專利名稱：：一種治療濕疹的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療濕疹的藥物組合物，具體地，是以黃芩、龍膽為原料制備而成的藥物組合物。屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：濕疹、皮炎(接觸性皮炎、過敏性皮炎、自敏性皮炎、傳染性濕疹樣皮炎等)是臨床最常見的皮膚病，其中尤以急性濕疹和急性皮炎多見，是國內(nèi)外皮膚病臨床及基礎(chǔ)研究的重點課題之一。由于本病常以劇烈瘙癢為主要癥狀，以皮疹形態(tài)多、易于滲出、病程遷延和有復(fù)發(fā)傾向為特征，嚴(yán)重影響患者身心健康。濕疹和皮炎從廣義上講性質(zhì)相同，都是由多種不同原因而引起的變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，二者病理變化都是在表皮出現(xiàn)細(xì)胞間水腫(海綿形成)及細(xì)胞內(nèi)水腫，真皮淺層有毛細(xì)血管擴(kuò)張、水腫及單個核細(xì)胞浸潤。因此臨床上被很多學(xué)者作為同義語來用。但濕疹往往不易找到明確的原因，而皮炎往往是原因比較明確的，如接觸某些刺激刺激物或過敏物質(zhì)，或者服用或外用某些藥物有關(guān)。本病是最常見的過敏性皮膚病，可見于任何年齡，男、女均可發(fā)病，無性別差異，城市多于農(nóng)村。據(jù)國內(nèi)的普查報告，濕疹約占皮膚科門診量的1525%，其中急性濕疹約占52.4%。國外將濕疹視為一大類疾病，包括特應(yīng)性皮炎、局限性慢性皮炎、接觸性皮炎、手部皮炎、錢幣狀皮炎，故其發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國內(nèi)。所以，濕疹是典型的常見病、多發(fā)病。急性濕疹主要以皮損多形性、對稱分布、劇烈瘙癢、傾向濕化及容易反復(fù)發(fā)作為特點，嚴(yán)重者造成感染等并發(fā)癥，故給患者帶來較大痛苦，從而影響生活質(zhì)量及工作、學(xué)習(xí)、生活。急性濕瘆可發(fā)生于身體的任何部位，常見于頭、面、耳后、乳房、四肢遠(yuǎn)端及陰部等處。急性濕疹的臨床特點為皮膚上首選出現(xiàn)多數(shù)密集的點狀紅斑及粟粒大小的丘疹和丘皰疹(丘疹的基底潮紅，有輕度浮腫)，并且很快變成小水皰，皰破后形成點狀糜爛而及結(jié)痂等。自覺癥狀為劇烈瘙癢，有灼痛，常因搔抓或熱水洗燙，造成糜面進(jìn)一步向周圍擴(kuò)散，使皮損境界不清。若處理得當(dāng)，炎癥減輕，出現(xiàn)脫屑，皮疹可在23周內(nèi)消退，如處理不當(dāng)，病程延長，易發(fā)展成為亞急性和漫性濕疹。根據(jù)發(fā)病部位，濕疹有耳部濕疹、乳房濕疹、臍窩濕疹、陰囊濕疹、女陰濕疹、肛門濕疹、手部濕疹、小腿濕疹的名稱差別。西醫(yī)對本病的治療1.去除一切可疑的致病因素。保持皮膚清潔，避免各種外界刺激，如熱水洗燙、用力搔抓、過多的使用肥皂、不適當(dāng)?shù)耐庥盟幍?。避免繼發(fā)感染，同時應(yīng)避免過度勞累及精神緊張，避免辛、辣、腥、酸等食物。對于慢性泛發(fā)濕疹患者，必要時清除病灶，治療全身性疾病。2.全身治療包括(1)抗組織胺類藥物，如撲爾敏、賽庚啶、息斯敏等；(2)鎮(zhèn)靜止癢劑用于有精神障礙或睡眠不佳者，酌選氯丙嗪、奮乃靜、眠爾通、10%水合氯醛等。(3)鈣劑，如10%葡萄糖酸鈣針劑靜脈緩慢注射。(4)針對劇烈瘙癢的靜脈封閉0.25%普魯卡因1020ml加入維生素C12g，靜脈注射。(5)維生素類藥物，如維生素C、B、B6等。(6)皮質(zhì)類固醇激素類，用于皮損廣泛，炎癥急劇，按上述方法未能奏效者，如強(qiáng)的松等。(7)組織胺球蛋白，是由鹽酸組織胺和丙種球蛋白混合后制成的注射劑，用于反復(fù)發(fā)作的濕疹。(8)針對繼發(fā)感染使用抗菌藥。(9)外用療法(爐甘石洗劑等)。嚴(yán)重時，采用照射對慢性濕疹可采用淺層X線照射或用放射性同位素磷32和鍶90治療。一般放射量為80100拉德，每日1次，10次為1療程。總量一般不超過1000拉德，但非常肥厚的病損可用至1500拉德。亞急性濕疹有少量滲出者亦可用放射性同位素治療，其開始量以30拉德左右為好，待滲出消退后可逐漸增加，但最大量不應(yīng)超過800拉德，一般總量為500800拉德。中醫(yī)主張標(biāo)本兼顧，內(nèi)外并治的整體與局部相結(jié)合的原則，既重視濕熱的表現(xiàn)，又重視脾失健運(yùn)的根本原因。在治法上，先治其標(biāo)，待濕熱退后，則建脾助運(yùn)以治其本。(1)辨證治療急性期可分為風(fēng)熱蘊(yùn)藏，風(fēng)濕蘊(yùn)膚，濕熱互結(jié)(濕重于熱，熱重于濕，濕熱并重)，肝郁濕阻，脾濕胃熱等證型。分別采用疏風(fēng)清熱飲，消風(fēng)散，清熱除濕湯，消風(fēng)導(dǎo)赤散，除濕止癢湯，丹梔逍遙散，瀉黃散加減治療。(2)其他療法主要是中藥洗劑，敷劑，搽劑及穴位注射，拔火罐，敷臍等。如應(yīng)用針剌療法長強(qiáng)穴穴位注射5%當(dāng)歸注射液和鹽酸異丙嗪，能宣通氣血，拮抗組織胺，抑制變態(tài)反應(yīng)，降低毛細(xì)血管通透性，改善淋巴循環(huán)，活血化瘀，消炎止痛，促進(jìn)皮損消失，達(dá)到止癢、滲液停止的目的。經(jīng)絡(luò)注氧療法；用100ml注射器吸取純氧80ml，在背部足太陽膀胱經(jīng)隔腧穴處皮下注射，每側(cè)40ml，隔日1次，10天1個療程。這種方法可能是通過調(diào)節(jié)人體的免疫機(jī)能而達(dá)到治療目的。綜上所述，有關(guān)濕疹的病理學(xué)因素不明，故西醫(yī)均屬對證治療。如應(yīng)用抗組胺藥，局部應(yīng)用皮質(zhì)類固醇激素等療效差，復(fù)發(fā)率高，長期應(yīng)用有一定不良作用。中藥治療療效確切，但臨床缺乏有效的中成藥制劑。目前尚無單獨將黃芩、龍膽配伍用于治療濕疹的相關(guān)報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是涉及一種治療濕疹的藥物組合物。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種治療濕疹的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑黃芩l-9份、龍膽9-l份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑黃芩1份、龍膽l-2份。更進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑黃芩1份、龍膽1份。本發(fā)明藥物是由黃苓、龍膽的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑或顆粒劑。其中，所述的膠囊劑中每粒含黃芩苷(C21H180)應(yīng)不少于35呢，含龍膽苦苷(C16H2。09)應(yīng)不少于12mg。