專利名稱：Hiv肽，抗原，疫苗組合物，檢測(cè)hiv所誘導(dǎo)的抗體的免疫測(cè)定試劑盒及方法
HIV肽，抗原，疫苗組合物，檢測(cè)HIV所誘導(dǎo) 的抗體的免疫測(cè)定試劑盒及方法本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2000年3月2日、申請(qǐng)?zhí)枮?0805735.4、發(fā)明 名稱為"HIV肽，抗原，疫苗組合物，檢測(cè)HIV所誘導(dǎo)的抗體的免疫測(cè) 定試劑盒及方法"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及基于HIV gag p24保守區(qū)域的新肽、游離形式或載體結(jié)合 形式的包含至少一種上述肽的抗原、包含至少 一種該抗原的疫苗組合物、的免疫測(cè)定試劑盒和方法。背景HIV感染的全球性流行急需得到控制，而開發(fā)抗HIV的疫苗是AIDS研 究中的一個(gè)主要目標(biāo)。通常，疫苗應(yīng)當(dāng)激活抗原呈遞細(xì)胞，克服T-細(xì)胞 應(yīng)答中的遺傳限制并產(chǎn)生T -與B -記憶細(xì)胞。該病毒群體的可變性給獲 得有效的HIV疫苗造成更大的困難。目前還沒有在試圖開發(fā)HIV疫苗的 過(guò)程中取得突破性進(jìn)展的報(bào)導(dǎo)?，F(xiàn)在普遍接受的是，誘導(dǎo)抗原特異性體 液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫是開發(fā)有效的預(yù)防性和治療性疫苗的關(guān)鍵。免疫系 統(tǒng)的所有三種武器包括中和抗體、CD8+CTL和T輔助細(xì)胞1 (TH1)細(xì)胞 是對(duì)抗HIV的保護(hù)性免疫所必需的。已知CTL能夠清除其它病毒的感染 (Ada,免疫細(xì)胞生物學(xué)(Immunol. Cell BioL)， 72:447-454， 1994), 并且CTL能夠在病毒后代能夠產(chǎn)生并通過(guò)細(xì)胞裂解釋放之前于感染早期 裂解受感染的靶標(biāo)(Ada等，同前)。焦點(diǎn)集中在抗原的選擇及不同佐劑 的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)上。在不同的體內(nèi)和體外研究中使用的抗原均來(lái)自主要源 于gpl60及在某種程度上源于p24的粗蛋白和各種合成肽。對(duì)gpl20的 V3環(huán)已進(jìn)行了大量的研究。觀察到T和B細(xì)胞應(yīng)答的誘導(dǎo)，然而， 一項(xiàng) 體外研究報(bào)導(dǎo)，源于gp41保守區(qū)的肽顯示了對(duì)感染的增強(qiáng)(Bell S.J. 等，臨床實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)(Clin. Exp. Immunol. ) ， 87 (1) : 37-45， ( 1992 年l月)。侯選疫苗中天然存在的HIV病毒序列由于該病毒所固有的通過(guò)改變存 在于感染細(xì)胞表面的表位外觀特征而隱藏的能力而不能剌激穩(wěn)定的免疫 應(yīng)答。免疫系統(tǒng)誤認(rèn)為與一種特定的氨基酸序列相關(guān)而實(shí)際上重要的氨 基酸卻被隱藏起來(lái)。最近的一項(xiàng)關(guān)于抗gag p24蛋白抗體效價(jià)的研究顯示，慢AIDS iLH 進(jìn)程與高效價(jià)相關(guān)，而快AIDS iL^進(jìn)程與低效價(jià)相關(guān)。已經(jīng)顯示具有低 p24抗體效價(jià)的人比具有高p24抗體效價(jià)的人其AIDS的發(fā)展快得多 (ZwartG.等，病毒學(xué)(Virology), 201,^285-93頁(yè)，1994年6月)， W明p24能夠在控制AIDS的iL艮中起著關(guān)鍵的作用。在W091/13360中描述了新的HIVp24肽,其中在一種筌別所診斷的HIV 陽(yáng)性血清樣品真假的方法中使用了該肽。Johnson R. P.等(免疫學(xué)雜志(The Journal o'f Immunology),第147 巻，第1512-1521頁(yè)，No. 5， 1991年9月1日)描述了在三個(gè)HIV-1血 清反應(yīng)陽(yáng)性個(gè)體中對(duì)gag特異性CTL應(yīng)答的良好特異性進(jìn)行的分析，發(fā) 現(xiàn)該gag特異性CTL應(yīng)答是由I型HLA限制的CD3+CD8淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的。EP-A-0 356 007公開了抗原決定蔟，具體地它涉及到與HIV-1中存在 的蛋白質(zhì)相關(guān)并且能夠作為潛在的抗AIDS疫苗的基礎(chǔ)使用的合成多肽序 列。Rosenberg E. S.等，科學(xué)(Science),第278巻，1997年11月21 日，第1447-1450頁(yè)描述了，病毒特異性CD4+ T輔助淋巴細(xì)胞是在許多 慢性病毒的感染中維持有效免疫的關(guān)鍵，但具有特征性的是在1型慢性 人類免疫缺陷病毒(HIV-l)的感染中不能檢測(cè)到該細(xì)胞。相反地，相應(yīng)于 p24的HIV-1特異性增殖應(yīng)答與病毒的攜帶有關(guān)。他們推斷HIV-1特異性 輔助細(xì)胞在免疫治療干涉及疫苗開發(fā)中可能是重要的。F. Hoffmarm-U Roche & Co. Aktiengesellschaft的EP 0 230 222、 EP 0 270 114、 DE 37 11 016和GB 2 188 639涉及到HTLVIII Gag/Env 基因的蛋白或融合蛋白的重組表達(dá)和純化?？梢詫⑦@些由天然序列組成 的蛋白質(zhì)純化至均一并作為用于檢測(cè)抗AIDS相關(guān)病毒的抗體的診斷測(cè)試 的基礎(chǔ)。也可以對(duì)該gag/env蛋白進(jìn)行配制，以用作通過(guò)預(yù)防免疫防止AIDS的疫苗。從診斷和治療的觀點(diǎn)看，使用p24作為測(cè)定或治療一部分的主要問題 和p24上許多刺激產(chǎn)生大量低特異性抗體的表位有關(guān)，這些表位通過(guò)在 潛在的突變序列上的重復(fù)加強(qiáng)能產(chǎn)生自身抗體(HIV感染中oc/pT細(xì)胞 受體的自身抗體，調(diào)節(jié)異常和模仿.Lake D.F.,等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院 刊(Proc. Natl. Acad. Sci. USA), (23) : 10849—53， 1994年11月8 日)。此外，據(jù)報(bào)道，p24的抗體效價(jià)達(dá)不到與包膜蛋白(gpl20和即41) 的抗體效價(jià)一樣高的水平。通常p24的抗體在感染極早期產(chǎn)生，但在最 初感染期后它的效價(jià)很快達(dá)到穩(wěn)定。之后p24的效價(jià)逐漸下降，而gpl60 發(fā)生相反情況。在細(xì)胞毒T-細(xì)胞活性受到天然存在的HIV-1 gag變種抑 制的有關(guān)最近報(bào)導(dǎo)中，也觀察到這些發(fā)現(xiàn)(Klenerman P.等.，自然 (Nature) , 2:369 (6479),第355頁(yè)，1994年6月2日)。這可能是為 什么會(huì)觀察到p24效價(jià)很快穩(wěn)定和后來(lái)開始下降的原因之一。根據(jù)以上背景資料，為滿足對(duì)有效的預(yù)防和治療疫苗的需求，我們決 定研究設(shè)計(jì)能模擬p24表位而又不拮抗細(xì)胞毒T-細(xì)胞活性的新合成肽的 可能性。最初的工作建立在Korber B.等人(人類逆轉(zhuǎn)錄酶病毒和AIDS, 1997 年編，理論生物學(xué)和生物物理學(xué)組，Los Alamos國(guó)家實(shí)驗(yàn)室，Los Alamos, NM)發(fā)表的一個(gè)表位上。該表位的氨基酸序列(203—222)是KA L G PGATLEEMMT A CQGVG RRMRTKSIKDLSSS R R GVR V S AA S E QQ在本說(shuō)明書給出的序列中定義氨基酸的單字母和三字母密碼符合國(guó)際 標(biāo)準(zhǔn)并在教科書例如，Lehninger A. L.《生物化學(xué)原理》(Principles of Biochemistry) ( Worth Publishers Inc.，紐約，1982)中有說(shuō)明。在上述頭一行序列下面給出的氨基酸是此序列的自然變異。在以下序列上對(duì)含有該修飾表位的序列進(jìn)行初步研究ANPDCKQILKSLGPGATLEEXXTACQGVG-NH2 L~-__J其中X表示2-氨基己酸，而且半胱氨酸殘基處于氧化狀態(tài)，即形成鏈 內(nèi)二硫橋。用該肽作為診斷試劑盒的一部分的研究結(jié)果(未發(fā)表)顯示 對(duì)于一組預(yù)先選擇的非洲人血清其特異性達(dá)到87% (n=279)。對(duì)于一組包 含了明顯不同于其它亞型的HIV-l 0亞型血清的HIV-l陽(yáng)性血清，其靈 敏度驚人地高達(dá)100%。為提高特異性，即確定對(duì)純粹的非交叉反應(yīng)性抗體應(yīng)答有利的氨基酸， 在一個(gè)明顯短得多的而且經(jīng)過(guò)進(jìn)一步修飾的肽上進(jìn)行了相似的研究LIWGATCQEHXTACQGVG - NH2 L__I其中X具有如上所述含義，且半胱氨酸殘基形成一個(gè)鏈內(nèi)二硫橋。 該研究的結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)的特異性提高到96%(n=293),而且與在不使 用p24肽進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中得到的特異性相似。