專利名稱：4’,5,6-三甲氧基燈盞花乙素、其制備方法及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及燈盞花乙素衍生物，具體涉及一種新穎的燈盞花乙素衍 生物，其制備方法及含有該化合物的藥物組合物，以及它們?cè)谛?、腦血 管疾病等方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
燈盞花又名燈盞細(xì)辛，屬菊豆科短亭飛蓬類植物。燈盞花素是從燈 盞花全抹植物中分離提取出的以含燈盞花乙素為主(>90%),還含有少量 燈盞花曱素的混合物(有效部位)，燈盞花乙素又稱野黃茶苷。燈盞花素 具有活血化瘀、散寒解表、舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)除濕之功效，臨床上常用于 治療心腦血管疾病。目前臨床中使用的燈盞花制劑，其有效成分一般都 是利用乙醇和乙酸乙酯進(jìn)行提取的主要含燈盞花乙素的制劑，燈盞花乙 素在心腦血管疾病治療方面已有許多文獻(xiàn)報(bào)道。臨床應(yīng)用表明燈盞花乙 素具有增加心腦血管血流量，降低血管阻力，抗血小板、紅細(xì)胞凝聚， 降低血液粘稠度等作用，療效確切。
由于燈盞乙素難溶于水，口服生物半衰期短，絕對(duì)生物利用度低，限 制了它在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。為了克服上述不利因素以及擴(kuò)大其應(yīng)用范 圍，人們對(duì)其進(jìn)行改造，旨在尋找新型的活性化合物。文獻(xiàn)報(bào)道(^/r. /. 尸力ar瓜5W, 2006， 29， 5， 385-393 )，在燈盞花乙素糖戒羧基上進(jìn)行乙 酯、千酯和羥乙酰胺酯的前藥合成，發(fā)現(xiàn)燈盞花乙素羥乙酰胺酯在緩沖 溶液(PH=4. 2)和水中的溶解度比燈盞花乙素分別提高了近10倍和35 倍。
然而，現(xiàn)有的燈盞花乙素或其衍生物的溶解性能不好，生物利用度 不高，治療效果也不夠理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一新的燈盞花乙素衍生化合物，該化合物溶 解性能好，生物利用度高，療效確切，可用于心腦血管等疾病的預(yù)防和 治療。
本發(fā)明的另 一 目的在于提供一種本發(fā)明新的化合物的制備方法。 本發(fā)明進(jìn)一步的目的在于提供一種改善或治療心腦血管、炎癥和腫 瘤的藥物組合物。
本發(fā)明提供了 一種新的燈盞花乙素衍生化合物，是在燈盞花乙素黃 酮結(jié)構(gòu)的酚羥基上引入甲基，獲得一新結(jié)構(gòu)的燈盞花乙素衍生物，其化
學(xué)命名為4， ，5, 6-三甲氧基燈盞花乙素，為了描述上的便利，下文中該 化合物簡(jiǎn)稱為Al，其結(jié)構(gòu)用式(I)表示
式(I)所示的新的燈盞花乙素衍生化合物還可以其鹽的形式出現(xiàn)， 包括與無(wú)機(jī)石威或有才幾石威形成的鹽。
本發(fā)明的4， ，5,6-三曱氧基燈盞花乙素(Al)的制備方法簡(jiǎn)便，它 是用工業(yè)化植物提取原料燈盞花素作為起始原料，經(jīng)曱醚化反應(yīng)后經(jīng)硅 膠柱分離得到化合物Al。 Al的具體的制備方法包括如下步驟
a、 將燈盞花素溶于有機(jī)溶劑中；
b、 向上述有機(jī)溶劑中加入甲醚化反應(yīng)試劑和堿，于室溫下攪拌；
c、 步驟b反應(yīng)得到的產(chǎn)物經(jīng)分離提取得到Al。其中，步驟a具體為將燈盞花素溶于DMF (N，N-二曱基曱酰胺)和 二氯曱烷按體積比10: 0-10: 5得到的混合溶劑中。其中，所述混合溶 劑用量為10-100毫升/克?；旌先軇┑挠昧渴前凑彰靠藷舯K花素所需要 的混合溶劑的毫升量計(jì)算。其中用二曱基亞砜(DMS0)可替代N,N-二曱 基曱酰胺(DMF)， 二氯乙烷可替代二氯甲烷，其它類似的替換也是可以 的。
其中，步驟b中所述曱醚化反應(yīng)試劑優(yōu)選硪曱烷，其用量按摩爾比 相對(duì)于反應(yīng)底物為3-5: 1。
其中，步驟b中所述的石威為M2C03或MHC03，其中M為鈉Na， K, Li， 用量按摩爾比相對(duì)于反應(yīng)底物為3-10: 1。
其中，步驟c具體為步驟b反應(yīng)得到的產(chǎn)物以乙酸乙酯/曱醇為1 -10: 1 (V/V)用硅膠柱分離提取得到Al。
