專利名稱：：一種銀杏葉總黃酮苷元口服藥物制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥銀杏葉提取物，尤其是一種銀杏葉總黃酮苷元的提取物，以及該提取物的藥物用途。屬中藥領域。
背景技術：
：銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏(GinkgobilobaL.)的葉。銀杏原產(chǎn)我國，以野生種存在于我國浙江天目山、大別山等地。由于基木保持丁1.5億年前的生態(tài)特征，又稱"活化石"植物。銀杏葉味甘苦、澀.性平?？梢嬷茄幽辍⒚滥w護發(fā)、斂肺平喘、收澀止帶。主治年老神衰、心痛、胸悶、氣逆喘咳、白帶、清稀等。銀杏葉黃酮類具有獨特的生理作用、臨床治療和保健價值，不但有擴張血管的作用，從而增加心腦血液流量，還有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、降血脂、抗腫瘤、抗白血病、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等功能。有關于銀杏葉黃酮報道有很多，耿秀芳等在"銀杏葉總黃酮近期研究進展"(《中國中藥雜志》，2003年6月，第28巻第6期)、郝滌非在"銀杏及銀杏黃酮的開發(fā)利用與前景"(《生物學教學》，2007年第27巻第9期)、羅蘭等在"銀杏黃酮類化合物提取分離和分析方法研究進展"(《萊陽農(nóng)學院學報》，2003年第20巻第4期)、齊麗霞等在"銀杏葉總黃酮提取方法的比較研究"(《江西農(nóng)業(yè)學報》，2007年第19巻第1期)研究中表明，銀杏葉中所含的黃酮類成分，具有擴血管、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗自由基、降血脂、抗腫瘤及抗白血病等作用，在臨床上有著廣泛的應用；而在CN95118737.6、CN200510036774.0、CN200510039105.9、CN200610046070.6等專利公開文獻也提供了多種制備銀杏葉總黃酮及其單方或復方制劑的方法?？梢娫谥兴?br>技術領域：
中，銀杏葉中總黃酮苷類成分一直是被研究的熱點。同時在鐘尉方等在"銀杏黃酮醇苷水解條件的正交實驗研究"(《黑龍江醫(yī)藥科學》，2006年10月，第29巻第5期)、杜安全等在"銀杏葉總黃酮苷的HPLC法分析水解條件"(《安徽醫(yī)藥》，2001年9月，第5巻第3期)、吳超等在"銀杏葉提取物制取黃酮苷元的酶解工藝研究"(《食品與機械》，2005年11月，第21巻第6期)、專利CN03153489.9中對銀杏葉中的黃酮苷元的制備方法進行研究。可見銀杏葉中的黃酮苷及其苷元己成為研究的熱點。但是，現(xiàn)有的技術都忽視了對銀杏葉總黃酮苷元療效、制劑的研究，其效果與應用情況一直處于空白狀態(tài)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一目的在于提供一種以銀杏葉總黃酮苷元為活性成分的口服藥物。第二目的是提供該藥物的制劑形式，特別是一種高效制劑；第三目的是提供該藥物高效制劑的制備方法。最后是提供該藥物在治療冠心病、高血壓、腦血栓、腦梗塞、中風、眩暈、精神病、腎炎、支氣管炎、帕金森氏病、糖尿病、腫瘤、白血病中的應用。本發(fā)明目的第一目的是這樣實現(xiàn)的-發(fā)明人提供一種口服的藥物，該藥物以銀杏葉總黃酮苷元為活性成分。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，苷類物質(zhì)其實是在植物體內(nèi)產(chǎn)生的生物活性較低的化合物，如在化合物上添加極性基團，把具有生物活性的苷元和糖結合起來形成生理活性較低的苷類而加以儲存，使之更易排出體外。同樣，這些苷類化合物在人體內(nèi)的生物利用度也較低，口服的苷類化合物在腸道內(nèi)難以吸收、生物利用度低，多數(shù)在體內(nèi)代謝并不完全，有的甚至完全以原型(苷類形式)排除體外，只有少量的苷類化合物經(jīng)腸道細菌、酶分解為苷元后才發(fā)揮出療效；非口服的苷類化合物，被人體吸收的苷還需經(jīng)血液轉運到肝臟，再通過肝腸循環(huán)，將苷水解為苷元再吸收入血而發(fā)揮療效，但因為步驟較多，故也不能迅速發(fā)揮療效。因而，針對銀杏葉的藥用價值，發(fā)明人提出一種新的藥用物質(zhì)，即銀杏葉總黃酮苷元。它是按現(xiàn)有技術從銀杏葉藥材中提取得到銀杏葉總黃酮苷，對該有效部位進行水解，使其中的苷類物質(zhì)脫去糖基，生成更具生物活性的苷元，即成為本發(fā)明所提供的銀杏葉總黃酮苷元。發(fā)明人經(jīng)研究證實，苷類物質(zhì)經(jīng)水解后所得苷元沒有了糖基，其親脂性大大增強，因而苷元較苷更易透過腸粘膜被吸收；同時，藥物的分子越小也越容易被吸收，苷水解掉所帶的糖分子變成苷元后，分子變得更小，也會更易吸收。另外，以苷元直接作為藥用物質(zhì)，克服了以往苷類物質(zhì)在體內(nèi)運行時間長、轉化效率低、轉化結果不確定等因素，大大提高了藥物的生物利用率，節(jié)約了藥物資源。在本發(fā)明提供的藥物中，銀杏葉總黃酮苷元可以單獨使用，也可以與其他藥物成分聯(lián)合使用，即在藥物活性成分中，可以只有銀杏葉總黃酮苷元純品，也可以是銀杏葉總黃酮苷元粗品，還可以是銀杏葉總黃酮苷元與其他藥物的混合物。本發(fā)明優(yōu)選使用銀杏葉總黃酮苷元粗品，即從藥材中提取銀杏葉總黃酮苷，再以適當方式水解，并根據(jù)需要進行精制，得到所需純度。