fā)明的目的，排除當(dāng)使用現(xiàn)有技術(shù)描述的所述脂肪酸的情形。發(fā)明目的本發(fā)明的目的為發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸及類似化合物的新應(yīng)用，其與現(xiàn)有技術(shù)中所述的那些無關(guān)。本發(fā)明的第一個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為抗腫瘤劑的活性。本發(fā)明的第二個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為降血壓劑的活性。本發(fā)明的第三個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為引起體重減輕的藥劑的活性。本發(fā)明的第四個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為控制細胞膜從片層結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換成六角結(jié)構(gòu)的藥劑的應(yīng)用。膜結(jié)構(gòu)的這種調(diào)節(jié)對G-蛋白以及它們轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，即它們信號傳播途徑的分子實體的活性有影響。通過直接與該類型的分子相互作用或以與源于它們活性的細胞信號有關(guān)的機理，大量的藥物作用于與G-蛋白結(jié)合的受體。然而2-羥基油酸和它的類似物作用在膜結(jié)構(gòu)上。以下所述的關(guān)于2-羥基油酸和它的類似物的應(yīng)用以前還未被任何人提到，它們的使用可能證明對于某些病理學(xué)有益。特別是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸和它的類似物顯示抗腫瘤活性，降血壓(或抗高血壓)活性和引起體重減輕。在本發(fā)明中通過使用實驗?zāi)Ｐ?，特別是體外分析系統(tǒng)，細胞培養(yǎng)系統(tǒng)和生物有機體證明2-羥基油酸和它的類似物的新應(yīng)用。所有這些分析模型毫無疑問地顯示2-羥基油酸和它的類似物是能夠用于制備藥物的分子，其基于由膜結(jié)構(gòu)從片層到六角的轉(zhuǎn)換介導(dǎo)的G-蛋白相關(guān)信號的控制用于癌癥治療、用于心血管疾病的治療和用于處理有體重和肥胖癥問題的受試者。發(fā)明描述在本發(fā)明中，"2-羥基油酸"是指a-羥油酸，十八碳烯酸C18:1順A9或順-2-羥基-9-十八碳烯酸。"類似物"是指含有偏移中心區(qū)1或2個位置的雙鍵和/或含有偏移中心區(qū)1至5個位置和/或在雙鍵的每一側(cè)含有1-6個碳原子(CH2基團)和/或在位置2含有不同于OH的小原子量(Mw小于或等于200Da)的殘基(R)的那些脂肪酸。對應(yīng)于R基投影的立體異構(gòu)體是R或者S無關(guān)緊要。關(guān)于測試的各種分子，已經(jīng)觀察到具有以下所示通式的那些顯示一些類似于羥油酸的效果，因此可以被歸類為其類似物。通式I:COOH-CHR-(CH2)m-CH=CH-(CH2)n-CH3，其中m和n獨立地具有0-15的值，R可以是H，OH，NH2，CH3，或一些分子量低于200Da的其它殘基。在本發(fā)明中"G-蛋白"是指蛋白質(zhì)鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白，其由3個亞基(1個a，一個(3和一個Y)形成，該亞基將信號從與G-蛋白結(jié)合的受體傳遞到效應(yīng)器(腺苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶，磷脂酶C，離子通道等)。在本發(fā)明中"膜結(jié)構(gòu)"是指脂類在天然或人工膜(脂質(zhì)體)中的二級結(jié)構(gòu)或排列。在本發(fā)明中"急性作用"是指在單次施用藥物后數(shù)分鐘到幾小時之間的時間間隔內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)。