上述制備A1的方法具有反應(yīng)條件溫和、成本較低、易于操作及適宜 于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明人采用兩種與人類疾病相近的動(dòng)物模型，測(cè)定多種藥效學(xué)指標(biāo)， 綜合評(píng)價(jià)Al對(duì)急性心腦缺血的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Al在實(shí)驗(yàn)條 件下，對(duì)心肌缺血有明顯保護(hù)作用，Al高劑量組40mg/kg顯示出了比 40mg/kg燈盞花素片和50mg/kg的尼莫地平片還要好的作用。本發(fā)明化合 物大劑量的使用，也沒有發(fā)現(xiàn)該化合物的毒副作用，證明其用藥安全。
本發(fā)明還提供了含有Al的藥物組合物，其中Al作為活性組分，還 包含藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物Al和藥物組合物可用于制備治療心腦血管疾病、炎 癥或腫瘤的藥物。
所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，如賦形劑、 填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香 劑、表面活性劑等。
以A1作為活性組分，加入藥學(xué)上常規(guī)的載體，按照制劑的常規(guī)制備方法可制成包括口服劑、注射制劑、鼻噴霧劑的常規(guī)劑型。
本發(fā)明的藥物組合物可按照各種制劑類型的常規(guī)方法使用，使用劑 量可根據(jù)用藥途徑、患者年齡、體重、所治療疾病的類型和嚴(yán)重程度等
變化，如口服途徑每次服用劑量在1 Omg—10 Omg,每天劑量在2 Omg- 3 0 Omg; 注射途經(jīng)每次5mg-80mg,每天1-2次。按照患者個(gè)體情況用藥，通常每 天治療劑量口服50mg-200mg、注射劑量20mg-100mg、預(yù)防口服用藥為 15mg_60mg。
具體實(shí)施例方式
下面具體描述Al的制備方法，Al的藥理學(xué)作用以及本發(fā)明藥物組合 物的常規(guī)制劑的制備方法。
制備實(shí)施例4， ， 5， 6-三曱IUJT盞花乙素(Al)的制備
5克(10. 8鵬o1 )燈盞花素溶解于100毫升DMF和二氯甲烷混合溶 劑中，加入4. 6克碘曱烷和7. 5克(54mmo1 )碳酸鉀，于室溫下攪拌2 天，TLC (薄層層析法)顯示反應(yīng)原料已完全，加入50毫升1N鹽酸，并 用50毫升乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，用無(wú)色硫酸鈉干燥，旋干有 機(jī)溶劑，并用硅膠過柱(乙酸乙酯曱醇=10: 1)，得淡黃色固體3.1 克，產(chǎn)率為60%。 Hi麗R( 400MHz， CDC13) 5 7.78 (d， 2H) ， 6.92 (d, 2H)， 6.60 (s， 1H)， 6.50 (s， 1H), 4.94 (d， 1H)， 4.01 (d， 1H), 3.83 (s， 3H)， 3.81 (s， 3H), 3.71 (s, 3H) ， 3.47-3.67 (m, 5H); C"NMR (100MHz, CDC13) 5 181.76， 181.68， 168.14， 163.59， 163.54， 161.79， 155.15, 152.38, 152.10， 151.62， 132.25， 127.28， 122,17， 113.62， 105.97, 102,82, 100.13， 93.63， 75.02， 74.77， 71.90， 70.31， 60.00， 54.63， 51. 54; MS (ESI) M+ 504
實(shí)驗(yàn)例一 Al對(duì)心腦血管缺血保護(hù)作用的藥理學(xué)研究
大量的藥理研究證明，燈盞花素具有擴(kuò)張腦血管，降低腦血管阻力， 增加腦血流量，改善微循環(huán)，提高血腦屏障通透性，增強(qiáng)機(jī)體巨謹(jǐn)細(xì)胞吞噬免疫作用，對(duì)抗垂體后葉素所至腦缺血缺氧，并能對(duì)抗由二磷酸腺
苷(ADP)引起的血小板凝聚作用。燈盞花素在臨床上廣泛用于治療腦血
栓、腦梗塞以及類型未定的中風(fēng)后癱瘓、高血壓、腦栓塞、多發(fā)性神經(jīng) 炎、慢性蛛網(wǎng)膜等腦血管意外所致癱瘓以及冠心病、心絞痛、治療痛風(fēng) 性關(guān)節(jié)炎等癥。
下面通過動(dòng)物藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)來說明本發(fā)明化合物Al的活性，并且通過 與燈盞花素及尼莫地平的對(duì)比研究來說明其顯著的治療效果。