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、取藥材黃芩、龍膽；b、加入水煎煮，或者采用40%以上的乙醇提取，回收乙醇，過濾，干燥，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的藥劑。其中，b步驟所述的乙醇濃度為60%乙醇。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療濕疹的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療急性皮炎的藥物中的用途。本發(fā)明藥物原料料中龍膽草、黃芩配伍治療濕疹，經(jīng)動物實驗研究證明，龍膽草、黃芩二者配伍，具有協(xié)同增效的作用，清瀉肝膽濕熱效力大增，有顯著的抗炎、抗過敏、止癢和抑菌作用，用于急性濕疹、皮炎引起的皮膚瘙癢、紅斑、丘疹或水皰療效顯著。具體實施方式實施例l本發(fā)明藥物的制備黃芩667g龍膽667g以上二味原料藥材共制成膠囊1000粒。以上二味，粉碎成粗粉，用60%乙醇回流提取2次，第一次加12倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取1小時，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.361.38(8(TC熱觀ij)的清膏，減壓干燥，粉碎，過60目篩，填裝膠囊，制成1000粒，即得。本品臨床用于急性濕疹和急性皮炎，每日口服1次3粒(0.4g內(nèi)容物/粒，或者相當(dāng)于1.33g原生藥/粒)，每日3次，服用24周，為人用安全劑量和療程。本發(fā)明不同工藝篩選比較不同溶劑提取物中有效成分含量比較按處方比例稱取藥材粗粉200g，共4份，分別選用水、40%、60%、80%乙醇為溶劑進(jìn)行加熱回流(或煎煮)提取3次，第一次加10倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取l小時；第三次加7倍量，提取1小時。合并提取液，定容，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液lOnl,按中國藥典2000年版一部黃芩項下黃芩苷、龍膽項下龍膽苦苷含量測定方法進(jìn)行處理，平行測定2次，結(jié)果見表l。表1不同提取液中主要有效成分含量(g)提取溶劑水40%乙醇60%乙醇80%乙醇黃芩苷含量8.198.598.874.82龍膽苦苷含量3.823.713.803.93從表1可見，不同提取溶劑對龍膽苦苷收率影響小，而對黃芩苷收率影響很大，最佳提取溶劑為60%乙醇，其次為水、40%乙醇。實施例2本發(fā)明藥物的制備黃芩667g龍膽74g以上二味原料藥材共制成膠囊1000粒。以上二味，粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取2次，第一次加12倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取1小時，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.361.38(8(TC熱測)的清膏，減壓干燥，粉碎，過60目篩，填裝膠囊，制成1000粒，即得。實施例3本發(fā)明藥物的制備黃芩74g龍膽667g以上二味原料藥材共制成片劑1000片。以上二味，粉碎成粗粉，用95%乙醇回流提取2次，第一次加12倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取1小時，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.361.38(8(TC熱觀iJ)的清膏，減壓干燥，粉碎，過60目篩，加入硬脂酸鎂，壓片，制成1000片，即得。實施例4本發(fā)明藥物的制備黃芩667g龍膽1334g以上二味原料藥材共制成片劑1000片。以上二味，粉碎成粗粉，用40%乙醇回流提取2次，第一次加12倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取1小時，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.361.38(8(TC熱測)的清膏，減壓干燥，粉碎，過60目篩，加入硬脂酸鎂，壓片，制成1000片，即得。實施例5本發(fā)明藥物質(zhì)量控制方法以黃芩苷、龍膽苦苷含量為指標(biāo)，建立了高效液相色譜測定方法，通過對三批中試產(chǎn)品的含量測定，制訂了其含量限(幅)度指標(biāo)及測定方法黃芩苷及龍膽苦苷含量HPLC測定方法如下黃芩苷照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇_水-磷酸(47:53:0.2)為流動相；檢測波長為280nm。理論塔板數(shù)以黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取在6(TC減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每lml含60ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取正交試驗樣品適量，精密稱定，置25ml容量瓶中，用流動相超聲溶解，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。龍膽苦苷照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(11:89)為流動相；檢測波長為270nm。理論塔板數(shù)以龍膽苦苷峰計算應(yīng)不低于4000。對照品溶液的制備精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.3mg的溶液，即得。供試溶液的制備取正交試驗樣品適量，精密稱定，置10ml容量瓶中，精密加入甲醇10ml，搖勻，超聲(功率不低于100W，頻率不小于40kHz)處理15分鐘，靜置，離心(轉(zhuǎn)速每分鐘3000轉(zhuǎn))，上清液即為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益效果。1、受試藥物與陽性藥物本發(fā)明藥物膠囊實施例1制備。規(guī)格0.4g(內(nèi)容物)/粒。清熱、燥濕、止癢。用于急性濕疹、皮炎引起的皮膚瘙癢、紅斑、丘疹或水皰。其內(nèi)容物為棕黃色粉末，lg藥粉相當(dāng)于原生藥3.34g，由四川省中藥研究所藥化室提供，批號20030508。樣品1(KM-B):棕黃色粉末，1g藥粉相當(dāng)于原生藥3.31g，由四川省中藥研究所藥化室楊安東副研究員提供，批號20030405。樣品1的制備方法稱取本發(fā)明藥物原料(黃芩667g龍膽667g)的50倍，用水提取三次，第一次加10倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取l小時；第三次加7倍量，提取1小時，濾過，合并濾液，濃縮成清膏，清膏減壓干燥，得率為33.0%(編號KM-B)。樣品2(KM-A):棕黃色粉末，1g藥粉相當(dāng)于原生藥3.03g，由四川省中藥研究所藥化室楊安東副研究員提供，批號20030406。