在本發(fā)明中"慢性作用"是指在連續(xù)施用藥物的幾天和幾周之間的時間間隔內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)。在本發(fā)明中"藥用形式"是指在本領(lǐng)域常規(guī)使用的那些中的任何一種，非限制性地包括酉旨，特別是乙酯(因為它們作為脂肪酸增溶劑的性能)，醚，酰胺，鹽等。本發(fā)明的一個目的是將2-羥基油酸和它的類似物用于控制細胞膜從片層到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換。該現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)在于2-羥基油酸和它的類似物與膜的相互作用和膜組成和/或結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)(表1和2)。表1.<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>aiH表示從片層轉(zhuǎn)換到六角結(jié)構(gòu)的溫度。表1顯示二反油酰磷脂酰乙醇胺(DEPE)的膜片層轉(zhuǎn)換到六角結(jié)構(gòu)的溫度值。對照值(缺乏2-羥基油酸)為63。c。由2-羥基油酸(20HOA)引起的減少(濃度依賴型)顯示該分子穩(wěn)定非層狀結(jié)構(gòu)的存在。這對細胞膜的重要修飾對于分子和細胞功能具有重要意義。所有測試的具有治療活性的2-羥基油酸類似物也導(dǎo)致對膜結(jié)構(gòu)的作用(表2)。表2.<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>片層到非片層的轉(zhuǎn)換的調(diào)控調(diào)節(jié)了G-蛋白的活性。羥油酸和相關(guān)化合物能夠調(diào)節(jié)G-蛋白的活性，其通過["S]GTPyS的結(jié)合測量(圖5)。這是因為這些分子對G-蛋白與膜的相互作用有影響，因此對它們的細胞定位有影響，如來自聚焦顯微鏡的照片所示(圖2)。羥油酸和它的類似物對G-蛋白的定位和活性的影響不是因為直接作用在它們之上。圖6顯示在缺乏膜時這些分子對純化的G-蛋白活性的影響。與當(dāng)G-蛋白與膜結(jié)合時所發(fā)生的形成對比，道諾霉素(DNM)和羥油酸(20HOA)，以及后者的類似物，對這些蛋白質(zhì)(只有當(dāng)它們在膜中和與G-蛋白結(jié)合的受體接觸時其被激活)的活性無影響。與G-蛋白結(jié)合的受體是普遍存在的，組成膜受體中的80%，該膜受體傳遞由神經(jīng)遞質(zhì)，激素，神經(jīng)調(diào)質(zhì)，細胞因子，生長因子等引發(fā)的信號。在其它生理過程中，它們調(diào)節(jié)血壓，細胞生長和增殖，和體重。因此，本發(fā)明所述分子可以調(diào)節(jié)上述生理過程。對膜結(jié)構(gòu)的測試研究膜結(jié)構(gòu)最有效和強大的技術(shù)是X-射線衍射/散射。使用該技術(shù)，我們確定膜的結(jié)構(gòu)被2-羥基油酸和它的類似物改變。從片層到六角結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換溫度的降低顯示對膜中脂分子的重排的重要影響。這種重排的調(diào)節(jié)形成2-羥基油酸和它的類似物施加影響的基礎(chǔ)。所有研究的符合通式的類似物具有膜調(diào)節(jié)和控制細胞增殖(癌癥中的功效)，血壓(在心血管過程中的功效)和體重(在肥胖癥中的功效)的活性。，本發(fā)明的一個目的是舉例說明2-羥基油酸和它的類似物具有作為抗腫瘤劑的活性。首先，細胞周期受到與細胞表面特異受體結(jié)合的生長因子的控制。所述生長因子與受體的結(jié)合引起級聯(lián)反應(yīng)，其是用來激活促有絲分裂激酶(Cdk)，該促有絲分裂激酶和與細胞周期有關(guān)的被稱為細胞周期蛋白的蛋白質(zhì)形成二聚復(fù)合物。