選擇與人類疾病相近且重復(fù)性好的動(dòng)物模型，是評(píng)價(jià)藥物治療效果 的基礎(chǔ)。下面生物實(shí)驗(yàn)中采用兩種與人類疾病相近的動(dòng)物模型，測(cè)定多 種藥效學(xué)指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)Al對(duì)心腦缺血的作用。
l材料
1. 1藥品與試劑
實(shí)施例合成Al純品。市售燈盞花素片，20mg/片，批號(hào)20070418， 由云南省藥物研究所制藥廠生產(chǎn)。尼莫地平(尼達(dá)爾片)，20mg/片，天津 市中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070301。以上樣品均用0. 5%羧曱基纖維 素鈉(CMC-Na)配制成所需濃度的混懸液供大鼠灌胃用。
紅四氮唑(TTC)，進(jìn)口， AMRESCO分裝，批號(hào)0765，上海生工出品。腺 苷二磷酸鈉(ADP)，批號(hào)A2754， Sigma公司生產(chǎn)，進(jìn)口分裝，北京鼎國(guó)生 物技術(shù)發(fā)展中心出品。
AST(紫外動(dòng)力學(xué)法，批號(hào)0704151 )、LDH(紫外動(dòng)力學(xué)法，批號(hào)0704102、 CK-MB (選擇性抑制動(dòng)力學(xué)法，批號(hào)100412 )、 TT (批號(hào)0504052 )、 PT (批 號(hào)0604161 )、 APTT (批號(hào)0604131 )及FIB (批號(hào)060405 )測(cè)定試劑盒， 均為四川邁克科技有限公司出品。 1. 2動(dòng)物
清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體重240 385g，合格證號(hào)SCXK (滬)2003-0002, 來源于上海西普爾一必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心代購(gòu)。
1. 3儀器
TM1024全自動(dòng)生化分析儀，日本東京抹式會(huì)社；Centrifuge 5810R 型冷凍離心機(jī)，德國(guó)eppendoff公司；BS110型電子分奸天平，賽多利斯 />司；Millipore超純7JC處理系統(tǒng)，美國(guó)Mi 11 ipore/>司；6951D型心電 機(jī)，上海光電公司；C2000-4血凝儀及LBY-NS血小板聚集儀，北京普利 生集團(tuán)。 1.4統(tǒng)計(jì)
結(jié)果以I士SD表示，正態(tài)分布數(shù)據(jù)用t;f僉驗(yàn)，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)用秩和 檢驗(yàn)。 2方法
2. 1大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎心肌缺血實(shí)驗(yàn) 2. 1. 1實(shí)驗(yàn)分組及造型
雄性SD大鼠，330 ~ 385g，按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、燈 盞花素片40mg/kg組、Al 20mg/kg組及Al 40mg/kg組。各組動(dòng)物按劑量 每曰灌胃給藥一次，連續(xù)5天，空白組和模型組給予等容量0. 5%CMC-Na 10ml/kg體重。末次給藥后30min,用12y。7jc合氯醛腹腔注射350mg/kg麻 醉動(dòng)物，行開胸手術(shù)暴露心臟，于肺動(dòng)脈圓錐及左心房間找出冠狀動(dòng)脈 左前降支，距根部2 3mm處結(jié)扎，快速心臟復(fù)位關(guān)閉胸腔。假手術(shù)組僅 置線頭而不結(jié)扎。
2. 1. 2檢測(cè)指標(biāo)
