專利名稱：：一種新型的peg衍生化磷脂包載前列腺素e1的膠束制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種靜脈注射用的前列腺素E1(PGE1)膠束制劑。技術(shù)背景關(guān)于前列腺素El(PGE1)納米微粒給藥系統(tǒng)的相關(guān)
背景技術(shù)：
，在本申請人:之前的專利(ZL200410057147)中有詳細(xì)的論述，涉及前列腺素El的藥理性質(zhì)以及脂質(zhì)體、微乳、聚乙二醇(PEG)衍生化磷脂膠束的載藥性質(zhì)，基于PEG衍生化磷脂膠束作為藥物載體的諸多優(yōu)點(diǎn)，特別是在包裹前列腺素E1制備出的前列腺素E1納米膠束微粒給藥系統(tǒng)所表現(xiàn)出優(yōu)良的藥學(xué)性質(zhì)和穩(wěn)定性，專利(ZL200410057147)闡述了一種靜脈注射用的前列腺素E1膠束，它是一種動力學(xué)穩(wěn)定體系，具有良好的穩(wěn)定性，并且在體內(nèi)有靶向作用，增加藥物在病變部位的分布，提高藥物療效并降低副作用。通過進(jìn)一步試驗研究，結(jié)果表明處方中藥脂比、磷脂比與載藥膠束的包封率和釋放度密切相關(guān)，載藥膠束的包封率和釋放度是膠束藥物發(fā)揮生物學(xué)特性的基礎(chǔ)，因此在進(jìn)一步研究處方中藥脂比、磷脂比與載藥膠束包封率和釋放度關(guān)系的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步優(yōu)化和限定了處方中藥脂比、磷脂比，制備了具有高的包封率和低的初始釋放度的前列腺素E1膠束制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種優(yōu)良的前列腺素El膠束制劑，它是一種動力學(xué)穩(wěn)定的體系，具有良好的穩(wěn)定性，并且在體內(nèi)有靶向作用，增加藥物在病變部位的分布，提高藥物療效并降低副作用。本發(fā)明是在專利(ZL200410057147)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化和限定處方中藥脂比、磷脂比等，提供一種具有更優(yōu)包封率和釋放度的前列腺素El膠束制劑。本發(fā)明提供一種靜脈注射用前列腺素E1膠束制劑，其含有治療有效量的前列腺素E1、PEG衍生化磷脂、氫化磷脂、以及藥學(xué)上可接受的輔劑，其中所述PEG衍生化磷脂為聚乙二醇分子通過共價鍵與磷脂分子上的含氮堿基結(jié)合而形成，PEG衍生化磷脂和氫化磷脂之和的總磷脂與前列腺素El的摩爾比在80:1500:1的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，PEG衍生化磷脂是聚乙二醇2000衍生化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，氫化磷脂占總磷脂的摩爾比例范圍為50%90%。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，總磷脂與前列腺素E1的摩爾比在160:1240:1的范圍內(nèi)。在本發(fā)明中，所述的藥學(xué)上可接受的輔劑包括抗氧劑、pH值調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述膠束制劑是凍干形式，臨用前加入生理上可接受的溶劑復(fù)溶。膠束制劑復(fù)溶后，形成含有0.5ug/ml10ug/ml的前列腺素El和0.01mM50mM的總磷脂的溶液，用于靜脈注射給藥途徑。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，膠束制劑復(fù)溶后，形成載藥膠束溶液的pH值在4.5-5.5范圍內(nèi)，優(yōu)選在4.8-5.2范圍內(nèi)。為了更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面對一些專業(yè)術(shù)語解釋如下。"膠束"是指雙親性分子在水溶液中濃度超過臨界膠團(tuán)濃度時(CMC)，能夠自發(fā)聚合形成膠束，膠束不同于脂質(zhì)體，不具有雙分子層，其結(jié)構(gòu)為疏7jC部分向內(nèi)，形成疏水核，親水部分向外形成親水表面。