cdk/細胞周期蛋白復(fù)合物調(diào)節(jié)細胞周期階段和它產(chǎn)生有絲分裂和細胞分裂的進展。許多細胞表面上的特異受體與G-蛋白結(jié)合，以致當(dāng)生長因子與受體結(jié)合時G-蛋白被激活，觸發(fā)前面所述的級聯(lián)反應(yīng)。因此，調(diào)節(jié)G-蛋白的定位和活性將可以控制細胞生長和細胞分裂。與2-羥基油酸和它的類似物的抗癌作用有關(guān)的機理是基于它們誘導(dǎo)調(diào)節(jié)G-蛋白和其它周邊蛋白，如蛋白激酶C或小G-蛋白(Ras，Raf等類型)的定位和活性的事實。該調(diào)節(jié)與膜脂結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)有關(guān)。己經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸作為G-蛋白轉(zhuǎn)運至核的抑制劑(圖2)。這樣，實現(xiàn)細胞增殖的抑制，如通過蛋白質(zhì)p21水平的明顯和顯著的增加和細胞周期蛋白質(zhì)cdk2和細胞周期蛋白B和D3的減少所證實(圖3A和B)。此外，已經(jīng)觀察到在培養(yǎng)物的細胞中，2-羥基油酸和它的類似物導(dǎo)致蛋白激酶C顯著的增加(增加40%至120%)。G-蛋白細胞定位的這種變化產(chǎn)生它們功能的調(diào)節(jié)，其比在治療癌癥中廣泛使用的藥物道諾霉素所產(chǎn)生的那些大。這些改變對于腫瘤細胞的增殖和生存具有重要的抑制作用(圖4)。細胞周期的一種重要調(diào)節(jié)物是蛋白p53，其通過將細胞分離減緩至Gl水平(有絲分裂前的階段)施加負性控制。該蛋白是響應(yīng)DNA改變的出現(xiàn)由細胞自身合成。如果復(fù)制的DNA能夠?qū)ψ蛹毎胸撚绊?，p53蛋白被激活，引起細胞程序死亡(編程性細胞死亡)。激活所述蛋白質(zhì)p53是指表達編碼調(diào)節(jié)蛋白如p21，p27，p16等的其它基因，所述調(diào)節(jié)蛋白抑制細胞周期蛋白和cdks(與細胞周期過程有關(guān))的活性/表達。在多種類型的腫瘤細胞中，p53蛋白似乎是突變的和/或無活性的，轉(zhuǎn)化(癌)細胞發(fā)生增殖。細胞中2-羥基油酸和/或它的類似物的存在誘導(dǎo)p53相關(guān)信號途徑的激活，其在各種類型的腫瘤細胞中誘導(dǎo)編程性細胞死亡的起始或細胞周期的停止。為了實現(xiàn)本發(fā)明的第一個目的，使用體外和體內(nèi)模型。就此而論，2-羥基油酸和所有符合前面所述通式I的結(jié)構(gòu)類似物己經(jīng)顯示具有顯著的抗腫瘤能力。測試的2-羥基油酸(2-羥基-順-9-十八碳烯)酸的類似物分子是2-甲基-油(2-甲基-順-9-十八碳烯)酸，2-氨基-油(2-氨基-順-9-十八碳烯)酸，油(順-9沖八碳烯)酸，棕櫚油(順-9沖六碳烯)'酸，順-ll-十八烯(順-ll-十八碳烯)酸和神經(jīng)(順-15-二十四碳烯)酸。這些分子己經(jīng)顯示使細胞增殖停止或誘導(dǎo)各種腫瘤細胞(例如人肺癌細胞A549，JurkatT淋巴細胞等)的死亡(圖4)。這些結(jié)果顯示所述脂肪酸的抗腫瘤活性，并顯示2-羥基油酸的基本結(jié)構(gòu)可以具有小的變化而不改變它的抗腫瘤活性。其它分子模型使我們能夠證實2-羥基油酸和它的類似物具有比其它抗腫瘤藥物，例如蒽環(huán)類抗生素所顯示的更高的抗腫瘤活性，因此它們是有高治療價值的化合物。在3T3成纖維細胞的膜上，我們成功證明2002-羥基油酸和/或油酸(2-羥基油酸的一個類似物)的存在導(dǎo)致NIH3T3細胞中G-蛋白活性75-84°/。的抑律1」，而200pM道諾霉素導(dǎo)致所述活性46%的抑制(圖5)。2-羥基油酸和它的類似物油酸的抗腫瘤功效在圖8中顯示，在圖8中我們可以看到在用2-羥基油酸治療后一些由肺腺癌形成的腦腫瘤轉(zhuǎn)移瘤的消失。用該2-羥基油酸和油酸治療導(dǎo)致癌的完全消失。