分別記錄結(jié)扎前及結(jié)扎后5分、30分、lh、 2h、 4h和24h肢體II導(dǎo) 聯(lián)心電圖，測(cè)量S-T段(J點(diǎn))變化值。待記錄24h心電圖后，頸動(dòng)脈插 管取血二份 一份分離血清按試劑盒方法測(cè)定AST、 LDH及CK-MB的活性； 一份用3.8%枸櫞酸鈉以1: 9抗凝，1000rpm離心5min制備富血小板血漿 (PRP), 3500rpm離心10min制備貧血小板血漿 (PPP )。按比濁法測(cè)定ADP-2Na誘導(dǎo)的血小板聚集率，ADP的終濃度為6mol/L;按試劑盒方法分 別測(cè)定TT、 PT、 APTT及FIB。耳又血后迅速摘出心臟，置于冰生理鹽水中泵 出心腔內(nèi)積血，去掉心房及脂肪組織，吸干水分稱取心室重，隨后沿冠狀 切成5片，在r/。TTC溶液中避光于37°C孵育染色10min。經(jīng)染色后，正 常心肌組織呈紅色，而梗死組織呈白色，將梗塞部位剪下稱重，計(jì)算壞死 部分占心室重的百分比為心肌梗塞范圍。
2.2大鼠MCAO局灶性腦缺血實(shí)—瞼 2. 2. 1實(shí)—驗(yàn)分組及造型
雄性SD大鼠，體重240 - 290g，分組及劑量同前，另設(shè)一陽(yáng)性對(duì)照藥 尼莫地平50mg/kg組。各組動(dòng)物每日按劑量灌胃給藥一次，連續(xù)5天。 末次灌胃后30min，用12%水合氯醛腹腔注射350mg/kg麻醉動(dòng)物，左側(cè) 臥位，沿右耳眼線中點(diǎn)切開皮膚，分離顳肌，絞斷顴骨，在顴骨根前方 用牙科鉆鉆孔，暴露MCA,在大腦下靜脈和嗅束間用針挑起，斷之，棉球 壓迫止血后，分層縫合肌肉和皮膚。假手術(shù)組除了不挑斷MCA外，其余 步驟相同。
2. 2, 2觀察指標(biāo)
動(dòng)物于造模后6h及24h根據(jù)運(yùn)動(dòng)等行為表現(xiàn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，以 此作為腦功能障礙指標(biāo)。評(píng)分采用盲法，即評(píng)分者不知道給藥的情況， 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下
_^_^_行為障礙評(píng)分
提鼠尾離開地面約 一尺，手術(shù)對(duì)側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲，肘屈曲， 1-4 肩內(nèi)旋或有腕，肘屈曲又有內(nèi)旋。
將動(dòng)物置于平地面上，分別推雙肩向內(nèi)側(cè)，檢查阻力。 1-3 將動(dòng)物置于金屬網(wǎng)面上，觀察兩前肢的張力。 1-3 將動(dòng)物置于平地面上，觀察有無(wú)轉(zhuǎn)圈。 1-2滿分 _^_______ 12
以上標(biāo)準(zhǔn)滿分為12分，分?jǐn)?shù)越高，表明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。
造模24h，經(jīng)神經(jīng)功能評(píng)分后，頸動(dòng)脈插管取血， 一份分離血清按試 劑盒方法測(cè)定AST及LDH的活性； 一份用3. 8°/。枸櫞酸鈉以1: 9抗凝， 1000rpm離心5min制備富血小板血漿(PRP ), 3500rpm離心10min制備 貧血小板血漿(PPP)。按比濁法測(cè)定ADP-2Na誘導(dǎo)的血小板聚集率，ADP 的終濃度為6mol/L;按試劑盒方法分別測(cè)定TT、 PT、 APTT及FIB。取血 后快速斷頭取腦，放入冰生理鹽水中去除嗅球、小腦和低位腦干，吸干 水分稱取腦重，沿冠狀切成5片，置入5ml含有41TTC及l(fā)mol/LK2HP040. lml 的溶液中，避光于37。C溫孵30min,其間每隔7-8min翻動(dòng)一次，經(jīng)染色 后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗死組織呈白色，將梗塞部位剪下稱重， 以重量求面積法計(jì)算梗死組織重量占雙側(cè)大腦半球重的百分比作為腦梗 塞范圍。
3結(jié)果
3. 1對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎心肌缺血的影響 3. 1. 1對(duì)心肌缺血心電圖S-T段的影響
模型組大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后，心電圖上S-T段(J點(diǎn))明顯升高或下 降，而假手術(shù)組則變化不大，表明實(shí)驗(yàn)造模成功。Al高劑量組能明顯減 少各時(shí)間點(diǎn)S-T段的變化，表明對(duì)心肌缺血時(shí)的心電圖有明顯改善作用； Al j氐劑量組^f義對(duì)缺血5 min、 30min和24h的心電圖有改善作用。結(jié)果見 表l。
表1 Al對(duì)心肌缺血大鼠心電圖S-T段的影響
組 劑量 動(dòng)物 結(jié)扎后 ST段變化(X土SD, mv)