因?yàn)樵诎说谝粋€(gè)肽的實(shí) 驗(yàn)中特異性為87%,所以如果將該肽用作候選疫苗，那么由于它能被非特 異性的抗體所識(shí)別，則可能誘導(dǎo)針對(duì)一個(gè)以上表位的免疫應(yīng)答。然而， 后一個(gè)實(shí)驗(yàn)顯示所用肽序列能獲得僅對(duì)HIV-1特異的免疫應(yīng)答。因此， 如果在侯選疫苗中使用以這個(gè)肽為基礎(chǔ)的序列作為抗原，那么極有可能 增強(qiáng)針對(duì)HIV-1的獨(dú)特免疫應(yīng)答。為進(jìn)一步增加T細(xì)胞表位的數(shù)量和減少逃避突變體形成的機(jī)率，在分 別來(lái)自第264-284位殘基，第253-271位殘基和第166-186位殘基的以 下三個(gè)序列的基礎(chǔ)上(這些序列發(fā)表在1997年"人類逆轉(zhuǎn)錄酶病毒和 AIDS"上；核酸和氨基酸序列的編輯和分析(A Compilation and Analysis of Nucleic Acid and Amino Acid Sequences), 理論生物學(xué)和生物物 理學(xué)組(編)，Los Alamos國(guó)家實(shí)驗(yàn)室，Los Alamos),構(gòu)建了另外三個(gè)肽序列RWI ILGLNKIVRM丫SPTSILD KGVVM MK CVG EDM V V QI GS ANNP P I PVGE I YKRW I ILGLS QAV KDML RKGM VMGGSN KV DVVH GTAP和PEV I PMFSALSEGATPQDLN T RITTTLTE AD ISYNI丫M L N AL VH V IM LAV為確定對(duì)HIV-1特異且靈敏的獨(dú)特序列，合成了幾個(gè)修飾的肽。本發(fā)明描述根據(jù)本發(fā)明的肽來(lái)源于HIV-1核心蛋白p24的上述四個(gè)不同保守區(qū) 域，且具有保持該HIV-1表位獨(dú)特性(靈敏性和特異性)的性質(zhì)。而且, 根據(jù)本發(fā)明的該新肽對(duì)識(shí)別的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)不具有拮抗作用， 并將具有至少一個(gè)潛在的CTL表位。根據(jù)本發(fā)明，滿足以上標(biāo)準(zhǔn)的肽選自Xaai Xaa^ Xaag Xaa4 Xaa5 Xaag Ala Xaa8 Xaa9 Gln Thr Pro Trp Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Xaa18 Val Xa^ (SEQ ID NO:l)其中該鏈中的氨基酸可能具有以下含義該肷衍生物的第l位的Xaa是Lys或Arg,第2位的Xaa是Ala、 Gly、 Ser或Arg，第3位的Xaa是Leu或Met,第4位的Xaa是Gly或Arg，第5位的Xaa是Pro、 Thr、 Val、 Ser、 Gln或Ala ,第6位的Xaa是Gly、 Ala、 Lys、 Arg、 Gln或Glu，第8位的Xaa是Thr或Ser,第9位的Xaa是Leu或lie,第14位的Xaa是Thr、 Ser或Val，第15位的Xaa是Ala或Ser,第16位的Xaa是Cys或Ser,第17位的Xaa是Gln或Leu,第18位的Xaa是Gly、 Glu或Arg，第20位的Xaa是Gly或Arg,該肽含有SEQ ID NO:l序列的至少九個(gè)連續(xù)氨基酸，Xaa丄Xaaa Xaag Xaa4 Xaa5 Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly]nXaa12 Xaa13 TyrXaa15 Pro Xaa17 Xaa18 lie Leu Xaa^ Xaa22 (SEQ ID NO:4)其中該鏈中的氨基酸具有以下含義第l位的Xaa是Arg、 Lys、 Asp或是沒有，第2位的Xaa是Trp、 Gly、 Lys或Arg,第3位的Xaa是Ile、 Leu、 Val或Met ，第4位的Xaa是Ile、 Val或Leu ，第5位的Xaa是Leu、 Met、 Val或Pro ,第12位的Xaa是Arg、 Lys ，第13位的Xaa是Met或Leu ,第15位的Xaa是Ser、 Cys或Gin,第17位的Xaa是Thr、 Val、 Ile、 Ser或Ala,第18位的Xaa是Ser、 Gly或Thr ，第21位的Xaa是Asp、 Glu、 Cys或Gly ，第22Xaa是Gly或沒有，其中SEQ ID N0:4的序列含有至少6個(gè)連續(xù)氨基酸，且n = 0， 1, 2或3，X叫Xaa^Xaaa Pro Ile Pro Xaay Xaa8 Xaa9 Xaa^Xaau Xaa12 [Gly]n Xaa_13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa加Xaa21 Xaa22 Xaa^ Xaa^ (SEQ ID NO :9)其中第l位的Xaa是Asn、 Ser、 Gly、 His、 Ala、 Pro、 Arg或沒有第2位的Xaa是Asn、 Ala或Lys第3位的Xaa是Pro、 Gln、 Gly、 Ile或Leu第7位的Xaa是Val或Ala第8位的Xaa是Gly或Lys第9位的Xaa是Glu、 Asp、 Lys、 Phe或Thr第10位的Xaa是Ile、 Met、 Val或Leu第ll位的Xaa是Tyr、 Leu或沒有第12位的Xaa是Ser或沒有第13位的Xaa是Arg或沒有第14位的Xaa是Asp、 Arg、 Trp、 Ala或沒有第15位的Xaa是Ile或沒有第16位的Xaa是Tyr或沒有第17位的Xaa是Lys或Arg第18位的Xaa是Arg、 Lys或Asp第19位的Xaa是Trp或Gly第20位的Xaa是Ile、 Met、 Val、 Gin或Ala第21位的Xaa是Ile、 Val或Ala第22位的Xaa是Leu、 Met或Val第23位的Xaa是Gly或Cys 第24位的Xaa是Leu或沒有其中SEQ ID N0:9的序列由至少六個(gè)連續(xù)氨基酸組成，且n = 1， 2或3，Xaa丄Xaa_2 Ile Ile Xaa5 Xaa^ Xaa^Xaag Xaag Leu Xaau [Gly]n [Arg]阻Xaa Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa加Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa: (SEQ IN NO :15)其中第l位的Xaa是Pro、 Lys、 Arg或沒有 第2位的Xaa是Glu、 Arg、 Phe或Lys 第5位的Xaa是Pro或Thr 第6位的Xaa是Met、 Thr或Nleu 第7位的Xaa是Phe或Leu 第8位的Xaa是Ser、 Thr、 Ala或Met 第9位的Xaa是Ala、 Glu或Leu 第11位的Xaa是Ser或沒有 第12位的Xaa是Ala、 Arg或沒有 第13位的Xaa是Ile、 Leu或沒有 第14位的Xaa是Ser、 Ala、 Leu或沒有 第15位的Xaa是Tyr、 Glu或Asp 第16位的Xaa是Gly或Asp 第17位的Xaa是Ala或Leu 第18位的Xaa是Thr、 Ile、 Val、 Leu或Asn 第19位的Xaa是Pro、 Thr或Ser 第20位的Xaa是Tyr、 Phe、 Nleu、 His或Gin 第21位的Xaa是Asp、 Asn、 Leu或Ala 第22位的Xaa是Leu、 Ile、 Val或Asn 第23位的Xaa是Asn、 Tyr、 Cys或Gly 第24位的Xaa是Thr、 Met、 Ile、 Ala、 Val或沒有 第25位的Xaa是Gly或沒有其中SEQ ID N0:15的序列由至少六個(gè)連續(xù)氨基酸組成，n 二 1, 2或3且 m=0， 1， 2或3，這些序列的末端可以是游離的羧基或氨基基團(tuán)、酰胺、?；?、乙酰基 或它們的鹽，兩個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基可以形成鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵(disulphide binding), -S-(CH2)p-S-或-(CH2)p-橋的部分，其中p 二 1-8,任選插入 一個(gè)或多個(gè)雜原子如0、 N或S，而且/或者將該所述肽序列固定在固相 支持物上。這些新肽序列具有充當(dāng)良好抗原的潛力，其中該抗原含有至少一種選 自SEQ ID N(hl、 SEQ ID N0:4、 SEQ ID N0:9或SEQ ID NO: 15的肽。 可以通過(guò)例如二聚化或多聚化和/或固定在固相上，調(diào)整不同肽的比例或 濃度或這些肽的大小，以調(diào)節(jié)抗原性。該抗原包含兩個(gè)或多個(gè)根據(jù)本發(fā) 明的多肽序列，它們或者通過(guò)橋如這些鏈的半胱氨酸殘基之間的二硫橋、 或可能插入了一個(gè)或多個(gè)雜原子(如0、 S、或N)的C「Cs亞烷基橋等連 接在一起，或者優(yōu)選地它們并不相接。這些鏈可以以單體、二聚體或寡 聚體的形式被固定在固相上?？梢栽谀┒思由掀渌陌被幔员阈纬?利于固定的"臂"。盡管優(yōu)選自然存在的L-型氨基酸，但本發(fā)明肽中的所有氨基酸均可以 是D-或L-型的。這些肽序列的C-末端及N-末端可以因?qū)δ┒伺?基團(tuán)和/或O00H基團(tuán) 的修飾而與天然序列不同，例如，它們可以被?；?、乙?；?、酰胺化、 或修飾以便為載體或另 一分子提供結(jié)合位點(diǎn)。根據(jù)本發(fā)明的肽由6-50個(gè)氨基酸，優(yōu)選10-30個(gè)氨基酸組成。它們 覆蓋了己鑒定位置中所有天然的氨基酸變異。根據(jù)本發(fā)明的多肽抗原可以是游離形式的或載體結(jié)合形成的。可以從 多種已知的載體中選擇該多肽任選結(jié)合的載體或固相。