膠束粒徑小(小于200nm)，平均粒徑在20-30nm左右，因此其不但是熱力學(xué)穩(wěn)定體系，而且是動力學(xué)穩(wěn)定體系，另外膠束顆粒不易聚集分層，包載容量高，在低濃度時，即可包載較高的藥量。"磷脂"，磷脂的分子結(jié)構(gòu)和脂肪相似，不同的是在甘油分子上只連有兩個脂肪酸，而磷脂的第三個羥基與磷酸結(jié)合成脂，并有一個含氮堿基與磷酸相結(jié)合。磷脂的這一結(jié)構(gòu)使它成為一種雙性分子。它的磷酸和^M堿基一端是極性的，易與水相吸，構(gòu)成磷脂分子的親水性頭部，而它的脂肪酸一端是非極性的，不與水相吸，構(gòu)成磷脂分子的疏水性尾部，本發(fā)明所涉及的磷脂往往是包括PEG衍生化磷脂在內(nèi)的幾種磷脂的配合使用。"治療有效量"是指前列腺素E1產(chǎn)生治療效果的用量。根據(jù)本發(fā)明，前列腺素E1的單位劑量為11000ug，優(yōu)選單位劑量5100ug，最優(yōu)單位劑量為10ug，劑量將根據(jù)每個特殊個體的需要而調(diào)整。"釋放度"是指在規(guī)定的條件下，藥物從膠束制劑中釋放的速率和程度，一般認(rèn)為藥物只有保留在膠束中才能夠延緩其在血液循環(huán)中的代謝，不斷地在病變部位聚集，才能更好地發(fā)揮藥效，因此膠束制劑在模擬體液中釋放越慢則越有利于其藥效的發(fā)揮。"包封率"指在前列腺素El膠束制劑中，被膠束包裹的藥物占總的藥物量的分子比例。藥物只有包裹于膠束中，才能發(fā)揮膠束藥物的生物學(xué)特性，因此理論上講，包封率越髙，越有利于膠束藥物生物學(xué)特性的發(fā)揮。"藥脂比"指處方中總磷脂與藥物(前列腺素E1)的摩爾比例。藥脂比二總磷脂摩爾數(shù)/前列腺素El摩爾數(shù)"磷脂比"指處方中總磷脂中不同磷脂成分之間的比例，在本發(fā)明中總磷脂中除了含有PEG衍生化磷脂，還含有氫化磷脂酰膽堿(HSPC)，它們之間的比例對膠束的藥物包封率、釋放度具有顯著影響。本發(fā)明所述的前列腺素El膠束制劑，是采用PEG衍生化磷脂衍生化磷脂作為載體,同時為了控制藥物從膠束制劑的釋放，與其他磷脂材料配合使用，通過一定的制劑學(xué)手段，將治療量的前列腺素El包裹于所形成的納米膠束中，根據(jù)需要添加一定量的抗氧劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑。在本發(fā)明中，所述PEG衍生化磷脂為PEG衍生化磷脂2000衍生化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。本發(fā)明所述的前列腺素El膠束制劑，是采用PEG衍生化磷脂衍生化磷脂作為載體，同時處方中加入氫化磷脂酰膽堿(HSPC)，利用氫化磷脂酰膽堿疏水性強(qiáng)的性質(zhì)，可以調(diào)節(jié)膠束的藥物包封率和釋放度。本發(fā)明所述的前列腺素E1膠束制劑，包封率在80%以上，更優(yōu)的藥物包封率應(yīng)在90%以上；在模擬體液中，0.5小時的釋放度不超過50%。本發(fā)明所述的前列腺素E1膠束制劑，其包封率與處方中藥脂比、磷脂比有關(guān)，隨著處方中磷脂用量的提高，藥物的包封率提高，為了保證膠束制劑的藥物包封率80%以上，處方中藥脂比應(yīng)在80:1500:1的范圍內(nèi)，優(yōu)選范圍為160:1240:1。本發(fā)明所述的前列腺素E1膠束制劑，膠束的藥物釋放度與處方中藥脂比、磷脂有關(guān)，藥物的釋放速度越慢，藥物在膠束中滯留時間越長，越有利于其藥效的發(fā)揮。在模擬體液條件下，本發(fā)明所述的前列腺素El膠束制劑，0.5小時的釋放度不超過50%。在模擬體液的釋放度測定方法取注射用前列腺素E1膠束制劑適量，加入生理鹽水配制成50嗎/mL溶液，取2mL置于透析袋中(截留分子量為1.4萬)，將兩端封好，以Krebs-Henseleit緩沖液(pH7.4)40mL為溶出介質(zhì)，置于搖床中，37°C，100轉(zhuǎn)/分，分別于規(guī)定的時間取樣，照HPLC方法測定含量，測定透析袋內(nèi)前列腺素E1的濃度，計算前列腺素E1膠束在規(guī)定時間點(diǎn)的釋放度。膠束藥物的釋放速度與藥脂比有關(guān)，為了保證膠束制劑的藥物釋放足夠緩慢，處方中總磷脂與藥物的分子比例應(yīng)在80:1500:1的范圍內(nèi)，優(yōu)選范圍為160:1240:1。