別 (/kg) 數(shù)5rain30min lh 2h 4h 24h
(只)假手10ml100. 06 ±0. 05 ±0. 04 ±0. 06 ±0. 06 ±0. 01 ±
術(shù)0. 060. 050. 050. 040. 050. 02
模10ml110. 37 ±0. 24 ±0. 140. 16 ±0. 16 ±0. 18 ±
型0. 12AA0. 09AA± 0. 08A0. 08AA0. 10AA0. 14AA
燈蓋40mg120. 15 ±0. 09 ±0. 07 ±0. 07 ±0. 08 ±0. 02 ±
花素0. 14"0. 08"0. 06'0. 07"0. 06'0. 03"
片
Al40mg120. 1"0. 06 ±0. 05 ±0. 05 ±0. 06 ±0. 02 ±
0. 12"0. 06"0. 04*'0. 04"0. 05*0. 03"
Al20mg110. 17 ±0. 12 ±0. 11 ±0. 11 ±0. 11 ±0. 07 ±
0.『0. 09"0. 080. 070. 080. 08'
與fi手術(shù)組相比AAP<0. 01;與沖莫型組相比:*P<0. 05, **P<0. 01。
3. 1. 2 對(duì)心肌缺血大鼠心肌酶學(xué)的影響
模型組大鼠血清AST、 LDH及CK-MB活性有不同程度的增高，尤以 CK-MB及LDH活性增高更明顯，表明心肌損傷造模成功。Al兩種劑量均 能明顯降低CK-MB和LDH的釋放，并具有降低AST的趨勢(shì)，表明減輕心 肌細(xì)胞損傷作用顯著；兩個(gè)給藥組大鼠的心肌梗塞范圍均顯著小于模型 對(duì)照組，與沖莫型組相比分別縮小60. 87%和45. 65%。結(jié)果見表2。
表2 Al對(duì)大鼠心肌梗塞范圍和酶學(xué)的影響
組 劑量動(dòng)物 心肌酶學(xué)(X±SD, ku/L) 心肌梗塞范圍
別 (/kg) 數(shù) AST LDHCK-MB (X±SD, 縮小率
(只) ％)假手術(shù)10ml100. 52 ± 0. 210. 82 ±0. 65 ± 0. 260. 19 ±一
0. 210. 27
模型10ml110. 72 ± 0. 351. 08 ±2. 06 ± 1. 306. 44 ±—
0. 27A△ △3. 62
燈盞花40mg120. 68 ± 0. 330. 94 ±0. 92 ±3. 09 ±52. 02
素片0. 420. 64*1. 58*
Al40mg120. 61 ± 0. 200. 61 ±0. 80 ±2. 52 ±60. 87
0. 24*'0. 68'2. 16'
Al20mg110. 61 ± 0. 26066 ±0. 71 ±3. 50 ±45. 65
0. 32"0. 45"2. 68'
與假手術(shù)組相比:AP<0.05， AAP<0. 01;與模型組相比:*P<0. 05, **P< 0. 01。
3. 1. 3對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎心肌缺血大鼠血小板聚集及凝血的影響
大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致心肌缺血造模后，血小板聚集率明顯升高，ATPP 時(shí)間有縮短趨勢(shì)，纖維蛋白原的含量明顯增加。各給藥組能明顯抑制ADP 誘導(dǎo)的血小板聚集，并有延長(zhǎng)TT、 APTT時(shí)間的趨勢(shì)，Al還具有降低纖維 蛋白原含量的趨勢(shì)。結(jié)果見表3。
表3 Al對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠血凝及血小板聚集的影響
組劑量動(dòng)物血凝指標(biāo)血小板
別(/kg)數(shù)TTPTAPTTFIB聚集率
(只)(s)(s)(s)(g/L)(%)
假手10ml1077. 14 ±23. 74 ±85. 95 ±3. 57 ±49. 00 ±
術(shù)25. 126. 6530. 160. 496. 34模10ml1172. 37 ±24. 56 ±56. 58 ±4. 75 ±57,.50 ±
型40. 794. 9641. 581. 19AA4. 00△厶
燈蓋40mg1292. 49 ±26. 58 ±69. 74 ±3. 90 ±48.93±
花素34. 443. 8133. 820. 967.22"
片
Al40mg1293. 04 ±25. 75 ±75. 96 ±3. 95 ±48.22 ±
35. 645. 2635. 870. 845.55.'
