專(zhuān)利名稱(chēng)：：甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)、其制備方法和應(yīng)用、以及藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)化合物、其制備方法和應(yīng)用、以及藥物組合物。技術(shù)背景結(jié)核病是一種嚴(yán)重危害人們生命健康的疾病，近年來(lái)結(jié)核病發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。耐藥尤其是多藥耐藥結(jié)核菌快速增加。結(jié)核桿菌耐藥率達(dá)到20°/。-50%,多藥耐藥率達(dá)到5%-20%。結(jié)核耐藥情況十分嚴(yán)重。我國(guó)結(jié)核桿菌初始耐藥率為28.1%，繼發(fā)耐藥率為41.1%，其中多藥耐藥菌的比例高達(dá)15%，已超過(guò)WHO規(guī)定的警戒線。另外，我國(guó)的HIV患者迅速增加，HIV與結(jié)核病并發(fā)感染加重了結(jié)核病疫情。目前臨床抗結(jié)核治療中使用的一線藥物仍舊是一些傳統(tǒng)的抗結(jié)核藥物，包括異煙肼、利福平、鏈霉素等。但隨著這些藥物的廣泛使用，耐藥和多藥耐藥菌的不斷增加，這些傳統(tǒng)的抗結(jié)核藥物漸漸失去了它們?cè)械寞熜?，?jù)資料統(tǒng)計(jì)，目前異煙肼、利福平、鏈霉素、EMB、TH的耐藥率分別達(dá)到了14.4%、10.6%、21.1%、2.4%、3.7%;近年來(lái)開(kāi)發(fā)的作為結(jié)核病治療二線藥的新型喹諾酮類(lèi)藥物Ciprofloxacin、ofloxacin和sparfloxacin的耐藥率也已達(dá)到30-40%?，F(xiàn)有的抗結(jié)核藥物已經(jīng)難以控制不斷出現(xiàn)的耐藥菌引發(fā)的結(jié)核病DNA回旋酶B亞基是研究抗結(jié)核藥物中的一個(gè)非常有意義的靶點(diǎn)。DNA回旋酶是細(xì)菌中特有的一種拓樸異構(gòu)酶，由A亞基和B亞基組成，分別由gyrA和gyrB基因編碼，天然的活性酶是由兩個(gè)A亞基和兩個(gè)B亞基組成的四聚體。DM回旋酶的A、B亞基都含有其特定的結(jié)構(gòu)和功能區(qū)，共同決定著酶的生物學(xué)功能。該酶催化利用ATP的閉合環(huán)狀雙鏈DM負(fù)超螺旋反應(yīng)等一系列關(guān)于DNA分子與拓樸異構(gòu)體間的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，為細(xì)菌生存所必須。已知喹諾酮類(lèi)和香豆素類(lèi)藥物是DNA回旋酶的抑制劑，前者作用于A亞基，后者作用于B亞基。香豆素類(lèi)化合物如新生霉素，與DNA回旋酶的B亞基具有高親和性，而且只有B亞基存在新生霉素的結(jié)合位點(diǎn)，它們的結(jié)合使酶分子的構(gòu)象發(fā)生改變，形成一種穩(wěn)定的與ATP有較低親和力的構(gòu)象，干擾負(fù)超螺旋反應(yīng)中ATP的能量耦聯(lián)，從而抑制回旋酶的活性。本發(fā)明人開(kāi)展了以DNA回旋酶B亞基為靶點(diǎn)建立篩選模型，用分枝桿菌來(lái)建立DNA回旋酶B亞基為靶點(diǎn)的藥物篩選模型的研究。本發(fā)明采用分枝桿菌DNA回旋酶B亞基為靶點(diǎn)，靶向耐藥結(jié)核桿菌的抗結(jié)核藥物篩選模型，從7200份微生物中發(fā)現(xiàn)了棒曲霉Aspergillusclavatus(例如，購(gòu)自保藏號(hào)CGMCC3.1290的微生物)的真菌發(fā)酵液粗提取物具有顯著的抗結(jié)核菌活性，它的作用機(jī)理是抑制DNA回旋酶活性，作用靶點(diǎn)為DNA回旋酶B亞基。棒曲霉Aspergillusclavatus粗提取物對(duì)分枝桿菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的特異性活性，對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌、酵母和真菌沒(méi)有活性(中國(guó)抗生素雜志2004;29(12):742-745.)。