樣品2的制備方法稱取本發(fā)明藥物原料(黃芩667g龍膽667g)的50倍，用60%乙醇提取三次，第一次加10倍量，提取2小時；第二次加8倍量，提取l小時；第三次加7倍量，提取1小時，濾過，合并濾液。減壓回收乙醇得清膏，清膏減干燥，得率為30.2%(編號KM-A)。芬必得(布洛芬緩釋膠囊)(90)衛(wèi)藥準(zhǔn)字X-129號。規(guī)格布洛芬300mg/粒，中美天津史克制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號20021120。醋酸地塞米松片川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第012641號。規(guī)格0.75mgX100片/瓶，成都天臺山制藥有限公司生產(chǎn)，批號980401。撲炎痛片(貝諾酯片)川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1981)第000144號。規(guī)格0.5gX100片，成都藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號990926。撲爾敏片川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1993)第008690號。規(guī)格4mgX100片/瓶，四川樂山第三制藥廠生產(chǎn)，批號20020101。2、動物Km(昆明種)小鼠，一級合格，川實動質(zhì)第2002—33號，由四川省中藥研究所實驗動物中心提供。SD大鼠，一級合格，川實動質(zhì)第2002—32號，由四川省中藥研究所實驗動物中心提供。3、儀器與試劑3.1儀器日本島津UV-730自動生化測定儀。日本島津EB-3200D精密電子天平(精密度0.01g)。上海精天電子儀器有限公司JA1003A型電子天平(精度lmg)。大鼠足容積測定儀。上海手術(shù)器械廠80—2離心沉淀器。3.2試劑二甲苯500ml/瓶，分析純，成都化學(xué)試劑廠出品，批號20021120。角叉菜膠規(guī)格10g/瓶，沈陽藥學(xué)院提供，批號980801。于試驗前一天用蒸餾水配制成1%溶液，置4。C冰箱保存?zhèn)溆?。伊文思藍(lán)10g/瓶，F(xiàn)luka進(jìn)口分裝，上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷，批號98-11-02。丙酮500ml/瓶，分析純，成都科龍化工試劑廠，批號20030110。硫化鈉500g/瓶，化學(xué)純，成都化學(xué)試劑廠，批號980923。卵白蛋白50g/瓶，由sigma公司提供，批號Lot#0123。吸附百白破、白喉、破傷風(fēng)聯(lián)合疫苗5ml/安瓿，10支/盒，衛(wèi)制(82)蓉(4)01號，由成都生物制品研究所提供，批號20020403。乙醚500ml/瓶，分析純，天津市博迪化工有限公司出品，批號20020208。2，4一二硝基氯苯(DNCB):25g/瓶，化學(xué)純，上海化學(xué)試劑一廠，批號890901。磷酸二氫鈉(NaH2P04.2H20):500g/瓶，分析純，汕頭市光華化學(xué)廠，批號20010811。磷酸氫二鈉(Na2HP04.12H20):500g/瓶，分析純，汕頭市光華化學(xué)廠，批號20010820。磷酸組胺5g/瓶，含量〉98.0%，中科院上海生化所東風(fēng)生化技術(shù)公司，批號9611147。右旋糖酐40葡萄糖注射液500ml/瓶，川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1994)第010577號，四川樂山第二制藥廠，批號0006147—5。0.9%氯化鈉注射液500ml/瓶，川衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第012141號，四川科倫大藥廠，批號021020—14。4、動物Km(昆明種)小鼠，一級合格，川實動質(zhì)第2002—33號，由四川省中藥研究所實驗動物中心提供。試驗例1本發(fā)明藥物不同配伍比例組合對小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的影響昆明種小鼠100只，雌性，體重1822g，按體重隨機(jī)分成10組，每組10只。設(shè)正常對照(空白對照)、模型對照(溶劑對照)和陽性對照組(醋酸地塞米松片)，四至十組為本發(fā)明藥物不同配伍比例組合，按實施例1方法制備，給藥劑量4g(原生藥)/kg。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，灌胃容積為0.1ml/10g體重，每日1次，連續(xù)13天。首次給藥前5h，以8。/。Na2S將各組小鼠背部皮膚預(yù)先脫毛，除正常對照組外，其余各組均于背部脫毛處涂10。/。DNCB丙酮液20ul/只，第12天給藥后2h，各組小鼠均以1。/。DNCB丙酮液15pl/只均勻涂于右耳正反兩面，24h后，即末次給藥50分鐘后，斷頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差的腫脹度(mg)表示其過敏反應(yīng)程度。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a=0.05。由下表可見，本發(fā)明藥物不同配伍比例組合(黃苳龍膽=9:11:9)均對小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)有抑制作用(p<0.05~0.01)或者抑制作用趨勢(pX).05)，抑制率在17.1456.19%之間。其中黃芩龍膽為1:(1-2)時效果較優(yōu)，以黃苓龍膽為1:1組時，抑制作用最強(qiáng)，為最佳配伍比例組。表2本發(fā)明藥物不同配伍比例組合對小鼠劍対數(shù)蟲性遲^^敏鵬的影口向(^s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型組比較*p>0.05**p<0.05;***p<0.01。在確定了原料的最佳配伍情況后，以下是對原料的不同提取工藝進(jìn)行試驗。試驗例2本發(fā)明藥物原料的不同提取工藝對小鼠二甲苯耳腫脹的影響1、原理給小鼠耳殼涂抹一定濃度的二甲苯可引起誘發(fā)小鼠耳殼急性炎性水腫。該模型可觀察本發(fā)明藥物不同工藝樣品對炎癥早期的對抗作用。2、方法黃芩黃酮類化合物具有明顯的抗變態(tài)反應(yīng)作用，而且苷元較苷作用強(qiáng)，提取溶劑最好選用乙醇?？紤]到成分之間具有助溶作用，苷元也可能用水煎出。為了選擇提取溶劑，分別用水、60%乙醇為提取溶劑，制備樣品進(jìn)行藥效比較實驗，結(jié)果表明醇提優(yōu)于水提。試驗樣品取樣品l(編號KM-B)、樣品2(編號KM-A)進(jìn)行試驗。