應(yīng)當(dāng)根據(jù)該固定 化多肽作為診斷抗原或作為疫苗中的免疫成分的預(yù)期用途來(lái)進(jìn)行選擇。能夠用于例如診斷目的的載體的實(shí)例有磁珠或共聚物(如笨乙烯-二乙 烯基苯共聚物、羥化苯乙烯-二乙婦基笨共聚物)、聚笨乙烯或羧化聚苯 乙烯的膠乳、炭黑珠、未活化的或聚笨乙烯或聚氯乙烯活化的玻璃、環(huán) 氧活化的多孔磁性玻璃、明膠或多糖顆?；蚱渌鞍踪|(zhì)微粒、紅細(xì)胞、單克隆抗體或多克隆抗體或這些抗體的fab片段。根據(jù)本發(fā)明的又一實(shí)施方案，這些抗原可以和載體、佐劑聯(lián)合或和其 它免疫刺激因子如攜帶基因的金絲雀痘苗病毒聯(lián)合，形成疫苗的部 分。用于疫苗目的的載體或/和佐劑的例子是其它蛋白質(zhì)，如人或牛的血 清白蛋白及匙孔血藍(lán)蛋白?？梢詫⒚庖叽碳の镔|(zhì)分成三組佐劑、抗原 的載體和賦形劑。佐劑的實(shí)例有氫氧化鋁、鋁鹽、皂苷、胞壁酰二肽或 三肽、單磷?；珹、副百曰咳博德特氏菌(及/ erto w';s)，及各種細(xì)胞 西子，包括Thl細(xì)胞因子IL-12和IL-1。許多蛋白質(zhì)毒素可以用以攜帶 過(guò)客蛋白(passenger protein)穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，這在開發(fā)CTL 疫苗中是有用的。載體包括細(xì)菌毒類素如滅活的破傷風(fēng)和霍亂毒素、經(jīng) 遺傳改造脫毒的細(xì)菌毒素如來(lái)自大腸桿菌的熱不穩(wěn)定性腸毒素、脂肪酸、 活的載體如脊髓灰質(zhì)炎病毒嵌合體(polio chimeras )、和形成顆粒的雜 合蛋白如酵母逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子雜合TY顆粒和HBcAg顆?！，F(xiàn)代疫苗中經(jīng)常 存在的成分賦形劑由礦物油乳劑、弗氏完全和不完全佐劑、植物油乳劑、 非離子嵌段共聚物表面活性劑、角鯊烯或角鯊?fù)?、脂質(zhì)體和生物可降解 微球體構(gòu)成。對(duì)于新疫苗的開發(fā)具有顯著潛力的兩種新佐劑包括水包油 型微乳劑(MF59)和聚合物微粒。任何能提高該抗原的免疫原性的物質(zhì)都 可以被采用，而且，在美國(guó)和歐洲藥典上還給出了載體或佐劑的幾種其 它替代物。用于免疫刺激用途的該抗原的適合制劑還可以含有干擾素如INFi、 抗病毒性趨化因子或造血生長(zhǎng)因子，如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)因子。為了增強(qiáng)刺激和例如腸道內(nèi)的吸收，另一個(gè)方法是與小欣例如二、三 或四肽一起施用本發(fā)明的肽。這些肽可以在本發(fā)明的肽之外施用，也可 以與本發(fā)明的肽聯(lián)合起來(lái)施用。優(yōu)選地，本發(fā)明的肽與由D-型或L-型氨 基酸、優(yōu)選D-型氨基酸組成的三肽YGG—起施用。近來(lái)用于疫苗的非腸胃外遞送(non-parenteral delivery)如通過(guò) 粘膜遞送的方法包括產(chǎn)生非毒性祐膜佐劑衍生物的基因融合技術(shù)、在 必需基因中帶有缺失的遺傳失活抗原、抗原與對(duì)于祐膜免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié) 和控制重要的特定細(xì)胞因子的共表達(dá)、以及允許DNA或RNA攝取的遺傳 物質(zhì)本身及其在寄主細(xì)胞中的內(nèi)源性表達(dá)。在需要細(xì)胞介質(zhì)的免疫的情況下，產(chǎn)生持久應(yīng)答的一種方法是接種編 碼一種或多種特異抗原的質(zhì)粒DNA。為了防止HIV感染，疫苗應(yīng)該誘導(dǎo)粘膜和全身免疫應(yīng)答，并且能夠通 過(guò)任何方便的途徑腸胃外或非腸胃外施用，如皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌 內(nèi)、口服、經(jīng)粘膜或鼻內(nèi)施用。在一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的疫苗的優(yōu)選實(shí)施方案中，它包含含有SEQ ID NO:l、 4、 9和15的肽的抗原，更優(yōu)選地這些肽以1:1:1:1的比例存在。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該疫苗組合物含有抗原RAL GPAATLQTPWTASLGVG-NH2 (SEQ ID NO : 3)RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG-NH2 (SEQ ID NO : 6) RAIPIPAGTLLSGGGRAI丫KRTAILG - NH2(SEQ ID NO : 11) 和RFIIPNIFTALSGGRRALLYGATPYAIG-NH2 (SEQ ID NO : 18). 這些序列中的一個(gè)含有B細(xì)胞表位并將激活體液免疫系統(tǒng)，而其它的序列提供CTL表位，在該CTL表位框架中設(shè)計(jì)氨基酸改變以實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的 結(jié)合。為了便于該肽的合成和/或增加該肽的溶解性，進(jìn)行其它的氨基酸 改變。本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案是，采用本發(fā)明的抗原在體液樣品中檢測(cè)由 HIV-1或HIV-1特異性肽或蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的抗體的方法。設(shè)計(jì)用于該檢測(cè)的 免疫測(cè)定試劑盒和能夠選擇性地與所述抗原反應(yīng)的抗體也包括在本發(fā)明 中。肽制備的描述本發(fā)明的肽可以通過(guò)任何已知的制備線性氨基酸序列的方法，如重組DNA技術(shù)來(lái)產(chǎn)生。將編碼本發(fā)明肽或該所述肽的多聚體的核^列引入表 達(dá)載體中。適合的表達(dá)載體有例如含有復(fù)制和表達(dá)所必需的控制序列的 質(zhì)粒、粘粒、病毒和YAC (酵母人工染色體)?？梢栽谒拗骷?xì)胞中刺激該 表達(dá)載體表達(dá)。適合的宿主細(xì)胞是例如細(xì)菌、酵母細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。 這些技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的，并描述于例如Sambrook等，《分子克隆 實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(Molecular Cloning: A Laboratory Manual) ， Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989。其它熟知的 技術(shù)有降解，或通過(guò)在液相或優(yōu)選在固相(樹脂)上把一個(gè)氨基酸殘基 與下一個(gè)氨基酸殘基偶聯(lián)起來(lái)的合成技術(shù)，例如所謂的Merrif ield合成。 參見例如Barany和Merrifield，《肽分析合成生物學(xué)》(P印tides， Analysis, Synthesis, Biology), 第2巻，E， Gross和Meinhofer編 (Acad. Press,紐約，1980); Kneib-Coronier和Mullen,國(guó)際肽蛋白 研究雜志(Int, J. Peptide Protein Res. )， 30,第705- 739 ( 1987); 和Fields和Norble，國(guó)際肽蛋白研究雜志，35，第161 - 214頁(yè)(1990)。 如果期望連接的或環(huán)狀的肽，則當(dāng)合成適合的線性氨基酸序列后，對(duì) 該氨基酸序列采取化學(xué)氧化步驟，以便實(shí)現(xiàn)環(huán)化或?qū)⒁粋€(gè)肽序列內(nèi)或兩 個(gè)肽序列之間的兩個(gè)半胱氨酸殘基連接起來(lái)，參見Akaji等，Tetrahedron Letter,33， 8,第1073—1076頁(yè)，1992。合成的一般性描述在以下給出的實(shí)施例中制備的所有肽衍生物均是按標(biāo)準(zhǔn)程序在 Milligen 9050型肽合成儀上合成的。所用樹脂是具有0.20 meq/g理論 負(fù)載量的Tenta Gel P RAM ( RAPP P0LYMERE GmbH, Ttibingen )。合成的 最終產(chǎn)物在真空中干燥過(guò)夜。在存在作為清除劑的乙二硫醇 (ethandithiol) (5%)和水(596 )的情況下用90%三氟乙酸處理(室溫下 1.5小時(shí))，使該肽從樹脂上裂解下來(lái)。然后過(guò)濾該樹脂，用其它的三氟 乙酸(10096)(2x20ml)在濾器上清洗。將合并的濾出液在真空中蒸發(fā)(室溫下水浴)，剩余物用乙醚(200 ml)研制，過(guò)濾出沉淀物。立即在濾器上 用水乙酸(100ml)溶解該固體，將其加入1.5升在甲醇中的20%乙酸中， 并用甲醇中的0,1 M碘溶液處理直到剩余微弱的褐色。然后加入醋酸鹽 形式的Dowex 1x8離子交換劑(15g) (Bio-Rad， Richmond, CA),之后 過(guò)濾混合物。蒸發(fā)濾液，殘余物水凍干燥除去乙酸。然后在含有溶于O. 1% 三氟乙酸水溶液的乙腈的適合系統(tǒng)中，在裝有Kromasi1⑧100-5C8 (EKA Nobel， Surte，瑞典)的柱子上，通過(guò)反向相液相色譜純化該產(chǎn)物。通過(guò) 配備了 Kromasil 100 - 5 C8柱(EKA Nobel， Surte,瑞典)的分析性 高效液相色譜儀(HPLC)分析從柱子中收集的樣品。