對(duì)棒曲霉Aspergillusclavatus粗提取物進(jìn)行分離以及結(jié)構(gòu)研究表明，其抗結(jié)核菌活性成分為新的甲基黃青霉素xanthocillinXmonomethylether類(lèi)化合物。目前已知的從天然界中得到的曱基黃青霉素類(lèi)化合物有xanthocillinXmonomethylether、xanthocillinXdimethylether、methoxy-xanthocillinXdimethylether體夕卜對(duì)部分革蘭氏P日性細(xì)菌具有抗菌活性、抗腫瘤以及抗病毒作用(JAntibiot(Tokyo).I968Dec;21(12):671_5.、JAntibiot(Tokyo).1968Dec;21(12):676-80.);MK4588具有窄譜的抗革蘭氏陽(yáng)性及陰性菌活性(工Antibiot(Tokyo).1990May;43(5):456-61.);BU-4704具有抗革蘭氏陽(yáng)性及弱的抗革蘭氏陰性菌活性(JAntibiot(Tokyo).1993Apr;46(4):687-88.)。BU-4704給出的是平面結(jié)構(gòu)，兩個(gè)異腈基構(gòu)型未定。本發(fā)明中式1所示的化合物結(jié)構(gòu)為分子相對(duì)構(gòu)型，兩個(gè)異腈基在異側(cè)。其熔點(diǎn)以及波譜數(shù)據(jù)與BU-4704有一定差異。曱基黃青霉素及其衍生物在抗菌活性、抗腫瘤以及抗病毒方面產(chǎn)生了多項(xiàng)專(zhuān)利1.黃青霉素提取分離技術(shù)專(zhuān)利(1)1960年4月12日GerhardBarwald申請(qǐng)了黃青霉素的生產(chǎn)流程專(zhuān)利，歐洲專(zhuān)利局(espS)cenet)公開(kāi)號(hào)NO.:GB898.198，申請(qǐng)?zhí)朑B1960001309919600412.優(yōu)先權(quán)號(hào)GB1960001309919600412(2)1966年R.Bergkvist獲得了黃青霉素分離提取技術(shù)的專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)歐洲專(zhuān)利局(esp扭cenet)No.US3，281，331日期1966年10月25日，相同專(zhuān)利其他公開(kāi)號(hào)CH441198，，F(xiàn)I42062B2.化合物專(zhuān)利(1)1993年5月11日日本科學(xué)家Kurihara等人獲得了黃青霉素(XME，XDE和XTE)的化合物專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)UnitedStatesPatentNO.5,210,097日期1993年5月11日(2)2005年曰本Nissan化學(xué)有限公司Miyajietal申請(qǐng)了黃青霉素衍生物(結(jié)構(gòu)式如圖3)的專(zhuān)利，專(zhuān)利y^開(kāi)號(hào)USPatentPubNO.US2005/02822730Al(ThrombopoetinReceptorActivatorandProcessforProducingtheSame)3.抗腫瘤相關(guān)專(zhuān)利1994年5月17日日本科學(xué)家TsutomuTsuruoka等人獲得了黃青霉素用于治療腫瘤的專(zhuān)利，實(shí)驗(yàn)中意外地發(fā)現(xiàn)了一直被公認(rèn)具有抗菌作用的黃青霉素及它的衍生化合物有極高的芳香化酶的阻斷活性，可以用于治療激素依賴(lài)性疾病。其中包括治療乳腺癌，前列腺炎等男女疾病，USPatent[19]No.5,312,833日期1994年5月17日4.血小板生成受體激活劑的專(zhuān)利2005年Nissan化學(xué)有限公司Miyajietal申請(qǐng)了黃青霉素衍生物具有血小板生成受體激活劑的活性的專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)USPatentPubNO.US2005/02822730Al(ThrombopoetinReceptorActivatorandProcessforProductingtheSame)5.