昆明種小鼠60只，雄性，體重1822g，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(芬必得膠囊)，受試藥物KM-A2個劑量組(分別相當(dāng)于2、4g原生藥/kg),受試藥物KM-B2個劑量組(分別相當(dāng)于2、4g原生藥/kg)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥(對照組給蒸餾水)，受試藥物KM-A2個劑量組濃度分別為20、40g原生藥/dl，受試藥物KM-B2個劑量組濃度分別為20、40g原生藥/dl，芬必得濃度為2g/dl，灌胃容積為0.1ml/10g體重，每日l次，連續(xù)3天。末次給藥后40min，將二甲苯0.03ml/只均勻涂抹于小鼠右耳正反兩面致炎(對照組除外)，20分鐘后處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差作為腫脹度(mg)，并計算各組腫脹抑制率(％)。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a-0.05。表3本發(fā)明藥物膠囊不同提取工藝樣品對二甲苯誘發(fā)小鼠急性耳腫脹的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與對照組比較(t檢驗或t，檢驗)*P>0.05;**P<0.05;***P<0.01。3、結(jié)果由表2可見，樣品KM-A2個劑量組和受試藥物KM-B2個劑量組對二甲苯致小鼠急性耳腫脹均有顯著抑制作用，其中KM-A對二甲苯急性炎癥的抑制率且略高于KM-B，有一定差異趨勢。試驗例3本發(fā)明藥物不同提取工藝對小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的影響1、原理半抗原接觸小鼠腹部表皮后(致敏)，經(jīng)過化學(xué)修飾，與郎罕氏細(xì)胞MHCII類抗原結(jié)合，并將抗原肽呈遞給皮膚抗原特異性T細(xì)胞。致敏后6天，小鼠耳廓再次接觸半抗原(觸發(fā))，活化CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，觸發(fā)接觸性超敏反應(yīng)、小鼠耳廓水腫(人過敏性接觸性皮炎)。該模型可觀察本發(fā)明藥物不同工藝樣品對遲發(fā)型超敏反應(yīng)的對抗作用。2、方法昆明種小鼠77只，雌性，體重18~22g，按體重隨機(jī)分成7組，每組11只。設(shè)正常對照(空白對照)、模型對照(溶劑對照)和陽性對照組(醋酸地塞米松片)，受試藥物KM-A2個劑量組(分別相當(dāng)于2、4g原生藥/kg)，受試藥物KM-B2個劑量組(分別相當(dāng)于2、4g原生藥/kg)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥(對照組給蒸餾水)，受試藥物KM-A2個劑量組濃度分別為20、40g原生藥/dl，受試藥物KM-B2個劑量組濃度分別為20、40g原生藥/dl，地塞米松濃度為0.01g/dl，灌胃容積為0.1ml/10g體重，每日1次，連續(xù)13天。首次給藥前5h，以8%Na2S將各組小鼠背部皮膚預(yù)先脫毛，除正常對照組外，其余各組均于背部脫毛處涂10。/。DNCB丙酮液20yl/只，第12天給藥后2h，各組小鼠均以1。/。DNCB丙酮液15ul/只均勻涂于右耳正反兩面，24h后，即末次給藥50分鐘后，斷頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差的腫脹度(mg)表示其過敏反應(yīng)程度。同時剖取脾臟和胸腺，稱重，計算臟器系數(shù)。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a-0.05。5.2.3結(jié)果由表3可見，樣品KM-A2、4g(原生藥)/kg2個劑量組和受試藥物KM-B4g(原生藥)/kg劑量組與模型組比較，其過敏反應(yīng)程度顯著降低(統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P〈0.05或0.01)，受試藥物KM-B2g(原生藥)/kg劑量組可見一定作用趨勢。表明本發(fā)明藥物樣品的不同提取工藝樣品KM-A和KM-B對DNCB所致小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)均有抑制作用，在相同劑量下KM-A的抗過敏作用強(qiáng)于KM-B的抗過敏作用。此外，還觀察到與地塞米松顯著抑制免疫器官不同，本品在有效劑量范圍內(nèi)，對免疫器官脾、胸腺的臟器系數(shù)無明顯影響。表4本發(fā)明藥物不同提取工藝樣品對小鼠劍夫接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(PTH)的影響組別動物數(shù)~~Ml過敏反應(yīng)程度過敏反應(yīng)抑制率胸腺臟器指數(shù)脾臟臟器指數(shù)(只)(g原生藥/kgxd)(mg)(%)(mg/10g)(mg/10g)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組比較(t檢驗)*P〉0.05;**P<0.05;*林P<0.01。3、試驗結(jié)論3.1本發(fā)明藥物KM-A2個劑量組和KM-B2個劑量組對二甲苯致小鼠急性耳腫脹均有顯著抑制作用，其中KM-A對二甲苯急性炎癥的抑制率且略高于KM-B，有一定差異趨勢。3.2本發(fā)明藥物KM-A2、4g(原生藥)/kg2個劑量組和KM-B4g(原生藥)/kg劑量組與模型組比較，其過敏反應(yīng)程度顯著降低(統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P〈0.05或0.01)，受試藥物KM-B2g(原生藥)/kg劑量組可見一定作用趨勢。表明本發(fā)明藥物不同提取工藝樣品KM-A和KM-B對DNCB所致小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)均有抑制作用，在相同劑量下KM-A的抗過敏作用強(qiáng)于KM-B的抗過敏作用。此外，還觀察到與地塞米松顯著抑制免疫器官不同，在有效劑量范圍內(nèi)，對免疫器官脾、胸腺的臟器系數(shù)無明顯影響。3.3從所試劑量范圍和本實驗?zāi)Ｐ椭笜?biāo)結(jié)果可以看出，本發(fā)明藥物KM-A和KM-B均有抗炎消腫和抗過敏作用，其中，本發(fā)明藥物KM-A的抗炎消腫和抗過敏作用優(yōu)于本發(fā)明藥物KM-B。綜上所述，本發(fā)明藥物原料醇提效果優(yōu)于水提，提取方法選擇60%乙醇為提取溶劑進(jìn)行回流提取。試驗例4本發(fā)明藥物抗炎消腫作用濕疹在發(fā)病過程中往往伴有炎癥反應(yīng)，大多數(shù)治療濕疹的中藥都有一定的抑制炎癥反應(yīng)的作用。本品主要用于急性濕疹、急性皮炎，故以急性炎癥模型試驗為主。1、對小鼠二甲苯耳腫脹的影響(1)目的給小鼠耳殼涂抹一定濃度的二甲苯可引起誘發(fā)小鼠耳殼急性炎性水腫。該模型可觀察本發(fā)明藥物膠囊對炎癥早期的對抗作用。