上述的水解方法包括了酸水解、酶水解或微生物水解，發(fā)明人經(jīng)過篩選，分別提供如下幾種具體的水解方法酸水解可以用110mol/L的鹽酸、硫酸、醋酸及甲酸等進行水解；酶水解可以用苦杏仁酶、麥芽糖酶、轉化糖酶、橙皮苷酶等進行水解；微生物可以用大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、梭狀芽孢桿菌、畸形菌體、雙岐桿菌及人體腸道正常菌群等進行水解。本發(fā)明的第二目的是提供上述銀杏葉總黃酮苷元的藥物制劑，尤其是一種高效制劑。由于本發(fā)明的第一目的中已解決了藥物的吸收問題，所以本領域技術人員可以方便地將本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元配合適當?shù)妮o料，制備成各種常規(guī)制劑。但是發(fā)明人還注意到另一個問題，即由于苷元的脂溶性相對較強，因而其制劑應用于人體后，其中的苷元成分不易被潤濕和溶出，如果不能解決這一問題，也會影響苷元的吸收。所以，針對這一問題，發(fā)明人提供了一種新技術方案，可以保證將銀杏葉總黃酮苷元制成高效制劑，該技術方案是方案一一種以本發(fā)明所述銀杏葉總黃酮苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有生物黏附劑和潤濕劑，還可以含有分散劑及其他藥劑學上的常規(guī)輔料，并被制成的片、膠囊、顆粒、散劑、丸等口服制劑。該技術方案的核心在于將銀杏葉總黃酮苷元用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證銀杏葉總黃酮苷元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的銀杏葉總黃酮苷元利用生物黏附劑和潤濕劑，還可以利用分散劑，進行潤濕、分散，以制成口服高效制劑，均應在本發(fā)明申請保護的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術方案選用生物黏附劑和潤濕劑，還可以用分散劑作為主要輔料，目的在于使銀杏葉總黃酮苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實際應用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、檸檬酸、碳酸氫鈉、低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂酸鎂等，這些均應視為在本發(fā)明技術的基礎上完成的工作，也應受本發(fā)明申請的保護。在該技術方案中，生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮或它們之間的混合物；潤濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆或其混合物；分散劑優(yōu)選為微粉硅膠、環(huán)糊精或其混合物。其中，殼聚糖、卡波姆作為生物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長藥物在胃腸道的滯留時間，顯著提高藥物的生物利用度。卵磷脂、泊洛沙姆等表面活性劑對銀杏葉總黃酮苷元有表面潤濕的作用，降低表面張力，增加脂溶性的銀杏葉總黃酮昔元的溶解度，促進其迅速吸收利用，利于迅速發(fā)揮療效。微粉硅膠、環(huán)糊精作為分散劑，其本身具有親水性，利于苷元的潤濕、分散，增強藥物的穩(wěn)定性。將本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強其中銀杏葉總黃酮苷元的分散性、潤濕性，提高其生物利用度。在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分2060%，生物黏附劑110%，潤濕劑520%，分散劑030%，其他輔料050%。其中的其他輔料是指制劑在成型過程中的一些其他輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、檸檬酸、碳酸氫鈉、低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂酸鎂等。上述技術方案主要應用于口服制劑，最適宜的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑和丸劑。方案二一種以本發(fā)明所述銀杏葉總黃酮苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有分散劑和潤濕劑，還可以含有生物黏附劑及其他藥劑學上的常規(guī)輔料，并被制成的軟膠囊、液體硬膠囊、滴丸等口服制劑。該技術方案的核心在于將銀杏葉總黃酮苷兀用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證銀杏葉總黃酮苷元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的銀杏葉總黃酮苷元利用分散劑和潤濕劑，還可以利用生物黏附劑，進行潤濕、分散，以制成口服高效制劑，均應在本發(fā)明申請保護的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術方案選用分散劑和潤濕劑，還可以用生物黏附劑作為主要輔料，目的在于使銀杏葉總黃酮苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實際應用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金乙酯、蜂蠟等，這些均應視為在本發(fā)明技術的基礎上完成的工作，也應受本發(fā)明申請的保護。