合并含有純物質(zhì)的組 分，蒸發(fā)溶劑，將產(chǎn)物水凍干燥除去乙酸。對(duì)終產(chǎn)物進(jìn)行最終的HPLC分 析，通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)鐠分析(LDI-MS)驗(yàn)證該肽的結(jié)構(gòu)。在合成中用到的所有氨基酸均是L-氨基酸，并用芴甲氧基羰基對(duì)其a-氨基功能進(jìn)行保護(hù)。側(cè)鏈按以下方式進(jìn)行保護(hù)Cys (Trt)， Gln(Trt)， Glu(0tBu)， Thr(tBu).括號(hào)內(nèi)的縮寫詞是Trt =三笨甲基t-Bu =叔丁基0tBu =叔丁酯這些氨基酸衍生物由Bachem AG，瑞士提供。 實(shí)施例1KALGPGATLQTPWTACQGVG — NH2 (SEQ ID NO: 2)的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。純 度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)諳分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): 87 %實(shí)施例2RALGPAATLQTPWTASLGVG (SEQ ID N0:3)的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以欲胺形式合成該肽。純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。純度(HPLC): > 95%分子量(游離堿(free base) ): 1966實(shí)施例3WIIPGLNPLVGGGKLYSPTSILCG-叫(SEQ ID NO:3) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。 純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)a。 純度(HPLC): 95 % 質(zhì)譜分析理論分子量2454.9 實(shí)驗(yàn)分子量2454.8 ES+實(shí)施例4WLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILGRALG (SEQ ID N0:6) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。 純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): >95 % 分子量(游離堿)2552 分子式 C119H195029N33實(shí)施例5KILLGLNPLVGGGRLYSPTSILG卿ID NO : 7)， R"LGLNPLVGGGRLYSPTTILG (SEQ ID NO : 8) 和NIPIPVGDIYGGGDIYKRWQALCL (SEQ ID NO : 24) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成這些肽。純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái) 。 實(shí)施例6RNIPIPVGDIYGGGDIYKRWQALC L卿ID NO:IO) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。 純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): 85 % 質(zhì)譜分析理論分子量2817.3 實(shí)驗(yàn)分子量2813. 7 ES+實(shí)施例7RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRWAILG 卿ID NO: 11) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。純 度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): >95 % 分子量(游離堿)2707 H《. C125H208029N38實(shí)施例8ALPIPAGFIYGGGRIYKRWQALG (SEQ ID NO : 12)， K IPIPVGFIGGGWIYKRWAILG (SEQ ID NO : 13)和K I PIPVGTLLSGGGRIYKRWAILG (SEQ ID NO : 14) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成這些肽。 純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。實(shí)施例9KFIIPN1FSALGGAISYDLNTN1LNCI(SEQID N0:16) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。序 列中的Nl是正亮氨酸。純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和 質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): >80 % 質(zhì)譜分析理論分子量2783.3 實(shí)驗(yàn)分子量2783. 3 ES+實(shí)施例10KFIIPN1FSALSGGGAISYDLNTFLNCIG (SEQ ID N0:17)的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。 序列中的Nl是正亮氨酸。純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析 和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。純度(HPLC): > 80 % 質(zhì)譜分析理論分子量2932.4 實(shí)驗(yàn)分子量2931.8 ES+實(shí)施例11RFIIPN1FTALSGGRRALLYGATPYAIG卿ID NO: 18)的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。序 列中的Nl是正亮氨酸。純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和 質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。 純度(HPLC): >95 % 分子量(游離堿)2894 分子式C137H217032N37實(shí)施例12KII PN1FSALGGGRLLYGATPYAIG (SEQ ID N0:19), RIIPN1FTALSGGGRLLYGATPYAIG卿ID N0:20) 和WIIPN1FSALGGAISYDLNTN1LNCI (SEQ ID NO:25) 的制備。根據(jù)合成的一般性描述，從相應(yīng)的原材料，以酰胺形式合成該肽。 純度用HPLC分析測(cè)定，結(jié)構(gòu)通過(guò)氨基酸分析和質(zhì)譜分析(LDI-MS)來(lái)驗(yàn)證。實(shí)施例13 通過(guò)二硫橋二聚化通過(guò)氧化步驟將實(shí)施例1和3的肽序列連^^起來(lái)形成二肽，其中半胱 氨酸殘基形成二疏橋，該橋可以按以下兩種方式的任何一種形成A) 用12氧化。等量的這兩個(gè)肽溶解在乙酸/甲醇(1:4)中，加入溶于 甲醇的O. 1 M 12產(chǎn)生二聚體的混合物?；駼) 通過(guò)[Cys (Spy) 16]-SEQ ID NO: 2進(jìn)行氧化。用2， 2-二硫二吡啶(2，2-dithiodipyridin) (3當(dāng)量)處理溶解在2 M AcOH (aq)和2-丙醇(l:l) 中的2.3mM SEQ ID N0:2的肽，產(chǎn)生[Cys(Spy) 16]-SEQ ID N0:2。 將等量的[Cys(Spy"]-SEQ ID N0: 2和SEQ ID NO:5的肽溶解在10 mM NH40ac (aq pH=6. 5)和甲醇(5:2)中，產(chǎn)生SEQ ID NO:21的二 聚體。此肽的純度用HPLC分析測(cè)定，肽結(jié)構(gòu)用氨基酸分析驗(yàn)證，肽含量(氨 基酸游離堿)為80% 純度(HPLC) : 9296實(shí)施例14制備含有SEQ ID NO:3、 6、 11和18的肽的疫苗。將水凍干燥的這些 肽以4 mg/ml的終濃度溶解在無(wú)菌水中。最終鹽濃度是0. 9 %。依據(jù)廠家 的使用說(shuō)明，將粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)制劑配制成0.3 rag/ml的終濃度。這兩種溶液均進(jìn)行皮內(nèi)給藥， 一個(gè)典型的注射劑量是100ni。實(shí)施例15將抗原溶液或懸浮液與等份的Bering弗氏完全或不完全佐劑混合， 然后通過(guò)注射器的抽吸和用力推出，或采用勻漿器使其良好地乳化。該 乳化液應(yīng)保持穩(wěn)定至少30分鐘，此抗原-佐劑乳化液最好皮下注射作為 貯存。實(shí)施例16 毒性數(shù)據(jù)將實(shí)例13中的二肽在0.9% NaCl中稀釋到4 mg/ml的試驗(yàn)溶液濃度。 此二肽以每公斤體重100 pg的劑量注入NMFI雌性小鼠體中。沒有觀察 到毒性作用，因此該肽被認(rèn)為是無(wú)毒的。在小鼠和大鼠中對(duì)實(shí)例14中疫苗的肽組合物進(jìn)行毒性研究。選擇小鼠 用于本研究，以提供來(lái)自第二種常用嚙齒類動(dòng)物物種的比較數(shù)據(jù)。測(cè)試 物質(zhì)是以含有凍干物的小瓶形式提供的4種肽的混合物，用于和生理鹽 水進(jìn)行重構(gòu)，劑量水平以總的肽量來(lái)表示。