(2)方法昆明種小鼠55只，雄性，體重1822g，按體重隨機(jī)分成5組，每組11只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(芬必得膠囊)，受試藥物3個劑量組(1、2、4g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的5、10、20倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥(對照組給蒸餾水)，受試藥物3個濃度分別為10、20、40g原生藥/dl，芬必得濃度為2g/dl，灌胃容積為0.lml/10g體重，每日1次，連續(xù)3天。末次給藥后40min，將二甲苯0.03m1/只均勻涂抹于小鼠右耳正反兩面致炎(對照組除外)，20分鐘后處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差作為腫脹度(mg)，并計算各組腫脹抑制率(％)。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a=0.05。(3)結(jié)果由表5可見，本發(fā)明藥物膠囊所試劑量范圍內(nèi)對二甲苯致小鼠急性耳腫脹有顯著抑制作用，且有一定量效差異趨勢，表明本發(fā)明藥物膠囊對二甲苯引起的急性炎癥有對抗作用。表5本發(fā)明藥物膠囊對二甲苯誘發(fā)小鼠急性耳腫脹的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>2、對角叉菜膠(carrageenin)誘發(fā)大鼠足爪腫脹的影響(1)目的選擇在注入后24小時腫脹達(dá)峰值的中效致炎劑角叉菜膠局部注射誘發(fā)大鼠足爪腫脹，該模型的特點是致炎局部PG合成增加，并與血管活性物質(zhì)和激肽類一起誘發(fā)水腫。通過測量致炎前后大鼠足腫脹容積的變化來觀察本發(fā)明藥物膠囊的抗炎作用。(2)方法SD大鼠50只，雄性，體重100140g，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(撲炎痛片)，受試藥物3個劑量組(0.8、1.6、3.2g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的4、8、16倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為8、16、32g原生藥/dl，撲炎痛濃度為2g/dl，灌胃容積lml/100g體重(對照組給等容積蒸餾水)，每日1次，連續(xù)3天。末次給藥后40min給大鼠右后足跖腱膜下注射1Q/^角叉菜膠0.05ml致炎。采用大鼠足爪容積測定儀測定致炎前和致炎后不同時間(間隔12小時一次，連續(xù)5次)大鼠足爪容積變化，按下式計算大鼠足腫脹率。計算各組腫脹率(％)，并作t檢驗，比較各組間差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)。=0.05。致炎后足容積(ml)—致炎前足容積(ml)腫脹率(％)二--X100%致炎前足容積(ml)(3)結(jié)果由表6可見，本發(fā)明藥物膠囊1.6、3.2g(原生藥)/kg劑量組腫脹率低于對照組腫脹率，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理具有差異顯著性，有一定量效差異趨勢，主要作用于角叉菜膠局部注射后1小時足爪腫脹形成期以及注射后4-8小時腫脹消退期，表明本發(fā)明藥物膠囊對角叉菜膠局部注射誘發(fā)大鼠足爪腫脹具有明顯抑制作用。表6本發(fā)明藥物膠囊對角叉菜膠誘發(fā)大鼠足爪腫脹的抑制作用組別動物數(shù)劑量致炎前致炎后足腫脹率(7±S，％)(只)(g/kgxd)足體積-_(ml)1hr_____對照組10—1.27±0.08".37土5.2041.21±12.3361.82±12.4752.89±8.7449.02±8.44本發(fā)明藥物101.6X31.29±0.12*10.09±7.49*40.76±12.29*53.55±10.68*49.27±7.68*43.52±9.85*本發(fā)明藥物100.8X31.33±0.10*9.33±5.22*40,58±16.83*50.69±12.87**45.17±8.70**43.29±7.76*本發(fā)明藥物103.2X31.29±0.06*7.37±5.17**38.17±8.70*45.74±7.32***41.82±7.62***41.38±9.18**撲炎痛100.2X31.33±0.07*7.20±4.99**14.99±9.46*"33.08±8.00*"39.96±12.38**8.05±10.07**與對照組比較(t檢驗)*P〉0.05;**P<0.05;*林P<0.01。3、對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響(1)目的選擇二甲苯作致炎因子，局部刺激小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增加。靜脈注入伊文思藍(lán)，該染料可從亢進(jìn)的毛細(xì)血管內(nèi)向血管外滲出，染料滲出量的多少可作為判斷本發(fā)明藥物膠囊是否能抑制炎癥早期毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的指標(biāo)。(2)方法昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重1821g，按體重隨機(jī)分成5組，每組12只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(醋酸地塞米松片)，受試藥物3個劑量組(1、2、4g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的5、10、20倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為IO、20、40g原生藥/dl，醋酸地塞米松片濃度為45mg/dl，灌胃容積為O.lml/10g體重，每日1次，連續(xù)3天。末次給藥后l小時經(jīng)小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水0.lml/10g體重，隨即于小鼠腹部正中央部位皮膚上滴二甲苯0.02ml/只。20min后頸椎移位處死動物，剪下有藍(lán)斑的皮膚，剪碎。浸泡于裝有丙酮一硫酸鈉液的有塞玻璃離心管中，定容至10ml，避光存放3天，每天輕輕搖動該試管23次，2000pm離心IO分鐘，取上清液在590mn處測定吸光度(A值)。結(jié)果用t檢驗比較各組間差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a=0.05。(3)結(jié)果由表7可見，本發(fā)明藥物膠囊所試3個劑量組藍(lán)斑提取染料吸光度值顯著低于對照組，表明本發(fā)明藥物膠囊能對抗炎癥引起的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增加。