黃青霉素作為芳香酶抑制劑的相關(guān)專(zhuān)利1995年曰本科學(xué)家NAKAYAMAMASAJIatel申請(qǐng)了黃青霉素作為芳香酶抑制劑的專(zhuān)利，申請(qǐng)?zhí)朖P1993023714019930831;優(yōu)先權(quán)號(hào)JP1993023714019930831/>布日期1995年3月14日6.黃青霉素X作為驅(qū)蟲(chóng)劑的專(zhuān)利1990年日本明治制藥有限公司高木申請(qǐng)了黃青霉素X作為驅(qū)蟲(chóng)劑的專(zhuān)利，主要是作用于豚，馬，牛，羊，狗，貓等家禽體內(nèi)的會(huì)引起寄主貧血，營(yíng)養(yǎng)不良，體虛，生育能力低下等的吸血蟲(chóng)等多種寄生蟲(chóng)，歐洲專(zhuān)利局，專(zhuān)利^>開(kāi)號(hào)JP2040324.申請(qǐng)?zhí)朖P1988018672019880728.優(yōu)先權(quán)號(hào):JP1988018672019880728日本專(zhuān)利公報(bào)，NO.特開(kāi)平2-40324未發(fā)現(xiàn)甲基黃青霉素硫酸酯以及其鹽類(lèi)化合物及其制備方法，以及其具有抗結(jié)核菌的相關(guān)文獻(xiàn)以及專(zhuān)利的報(bào)道。本發(fā)明目的在于提供新的甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)化合物及其制備方法，以及其在抗結(jié)核菌中的應(yīng)用、以及含有曱基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)化合物的藥物組合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一方面，涉及的是新化合物曱基黃青霉素酯及其藥學(xué)上可接受的鹽類(lèi)的結(jié)構(gòu)如式l所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式1其中，R表示C2-C10。的含環(huán)或不含環(huán)的?；珻2-C5的磺?；?，(C1-C6烷基或者閨素)取代的或未取代的苯磺酰基，氨基酸?；?，-HS03、-H2P03、以及它們與金屬或非金屬形成的鹽。本發(fā)明特別涉及如上述式1中之一的曱基黃青霉素硫酸酯及其藥學(xué)上可接受的鹽，特別是甲基黃青霉素硫酸酯的鈉、鉀或銨鹽。本發(fā)明的第二方面，涉及含有治療有效量的甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)化合物為有效成分以及一種或多種藥用載體的藥物組合物。本發(fā)明的第三方面，涉及涉及一種甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)化合物在制備抗結(jié)核藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的第四方面，涉及一種甲基黃青霉素>^酸酯及其鹽類(lèi)化合物的制備方法，主要包括以下步驟a:培養(yǎng):在培養(yǎng)基中培養(yǎng)具有產(chǎn)生甲基黃青霉素硫酸酯能力的棒曲霉Aspergillusclavatus的真菌微生物使之在培養(yǎng)物中生成和積累。步驟a中的培養(yǎng)基是釆用所用微生物能利用的營(yíng)養(yǎng)源，其中碳源可以采用葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油，可兩種以上組合使用；氮源組合使用蛋白胨、黃豆餅粉、棉籽餅粉、血凍，此外可以在適當(dāng)?shù)靥砑逾c鹽、鉀鹽、磷酸鹽、聚乙二醇；培養(yǎng)方法為震蕩、通氣攪拌的液體培養(yǎng)方法；另外步驟a中的培養(yǎng)基液體pH-6.0;培養(yǎng)基溫度保持在25-30t:培養(yǎng)時(shí)間3-5天。b:分離按照發(fā)酵產(chǎn)物的一般提取分離方法從發(fā)酵液中提取分離含有甲基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)的粗提取物。步驟b所述的一般提取分離方法包括溶媒提取、大孔吸附樹(shù)脂、層析法。首先進(jìn)行過(guò)濾或離心除去菌絲體，發(fā)酵液釆用大孔吸附樹(shù)脂吸附，將甲基黃青霉素硫酸酯吸附大孔吸附樹(shù)脂上，再用包括乙酸乙酯-丙酮的有機(jī)溶劑作為洗脫液將其洗脫下來(lái)。