在該技術方案中，分散劑優(yōu)選為植物油或聚乙二醇；潤濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇或它們之間的混合物；生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆或其混合物。其中，卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇等表面活性劑對銀杏葉總黃酮苷元有表面潤濕的作用，降低表面張力，增加脂溶性的銀杏葉總黃酮苷元的溶解度，促進其迅速吸收利用，利于迅速發(fā)揮療效。植物油、聚乙二醇作為分散劑，可以將銀杏葉總黃酮苷元分散均勻。殼聚糖、卡波姆作為生物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長藥物在胃腸道的滯留時間，顯著提高藥物的生物利用度。將本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強其中銀杏葉總黃酮苷元的分散性、潤濕性，提高其生物利用度。在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分1040%，生物黏附劑010%，潤濕劑520%，分散劑5080%，其他輔料020%。其中的其他輔料是指制劑在成型過程中的一些其他輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金乙酯、蜂蠟等。上述技術方案主要應用于口服制劑，最適宜的劑型為液體硬膠囊、軟膠囊劑和滴丸劑。本發(fā)明的第三目的是提供上述高效制劑的制備方法，其中的核心技術是將銀杏葉總黃酮苷元與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加入所需常規(guī)制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。而這里的混合方法優(yōu)選振動磨超微粉碎混合的方法。只有通過有效的混合方式，才能保證提取物中所含銀杏葉總黃酮苷元與特殊輔料充分分散均勻，應用于人體時才能夠迅速潤濕、溶出、吸收，發(fā)揮高效的作用。經(jīng)發(fā)明人驗證，熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合等方式，都能夠實現(xiàn)本發(fā)明目的，而其中的超微粉碎方式效果最為突出。雖然超微粉碎技術早己出現(xiàn)，但在中藥
技術領域：
的應用，一直停留于"粉碎"的概念上，始終沒有突破，因而其范圍很局限。發(fā)明人在實踐中發(fā)現(xiàn)，超微粉碎技術己不僅僅是粉碎技術，更是一種高效混合技術，它可使苷元與輔料一起受到強烈的正向擠壓力和切向剪切力的作用，運用高速、高能量進行粉碎、混合，所得到的粉末中心粒徑由原來的75um減小到10um以下，粒度細膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，使藥物粒子與輔料粒子充分接觸、混合，既提高了藥物粒子的分散度，又保證了其迅速潤濕并溶出，大人提高了藥物的吸收率和生物利用度，其優(yōu)勢是目前常規(guī)混合方法不可比擬的。在這其中，振動磨超微粉碎方式是實現(xiàn)本發(fā)明目的的最佳方法。有益效果本發(fā)明的銀杏葉總黃酮苷元，具有擴血管、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗自由基、降血脂、抗腫瘤及抗白血病等作用，可用于治療冠心病、高血壓、腦血栓、腦梗塞、中風、眩暈、精神病、腎炎、支氣管炎、帕金森氏病、糖尿病、腫瘤、白血病等病癥。配合本發(fā)明的高效制劑手段，更可以充分發(fā)揮其功效。發(fā)明人通過以下動物實驗，來說明本發(fā)明的突出效果。實驗l:抗大鼠靜脈血栓形成的作用1實驗材料1.1動物Wister大鼠50只，雌雄各半，體重200土20g。由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.2藥品供試樣品的制備取銀杏葉6kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.101.15(60°C)，加乙醇使含醇量達70%，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇，以水飽和正丁醇提取三次，合并正丁醇液，回收正丁醇，余液加6倍量水溶解，加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、10%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取1/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，干燥物制備銀杏葉總黃酮苷制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以2mol/L鹽酸水解3小時，水解液加氧化鈣適量，濾過，8并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，1/3干燥物制備銀杏葉總黃酮苷元一般制劑，另2/3干燥物制備銀杏葉總黃酮苷元高效制劑。