膠束藥物的釋放速度與磷脂比有關(guān)，在保持藥脂比相同的情況下，隨著HSPC在總磷脂中的比例增加，藥物的釋放速度降低，為了保證藥物從膠束中的釋放速度，本發(fā)明所述的前列腺素E1膠束制劑，HSPC占總磷脂的摩爾比例為50%90°/。，優(yōu)選范圍為70%90%。本發(fā)明所涉及的前列腺素E1的膠束制劑是凍干形式，臨用前加入生理上可接受的溶劑復(fù)溶后，形成載藥膠束，使用的溶劑可以是注射用水、生理鹽水、葡萄糖注射液等。本發(fā)明所涉及的前列腺素E1的膠束制劑復(fù)溶后，藥液的pH值，與藥物的包封率、釋放速度、穩(wěn)定性密切相關(guān)，前列腺素El分子中有羧基，pH的提高可以增加藥物的成鹽比例(藥物親水性增加)，導(dǎo)致藥物的包封率降低，因此在處方中其他因素相同的情況下，降低藥物的pH值，有利于包封率的提高，有利于控制藥物的釋放速度。另外根據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果，藥物的pH值過低，則不利于制劑的儲存，根據(jù)需要，本發(fā)明的給藥系統(tǒng)可以加入pH調(diào)節(jié)劑(各類緩沖系統(tǒng)如檸檬酸一檸檬酸鈉、醋酸一醋酸鈉、磷酸鹽等)，調(diào)節(jié)pH值范圍是4.5-5.5，最佳pH值范圍是4.8-5.2。本發(fā)明所涉及的前列腺素E1的膠束制劑復(fù)溶后，前列腺素E1的濃度為0.5yg/ml10Pg/ml，微粒的粒徑范圍為200nrn以下，平均體積粒徑小于100nm，用于靜脈注射給藥途徑。具體地，該發(fā)明所述的膠束給藥系統(tǒng)是采用了以下制備方法制成的將前列腺素E1、磷脂、脂溶性添加劑溶于有機(jī)溶劑中，置于茄形瓶中，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。揮干有機(jī)溶劑，在茄形瓶表面形成薄而均勻的磷脂膜，將水溶性添加劑(水溶性抗氧劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑)溶于水中，將該水溶液加入到茄形瓶中，振蕩水化，超聲分散，過膜整粒，最后過0,22um的微孔濾膜過濾除菌，按照需要分裝凍干。附圖1是Wistar大鼠iv給藥前列腺素El膠束(試驗品T)和注射用前列腺素El(參比品R)后不同時間的平均全血藥物濃度一時間曲線(logC-t)比較。附圖2是Wistard大鼠iv給藥試驗品和參比品后5分鐘后藥物在各組織的含量比較。附圖3是Wistardd大鼠iv給藥試驗品和參比品后20分鐘后藥物在各組織的含量比較。以下實施例主要是用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。具體實施方式實施例l:不同藥脂比和磷脂比前列腺素E1膠束制劑處方與其釋放度的測定處方見表1表l不同藥脂比和磷脂比前列腺素E1膠束制劑處方表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備工藝按上述處方比例稱取前列腺素E1、聚乙二醇2000衍生化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)、氫化磷月旨(HSPC)溶于適量的氯仿中，置于茄形瓶中，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，揮干有機(jī)溶劑，在茄形瓶表面形成薄而均勻的磷脂膜；將水溶性添加劑(VC、VE、EDTA)溶于水中，5.0%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定的范圍，將該水溶液加入到茄形瓶中，6(TC振蕩水化，超聲分散，(制備過程中注意氮?dú)獗Ｗo(hù))，分裝凍干。凍干后樣品外觀為白色疏松塊狀物，加水復(fù)溶后，形成載藥膠束，形成藥液pH值4.85.2，包封率大于90%，平均粒度50nm左右，在模擬血漿中的0.5小時釋放度小于50%，可供靜脈注射。實施例2前列腺素E1膠束制劑的釋放度、包封率與藥脂比、磷脂比例關(guān)系的研究PEG衍生化磷脂2000-DSPE與HSPC是形成膠束的主要材料，其比例決定了膠束的載藥性質(zhì)和藥物釋放性質(zhì)，載藥膠束應(yīng)具有較高的包封率和盡量緩慢的藥物釋放速度，才能保證其優(yōu)良藥物藥代動力學(xué)性質(zhì)。