洗脫液根據(jù)所需要得到的鈉、鉀、銨等鹽分別加入適量的醋酸鉀、醋酸鈉、或醋酸銨，0-25匸條件下攪拌2-5h，0-25'C條件下減壓回收乙酸乙酯-丙酮，剩余物進(jìn)行冷凍干燥，得到甲基黃青霉素硫酸酯的鉀、鈉、銨鹽類(lèi)的粗提取物。c:精制進(jìn)一步分離精制甲基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)，采用一般小分子化合物分離精制方法。步驟C所迷的精制方法是采用硅膠吸附層析，以乙酸乙酯-丙酮為洗脫劑，可以適量加入少量的DMS0;以及0DS鍵合型硅膠的反相層析，以乙腈-水或甲醇-水為洗脫劑。精制過(guò)程中甲基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)的確認(rèn)釆用甲基黃青霉素硫酸酯抑制微生物活性的生物檢測(cè)法以及高效液相層析法聯(lián)用。d.:甲基黃青霉素硫酸酯的制備從上述步驟得到的鹽溶于DMS0中，加入稀酸調(diào)節(jié)pH得到甲基黃青霉素硫酸酯。甲基黃青霉素硫酸酯結(jié)構(gòu)確證及數(shù)據(jù)甲基黃青霉素疏酸酯為白色晶體，硪蒸氣顯色反應(yīng)陽(yáng)性。熔點(diǎn)157-162X:(分解);高分辨質(zhì)譜ESI-MS—顯示分子量為382.05480，分子式為C19H14謹(jǐn)5S。^NMR、13CNMR表明分子中含有兩個(gè)A2B2芳香偶合系統(tǒng)、兩個(gè)孤立雙鍵以及甲氧基信號(hào)，13CNMR數(shù)據(jù)同時(shí)顯示分子中含有取代a、P不飽和苯丙異腈特征。ESI-MS-:381.05480(M-1)，301.09831(M—S03),286.07503(M-S03-CH3)274.08770(M-S03-HCN),259.06417(M-S03-CH3-HCN)。!HNMR:7.87(2H,d，J=9.OHz，2"、6"),7.80(2H,d，J=9.OHz,、6')，7.31(1H，S,4-H)，7.30(1H，S,1-H),7.19(2H,d，J-9.0Hz，3"、5")，7.11(2H，d，J-9.OHz，3'、5')，3.83(3H，s，Ar-OCH3)。"CNMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。表1甲基黃青霉素硫酸酯的"CNMR數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>抗結(jié)核菌活性測(cè)定1.材料和方法(l)受試藥物作為本發(fā)明的化合物甲基黃毒霉素硫酸酯、甲基黃毒霉素硫酸酯的鈉鹽和甲基黃毒霉素硫酸酯的鉀鹽；對(duì)照藥異煙肼(INH)和利福平(RFP)為Sigma公司產(chǎn)品。(2)實(shí)驗(yàn)菌抹結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)林H37Rv為本室保存菌林。(3)培養(yǎng)基7H9液體培養(yǎng)基(Difco公司產(chǎn)品)。(4)方法無(wú)菌96孑L板(Falcon3072;BectonDickinson,LincolnPark,N.J.)，200jli1滅菌水加入96孔板的四周的各孔中，以防止培養(yǎng)過(guò)程中各實(shí)驗(yàn)孔的成分蒸發(fā)。INH以滅菌蒸鎦水溶解，本發(fā)明的化合物及RFP以二甲基亞砜溶解，制成濃度為6.4mmg/ml的初溶液，用7H9培養(yǎng)基(不含吐溫-80)稀釋為所需的各二倍濃度，加入96孔板lOOjiil，化合物終濃度為0.5，1,2，4，8，16，32jig/ffll。，INH和RFP終濃度為:0.006、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2、pg/ml。結(jié)核分枝桿菌H37Rv,每孔接種100m1，菌的終濃度為lx105CFU/ml。每板上均設(shè)2個(gè)不含抗菌藥的生長(zhǎng)對(duì)照孔，96孔板于37"C孵育。7天后加入生長(zhǎng)對(duì)照孔20m110xAlamarBlue(Setotec公司產(chǎn)品)和5%Tween8050"1的混合液，37孵育24小時(shí)，如果顏色從藍(lán)色變?yōu)榉凵?