銀杏葉總黃酮苷組供試品取銀杏葉總黃酮苷干燥物，加殼聚糖2.5g、泊洛沙姆10g、環(huán)糊精40g，并加羧甲淀粉鈉至200g，超微粉碎混合80分鐘，取其中60g以水混懸至100ml;銀杏葉總黃酮苷元一般組供試品取1/3銀杏葉總黃酮苷元干燥物，加淀粉至200g，混勻，取其中60g以水混懸至100ml;銀杏葉總黃酮苷元高效組供試品取2/3銀杏葉總黃酮苷元干燥物，加殼聚糖5g、泊洛沙姆20g、環(huán)糊精80g，并加羧甲淀粉鈉至400g，超微粉碎混合80分鐘。取其中60g以水混懸至100ml作為苷元高效組。2實驗方法與結果取Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重200土20g，隨機分為4組，每組10只銀杏葉總黃酮苷元高效組、銀杏葉總黃酮苷組、銀杏葉總黃酮苷元一般組，灌胃給藥每天1次，給藥劑量分別為10ml/kg，空白對照組灌胃給予同體積生理鹽水，連續(xù)10天。末次給藥后lh，各組動物腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉，剖腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下穿一絲線結扎下腔靜脈管，造成淤血，關閉腹腔。6h后，用內(nèi)徑為lmm的玻璃毛細管插入鼠內(nèi)眥靜脈叢取血，至毛細管血柱達5cm，每隔30s折斷毛細管一段，檢查有無出現(xiàn)凝血絲，計算毛細管采血到出現(xiàn)血凝絲時間，即為凝血時間。再次打開腹腔，于結扎下方2cm處夾閉血管，縱行剖開，取出血栓，記錄血栓有無并稱重。結果見表l。表l對大鼠靜脈血栓形成的影響(^土S)組別動物數(shù)(只)凝血時間(s)血栓濕重(mg)銀杏葉總黃酮苷元高效組10126.00±17.49***13.27±1.76***銀杏葉總黃酮苷元一般組10114.00±18.84**16.11±2.57*銀杏葉銀杏葉總黃酮苷組10102.00±15.73**18.37±3.16*空白對照組1075.00±14.1425.74±3.43與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。以上試驗結果表明，銀杏葉總黃酮苷元高效制劑組可明顯延長凝血時間，與空白對照組比較具有顯著性差異；同時，銀杏葉總黃酮苷元一般制劑組也較銀杏葉總黃酮苷組效果好。實驗2:對大鼠血液流變學的影響i實驗材料1.1動物Wister大鼠40只，雌雄各半，體重200土20g。由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.2供試樣品(同實驗l)1.3儀器LBY—N6A自清洗旋轉式粘度計北京普利生醫(yī)療器械科技有限公司2實驗方法與結果取大鼠，隨機分為4組，每組10只。按表2所示劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14曰，對照組每日灌以等體積水。于末次給藥后lh，各組大鼠以3%戊巴比妥鈉依次麻醉后，經(jīng)腹主動脈采血，肝素抗凝，置LBY—N6A自清洗旋轉式粘度計上，測定全血粘度及血漿粘度。結果見表2。表2對正常大鼠血液流變學的影響(nipaS;X±SD)動物數(shù)全血粘度組別g/kg-血漿粘度(n)10S-140S-l120S-1苷元高效組3.01011.53±2.82*林6.73±1.07林*4.84±0.75***2.04±0.47苷元一般組3.01012.79±2.86**7.25±1.75**5.04±0.69**2.07±0.72總黃酮苷組3.01013.35±3.17*7.99±1.58*5.63±0.952.11±0.66空白對照組-1015.12±1.688.85±0.876.07±0.832.27±0.73與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。以上試驗結果表明，銀杏葉總黃酮苷元高效組能夠降低大鼠的全血粘度，與對照組比較差異顯著；同時，銀杏葉總黃酮苷元一般組也較銀杏葉總黃酮苷組效果好。對血漿粘度影響不大。實驗3:對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響l材料1.1動物動物昆明種小鼠，雄性，體重22-24g,鼠齡10-11周。由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.2供試樣品供試樣品的制備取銀杏葉6kg，粗粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、20%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取l/4的回收乙醇的水液，減壓干燥，千燥物制備銀杏葉總黃酮苷制劑；其余3/4的回收乙醇的水液以2mol/L硫酸水解4小時，水解液加氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減壓干燥，1/3干燥物制備銀杏葉總黃酮苷元一般制劑，另2/3干燥物制備銀杏葉總黃酮苷元高效制劑。