這些結(jié)果證明(a)2-羥基油酸和它的類似物是可以用于制備供治療癌癥的藥物的分子；(b)它們具有廣泛的作用范圍(它們已經(jīng)對培養(yǎng)物和活體中的各種腫瘤細胞有效)和(c)它們在抗癌效力，它們無副作用和它們口服給藥(盡管也可靜脈內(nèi)或皮下給藥)方面優(yōu)于用于治療癌癥的其它分子?？鼓[瘤測試已經(jīng)在人肺癌細胞A549和人白血病細胞(Jurkat)中證明羥油酸的抗增殖功效。圖3顯示抗增殖蛋白p21的誘導(dǎo)，伴隨蛋白cdk2、細胞周期蛋白D3的減少，其是腫瘤細胞得以分裂所需。所有測試的符合前面所給結(jié)構(gòu)通式的類似物產(chǎn)生類似效果。通過培養(yǎng)物中腫瘤細胞的細胞密度的減小證明2-羥基油酸和它的類似物的這種抗增殖效果(圖4)。使用其它技術(shù)和其它細胞類型也觀察到這種抗增殖效果在大鼠初生星形膠質(zhì)細胞中，這些脂肪酸具有抗增殖效果，我通過結(jié)合含氚胸苷研究該抗增殖效果。此外，羥油酸和它的類似物能夠在人癌細胞中誘導(dǎo)細胞程序死亡或編程性細胞死亡。在一方面，PARP的降解(圖3C)，和在另一方面細胞形態(tài)學(xué)的改變和細胞殘余的存在(圖4)顯示2-羥基油酸和它的類似物作為細胞死亡的誘導(dǎo)物的效果。使用流式細胞儀實驗，確定在2-羥基油酸的存在下活的人白血病細胞(Jurkat)的數(shù)量僅為使用依托泊甙，一種知名的抗腫瘤劑存活的那些的10%。最后，在人中效果的研究己經(jīng)顯示2-羥基油酸和它的類似物可構(gòu)成一類具有重要價值的抗腫瘤藥物。圖8顯示用2-羥基油酸和油酸治療對人腫瘤的效果。顯示的情形對應(yīng)于女性患者，其中先前的化學(xué)治療和放射治療未產(chǎn)生腦瘤的減少。*本發(fā)明的一個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物是具有降血壓活性的藥劑。G-蛋白的活性的調(diào)節(jié)控制血壓。在本發(fā)明的藥物和G-蛋白活性以及血壓之間存在關(guān)系。在人中進行的研究是一個證實前面所述的結(jié)果，在研究中發(fā)現(xiàn)高血壓個體具有膜脂水平的變化(表3)。膜脂對片層-六角轉(zhuǎn)換具有影響，該轉(zhuǎn)換依次確定G-蛋白的定位和功能性。實際上，在高血壓患者中我們觀察到G-蛋白與膜結(jié)合水平的改變，這是由于膜脂的上述變化和易于形成六角相。如,非片層膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)和由此導(dǎo)致的G-蛋白的重定位產(chǎn)生高血壓，通過調(diào)節(jié)膜脂的片層-六角轉(zhuǎn)換可以實現(xiàn)膜蛋白定位和最終血壓的調(diào)節(jié)(圖7)。表3.在血壓正常(對照)和高血壓受試者(mg/100mg)的紅細胞膜磷脂脂肪酸和膽固醇的酯的組成。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>SFA，飽和脂肪酸；MUFA，單不飽和脂肪酸；PUFA，多不飽和脂肪酸。*P<0.05，**P<0.01。n.d.:未檢測到。證明2-羥基油酸和它的類似物也具有顯著的降血壓效果，因為它們導(dǎo)致收縮血壓和舒張血壓的減小，而不改變心率(圖9a，9b和10)。由2-羥基油酸和它的類似物產(chǎn)生的降血壓效果是它導(dǎo)致急性形式(從治療2小時起明顯)和慢性(當(dāng)維持治療時保持幾天和幾周)血壓的減小。例如氨基油酸在持續(xù)1周的慢性治療中將血壓降低15mmHg。血壓受各種受體系統(tǒng)控制，該受體與G-蛋白偶聯(lián)，如血管升壓素受體，腎上腺素能受體等。與血壓控制有關(guān)的激素和結(jié)合以刺激G-蛋白的受體之間的相互作用受2-羥基油酸和類似化合物的作用調(diào)節(jié)。這些脂肪酸調(diào)節(jié)受體，G-蛋白和效應(yīng)器之間的聯(lián)系。結(jié)果是環(huán)AMP,磷脂酶C和氧化氮的調(diào)節(jié)，其引起血壓降低。該效果還與膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)有關(guān)。2-羥基油酸和它的類似物的主要藥理學(xué)優(yōu)勢是，與其它降血壓藥不同，它們對心率無影響(即它們不顯著增加或減小心率)。