，則在各實(shí)驗(yàn)藥物的孔內(nèi)加入上述量的AlamarBlue和Tween80混合液，37C將育24小時(shí)記錄各孔的顏色，MIC定義為阻止顏色變化(從藍(lán)色變?yōu)榉奂t色)的最小抑菌濃度。2.結(jié)果MABA法測(cè)定的最小抑菌濃度(MIC)如表2。表2MABA法測(cè)定的最小抑菌濃度(MIC)曱基黃毒霉素硫酸酯1甲基黃毒霉素硫酸酯的鈉鹽4甲基黃毒霉素硫酸酯的鉀鹽2濯0.025RFP0.0125在本實(shí)驗(yàn)條件下，曱基黃毒霉素硫酸酯、甲基黃毒霉素硫酸酯的鈉鹽和甲基黃毒霉素硫酸酯的鉀鹽對(duì)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)林HnRv的MIC分別為lng/ml、4jug/ml和2ng/ml，INH和RFP的MIC分別為0.025pg/ml和0.0125ng/ml。1.甲基黃青霉素疏酸酯的高分辨質(zhì)鐠2.甲基黃青霉素硫酸酯的高分辨多級(jí)質(zhì)傳3.甲基黃青霉素硫酸酯的屮NMR圖譜4.甲基黃青霉素疏酸酯的"CNMR圖鐠5.甲基黃青霉素硫酸酯的力-111C0SPY圖譜具體實(shí)施方案下面的實(shí)例適用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不意味著本發(fā)明僅限于此。曱基黃青霉素硫酸酯以及甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽、甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽的具體制備方法如下制備實(shí)例1:培養(yǎng)基組成a.斜面培養(yǎng)基Sabouraud培養(yǎng)基葡萄糖4%,蛋白胨1%，瓊脂1.5%，pH5.6。b.—級(jí)種子培養(yǎng)基甘油1%，KH2P040.03%，葡萄糖1%，可溶性淀粉1%，蔗糖1%，黃豆粉0.2%，聚乙二醇60000.25%，NaNO30.3%，蛋白胨1%，(NH4)2S040.03%,pH6.0(—般情況下培養(yǎng)基配完自然達(dá)到6.0)。c.二級(jí)種子培養(yǎng)基(同一級(jí)種子培養(yǎng)基)d.發(fā)酵培養(yǎng)基(同一級(jí)種子培養(yǎng)基，罐上發(fā)酵再加入萬(wàn)分之三消泡劑)制備實(shí)例2:培養(yǎng)方法從新鮮培養(yǎng)好的棒曲霉Aspergillusclavatus真菌斜面上挑取(一般500ml搖瓶中挑取指甲蓋大小即可)的菌接入一級(jí)種子培(20%裝量，500ml搖瓶)，一級(jí)種子搖瓶中需要加入適量玻，為了防止菌絲體成團(tuán)，28t:培養(yǎng)48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速200rpm/s。一級(jí)種子培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入二級(jí)種子培養(yǎng)基(20%裝量，500ml量基珠適養(yǎng)璃搖瓶)，接種量5%，這次搖瓶中無(wú)需加入玻璃珠，28r:培養(yǎng)24小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速200rpm/s。二級(jí)種子培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量10%，溶氧保持在30%以上，28t:培養(yǎng)78-80小時(shí)左右，發(fā)酵pH接近7.7時(shí)放罐。制備實(shí)例3:曱基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽的制備取真菌棒曲霉Aspergillusclavatus發(fā)酵物50L,冷藏12h，過(guò)濾，濾液以20ml/min的速度在41C條件下流過(guò)預(yù)先裝入2LHP20大孔吸附樹(shù)脂的層析柱，吸附完成后，依次采用20L水、10L306丙酮淋洗HP20樹(shù)脂，然后采用6L乙酸乙酯-丙酮3:7(V/V)混合溶液洗脫，分步收集洗脫液、100ml/瓶。合并含有甲基黃青霉素硫酸酯的洗脫液、加入醋酸鉀0.6g，攪拌3h，然后在5*€以下減壓乙酸乙酯-丙酮，回收乙酸乙酯-丙酮后的剩余物冷凍干燥，得到20g含有甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物的粗提物。