銀杏葉總黃酮苷組供試品取銀杏葉總黃酮苷干燥物，加殼聚糖5g、卵磷脂5g、微粉硅膠25g，并加微晶纖維素至200g，超微粉碎混合50分鐘，取其中60g以水混懸至lOOml;銀杏葉總黃酮苷元一般組供試品取1/3銀杏葉總黃酮苷元干燥物，加淀粉至200g，混勻，取其中60g以水混懸至100ml;銀杏葉總黃酮苷元高效組供試品取2/3銀杏葉總黃酮苷元干燥物，加殼聚糖10g、卵磷脂10g、微粉硅膠50g，并加微晶纖維素至400g，超微粉碎混合50分鐘。取其中60g以水混懸至100ml作為苷元高效組。1.3陽性對照藥醋酸地塞米松片，天津藥業(yè)有限公司出品2實驗方法與結果選取50只昆明種小鼠，雄性，體重22-24g,鼠齡10-11周，按體重隨機分為5組，每組10只。按表3所列藥物和劑量，分別灌胃給藥l次/口，連續(xù)4日。末次給藥后60min，各組動物用二甲苯50ul涂于小鼠左耳廓兩面致炎，致炎30min后剪下雙耳，錘取雙耳相同部位耳片，稱重，按下式計算腫脹度和腫脹抑制率。結果見表3。腫脹度=致炎側耳片重—非致炎側耳片重腫脹抑制率-(對照組腫脹度一給藥組腫脹度)/對照組腫脹度表3對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響組別<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注:各給藥組與對照組比較。*P<0.05，**P<0.01。以上試驗結果表明，銀杏葉總黃酮苷元高效組能夠降低二甲苯所致小鼠耳腫脹程度，與對照組比較差異顯著；同時，銀杏葉總黃酮苷元一般組也較銀杏葉總黃酮苷組效果好。實驗4:對酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應的影響l材料1.1動物昆明種小鼠，由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.2供試樣品(同實驗3)1.3試劑酒石酸銻鉀，天津化學試劑三廠生產(chǎn)。2方法與結果取小鼠40只，雌雄各半，體重20土2g，隨機均勻分為4組，即空白組、銀杏葉總黃酮苷元高效組、銀杏葉總黃酮苷元一般組、銀杏葉總黃酮苷組，實驗組灌胃給藥劑量均為10ml/kg，空白組灌胃給予同體積的生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)給藥3大，于最后l次給藥后lh，每鼠腹腔注射新配制的酒石酸銻鉀液，立即觀察小鼠首次出現(xiàn)扭體反應的潛伏期及10min內(nèi)小鼠扭體發(fā)生數(shù)。結果見表4。表4對酒石酸銻鉀所致小鼠扭體反應的影響(X土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>以上試驗結果表明，銀杏葉總黃酮苷元高效組可明顯延長小鼠首次發(fā)生扭體的潛伏期，減少小鼠扭體次數(shù)，與空白對照組比較具有顯著性差異；同時，銀杏葉總黃酮苷元一般組也較銀杏葉總黃酮苷組效果好。實驗5:對MCAT大鼠腦梗塞范圍的影響1實驗材料1.1動物Wistar大鼠，體重260-300g。由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供。1.2供試樣品供試樣品的制備供試樣品的制備取銀杏葉3kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，取1/3的干燥物制備苷制劑；其余2/3的干燥物加水溶解，115'C滅菌20min，以乳酸菌菌種發(fā)酵水解72小時，水解液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓干燥，干燥物備用。銀杏葉總黃酮苷組供試品取苷干燥物，加卡波姆4g、內(nèi)二醇10g、泊洛沙姆5g，并加聚乙二醇400至200g，超微粉碎混合80分鐘，取其中60g以水混懸至100ml;銀杏葉總黃酮苷元高效組供試品取苷元干燥物，加卡波姆8g、丙二醇20g、泊洛沙姆10g，并加聚乙一醇400至400g，超微粉碎混合80分鐘，取其中60g以水混懸至100ml作為苷元高效組。1.3試劑與儀器FeCI3(A.R.)，批號20020128，廣東山頭市西隴化工廠紅四氮唑(TTC)，A.R.,北京化學試劑公司AO光學顯微鏡，美國產(chǎn)品；慍溫水浴，HH.W21.Cu600，上海躍進醫(yī)療器械廠；電子天平，JUPITERS2160A型，日本生產(chǎn)。2實驗方法2.1分組及給藥取Wistar大鼠40只，分為4組(即假手術組、MCAT模型組、銀杏葉總黃酮苷元組、銀杏葉總黃酮苷組)，每組10只，雌雄各半。實驗組灌胃給藥劑量均為10ml/kg，假手術組、MCAT模型組灌胃給予同體積的生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)給藥5天。造模，造模成功后實驗組灌胃給藥劑量均為10ml/kg，假手術組、MCAT模型組灌胃給予同體積的生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)給藥5天。2.2實驗方法大鼠腹腔注射3%異戊巴比妥0.lml/100g麻醉。按Tamura方法，稍加改進。大鼠右側臥位固定，在眼外眥和耳道連線中點作一弧形切口，長約1.5cm，夾斷顳肌并切除，暴露顳骨，用牙科鉆在顴骨和顳骨接合處靠近口側lmm處作一直徑2.5mm骨窗，清理殘渣，暴露大腦中動脈(位于嗅束及大腦下靜脈之間)。置一小片塑料薄膜保護血管周圍組織。將吸有50%三氯化鐵溶液10W的小片定量濾紙敷在此段大腦中動脈上，30min后取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回籠詞養(yǎng)。