藥脂比、磷脂比對載藥膠束的包封率、釋放度具有決定性的影響。表2不同藥脂比的前列腺素E1膠束包封率比較研究<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果表明，處方中總磷脂比例提高，藥物的包封率提高，當(dāng)處方中藥脂比超過80:l時，總磷脂中HSPC的比例超過50。/。時，藥物的包封率大于90%。表3不同藥脂比、磷脂比前列腺素E1膠束釋放度比較研究比的前列腺素E1膠束釋放度研究比較批號050324050818-1050819-1050819-2藥脂比1:501:501:801:80PEG2000-DSPE:HSPC2:11:21:41:80.5小時的釋放度％70.4956.0820.2314.47批號050823-1050824-1藥脂比1:1601:240PEG2000-DSPE:HSPC1:21:20.5小時的釋放度％20.237.15結(jié)果表明，膠束的藥物釋放度與處方中藥脂比、磷脂比有關(guān)，處方中總磷脂比例越高藥物釋放越慢，總磷脂中HSPC占的比例越高，藥物的釋放越慢，通過研究藥脂比超過80:1,總磷脂中HSPC的比例超過50。/。時，膠束在0.5小時的釋放度小于50%。實施例3前列腺素E1膠束制劑的制備及其穩(wěn)定性研究處方見表3:表3前列腺素El膠束制劑處方濃度(uM)重量(ug)前列腺素E1112.8200PEG2000-DSPE600084000HSPCl畫69000VE4231000VC1135410000EDTA-Ca5381000檸檬酸酸10417100005.0%NaOH調(diào)節(jié)pH至4.5士0.2水5.0ml制備工藝按上述處方比例稱取前列腺素E1、聚乙二醇2000衍生化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)、氫化磷脂(HSPC)溶于適量的氯仿中，置于100ml茄形瓶中，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，揮干有機(jī)溶劑，在茄形瓶表面形成薄而均勻的磷脂膜；將水溶性添加劑(VC、VE、EDTA)溶于水中，5.0c/。的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定的范圍，將該水溶液加入到茄形瓶中，6(TC振蕩水化，超聲分散，(制備過程中注意氮?dú)獗Ｗo(hù))，分裝凍干。凍干后樣品外觀為白色疏松塊狀物，加水復(fù)溶后，測定平均粒徑為52.4nm。將凍干后樣品置于28°。條件下，分別于0月、3月、6月、9月、12月取樣，觀察樣品的各項指標(biāo)的變化情況，結(jié)果見表4。酸堿度取本品，加水制成每lml中含2Pg的溶液，依法測定pH值(中國藥典2005年版二部附錄VIH)。粒度取本品，加生理鹽水制成每lml中含前列腺素Ell"g的溶液，靜置10分鐘，作為供試品溶液，用動態(tài)激光散射粒徑測定法測定膠束的平均粒徑和粒徑范圍。表4穩(wěn)定性研究結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例4前列腺素E1膠束體內(nèi)藥代動力學(xué)研究采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用(LC/MS)法對注射用前列腺素El膠束(試驗品T)與國內(nèi)已上市普通制劑注射用前列腺素El(參比品R)進(jìn)行大鼠單劑量給藥的藥代動力學(xué)研究，考察試驗品與參比品的藥物代謝異同及組織分布的異同。Wistar大鼠分別靜脈注射給藥試驗品和對照品，給藥后不同時間眼眶采血，測定試驗品和參比品的血藥濃度，計算藥代參數(shù)。Wistar大鼠iv給藥前列腺素El試驗品和參比品的主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表5。兩種制劑的AUC有差別，消除相半衰期基本相同，試驗品生物利用度高于參比品，藥時曲線見附圖1。另外取Wistar大鼠iv給藥后5min和20min處死，測定各主要臟器的組織分布，比較試驗品和參比品的異同，試驗表明,給藥后5min試驗品與參比品在各組織中的分布基本相當(dāng)，到給藥后20min心、肝、脾、肌肉和脂肪的組織含量試驗品高于參比品，組織含量圖見附圖2、附圖3。