將18g含有甲基黃青霹素硫酸酯的鉀鹽化合物的粗提物溶于200ffll乙酸乙酯中，在零下16-18匸條件下進(jìn)行硅膠柱層析，依次用乙酸乙酯500ml、乙酸乙酯-丙酮(9:1，V/V)300ml、乙酸乙酯-丙酮(8:2，V/V)1000ml洗脫，將含有甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物的乙酸乙酯-丙酮8:2洗脫部位合并，5X:以下減壓濃縮至原體積的1/10，液濃縮進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析，將含有甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物的洗脫液濃縮，冷藏條件下結(jié)晶，得到甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物晶體，將甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物晶體用乙酸乙酯洗滌數(shù)次，過(guò)濾，得到白色的甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽化合物純品100mg。制備實(shí)例-4甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽的制備-取真菌棒曲霉Aspergillusclavatus發(fā)酵物50L，冷藏12h，過(guò)濾，濾液以20ml/min的速度在4^C條件下流過(guò)預(yù)先裝入2LHP20大孔吸附樹(shù)脂的層析柱，吸附完成后，依次釆用20L水、10L30。/。丙酮淋洗HP20樹(shù)脂，然后采用6L乙酸乙酯-丙酮3:7(V/V)混合溶液洗脫，分步收集洗脫液、100ml/瓶。合并含有曱基黃青霉素硫酸酯的洗脫液、加入醋酸鈉0.8g,攪拌3h,然后在51C以下減壓乙酸乙酯-丙酮，回收乙酸乙酯-丙酮后的剩余物冷凍千燥，得到20g含有甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物的粗提物。將18g甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽粗提物溶于400ml乙酸乙酯中，在零下16-18X:條件下進(jìn)行硅膠柱層析，依次用乙酸乙酯500ml、乙酸乙酯-丙酮(9:1，V/V)300ml、乙酸乙酯-丙酮(8:2，V/V)1000ml洗脫，將含有甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物的乙酸乙酯-丙酮8:2洗脫部位合并，濃縮至原體積的1/10，液濃縮進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析，將含有甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物的洗脫液濃縮，冷藏條件下結(jié)晶，得到甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物晶體，將甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物晶體用乙酸乙酯洗滌數(shù)次，過(guò)濾，得到白色的甲基黃青霉素硫酸酯的鈉鹽化合物純品80mg。制備實(shí)例-5甲基黃青霉素硫酸酯的制備甲基黃青霉素硫酸酯的鉀鹽25mg，溶于IOml乙酸乙酯-二曱亞砜-9:l的混合溶劑中，-5t:條件下，滴加0.1M鹽酸0.6ml，保持溫度在-5。C攪拌15min后，加入預(yù)先冷凍至-10X:的乙酸乙酯50ml，冰-水混合物50ml，劇烈振搖后，快速分出乙酸乙酯層，乙酸乙酯層用冰-水混合物5Gml快速洗滌后，4t:條件加入無(wú)水硫酸鈉干燥過(guò)夜。濾除疏酸鈉的千燥乙酸乙酯溶液在-10iC條件下快速減壓濃縮至干，得到甲基黃青審素硫酸酯8mg。權(quán)利要求1.一種如式1所示的甲基黃青霉素酯及其藥學(xué)上可接受的鹽，id="icf0001"file="S2008100978184C00011.gif"wi="119"he="44"top="61"left="49"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式1其中，R表示C2-C10的含環(huán)或不含環(huán)的?