這4種肽以1:1:1:1的比例 存在，使每種肽的劑量水平是0. 0075mg/kg體重、0. 075mg/kg體重和0. 75 mg/kg體重，該劑量水平高達(dá)預(yù)期的人體劑量的500倍。將測(cè)試動(dòng)物分成 4組，每組10只動(dòng)物(5只雄性和5只雌性)鹽水對(duì)照組以及低、中和 高劑量組。通過(guò)以3ml/分鐘的劑量速度靜脈內(nèi)輸注至尾靜脈的方式，施 用一次該測(cè)試組合物。通過(guò)JiJ度內(nèi)注射戊巴比妥鈉在第15和16天處死 動(dòng)物。這些研究的結(jié)果顯示，給小鼠和大鼠施用的這些劑量水平?jīng)]有引起不 良反應(yīng)，而且無(wú)作用劑量超過(guò)3mg/kg。實(shí)施例17用于檢測(cè)HIV-1所誘導(dǎo)的抗體的免疫測(cè)定依據(jù)廠家推薦的操作方案制備磁性微粒試劑。所用Dynabeads的生產(chǎn)商是Dynal AS。將包被了配體的磁性微粒稱作試劑1。將根據(jù)本發(fā)明的 肽與該磁性顆粒的預(yù)先激活表面共價(jià)偶聯(lián)。也可以將該肽物理吸附在該 磁性微粒的表面。試劑1中顆粒的濃度在1 mg/ml到15 mg/ml之間。 顆粒大小在0.2 nm至15 ，之間。肽的濃度范圍從O.Ol mg/mg顆粒到 1 mg/mg顆粒。根據(jù)Dako AS公司推薦的方案，制備抗人Ig堿性磷酸酶(AP)偶聯(lián)的 抗體試劑。該方案是本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)程序，這個(gè)試劑被稱作試劑2。根據(jù)Fluka AG推薦的方案，制備底物溶液酚酞-單磷酸鹽。該方案是 本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)程序，這個(gè)試劑被稱作試劑3。所用的洗滌和孵育緩沖液是含有以下添加成分的標(biāo)準(zhǔn)0.05M tris堿 緩沖液Tween 20(0.01%到0.1%)、甘油(0. 1%到10%)和氯化鈉(0. 2% 到0. 1%)。該測(cè)定程序包括一個(gè)孵育步驟，其中在每個(gè)孔將1滴試劑1和2滴洗 滌緩沖液混合?；旌虾螅尤?0 jil樣品并孵育該溶液5分鐘?？梢岳?用磁鐵吸附住磁性微粒，并在將該磁鐵分離開之前除去液體。然后在與 試劑2 —起孵育前，每個(gè)孔用4滴洗滌溶液清洗兩次。加入1滴試劑2 和2滴洗滌緩沖液，并孵育該溶液5分鐘。可以利用磁鐵吸附住磁性微 粒，并在將該磁鐵分離開之前除去液體。然后在與試劑3 —起孵育之前， 重復(fù)洗滌步驟。每個(gè)孔加入2滴試劑3，并將溶液孵育3分鐘。可以在白 色背景下讀取結(jié)果，陽(yáng)性結(jié)果呈紅色((3+ =鮮紅)，而陰性結(jié)果與陰性 對(duì)照中所獲得一樣是清楚的淡黃/褐色溶液。該免疫測(cè)定試劑盒可以用于檢測(cè)由HIV病毒或HIV特異性肽或蛋白 質(zhì)，例如本發(fā)明的肽誘導(dǎo)的抗體。上面的實(shí)施例僅用來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明，我們必須理解本領(lǐng)域的技術(shù) 人員能對(duì)這里所描述的肽、抗原和疫苗進(jìn)行^^改，而不背離權(quán)利要求書 中闡述的本發(fā)明的概念和范圍。本發(fā)明的多肽能以選自序列SEQ ID N0:1、 SEQ ID N0:4、 SEQ ID N0:9 和SEQ ID N0:15每一組的至少一種肽的組合使用，以形成抗原和目的在 于防治1型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)的預(yù)防性或治療性疫苗的有效成21分。該疫苗可以包括對(duì)于保護(hù)或刺激宿主(人類或脊推動(dòng)物)免疫系統(tǒng) 具有有利作用的化合物，如白介素、干擾素、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)因子、 造血生長(zhǎng)因子等。優(yōu)選地，該疫苗組合物進(jìn)一步含有佐劑或賦形劑，更 優(yōu)選地該佐藥或賦形劑是可能與明礬、弗氏佐劑(完全或不完全)或氫氧化鋁一起的單磷?；珹(Monophosphoryl Lipid A) (MPL )。佐藥/ 賦形劑的最佳量將取決于所選擇的類型 該肽或疫苗制劑可以在保存前凍干。該疫苗可以優(yōu)選在低溫下保存在 含有一個(gè)或多個(gè)劑量單位的小瓶中備用。根據(jù)本發(fā)明的肽的典型劑量單 位在每公斤體重1 ng-lfflg的濃度范圍內(nèi)，優(yōu)選在每公斤體重2 ng-O. 15 mg 內(nèi)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將明了適合的劑量將取決于患者的體重、疾病 的類型、病癥的嚴(yán)重性、給藥途徑以及幾個(gè)其它的因素。該疫苗可以通 過(guò)注射施用多達(dá)12次，典型地施用大約3次。在制備注射溶液時(shí)，將這 些肽以每種肽1 mg/ml和0. 9%氯化鈉的終濃度溶解在無(wú)菌氯化鈉溶液中 典型地注射體積從100 nl到200 pl (2 x 100 nl)。該肽優(yōu)選與合適的 佐藥和/或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)因子如Leucomax 《Shering Plouglw— 起施用。適合的施用方式可以是皮內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、口服、肌內(nèi)、鼻 內(nèi)、粘膜途徑或任何其它合適的途徑。為了維持保護(hù)作用，可能需要進(jìn) 行加強(qiáng)施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了，根據(jù)本發(fā)明的該疫苗組合物不僅 在感染的預(yù)防中有用，而且在感染的治療中也是有用的。序列表(1) 一般信息(i)申請(qǐng)者(對(duì)于除美國(guó)之外的所有國(guó)家)(A) 姓名Bionor A/S(B) 街區(qū)Stramdalsjordet 4,信箱號(hào)碼1868 Gulset(C) 城市Skien(E) 國(guó)家挪威(F) 郵編(ZIP): N-3705(G) 電話+47 35 50 57 50(H) 傳真+ 47 35 50 57 01(i) 發(fā)明者和申請(qǐng)人(僅限于美國(guó))(A) 姓名- Birger S0ret1sen(B) 街區(qū)Meierlia 3(C) 城市3727 Skien(D) 國(guó)家挪威(ii) 發(fā)明名稱HIV肽，抗原，疫苗組合物，檢測(cè)HIV所誘導(dǎo)的抗體的免疫測(cè)定和方法。(iii) 序列數(shù)25(iv) 計(jì)算機(jī)可讀形式(A) 介質(zhì)類型軟盤(B) 計(jì)算機(jī)IBM兼容機(jī)(C) 操作系統(tǒng)Windows 95(D) 軟件Word 7. 0(v) 目前的申請(qǐng)資料-優(yōu)先權(quán)來(lái)自2000年三月四日提交的N0 1999 1078 申請(qǐng)?zhí)?2)SEQIDNO: 1的信息(0 序列特性(A) 長(zhǎng)度20個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(V)片段類型內(nèi)在的(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置1(D)其它信息/注="第1位的Xaa是Lys或Arg" (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置2(D)其它信息/注="第2位的Xaa是Ala, Gly, Ser或Arg" (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置3(D)其它信息/注="第3位的Xaa是Leu或Met" (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置4(D)其它信息/注="第4位的Xaa是Gly或Arg" (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置5(D)其它信息:/注="第5位的Xaa是Pro， Thr, Val， Ser, Gin或Ala " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置6(D)其它信息/注="第6位的Xaa是Gly， Ala, Lys, Arg， Gin或Glu "(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置8(D)其它信息/注="第8位的Xaa是Thr或Ser "(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置9(D)其它信息/注="第9位的Xaa是Leu或lie " (ix)特征(A) '名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置14(D)其它信息/注="第14位的Xaa是Thr， Ser或Val " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置15(D)其它信息/注="第15位的Xaa是Ala或Ser " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置16(D)其它信息/注="第16位的Xaa是Cys或Ser，任選地Cys形成二硫鍵的部分" (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置17(D)其它信息/注="第17位的Xaa是Gln或Leu " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置18(D)其它信息/注="第18位的Xaa是Gly, Glu或Arg " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置20(D)其它信息/注="第20位的Xaa是Gly或Arg "(xi)序列描述SEQ ID NO:l :Xaa， Xaa2Xaa3Xaa4 Xaa5 Xaa6 Ala Xaa8 Xaa9 Gin Thr Pro Trp Xaa14Xaa,5-Xaa16 Xaa17 1 5 10 15Xaa18Val Xaa20 20(2) SEQ ID NO:2的信息(i) 序列特性(A) 長(zhǎng)度20個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽 (iv) 假設(shè)無(wú)(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置16(D)其它信息/注="任選地第16位的Cys形成二硫鍵橋的部分"(xi) 序列描述SEQ ID NO: 2:Lys Ala Leu Gly Pro Gly Ala Thr Leu Gin Thr Pro Trp Thr Ala Cys Gin Gly Val Gly 1 5 10 15 20(2)SEQ ID N0:3的信息:(i) 序列特征(A) 長(zhǎng)度20個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO: 3:Arg Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Gin Thr Pro T巾Thr Ala Ser Leu Gly Val Gly 1 5 10 15 20(2) SEQ ID NO: 4的信息(i) 序列特征(A) 長(zhǎng)度23-24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(ix)特征(A) 名字/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位點(diǎn)1(D)其它信息/注釋="第l位的Xaa是Arg, Lys, Asp或沒有(ix)特征(A) 名字/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位點(diǎn)2(D)其它信息/注釋="第2位的Xaa是Trp， Gly, Lys或Arg (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞(ix)特征被修飾的位點(diǎn)(B) 位置3(D)其它信息/注="第3位的Xaa是Ile， Leu, Val或Met "(ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置4(D)其它信息/注="第4位的Xaa是Ile ， Val或Leu " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置5(D)其它信息/注="第5位的Xaa是Leu， Met, Val或Pro "(ix)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B)位置12(D)其它信息/注="第12位的Xaa是Arg或Lys "(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置13(D)其它信息/注="第13位的Xaa是Met或Leu "(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置15(D)其它信息/注="第15位的Xaa是Ser, Cys或Gln，任選地Cys形成二硫鍵的部分"(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置17(D)其它信息/注="第17位的Xaa是Thr， Val, lie, Ser或Ala " (ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置18(D)其它信息/注="第18位的Xaa是Ser, Gly或Thr "(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置21(D)其它信息/注="第21位的Xaa是Asp, Glu, Cys或Gly,任選地Cys形成二硫鍵的部分"(ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置22(D)其它信息/注="第22位的Xaa是Gly或沒有" ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置ll.. 12(D)其它信息/注="任選地插入具有0、 1、 2或3個(gè)殘基的Gly橋" (xi)序列描述:SEQ ID NO: 4Xaa， Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Gly Leu Asn Pro Leu Val [GlynXaal2Xaa13 Tyr Xaa15 Pro 1 5 10 15Xaa"Xaaialle l_eu Xaa21 Xaa" 20(2) SEQ ID N0:5的信息: (i)序列特征-(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 種類氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子種類肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置23(D)其它信息/注="第23位的Cys可以形成二硫橋的部分" (xi)序列描述:SEQ ID NO: 5:Trp lie lie Pro Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Lys Leu Tyr Ser Pro Thr Ser He Leu 15 10 15 20Cys Gly(2)SEQ ID N0:6的信息: (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述:SEQ ID NO:6:Arg Tip Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Ser 1 5 10 15 20lie Leu Gly(2) SEQ ID N0:7的信息: (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度23個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO:7: 'Lys lie Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Ser He 15 10 15 20Leu Gly(2) SEQ ID N0:8的信息: (i)序列特性(A) 長(zhǎng)度23個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述:SEQ ID NO:8:30Arg Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Thr Ile1 5 10 15 20Leu Gly(2)SEQ ID N0:9的信息: (i)序列特征-(A) 長(zhǎng)度22-26個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置1(D)其它信息/注="第1位的Xaa是Asn， Ser' Gly His, Ala, Pro' Arg或沒有"IX)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置2(D)其它信息/注="第2位的Xaa是Asn ， Ala或Lysix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置3(D)其它信息/注="第3位的Xaa是Pro， Gln， Gly， Ile或Leuix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置7(D)其它信息/注="第7位的Xaa是Val或AlaIX)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置8(D)其它信息/注="第8位的Xaa是Gly或Lysix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置9(D)其它信息/注="第9位的Xaa是Glu, Asp, Lys， Phe或Thr 。ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置10(D)其它信息/注="第lO位的Xaa是Ile, Met, Val或Leu 。ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置11(D)其它信息/注="第ll位的Xaa是Tyr， Leu或沒有。 ix)特征:(A)名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn) .