假手術組大鼠除不滴加三氯化鐵溶液外，其余手術步驟同模型組。2.3腦梗塞范圍測定最后一次給藥12小時后，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在4'C以下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染料中含4。/。TTC1.5ml，1MK2HP040.lml)，37。C避光溫孵30min，再取出，置于甲醛中避光保存。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玟瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細挖下稱重，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。模型組腦梗塞范圍一給藥組腦梗塞范圍腦組織梗塞范圍抑制率(％)=-X100%模型組腦梗塞范圍3實驗結果試驗結果進行組間比較，t檢驗，結果見表5。表5對MCAT大鼠腦組織梗塞范圍的影響(X±SD)會目別給藥量(g/kg)動物數(shù)(只)梗塞范圍(％)抑制率(％)假手術組生理鹽水100.00±0.000.0模型組生理鹽水89.23±1.750.0銀杏葉總黃酮苷元組6.084.03±1.05**56.34銀杏葉總黃酮苷組6.095.64±1.43**38.89與模型組相比，*P<0.05，林P<0.01。結果顯示，除假手術組未見異常改變外，血栓模型組大鼠及各給藥組大鼠均有不同程度梗塞灶。銀杏葉總黃酮苷元組均可明顯減少梗塞程度，與模型組比較有顯著差異，較銀杏葉總黃酮苷組效果好。具體實施例方式下面列舉實施例，進一步說明本發(fā)明，各實施例僅用于說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明-實施例1取銀杏葉總黃酮苷元100g，加入殼聚糖20g、聚乙烯吡咯烷酮20g、卡波姆10g、泊洛沙姆50g、卵磷脂50g、微粉硅膠50g、倍他環(huán)糊精100g、淀粉100g，振動磨超微粉碎混合30分鐘，分裝，制成散劑。實施例2取銀杏葉總黃酮苷元70g、葛根總黃酮苷元10g，加入殼聚糖5g、卡波姆5g、泊洛沙姆"g、卵磷脂10g、微粉硅膠10g、倍他環(huán)糊精20g、羧甲淀粉鈉6g，微晶纖維素50g，重壓式研磨超微機超微粉碎30分鐘，加70%乙醇合坨10分鐘，制丸條、分粒與搓圓，干燥，打光，分裝，制成丸劑。實施例3取銀杏葉總黃酮苷元80g、銀杏葉總內(nèi)酯40g，加入殼聚糖2g、卵磷脂10g，再加糊精66g、阿斯帕坦2g，攪拌均勻，干壓制粒，分裝，制成顆粒劑。實施例4取銀杏葉總黃酮苷元60g，加入殼聚糖10g、聚乙烯吡咯烷酮2g、泊洛沙姆8g、倍他環(huán)糊精20g、淀粉100g，過篩混合均勻，制粒，裝腸溶膠囊，制成膠囊劑。實施例5取銀杏葉總黃酮苷元80g、赤芍總苷20g,加入聚乙烯吡咯烷酮10g、泊洛沙姆20g、卵磷脂10g、微粉硅膠10g、倍他環(huán)糊精50g，振動磨超微粉碎混合50分鐘，制粒，壓片，包衣，制成片劑。實施例6取銀杏葉總黃酮苷元20g，加入丙二醇10g、泊洛沙姆10g、卵磷脂20g、殼聚糖10g、卡波姆10g、加入120g聚乙二醇400，振動磨超微粉碎20分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊，即得。實施例7取銀杏葉總黃酮苷元30g,加入卵磷脂10g、甘氨酸10g，甘油30g，再加入120g聚乙二醇600，振動磨超微30分鐘，使混合均勻，壓制成軟膠囊，即得。實施例8取銀杏葉總黃酮苷元50g，加入殼聚糖10g、卵磷脂20g、泊洛沙姆4g、尼泊金乙酯lg，蜂蠟5g，并加入大豆油110g，攪拌，過篩混勻，壓制成軟膠囊，即得。實施例9取50g聚乙二醇6000和50g聚乙二醇4000，加入銀杏葉總黃酮苷元80g、丙二醇10g、甘油10g，振動磨超微50分鐘，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。實施例10取銀杏葉總黃酮苷元100g、卵磷脂25g、尼泊金乙酯2.5g，蜂蠟47.5g，并加入大豆油325g，振動磨超微40分鐘，使混合均勻，壓制成軟膠囊，制成1000粒，即得。實施例11取銀杏葉2kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.101.15(60°C)的清膏，加入乙醇，使含醇量達70%，靜置12小時，濾過，濾液減壓回收乙醇，水液加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、20%乙醇、70。/。乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，余水液加硫酸使含酸量達2mol/L，加熱水解3小時，放冷，濾過，殘渣以水洗滌至近中性，減壓干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元160g(含銀杏葉總黃酮苷元30%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆15g、殼聚糖5g、卵磷脂10g、泊洛沙姆10g、丙二醇30g，并加入450g聚乙二醇600，振動磨超微80分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊，制成1000粒，即得。