；珻1-C5的磺?；?C1-C6烷基或者鹵素)取代的或未取代的苯磺?；被狨；?HSO3、-H2PO3、以及它們與金屬或非金屬形成的鹽。2.權(quán)利要求1所述的甲基黃青霉素酯及其藥學(xué)上可接受的鹽，其是甲基黃青霉素硫酸酯的鈉、鉀或銨鹽。3.—種產(chǎn)生如權(quán)利要求2所述的甲基黃青霉素酯及其藥學(xué)上可接受的鹽類(lèi)的制備方法，該方法包括以下步驟a:培養(yǎng):在培養(yǎng)基中培養(yǎng)具有產(chǎn)生曱基黃青霉素硫酸酯能力的棒曲霉Aspergillusclavatus的真菌微生物4吏之在培養(yǎng)物中生成和積累。b:分離按照發(fā)酵產(chǎn)物的提取分離方法從發(fā)酵液中提取分離含有甲基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)的粗提取物。c:精制采用小分子化合物分離精制方法，進(jìn)一步分離精制曱基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，步驟a中的培養(yǎng)基是采用所用微生物能利用的營(yíng)養(yǎng)源，其中碳源采用葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油中的一種或兩種以上；氮源使用蛋白胨、黃豆餅粉、棉籽餅粉、血凍中的一種或兩種以上，添加或不添加鈉鹽、鉀鹽、磷酸鹽、或者聚乙二醇；培養(yǎng)方法為震蕩、通氣攪拌的液體培養(yǎng)方法；所述培養(yǎng)基的液體pH-6.0;培養(yǎng)基溫度保持在25-30C，培養(yǎng)時(shí)間3-5天。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，步驟b所述的提取分離方法包括溶媒提取、大孔吸附樹(shù)脂、層析法。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，首先進(jìn)行過(guò)濾或離心除去菌絲體，發(fā)酵液釆用大孔吸附樹(shù)脂吸附，將甲基黃青霉素硫酸酯吸附大孔吸附樹(shù)脂上，再用有機(jī)溶劑將其洗脫下來(lái)，洗脫液根據(jù)所需要得到的鈉、鉀、銨鹽分別加入醋酸鉀或醋酸鈉或醋酸銨，在0-25匸條件下攪拌2-5h,在0-25。C條件下減壓回收有機(jī)溶劑，剩余物進(jìn)行冷凍干燥，得到甲基黃青霉素疏酸酯的鉀、鈉或銨鹽的粗提取物。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，步驟c所述的精制方法是采用硅膠吸附層析，其以乙酸乙酯-丙酮為洗脫劑，加入DMSO;以及ODS鍵合型硅膠的反相層析，其以乙腈-水或曱醇-水為洗脫劑；精制過(guò)程中甲基黃青霉素硫酸酯的鹽類(lèi)的確認(rèn)采用甲基黃青霉素硫酸酯抑制微生物活性的生物檢測(cè)法以及高效液相層析法的聯(lián)用。8.—種產(chǎn)生如權(quán)利要求3所述的甲基黃青霉素酯及其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其特征在于在甲基黃青霉素硫酸酯的鉀、鈉或銨鹽的DMSO溶液中，加入稀酸調(diào)節(jié)pH，得到甲基黃青霉素硫酸酯。9.權(quán)利要求1中的化合物在制備用于抑制結(jié)核桿菌以及防治結(jié)核病中的藥物中的應(yīng)用。10.藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1中的化合物及藥學(xué)上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明涉及甲基黃青霉素酯及其鹽類(lèi)、其制備方法和在抗結(jié)核方面的應(yīng)用、以及藥物組合物。文檔編號(hào)A61K31/277GK101265214SQ200810097818公開(kāi)日2008年9月17日申請(qǐng)日期2008年5月15日優(yōu)先權(quán)日2008年5月15日發(fā)明者艷關(guān),劉振龍,明張,張勇忠,肖春玲,郝雪秦申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所