Al20mg1192. 41 ±25. 90 ±78. 17 ±4. 77 ±51.20±
42. 373. 5128. 141. 117.4T
與々i手術(shù)組相比AP < 0. 05， AAP < 0. 01;與才莫型組相比*P < 0. 05, **P< 0. 01。
3. 2對(duì)MCAO致局灶性腦缺血大鼠的影響
3. 2. 1對(duì)MCAO大鼠神經(jīng)功能障礙及腦梗塞范圍的影響
大鼠MCAO造模后，活動(dòng)減少，出現(xiàn)不同程度的運(yùn)動(dòng)障礙，模型組與 假手術(shù)組相比差異顯著。各給藥組均能明顯改善MCAO大鼠的神經(jīng)功能障 礙，縮小腦梗塞的范圍，Al分別縮小64. 64% 、 59.10%。結(jié)果見表4。
表4 Al對(duì)MCAO大鼠神經(jīng)功能障礙及腦梗塞范圍的影響
組別劑量動(dòng)物數(shù) 腦梗塞范圍 行為學(xué)評(píng)分(X±SD,分)
(/kg) (只) (X±SD, %)縮小率 6h 24h
^艮手術(shù) 10ml 100.04 ±0.09 — 0. 6 ±0.60 ±1.08
0. 97
沖莫型 10ml 11 5. 77 ± 2. 59 —8.73 ±1.01AA 7. 54 ± 1. 29
厶厶 厶厶
尼莫地 50mg 122. 27 ±2. 56" 60.66 6. 50 ±1.68"4. 83 ±1.40**
平燈盞花 40mg 11 2. 70 ±1.42" 53.21 6. 27 ± 1. 01" 5. 18 ± 1. 33"
素片
Al 40mg 12 2. 04 ±1.43" 64.64 5. 75 ± 1. 42" 4. 25 ± 1. 60"
Al 20mg 12 2. 36 ±1.81" 59.10 6. 42 ± 1. 62" 4. 92 ± 1. 31"
與々支手術(shù)組相比AAP<0. Ol;與模型組相比:*P < 0. 05, **P < 0. 01。
3. 2. 2對(duì)ADP誘導(dǎo)的MCAO大鼠血小板聚集及凝血的影響
大鼠MCAO造模后，血小板聚集率明顯增加，凝血時(shí)間有所縮短而纖 維蛋白原的含量有增加的趨勢(shì)。兩種樣品均能明顯抑制由ADP誘導(dǎo)的血 小板聚集，并具有降低纖維蛋白原含量的趨勢(shì)，A1有延長(zhǎng)APTT時(shí)間、有 延長(zhǎng)TT時(shí)間的趨勢(shì)。結(jié)果見表5。
表5 Al對(duì)MCAO大鼠血凝及血小板聚集的影響(X ± SD )
組劑量動(dòng)物數(shù)血凝指標(biāo)血小板
別(/kg)(只)TTPTAPTTFIB聚集率
")(s)(s)(g/L)(%)
假手10ml1087. 96 ±28. 02 ±81. 63±3. 70 ± 0. 5846. 30 ±
術(shù)29. 565. 4939. 8010. 97
模10ml1171. 58 ±25. 82 ±57. 86 ±4.50±1.4060. 38
型35. 647. 7932. 72± 9. 28AA
尼莫50mg1288. 55 ±23. 38 ±61. 02 ±3. 52 ± 1. 1454.15 ±
地平32. 248. 2344. 797. 76
燈盞40mg1198. 07 ±26. 78 ±74. 79 ±3. 24 ± 0. 90'49. 5 ±
花素36. 833. 5126. 266. 80"
片
Al40mg1262. 04 ± 復(fù)8023. 43 ± 8. 6675. 15 ± 27. 413. 59 ± 0. 7652. 38 ± 5. 24*Al 20mg12 95. 55 ± 25. 56 ±62. 48 ±3. 38 ± 1. 07 50. 52 ±
24.80 5.30 29.08 4.07"
與假手術(shù)組相比AP<0. 05, AAP<0. 01;與模型組相比*P < 0. 05, **P< 0. 01。
3. 2. 3 對(duì)MCAO大鼠血清AST、 LDH及體重的影響
模型組大鼠血清AST及LDH活性明顯增高而手術(shù)后24h體重顯著下 降，兩給藥組均能明顯降低LDH的釋放，A1還能明顯降低AST活性，能 明顯對(duì)抗造模大鼠的體重減輕，表明兩樣品減輕腦組織損傷作用顯著。 結(jié)果見表6。
表6 Al對(duì)MCAO大鼠血清AST、 LDH及體重的影響
組劑量動(dòng)物數(shù)體重(X±SD, g)血清酶(X ±SD, u/L))
別(/kg)(只)給藥前手術(shù)前術(shù)后6h術(shù)后 24hASTLDH
假手10ml10258. 0 ±269. 5 ±258. 0 ±255. 5 ±156. 0±566. 1 ±