(B)位置12(D)其它信息/注="第12位的Xaa是Ser或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置13(D)其它信息/注="第13位的Xaa是Arg或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置14(D)其它信息/注="第14位的Xaa是Asp， Arg, Trp， Ala或沒有U)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置15(D)其它信息/注="第15位的Xaa是lie或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置16(D)其它信息/注="第16位的Xaa是Tyr或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置17(D)其它信息/注="第17位的Xaa是Lys或Argix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置18(D)其它信息/注="第18位的Xaa是Arg， Lys或Aspix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置19(D)其它信息/注="第19位的Xaa是Trp或Glyix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置20(D)其它信息/注="第20位的Xaa是lie, Met, Val， Gin或Ala")特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置21(D)其它信息/注="第21位的Xaa是Ile， Val或Ala ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置22(D)其它信息/注="第22位的Xaa是Leu, Met或Val ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置23(D)其它信息/注="第23位的Xaa是Gly或Cys ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置24(D)其它信息/注="第24位的Xaa是Leu或沒有ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置12.. 13(D)其它信息/注="選擇地插入1、 2或3殘基的甘氨酸橋 (xi)序列描述:SEQ ID N0:9:Xaa， Xaa2Xaa3 Pro lie Pro Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa，。Xaa" Xaa12 [Gly〗n Xaa13 Xaa14Xaa 1 5 10 15Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa2420(2) SEQ ID NO: 10的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度25個(gè)氨基酸(B) 類性氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)IX)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置24(D)其它信息/注="第24位的半胱氨酸可以形成二硫鍵的部分 (xi)序列描述SEQ ID NO: 10:Arg Asn lie Pro lie Pro Val Gly Asp lie Tyr Gly Gly Gly Asp lie Tyr Lys Arg Trp Gin Ala1 5 10 15 20l_eu Cys l_eu(2) SEQ ID NO: 11的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度26個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO: 11:Arg Ala lie Pro lie Pro Ala Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly Arg Ala He Tyr Lys Arg Trp 15 10 15 20Ala lie Leu Gly 25(2) SEQ ID NO: 12的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度23個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述:SEQ ID NO: 12:Ala Leu Pro lie Pro Ala Gly Phe lie Tyr Gly Gly Gly Arg lie Tyr Lys Arg Trp Gin Ala Leu， 5 10 15 20Gly(2) SEQ ID NO: 13的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度22個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO: 13:Lys lie Pro He Pro Val Gly Phe lie Gly Gly Gly Trp lie Tyr Lys Arg Trp Ala lie Leu Gly 1 5 10 15 20(2) SEQ ID NO: 14的信息(l)序列特征(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述:SEQ ID NO: 14:Lys lie Pro lie Pro Val Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly Arg lie Tyr Lys Arg Trp Ala lie1 5 10 15 20Leu Gly(2) SEQ ID NO: 15的信息(i) 序列特征(A) 長(zhǎng)度24-28個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置1(D)其它信息/注="第l位的Xaa是Pro， Lys， Arg或沒有 ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置2(D)其它信息/注="第2位的Xaa是Glu, Arg, Phe或Lysix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置5(D)其它信息/注="第5位的Xaa是Pro或Thrix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置6(D)其它信息/注="第6位的Xaa是Met, Thr或Nleix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置7(D)其它信息/注="第7位的Xaa是Phe或Leu ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置8(D)其它信息/注="第8位的Xaa是Ser， Thr, Ala或Metix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置9(D)其它信息/注="第9位的Xaa是Ala, Glu或Leuix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置11(D)其它信息/注="第11位的Xaa是Ser或沒有 ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置12(D)其它信息/注="第12位的Xaa是Ala, Arg或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置13(D)其它信息/注="第13位的Xaa是Ile， Leu或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置14(D)其它信息/注="第14位的Xaa是Ser, Ala, Leu或沒有ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置15(D)其它信息/注="第15位的Xaa是Tyr， Glu或Asp ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置16(D)其它信息/注="第16位的Xaa是Gly或Aspix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置17(D)其它信息/注="第17位的Xaa是Ala或Leuix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置18(D)其它信息/注="第18位的Xaa是Thr, Ile， Val, Leu或Asnix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置19(D)其它信息/注="第19位的Xaa是Pro， Thr或Ser ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置20(D)其它信息/注="第20位的Xaa是Tyr, Phe， Nle， His或Ginix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置21(D)其它信息/注="第21位的XM是Asp, Asn, Leu或Alaix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置22(D)其它信息/注="第22位的Xaa是Leu, Ile， Val或Asn 1X)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置23(D)其它信息/注="第23位的Xaa是Asn, Tyr， Cys或Glyix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置24(D)其它信息/注="第24位的Xaa是Thr, Met, lie, Ala, Val或沒有ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置25(D)其它信息/注="第25位的Xaa是Gly或沒有ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置23(D)其它信息/注="任選地第23位置的Cys形成二硫鍵的部分1X)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置11. . . 