實施例12取銀杏葉4kg，粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，濾液回收乙醇，余水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，余水液加鹽酸使含酸量達2mol/L，加熱水解4小時，加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性，加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別用水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元150g(含銀杏葉總黃酮苷元60%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入丙二醇30g、甘油10g、尼泊金乙酯lg，并加入200g聚乙二醇400,攪拌混勻，壓制成軟膠囊，即得。實施例13取銀杏葉3kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.101.15(60°C)的清膏，加入乙醇，使含醇量達60%，靜置12小時，濾過，濾液減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，干燥物加水溶解，115。C滅菌20min，以雙岐桿菌菌種發(fā)酵水解72小時，減壓濃縮，減壓干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元112g(含銀杏葉總黃酮苷元40%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入100g聚乙二醇6000、250g聚乙二醇4000、銀杏葉總內(nèi)酯20g，卡波姆5g、丙二醇40g、卵磷脂5g、泊洛沙姆5g，振動磨超微35分鐘，加熱熔融，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。實施例14取銀杏葉藥材2.5kg，粉碎，加10倍量水煎煮3次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮，70%乙醇沉淀，回收乙醇，水液用正丁醇萃取3次，回收正丁醇液，余水液115。C滅菌15-20min，大腸桿菌菌種用無菌水配制成每毫升含108個分生孢子的懸浮液，以孢子懸液的形式按V/W為3-10%的比例接入培養(yǎng)基，于26-30°C，搖床轉速140-220rpm的條件下震蕩，培養(yǎng)時間72-96h;終止發(fā)酵后，過濾，濾餅用5倍量80%乙醇回流提取2次，每次30分鐘，合并濾液，減壓回收乙醇，剩余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元91g(含銀杏葉總黃酮苷元55。/0以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆5g、卵磷脂25g、倍他環(huán)糊精25g、淀粉105g，振動磨超微粉碎混合20分鐘，制粒，裝膠囊，制成膠囊劑。實施例15取銀杏葉藥材5kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，剩余水液以正丁醇萃取三次，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘渣以水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，先以水、30%乙醇洗脫，棄去洗脫液，再以70%乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，余液加入鹽酸使含酸量達lmol/L，水解3小時，放冷，以氫氧化鈉中和剩余的酸，干燥，干燥物用乙醇回流提取，所得乙醇液回收乙醇，干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元128g(含銀杏葉總黃酮苷元65%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖25g、泊洛沙姆45g、微粉硅膠30g、倍他環(huán)糊精30g、羧甲淀粉鈉10g，振動磨超微粉碎混合80分鐘，制粒，壓片，包衣，制成1000片，即得。實施例16取銀杏葉藥材3kg，粉碎，加60%乙醇回流提取3次，每次1小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，水液加鹽酸300ml，加熱水解4小時，水解液加氫氧化鈉中和，過AB-8大孔樹脂柱，分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得到銀杏葉總黃酮苷元70g(含銀杏葉總黃酮苷元70%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入葛根總黃酮苷元20g、殼聚糖5g、卡波姆5g、泊洛沙姆5g、卵磷脂15g、淀粉50g，振動磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，裝膠囊，制成膠囊劑。