_表5藥代參數(shù)比較_藥代參數(shù)SS試驗品參比品實施例5前列腺素E1膠束對動物微循環(huán)血管的影響目的觀察注射用前列腺素E1膠束對正常生理條件下微循環(huán)的藥理效應(yīng)，同時與前列腺素E1脂微球注射液、注射用前列腺素E1對比。方法制備金黃地鼠頰囊三級四級微動脈觀察模型，靜脈注射不同劑量(0.5ug、l.O呢、2.0嗎/動物'0.4ml)注射用前列腺素El膠束和注射用前列腺素E1，在注射前、注射后O、5、10、15、20、25、30分時監(jiān)測并分析血壓、管徑、流速和自律運(yùn)動變化。結(jié)果注射用前列腺素E1膠束不僅具有較強(qiáng)的擴(kuò)血管、降壓效果，還有激活自律運(yùn)動，維持管徑和微血流灌注的作用，同等劑量下，作用強(qiáng)度強(qiáng)于前列腺素E1脂微球注射液和注射用前列腺素E1。其原因可能與膠束<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>藥物劑型、作用特點(diǎn)有關(guān)。同時，這種作用均有一定的劑量依賴性，但在低劑量即可發(fā)揮較好的作用。權(quán)利要求1.一種靜脈注射用前列腺素E1膠束制劑，其含有治療有效量的前列腺素E1、PEG衍生化磷脂、氫化磷脂、以及藥學(xué)上可接受的輔劑，其中所述PEG衍生化磷脂為聚乙二醇分子通過共價鍵與磷脂分子上的含氮堿基結(jié)合而形成，PEG衍生化磷脂和氫化磷脂之和的總磷脂與前列腺素E1的摩爾比在80∶1～500∶1的范圍內(nèi)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中所述PEG衍生化磷脂是聚乙二醇2000衍生化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中氫化磷脂占總磷脂的摩爾比例范圍為50%90%。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中總磷脂與前列腺素El的摩爾比在160:1240:1的范圍內(nèi)。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中所述的藥學(xué)上可接受的輔劑包括抗氧劑、pH值調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中所述膠束制劑是凍干形式，臨用前加入生理上可接受的溶劑復(fù)溶。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中膠束制劑復(fù)溶后，形成含有0.5ug/ml10yg/ml的前列腺素El和0.01mM50mM的總磷脂的溶液，用于靜脈注射給藥途徑。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中膠束制劑復(fù)溶后，形成載藥膠束溶液的pH值在4.5-5.5范圍內(nèi)。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束制劑，其中膠束制劑復(fù)溶后，形成載藥膠束溶液的pH值在4.8-5.2范圍內(nèi)。全文摘要本發(fā)明提供了一種靜脈注射用具有高的包封率和低的初始釋放度的前列腺素E1膠束制劑，其含有治療有效量的前列腺素E1、PEG衍生化磷脂、氫化磷脂、以及藥學(xué)上可接受的輔劑，其中所述PEG衍生化磷脂為聚乙二醇分子通過共價鍵與磷脂分子上的含氮堿基結(jié)合而形成，PEG衍生化磷脂和氫化磷脂之和的總磷脂與前列腺素E1的摩爾比在80∶1～500∶1的范圍內(nèi)。本發(fā)明的納米微粒給藥系統(tǒng)是凍干制劑，加入生理上可接受的溶劑復(fù)溶后，形成具有高的包封率和低的初始釋放度的納米載藥膠束，靜脈注射給藥后，可明顯提高前列腺素E1的生物利用度，對微循環(huán)障礙血管具有更強(qiáng)、更持久的藥理作用。文檔編號A61P9/08GK101278913SQ20081010511公開日2008年10月8日申請日期2008年4月25日優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日發(fā)明者劼付,偉梁,王亞芹申請人:中國科學(xué)院生物物理研究所;北京百奧藥業(yè)有限責(zé)任公司