12(D)其它信息/注="任選地在插入第11位Xaa和第12位Xaa之間一個(gè)Gly-Arg橋，其中n = 1， 2和3, m獨(dú)立于n,是0, 1, 2或3。(xi)序列描述:SEQ ID NO: 15:Xaa, Xaa2 lie lie Xaas Xaa6 Xaa7Xaaa Xaag Leu Xaa" [Glyn[Argm Xaa12 Xaa13 Xaa14 1 5 10Xaa15Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19Xaa20 Xaa21 Xaa^Xaa" Xaa24 Xaa25 15 20 25(2)SEQ ID NO: 16的信息(l)序列特征(A) 長(zhǎng)度25個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置24(D)其它信息/注="任選地第24位的Cys形成二硫鍵的部分 (xi)序列描述SEQ ID. NO: 16:LVs Phe lie lie Pro NIe Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala lie Ser Tyr Asp. Leu Asn Thr NIe1 5 10 15 20Leu Asn Cys lie(2) SEQ ID NO: 17的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度28個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置26(D)其它信息/注="任選地第26位Cys形成二硫鍵的部分 (xi)序列描述SEQ ID NO: 17:(2) SEQ ID NO: 18的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度27個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述:SEQ ID NO: 18:Arg Phe lie lie Pro NIe Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Arg Arg Ala Leu Leu Tyr Gly Ala15 10 15 20Thr Pro Tyr Ala lie Gly 25(2) SEQ ID NO: 19的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO: 19:Lys lie lie Pro NIe Phe Ser Ala Leu Gly Gly Gly Arg Leu Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr Ala15 10 15 20lie Gly(2) SEQ ID N0:20的信息(i) 序列特征(A) 長(zhǎng)度25個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)(xi)序列描述SEQ ID NO:20:Arg lie lie Pro NIe Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Gly Arg Leu Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr 15 10 15 20Ala lie Gly 25(2) SEQ ID N0:21的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度44個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii)分子類型二聚體肽(ili)假設(shè)無(wú)ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置二硫鍵在SEQ ID NO:2的第16位和SEQ ID N0:5的第23位之間(2) SEQ ID NO:22的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度40個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種 (ll)分子類型二聚體肽43(iii)假設(shè)無(wú)ix)特征(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置二硫鍵在SEQ ID N0:2的第16位和SEQ ID NO: 2的第16位之間 (D)其它信息 >注="(2) SEQ ID N0:23的信息 (i)序列特征(A) 長(zhǎng)度48個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型二聚體月太(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置二硫鍵在SEQ ID N0:5的第23位和SEQ ID N0:5的第23位之間 (2) SEQ ID NO:24的信息(l)序列特征(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征:(A) 名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)(B) 位置23(D)其它信息/注="第23位的Cys可以形成二硫橋的部分 (xi)序列描述:SEQ ID NO:24:Asn lie Pro lie Pro Val Gly Asp He Tyr Gly Gly Gly Asp lie Tyr Lys Arg Tyr Gin Ala 15 10 15 20l_eu Cys l_eu(2) SEQ ID NO:25的信息(i) 序列特征(A) 長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B) 類型氨基酸(C) 鏈型單(D) 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)兩種(ii) 分子類型:肽(iii) 假設(shè)無(wú)ix)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞被修飾的位點(diǎn)'(B)位置23(D)其它信息/注="任選地第23位的Cys形成二硫鍵的部分(xi)序列描述:SEQ ID NO:25:Trp lie lie Pro NIe Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala lie Ser Tyr Asp Leu Asn Thr NIe 15 10 15 20l_eu Asn Cys lie
權(quán)利要求
1.來(lái)自HIV gag p24蛋白的肽，其特征在于其氨基酸序列為Arg Trp LeuLeu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro ThrSer Ile Leu Gly(SEQ ID NO6)，其中所述序列的末端可以是游離羧基或氨基基團(tuán)、酰胺、?；?、乙?；蛩鼈兊柠}類，任選地所述肽序列被固定在固相支持物上。
2. 抗原，其特征在于它含有根據(jù)權(quán)利要求1的肽。
3. 疫苗組合物，其特征在于它含有根據(jù)權(quán)利要求l的抗原和可藥用稀釋 劑以及任選的佐劑、載體和/或賦形藥和任選的其它一種或多種免疫刺激 化合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的疫苗組合物，其中這些肽被溶解在鹽水溶液中，而 且所述任選的免疫刺激化合物是粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3-4中任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中該組合物含有選自 單磷?；珹(MPL⑧)、弗氏完全或不完全佐劑或氫氧化鋁的佐劑。
6. 在體液樣品中檢測(cè)由HIV或HIV特異性肽或蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的抗體的方 法，其特征在于將所述樣品進(jìn)行免疫測(cè)定，其中使用了抗原，所述抗原 是權(quán)利要求l的肽。
7. 用于在體液樣品中檢測(cè)由HIV或HIV特異性肽或蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的抗體 的免疫測(cè)定試劑盒，其特征在于該試劑盒包含了診斷用抗原，該診斷用 抗原是權(quán)利要求1的肽。
全文摘要
本發(fā)明包含新的經(jīng)修飾的肽，這種肽能誘導(dǎo)HIV-1特異免疫應(yīng)答而不拮抗細(xì)胞毒性T-細(xì)胞的活性，從而獲得一種有效的預(yù)防性和治療性抗HIV疫苗。此肽以HIV gag p24蛋白的保守區(qū)域?yàn)榛A(chǔ)，本發(fā)明描述了游離形式或載體結(jié)合形式的包含至少一種上述肽的抗原、包含至少一種該抗原的疫苗組合物、使用此抗原檢測(cè)由HIV或HIV特異肽誘導(dǎo)的抗體的免疫測(cè)定試劑盒及方法。
文檔編號(hào)A61K39/00GK101328210SQ20081009213
公開日2008年12月24日 申請(qǐng)日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月4日
發(fā)明者B·索倫森 申請(qǐng)人:比奧諾爾免疫有限公司