實施例17取銀杏葉藥材3.5kg，粉碎，加70%乙醇滲濾提取，滲濾液，回收乙醇，水液加0.5%活性炭脫色，濾過，濾液過moi大孔樹脂柱，分別用水、20%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇，用麥芽糖苷酶、苦杏仁苷酶水解24小時，水解液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，十燥，得到銀杏葉總黃酮苷元101g(含銀杏葉總黃酮苷元60%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼聚糖5g、聚乙烯吡咯烷酮10g、卡波姆5g、泊洛沙姆15g、卵磷脂15g、淀粉150g、羧甲淀粉鈉5g，振動磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，壓片，包腸溶衣，制成片劑。實施例18取實施例13所制滴丸治療32例冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者。治療方案每日3次，每次0.5g，連用3個月，有效率69%。自覺癥狀，如胸悶、心悸、心絞痛以及心電圖等，均有不同程度的改善。實施例19取實施例12所制軟膠囊治療28例慢性支氣管炎患者。治療方案每日3次，每次2粒,連用l個月，有效率71%。實施例20取實施例3所制顆粒治療36例大腦功能不全綜合患者。治療方案每日2次，每次5g。連用12周。據(jù)醫(yī)師評價有25例(69%)顯著改善，病人自覺改善者有30例(83%)。1權利要求1、一種以銀杏葉總黃酮苷元為活性成分的口服藥物。2、根據(jù)權利要求1所述的藥物，其特征在于所述活性成分中可以只有銀杏葉總黃酮苷元，也可以是銀杏葉總黃酮苷元與其他藥物成分聯(lián)合使用。3、根據(jù)權利要求2所述的藥物，其特征在于所述銀杏葉總黃酮苷元是通過水解銀杏葉總黃酮苷而得到的。4、根據(jù)權利要求3所述的藥物，其特征在于水解方法為酸水解、酶水解或微生物水解。5、根據(jù)權利要求1至4中任一項所述的藥物，其特征在于藥物活性成分與藥劑學上可接受的輔料配合使用。6、根據(jù)權利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有生物黏附劑和潤濕劑。7、根據(jù)權利要求6所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有分散劑。8、根據(jù)權利要求7所述的藥物，其特征在于輔料中的生物黏附劑是指殼聚糖、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮中的任一種或二種以上的組合物；潤濕劑是指卵磷脂和/或泊洛沙姆；分散劑是指微粉硅膠和/或環(huán)糊精。9、根據(jù)權利要求8所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為活性成分2060%，生物黏附劑110%，潤濕劑520%，分散劑030%，'其他輔料050%。10、根據(jù)權利要求9所述的藥物，其特征在于被制成片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑。11、根據(jù)權利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有潤濕劑和分散劑。12、根據(jù)權利要求ll所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有生物黏附劑。13、根據(jù)權利要求12所述的藥物，其特征在于輔料中的潤濕劑是指丙二醇、卵磷脂、泊洛沙姆中的任一種或二種以上的組合物；分散劑是指聚乙二醇或植物油；生物黏附劑是指殼聚糖和/或卡波姆。14、根據(jù)權利要求13所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為活性成分1040%，生物黏附劑010%，潤濕劑520%，分散劑5080%，其他輔料020%。15、根據(jù)權利要求14所述的藥物，其特征在于被制成軟膠囊劑、液體硬膠囊劑或滴丸劑。16、制備權利要求6至15中任一項所述藥物的方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加入所需常規(guī)制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。17、根據(jù)權利要求16所述的制備方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料通過振動磨超微粉碎方法混合。18、權利要求1至4中任一項所述藥物在制備用于治療冠心病、高血壓、腦血栓、腦梗塞、中風、眩暈、精神病、腎炎、支氣管炎、帕金森氏病、糖尿病、腫瘤或白血病的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種銀杏葉總黃酮苷元口服制劑及其制備方法和用途，屬中藥領域。該發(fā)明是將從銀杏葉中提取的總黃酮苷進行水解，得到銀杏葉總黃酮苷元，并將銀杏葉總黃酮苷元配合特殊的輔料制成高效制劑，可以大大提高銀杏葉總黃酮苷元的生物利用度。該制劑在治療冠心病、高血壓、腦血栓、腦梗塞、中風、眩暈、精神病、腎炎、支氣管炎、帕金森氏病、糖尿病、腫瘤、白血病等病癥中有明顯的療效。文檔編號A61K47/34GK101518553SQ20081010100公開日2009年9月2日申請日期2008年2月27日優(yōu)先權日2008年2月27日發(fā)明者張佳余,李欽青申請人:北京凱瑞創(chuàng)新醫(yī)藥科技有限公司