這些化合物一個另外的優(yōu)勢是它們控制其它心血管危險因子血清脂質(zhì)/脂蛋白分布圖和體重(參見下文)。因為血壓控制其本身不足以延長患者生命和需要控制其它心血管危險因子，這些脂肪酸優(yōu)于在心血管疾病患者中使用的其它分子。降血壓測試2-羥基油酸在大鼠中引起血壓顯著降低(圖9)。這些降低具有急性形式(在處理2小時時，19±6mmHg，P<0.01，n=6)和慢性形式(l周，26±7mmHg，PO.OOl，n=6)的性質(zhì)。此外，從lmg/kg至10mg/kg的急性和慢性處理也產(chǎn)生濃度依賴型的血壓顯著降低。在人中，2-羥基油酸也產(chǎn)生血壓顯著的大的降低，參見圖9。此外，符合以上所給通式的2-羥基油酸的類似物具有降血壓效果(圖10)。在所有情形中，與對照相比血壓降低顯著(*P<0.05，**P<0.01)。這些結(jié)果清楚地顯示2-羥基油酸和它的類似物是臨床/藥物治療高血壓的有效藥劑。，本發(fā)明的一個目的是顯示2-羥基油酸和它的類似物具有作為引起體重減輕的藥劑的活性。除了2-羥基油酸和它的類似物的抗腫瘤和降血壓活性以外，它們引起體重減輕。體重尤其受因素如個體的代謝能力和進食控制調(diào)節(jié)。進食控制由飽滿感的感覺決定，該飽滿感的感覺又受在激素水平上調(diào)節(jié)。例如，營養(yǎng)的缺乏刺激引起食欲感覺的激素的分泌。在食用后，一旦營養(yǎng)水平己經(jīng)恢復(fù)，刺激引起飽滿感感覺的激素的分泌。己經(jīng)發(fā)現(xiàn)2-羥基油酸和它的類似物產(chǎn)生飽滿感效果，引起進食的減少。該控制也由細胞因子受體，leptins，腎上腺素受體，和其它與G-蛋白偶聯(lián)的受體介導(dǎo)，G-蛋白的活性受這些脂肪酸調(diào)節(jié)。在處理的動物中，這種對飽滿感的效果是指比對照動物少15%-30%的食物的消耗。體重控制測試用這些分子處理的大鼠在慢性處理期間(5-17天)失去體重。在這些實驗中，用2-羥基油酸或它的類似物，特別是氨基油酸處理的大鼠，如同處理大鼠的對照組一樣地自由接近食物和水(圖11)。在這些條件下大鼠體重逐漸減少，從處理的第一天開始，直至處理的第7天的17克(2-3個月大的Sprague-Dowley大鼠正常體重的5%)。稱量供應(yīng)給這些動物的飼料，發(fā)現(xiàn)在處理期間消耗更低，證實用與本發(fā)明有關(guān)的分子的處理在動物中產(chǎn)生飽滿感的效果。用2-羥基油酸對成年小鼠進行的長達28天時間的類似實驗顯示與對照小鼠(用載體處理)相比體重減輕15%-25%。附圖描述圖l:除了片層以外，膜可以采用的多種結(jié)構(gòu)中的一些。圖2顯示在大鼠腦初生星形膠質(zhì)細胞中用熒光素標(biāo)記的Go^蛋白的細胞定位。在對照細胞中，標(biāo)記顯示該蛋白整個細胞中的存在，特別是在細胞核(箭頭)中。在用2-羥基油酸(20HOA)處理的細胞中，標(biāo)記似乎在膜和細胞溶膠中，但不在細胞核(箭頭)中。圖3顯示分子標(biāo)記的2-羥基油酸對細胞增殖和細胞死亡的影響。A部分顯示2-羥基油酸(20HOA)對人肺癌細胞A549中的細胞周期蛋白cdk2，細胞周期蛋白B和細胞周期蛋白D3的影響。這些蛋白質(zhì)的減少說明該脂肪酸誘導(dǎo)細胞周期的停止，即使細胞分裂停止。B部分顯示在溫育24和48小時后2-羥基油酸(20HOA)對A549細胞中的p21蛋白的影響。蛋白p21抑制細胞周期，因此它是一種抗增殖蛋白。2-羥基油酸對該蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的大的增加解釋周期和腫瘤細胞增殖的停止。C部分顯示人白血病細胞(Jurkat)中的多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的降解(依托泊甙25[El]和250jiM[E2];2-羥基油酸IO[OI]，100和1000jiM)。該酶水平的減小，或它降解的證據(jù)說明細胞程序死亡或編程性細胞死亡的開始。在這些實驗中依托泊甙被用作陽性對照，因為已知該分子是細胞程序死亡的誘導(dǎo)物和抗腫瘤劑。