表7本發(fā)明藥物膠囊對二甲苯誘發(fā)小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增加的影響組另lj動物數(shù)劑量皮膚浸泡液吸光度值抑制率(％)(只)(g/kgxd)(A，i±S)對照組12一0.139±0.045一本發(fā)明藥物121X30.097±0.041"30.22本發(fā)明藥物122X30.097士0.047"30.22本發(fā)明藥物124X30.088±0.030*"36.69地塞米松124.5mg/kgX30.034±0.021"*75.54與對照組比較(t檢驗)*P〉0.05;林P<0.05;***P<0.01。試驗例5本發(fā)明藥物抗過敏作用目前認(rèn)為濕疹是一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，研究中藥的抗過敏作用應(yīng)是其治療濕疹的藥效學(xué)研究的主要部分。1、本發(fā)明藥物對大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng)(RatPCA)的影響(1)目的將致敏大鼠的血清(內(nèi)含豐富的IgE抗體)皮內(nèi)注射于正常大鼠腹壁或背部，IgE與局部皮膚肥大細(xì)胞的Fc受體結(jié)合，使之被動過敏。當(dāng)抗原攻擊時，引起局部肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)，從而使局部血管的通透性增加，用伊文思蘭判定血管通透性變化，可反映皮膚過敏反應(yīng)程度。(2)方法抗血清制備取大鼠10只，后肢兩側(cè)肌肉注射卵蛋白生理鹽水溶液30mg/kg.2m1—1，同時腹腔注射百白破三聯(lián)疫苗2.5ml/只。第2天再重復(fù)注射1次，14天后處死動物，股動脈放血，4°C2500rpmX10min分離血清，-30"C保存?zhèn)溆?。攻擊及給藥取SD大鼠50只，雌雄各半，體重150200g，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(撲爾敏片)，受試藥物3個劑量組(0.8、1.6、3.2g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的4、8、16倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為8、16、32g原生藥/dl，撲爾敏濃度為0.032g/dl，灌胃容積lml/100g體重(對照組給等容積蒸餾水)，每日l次，連續(xù)5天。其間，在給藥3天后，各組動物均于背部脊柱兩側(cè)剪毛，每鼠剪2個點，約lcmXlcm大小。左側(cè)注射l:2稀釋抗血清，右側(cè)注射l:4稀釋抗血清，0.lml/點。注射后48h，各鼠尾靜脈注射1%伊文思蘭生理鹽水液(內(nèi)含2mg/ml卵蛋白)2ml/只，20min后斷頸處死動物，剪下藍(lán)染皮膚，浸泡于4ml丙酮-硫酸鈉溶液中，3日后2000rpm離心10min，取上清液于590nm處比色測定光密度，以未泡皮膚之丙酮-硫酸鈉液較零。計算各組藍(lán)染皮膚浸泡液0D值的均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，并作t檢驗，比較各組間差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)ci二0.05。表8本發(fā)明藥物膠囊對大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng)(RatPCA)的影響組別動物數(shù)劑量皮膚浸泡液吸光度值(1:2抗血清)皮膚浸泡液吸光度值(1:4抗血清)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(3)結(jié)果由表8可見，本發(fā)明藥物膠囊1.6、3.2g/kg皮膚藍(lán)斑浸泡液0D值低于對照組(P<0.050.01)，0.8g/kg可見一定趨勢(P>0.05)，表明本發(fā)明藥物膠囊對大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng)具有抑制作用。2、本發(fā)明藥物對小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(PTH)的影響(1)目的半抗原接觸小鼠腹部表皮后(致敏)，經(jīng)過化學(xué)修飾，與郎罕氏細(xì)胞MHCII類抗原結(jié)合，并將抗原肽呈遞給皮膚抗原特異性T細(xì)胞。致敏后6天，小鼠耳廓再次接觸半抗原(觸發(fā))，活化CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，觸發(fā)接觸性超敏反應(yīng)、小鼠耳廓水腫(人過敏性接觸性皮炎)。(2)方法昆明種小鼠60只，雌性，體重1822g，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(醋酸地塞米松片)，受試藥物3個劑量組(1、2、4g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的5、10、20倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為10.0、20.0、40.0g原生藥/dl，地塞米松濃度為0.01g/dl，灌胃容積為0.lml/10g體重，每日1次，連續(xù)13天。首次給藥前5h，以8%N&S將各組小鼠背部皮膚預(yù)先脫毛，除正常對照組外，其余各組均于背部脫毛處涂1(mDNCB丙酮液20u1/只，第12天給藥后2h，各組小鼠均以1。/oDNCB丙酮液15ul/只均勻涂于右耳正反兩面，24h后，即末次給藥50分鐘后，斷頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，以兩耳片重量之差的腫脹度(mg)表示其過敏反應(yīng)程度。同時剖取脾臟和胸腺，稱重，計算臟器系數(shù)。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a=0.05。(3)結(jié)果由表9可見，本發(fā)明藥物膠囊所試3個劑量組與模型組比較，其過敏反應(yīng)程度顯著降低(統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P〈0.05或0.01)，且呈一定的量效關(guān)系。與地塞米松不同，本發(fā)明藥物在有效劑量范圍內(nèi)，對免疫器官脾、胸腺的臟器系數(shù)無明顯影響。表明本發(fā)明藥物膠囊對DNCB所致小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)有抑制作用。表9本發(fā)明藥物膠囊對小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(PTH)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>3、本發(fā)明藥物對小鼠皮內(nèi)注射性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(PTH)的影響(l)目的與接觸性超敏反應(yīng)相同，DTH也包括致敏和觸發(fā)兩個時相。