術(shù)15. 516. 615. 816. 651. 0191. 2
模10ml11257. 3 ±267. 7 ±252. 3 ±240. 0 ±246. 6 ±907. 1 ±
型10. 19. 67. 58. 7A121. 5A256. 7AA
尼莫50mg12259. 6 ±265. 8 ±257. 1 ±249. 6 ±198, 6 ±536. 7 ±
地平14. 512. 911. 410. 5'118. 2262. 8"
燈盞40mg11259. 1 ±267. 7 ±256. 8 ±247. 3 ±244. 3 ±719. 5 ±
花素13. 019. 415. 715. 4183. 6133. 4'
片
Al40mg12256. 3 ±265. 8 ±253. 8 ±244. 2 ±152. 9±472. 0 ±
13. 312. 412. 112. 233. 0'231. 9"
Al20mg12257. 9 ±268. 8 ±258. 3 ±250. 0 ±171. 2 ±571. 1 ±
11. 612. 411. 915. r71. 6287. 5"與々i手術(shù)組相比AP<0. 05， AAP<0. 01;與才莫型組相比*P < 0. 05, **P< 0. 01。 4.結(jié)論
發(fā)明人采用兩種與人類疾病相近的動(dòng)物模型，測(cè)定多種藥效學(xué)指標(biāo)， 綜合評(píng)價(jià)兩種樣品對(duì)急性心腦缺血的影響。結(jié)果表明，Al能明顯改善冠 狀動(dòng)脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠的心電圖變化，降低血清CK-MB及LDH的活 性，縮小心肌梗死范圍，抑制血小板聚集，并具有延長(zhǎng)凝血時(shí)間和降低 纖維蛋白原的趨勢(shì)，提示其對(duì)心肌缺血有明顯保護(hù)作用。Al不^f又可以減 少M(fèi)CAO大鼠腦梗塞范圍，使行為障礙程度得到明顯改善，血清中LDH及 AST的活性明顯降低；同時(shí)還能明顯抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，并有一 定的抗凝趨勢(shì)，從而抑制血栓形成。研究結(jié)果表明，Al對(duì)心腦缺血具有 顯著保護(hù)作用。
在所采用的兩種缺血性心腦血管疾病模型上，Al在實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì) 心肌缺血有明顯保護(hù)作用，Al高劑量組顯示出了比40mg/kg燈盞花素片 和50mg/kg的尼莫地平片還好的作用。
實(shí)驗(yàn)例二本發(fā)明化合物Al和燈盞花乙素的溶解性比較研究
表7 本發(fā)明化合物Al和燈盞花乙素的溶解性比較
化合物H20MeOH95%EtOHn-BuOH0. OIN歸H
燈盞花乙素極微溶解略溶略溶略溶溶解
Al微溶溶解溶解溶解溶解
注按2005CP規(guī)定，極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶 解、幾乎不溶和不溶的定義。
從表7可以看出，本發(fā)明化合物Al較之燈盞花乙素，生物理化性質(zhì) 明顯改善，即水溶性和脂溶性都有明顯的改善，進(jìn)而可以明顯提高其生物利用度，提高療效。
通過下面的實(shí)施例說明本發(fā)明化合物在制備藥物制劑上的應(yīng)用。
制劑制備實(shí)施例1: Al凍干粉針劑的制備
原料配方(制備1000支，產(chǎn)品規(guī)格50mg/支) 4， ，5,6-三曱氧基燈盞花乙素 50g 甘露醇 100g 制備方法具體如下
按處方稱取4， ，5，6-三曱氧基燈盞花乙素，加注射用水1000ml，攪 拌、并用0. Ol麗aOH調(diào)節(jié)使溶解，溶解后加入甘露醇100g ，攪拌使溶解 完全，加注射用水至總配液量2000ml ，加入總配液量1%的針用活性炭， 吸附30分鐘，先用濾紙加砂棒過濾除去活性炭，濾液經(jīng)過0. 45 |u m的濾 膜過濾等處理后，在100級(jí)條件下，用0. 2jum以下的濾膜精濾。精濾液 送入灌裝機(jī)，灌裝2. Oml/支，半壓塞，送入冷凍真空干燥機(jī)，快速冷至 零下40。C,保持2小時(shí)，抽真空至約lPa以下，逐步緩慢升溫至30。C, 保持2小時(shí)。壓塞，耳又出制品，扎蓋、包裝、檢驗(yàn)合格得成品1000支。
制劑制備實(shí)施例2 Al滴丸的制備
成份 1000丸
Al 40克
聚乙二醇-6000 200克
制備方法具體如下