圖4顯示2-羥基油酸和它的類似物對人肺癌細胞A549(A)和人白血病Jurkat細胞(B)的增殖的影響。2-羥基油酸(20H0A)和所有符合前面所給式的它的類似物誘導(dǎo)分離的停止和腫瘤細胞的死亡(OA:油酸；VA:順-酸ll-十八碳烯酸；POA:順-9-十六碳烯酸；NA:神經(jīng)酸；2MOA:2-甲基油酸；2NOA:2-氨基油酸)。圖5顯示pS]GTP丫S與用大鼠腎上腺素受體012^轉(zhuǎn)染的N1H3T3細胞的膜的結(jié)合。該參數(shù)測量G-蛋白的活性。2-羥基油酸的存在誘導(dǎo)甚至大于蒽環(huán)類抗生素道諾霉素(DNM)的G-蛋白功能的降低，因此2-羥基油酸抗腫瘤可能更有效。2-羥基油酸的類似物產(chǎn)生類似于2-羥基油酸的效果。圖6:羥油酸和它的類似物對純G-蛋白(缺少膜)無影響。這說明它對G-蛋白活性的影響是由非片層膜結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)介導(dǎo)的。道諾霉素(DNM)具有類似于對照的性能。圖7:在血壓正常(空條)和高血壓受試者(填充條)的紅細胞膜G蛋白的水平。在低血壓受試者中蛋白Gai1/2(Gi)，Gao(Go)，Gas(Gs)和GG卩(Gb)的水平顯著較低。條的值是平均值土平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差叩<0.05，，O.Ol。圖8顯示由肺腺癌形成的腦轉(zhuǎn)移瘤(腫瘤)。左圖(8a)對應(yīng)于治療前的腫瘤，右圖對應(yīng)于用2-羥基油酸治療后的不同日期的腫瘤?？梢钥闯觯[瘤之一消失較快，另一個較慢。圖9a顯示羥油酸(30mg/kg)對Sprague-Dowley大鼠動脈收縮血壓的急性作用(2小時，黑條)和慢性作用(每日3次注射共7天，白條)。該分子的低劑量(l-10mg/kg)產(chǎn)生類似的效果，但較不顯著。*P<0.01。圖9b顯示2-羥基油酸(30mg/kg)對人血壓的影響。該圖顯示動脈收縮血壓為治療日的函數(shù)。治療前的日子用負值表示。*P<0.05，**P<0.01。圖10顯示用2-羥基油酸(20HOA)和它的類似物2-甲基油酸(2MOA)，油酸(OA)，順-9-十六碳烯酸(POA)，順-ll-十八碳烯酸(VA)和神經(jīng)酸急性治療的效果。所有用2-羥基油酸和符合以上所給通式的類似物進行的治療導(dǎo)致Spmgue-Dowley大鼠動脈收縮血壓的顯著減小(*P<0.05，**P<0.001)。圖11顯示2-羥基油酸(OHOA)和它的類似物，油酸(OA)禾11順-9-十六碳烯酸(POA)對體重的影響(每日3次30mg/kg的注射)。動物(Sprague-Dowley大鼠)可以在任何時間自由接近食物和水。權(quán)利要求1.通式ICOOH-CHR-(CH2)m-CH＝CH-(CH2)n-CH3的化合物在制備可以用于肥胖治療的藥物和藥用形式的應(yīng)用，其中R選自H，CH3，OH或NH2，m和n獨立地具有0-15的值。2.按照權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物含有12-28個碳原子。3.按照上述權(quán)利要求中任何一項的應(yīng)用，其特征在于所述通式I的化合物為2-羥基油酸或氨基-油酸。全文摘要羥油酸和它的類似化合物在制備藥物中的應(yīng)用。描述羥油酸和通式ICOOH-CHR-(CH₂)_m-CH＝CH-(CH₂)_n-CH₃的它的類似物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物可用于癌癥，高血壓，肥胖癥或由膜結(jié)構(gòu)的改變和由此導(dǎo)致的G-蛋白或與它們偶聯(lián)的受體的調(diào)節(jié)介導(dǎo)的疾病的治療，其中m和n獨立地具有0-15的值，R可以是分子量低于200Da的任何殘基。文檔編號A61P9/10GK101259122SQ20081009179公開日2008年9月10日申請日期2002年10月9日優(yōu)先權(quán)日2001年10月11日發(fā)明者P·V·埃斯克里瓦魯伊斯申請人:巴利阿里群島大學(xué)