<鼠腹部皮下注射半抗原(致敏)，抗原特應(yīng)性T細(xì)胞分布到外周各淋巴組織。致敏后6天，小鼠足墊再次注射半抗原(觸發(fā))，活化CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，觸發(fā)DTH(小鼠足墊腫脹)。(2)方法昆明種小鼠60只，雌性，體重1822g，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(醋酸地塞米松片)，受試藥物3個劑量組(1、2、4g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的5、10、20倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為10.0、20.0、40.0g原生藥/dl，地塞米松濃度為0.01g/dl，灌胃容積為0.lml/10g體重，每日1次，連續(xù)9天。首次給藥前3h，以7%DNCB丙酮液(3:7)0.03ml/只背部皮內(nèi)注射(正常組除外)，第9天給藥后2h，各組小鼠均于右足足墊注射O.5。/oDNCBPBS液(PH=7.4)0.03ml/只，24h后，斷頸處死小鼠，沿踝關(guān)節(jié)毛際處剪下左、右兩足，以兩足重量之差的腫脹度(mg)表示其過敏反應(yīng)程度。同時剖取脾臟和胸腺，稱重，計算臟器系數(shù)。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a二O.05。表10本發(fā)明藥物膠囊對小鼠皮內(nèi)注射性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(PTH)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與模型組比較(t檢驗)*P〉0.05;**P<0.05;林*P<0.01。(3)結(jié)果由表10可見，本發(fā)明藥物膠囊所試2、4g原生藥/kg劑量組與模型組比較，其過敏反應(yīng)程度顯著降低(P〈0.05或0.01)，本發(fā)明藥物膠囊所試lg(原生藥)/kg組也有一定作用趨勢，呈一定的量效關(guān)系。與地塞米松不同，本品在有效劑量范圍內(nèi)，對免疫器官脾、胸腺的臟器系數(shù)無明顯影響。表明本發(fā)明藥物膠囊對小鼠皮內(nèi)注射性遲發(fā)型超敏反應(yīng)有較好抑制作用。試驗例6本發(fā)明藥物止癢作用濕疹在發(fā)病時往往伴有劇烈的瘙癢，故而止癢作用應(yīng)是在中藥治療濕疹的研究過程中不可或缺的一項藥效學(xué)內(nèi)容。1、本發(fā)明藥物對豚鼠組織胺局部致癢的影響a)目的涂抹一定量的不同濃度組織胺于豚鼠局部皮膚可引起其局部皮膚瘙癢導(dǎo)致豚鼠產(chǎn)生瘙癢動作，用致癢閾來反映藥物的止癢作用。(2)方法取健康豚鼠60只，雌雄各半，體重250士50g，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只。設(shè)正常對照、模型對照和陽性對照組(撲爾敏片)，受試藥物3個劑量組(0.8、1.6、3.2g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的4、8、16倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥，受試藥物3個濃度分別為8、16、32g原生藥/dl，撲爾敏濃度為0.016g/dl，灌胃容積lml/100g體重(對照組給等容積蒸餾水)，每日l次，連續(xù)4天。實驗前一日用剃刀給各豚鼠右后足背剃毛，末次給藥后lh，將剃毛處皮膚用粗砂紙擦傷右后足背剃毛處，面積lcm2，開始在創(chuàng)面處滴0.0P/。磷酸組織胺0.05ml/只，此后每隔3分鐘依0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、......遞增濃度，每次均為0.05m1/只。直至豚鼠出現(xiàn)回頭舔右后足，以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時所給予的磷酸組織胺總量為致癢閾，計算各組豚鼠致癢閾的均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，并作t檢驗，比較各組間差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)0=0.05。(3)結(jié)果由表11可見，本發(fā)明藥物膠囊所試1.6、3.2g原生藥/kg劑量組與模型組比較，其致癢閾顯著提高(P〈0.05或0.01)，本發(fā)明藥物膠囊所試0.8g(原生藥)/kg組也有一定作用趨勢。表明本發(fā)明藥物膠囊對豚鼠組織胺引起的局部瘙癢反應(yīng)具有明顯抑制作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>與模型組比較(t檢驗或t，檢驗)*P〉0.05;**P<0.05;***P<0.01。2、本發(fā)明藥物對右旋糖酐致小鼠全身瘙癢的影響(1)目的右旋糖酐iv小鼠可引起全身瘙癢導(dǎo)致小鼠產(chǎn)生瘙癢動作，該模型可觀察本品對抗小鼠全身瘙癢的作用。(2)方法昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重1822g，按體重和性別隨機(jī)分成6組，每組10只。設(shè)陰性對照(溶劑對照)和陽性對照組(撲爾敏片)，受試藥物3個劑量組(1、2、4g原生藥/kg，分別相當(dāng)于臨床每日推薦劑量的5、10、20倍)。采用等容積不等濃度藥液灌胃給藥(對照組給蒸餾水)，受試藥物3個濃度分別為10、20、40g原生藥/dl，撲爾敏濃度為0.02g/dl，灌胃容積為O.lml/10g體重，每日l次，連續(xù)3天。末次給藥后lh，各組均尾靜脈注射0.025%右旋糖酐生理鹽水液0.05ml/10gBW(1.25mg/kg，對照組除外)，以小鼠出現(xiàn)前爪搔抓頭部、后爪搔抓軀干、嘴咬全身各部位為瘙癢指征，記錄20分鐘內(nèi)小鼠瘙癢次數(shù)及瘙癢持續(xù)時間及平均每次瘙癢持續(xù)時間的均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果用t檢驗比較各組間腫脹度差異顯著性，檢驗水準(zhǔn)a二0.05。(3)結(jié)果由表12可見，本發(fā)明藥物膠囊所試2、4g原生藥/kg劑量組與模型組比較，其瘙癢次數(shù)和瘙癢持續(xù)時間均顯著降低(P〈0.05或0.01)，本發(fā)明藥物膠囊所試lg(原生藥)/kg組也有一定作用趨勢，呈一定的量效關(guān)系。表明本發(fā)明藥物膠囊對右旋糖酐致小鼠全身瘙癢有對抗作用。表12本發(fā)明藥物膠囊對右旋糖酐致小鼠全身瘙癢的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>試驗例7本發(fā)明藥物抗菌作用(1)目的中藥治療濕疹，其抗菌作用是一個重要環(huán)節(jié)。故選用與濕疹有關(guān)的菌株進(jìn)行體外抗菌試驗等。