包括a)稱取粉碎過的(Al) 40克。b)取200克聚乙二醇(6000 )于IO(TC左右水浴中熔化，熔化后65-75。C恒溫。c)將上述藥物在攪 拌下逐漸加入到聚乙二醇-6000恒溫液中，充分?jǐn)嚢枋蛊浠旌暇鶆?，送?滴丸機(jī)的貯藥罐內(nèi)。于65-80。C恒溫、攪拌混合均勻后即可滴制。二曱硅 油或液體石蠟為冷凝液，冷卻液液溫為3. 5-irC,滴速控制在60 - 80滴/分鐘。滴制完畢，取出，吸去表面硅油或石蠟油，在室溫條件下自然干
燥定型后，在50士2。C干燥制得Al 口服滴丸。 制備實(shí)施例3 Al片劑的制備
成份 1000片
Al IO克
乳 糖 18克
低取代羥丙基纖維素(L-HPC) 50克
羧曱基淀粉鈉(CMS-Na) 5克
乙醇 30毫升
水 54毫升
微粉硅膠 5克 制備方法具體如下
按比例稱取粉碎過的Al、乳糖、低取代輕丙基纖維素、羧曱基淀粉 鈉等，按常規(guī)工藝處理后，混合均勻，加入適宜乙醇作潤(rùn)濕劑制備軟材， 制粒，干燥，整粒，取顆粒檢查合格后，加入助流劑微粉硅膠，混合均 勻后壓片。質(zhì)量檢查合格后分裝，貼簽，包裝即得A1口腔崩解片。
以上實(shí)施例只是用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不是用來限制本發(fā)明的 保護(hù)范圍。凡是在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)所做出的具體實(shí)施方式
及應(yīng)用范圍 上的些許變動(dòng)，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1、一種新的燈盞花乙素衍生物，其化學(xué)名稱為4’，5，6-三甲氧基燈盞花乙素，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示
2、 權(quán)利要求1所述的燈盞花乙素衍生物的制備方法，其特征在于包 括如下步驟a、 將燈盞花素溶于有機(jī)溶劑中；b、 向上述有機(jī)溶劑中加入曱醚化反應(yīng)試劑和堿，于室溫下攪拌；c、 步驟b反應(yīng)得到的產(chǎn)物經(jīng)分離提取得到4， ，5,6-三曱氧基燈盞花 乙素。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟a具體為將 燈盞花素溶于N，N-二曱基曱酰胺和二氯曱烷按體積比10: 0-10: 5得到 的混合溶劑中。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于混合溶劑的用量為 10-100毫升/克。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟b中所述曱醚 化反應(yīng)試劑為碘曱烷，其用量按摩爾比相對(duì)于反應(yīng)底物為3-5: 1。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟b中所述堿為 M2C03或MHCO"其中M為鈉Na, K, Li，其用量按摩爾比相對(duì)于反應(yīng)底物 為3- 10: 1。
7、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟c具體為以 乙酸乙酯/甲醇為1 - 10: 1 (V/V)用硅膠柱分離得到產(chǎn)物4， ，5,6-三曱 氧基燈盞花乙素。
8、 一種用于治療心腦血管疾病、炎癥或腫瘤的藥物組合物，其特征 在于以4， ，5,6-三甲氧基燈盞花乙素為活性組分，還包含藥學(xué)上可接受 的載體。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于按照制劑的常規(guī) 制備方法制成包括口服劑、注射制劑或鼻噴霧劑的常規(guī)制劑。
10、 4， ，5，6-三曱氧基燈盞花乙素在制備治療心腦血管疾病、炎癥 或腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了4’，5，6-三甲氧基燈盞花乙素、其制備方法及其藥物組合物。本發(fā)明化合物可以燈盞花素作為起始原料，經(jīng)甲醚化反應(yīng)后再經(jīng)硅膠柱分離得到。本發(fā)明化合物及其藥物組合物可用于心腦血管疾病、炎癥和腫瘤的治療，具有溶解性能好、生物利用度高及療效顯著的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101585860SQ200810097680
公開日2009年11月25日 申請(qǐng)日期2008年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月22日
發(fā)明者徐樹光, 普俊學(xué), 朱華結(jié), 楊兆祥, 毅 金 申請(qǐng)人:昆明制藥集團(tuán)股份有限公司