(2)方法受試藥物配制以加重法精確稱取膠囊內(nèi)容藥粉(lg藥粉二3.34g原生藥)2.00g，加無菌蒸餾水29.3ml使成混懸液，濃度為64mg/ml，沸水浴煮沸10分鐘殺死雜菌。實驗時取0.5ml用無菌MH肉湯(乙型鏈球菌用血清肉湯、白色念珠菌用沙氏肉湯)作對倍稀釋，使?jié)舛认盗袨?2、16、8、4、2、1、0.5、0.25mg/ml。試驗細(xì)菌來源選擇皮炎濕疹常見致病菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床分離菌株16株。包括金黃色葡萄球菌ATCC6538、金黃色葡萄球菌臨床株、表皮葡萄球菌ATCC12228、表皮葡萄球菌臨床株、大腸桿菌ATCC25922、大腸桿菌臨床株、綠膿桿菌ATCC27853、綠膿桿菌臨床株、乙型鏈球菌ATCC19615、乙型鏈球菌臨床株、肺炎克雷伯氏菌ATCC13883、肺炎克雷伯氏菌臨床株、白色念珠菌ATCC10231、白色念珠菌臨床株、枯草桿菌ATCC9372(繁殖體)、福氏痢疾桿菌臨床株。其中國際公認(rèn)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株，由四川省防疫站細(xì)菌科提供。其余臨床菌株來源于四川省人民醫(yī)院或四川省防疫站的新近分離的臨床菌株。試驗菌液的制備試驗菌株按營養(yǎng)需求接種于普通瓊脂平板、沙氏瓊脂平板或血平板，37r培養(yǎng)18小時，刮取少量菌苔乳化于MH肉湯(乙型鏈球菌用血清肉湯、白色念珠菌用沙氏肉湯)，比濁校正其濃度，再做io萬倍稀釋，使終濃度相當(dāng)于104cfu/ml。MIC測定采用試管液體二倍稀釋法。試驗菌液每管加量0.5ml，混勻后放37'C培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果。加菌后，試驗藥相當(dāng)于再稀釋l倍，濃度系列為16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125mg/ml。抑制細(xì)菌生長的最低濃度即為MIC。MBC測定采用平板活菌計數(shù)法。即先測出MIC，再依次將未見細(xì)菌生長的各管培養(yǎng)物分別吸取0.1ml按營養(yǎng)需求接種于平板，37。C再培養(yǎng)1824小時，平板上菌落數(shù)〈5個的最低藥物濃度即為最小殺菌濃度。同時做菌液肉湯對照和試驗藥空白對照、陽性藥物潔爾陰洗液對照。表13本發(fā)明藥物膠囊體外最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>(3)結(jié)果由表13可見，本發(fā)明藥物膠囊對皮炎濕疹常見致病菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、乙型鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、白色念珠菌、枯草桿菌(繁殖體)、福氏痢疾桿菌均有一定的抑制或者殺滅作用。試驗結(jié)論1、本發(fā)明藥物膠囊灌胃給藥對二甲苯致小鼠急性耳腫脹、角叉菜膠局部注射誘發(fā)大鼠足爪腫脹均顯著對抗作用，可以對抗炎癥引起的小鼠二甲苯皮膚毛細(xì)血管通透性增加，表明本品對炎癥初期具有肯定的抗炎作用。2、本發(fā)明藥物膠囊對大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng)具有明顯抑制作用，對DNCB所致小鼠皮膚接觸性遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)有較好抑制作用以及小鼠皮內(nèi)注射性遲發(fā)型超敏反應(yīng)均有顯著抑制作用，具有抗過敏作用。3、本發(fā)明藥物膠囊對豚鼠組織胺引起的局部瘙癢反應(yīng)以及右旋糖酐致小鼠全身瘙癢均具有明顯抑制作用，具有止癢作用。4、本發(fā)明藥物膠囊對皮炎濕疹常見致病菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、乙型鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、白色念珠菌、枯草桿菌(繁殖體)、福氏痢疾桿菌有一定的抑制或者殺滅作用，具有抑菌作用。以上結(jié)果表明，本發(fā)明藥物膠囊具有抗炎消腫、抗過敏、止癢、抑菌等多方面與急性濕疹和皮炎治療有關(guān)的藥理作用。綜上，本發(fā)明藥物針對治療濕疹具有顯著的藥效。權(quán)利要求1、一種治療濕疹的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑黃芩1-9份、龍膽9-1份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑黃芩1份、龍膽l-2份。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑黃芩1份、龍膽1份。4、根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于它是由黃芩、龍膽的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒劑。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于所述的膠囊劑中每粒含黃芩苷(C21H180u)應(yīng)不少于35mg，含龍膽苦苷(C16H2。09)應(yīng)不少于12mg。7、一種制備權(quán)利要求l-6任一項所述的治療濕疹的藥物組合物，它包括如下步驟a、取藥材黃苳、龍膽；b、加入水煎煮，或者采用40%以上的乙醇提取，回收乙醇，過濾，干燥，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的藥劑。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療濕疹的藥物組合物，其特征在于b步驟所述的乙醇濃度為60%乙醇。9、權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備治療濕疹的藥物中的用途。10、權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備治療急性皮炎的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療濕疹的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑黃芩1-9份、龍膽9-1份。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明藥物中兩味原料藥龍膽草、黃芩配伍治療濕疹，經(jīng)動物實驗研究證明，龍膽草、黃芩二者配伍，清瀉肝膽濕熱效力大增，具有顯著的抗炎、抗過敏、止癢和抑菌作用，用于急性濕疹、皮炎引起的皮膚瘙癢、紅斑、丘疹或水皰療效顯著。文檔編號A61K9/16GK101234140SQ20081010155公開日2008年8月6日申請日期2008年3月7日優(yōu)先權(quán)日2008年3月7日發(fā)明者楊安東,趙軍寧申請人:四川省中醫(yī)藥科學(xué)院