專利名稱：：一種sod細(xì)胞修復(fù)液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種SOD細(xì)胞修復(fù)液及其制備方法，本發(fā)明中含有SOD(超氧化物歧化酶)蘆薈原汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸，維生素E等組分；所述的修復(fù)液可以外用內(nèi)服，快速修復(fù)細(xì)胞。
背景技術(shù)：
：超氧化物歧化酶(SOD，S叩eroxidedismutace)是一種提取于動物紅細(xì)胞的酶(它在植物界也廣泛存在)，它的主要作用是分解和清除機(jī)體內(nèi)過剩的氧自由基。據(jù)科學(xué)研究證明，人體的衰老和90%以上的疾病與自由基有關(guān)?？上У氖侨说臋C(jī)體在25歲以后，隨著細(xì)胞組織的老化，超氧化物歧化酶的產(chǎn)生率及活力將逐漸降低，再加上外部因素造成氧自由基生成過多，打破了機(jī)體原有的自由基生成與清除的動態(tài)平衡，使機(jī)體免疫調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂和全身多部位細(xì)胞組織損傷，導(dǎo)致人體疾病的發(fā)生與加重，并且加快了機(jī)體的衰老，所以人在25歲以后應(yīng)適當(dāng)外源性補(bǔ)充一些超氧化物歧化酶，保護(hù)機(jī)體正常的細(xì)胞組織，減緩人體的衰老，預(yù)防疾病，推遲、減緩老年病的發(fā)生。針對上述存在的問題，中國專利200610021151.0公開了一種制備青稞SOD的方法和含青稞SOD的調(diào)理食品。制備方法包括以下步驟浸泡磨漿；破碎過濾；超濾濃縮沉淀；稀釋凍干，得青稞S0D粉末。將該青稞S0D粉末與沙棘粉、青稞淀粉、紅景天粉等混合，輔以食品、飲料或酒等主料及其他添加物，得到SOD調(diào)理食品。其中每克青稞S0D調(diào)理食品中含1000-3000個活性單位。但是該調(diào)理食品存在以下缺點(diǎn)其中的超氧化物歧化酶容易受到胃酸的破壞，降低了其有效性；該調(diào)理食品中的原料組合缺乏靶向性、穩(wěn)定性，不能真正發(fā)揮SOD的抗氧化增強(qiáng)作用；該調(diào)理食品性能較單一，修復(fù)細(xì)胞療效不夠廣泛。而且，目前國內(nèi)也沒有研制出療效廣泛、效果明顯的S0D細(xì)胞修復(fù)液。因此，需要提出一種新的S0D細(xì)胞修復(fù)液及其制備方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種S0D細(xì)胞修復(fù)液及其制備方法，本發(fā)明中含有超氧化物歧化酶、蘆薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸，維生素E等組分；本發(fā)明將原料中的各自有效成分及積極作用有機(jī)結(jié)合，充分利用SOD的催化作用、靶向性、專一性的特點(diǎn)，使?fàn)I養(yǎng)物的有效成分迅速達(dá)到人體最需要的部位，去清除自由基，快速修復(fù)細(xì)胞、保護(hù)、恢復(fù)細(xì)胞功能，緩解體力疲勞，增強(qiáng)人體免疫力。本發(fā)明的目的是由下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種SOD細(xì)胞修復(fù)液，所述細(xì)胞修復(fù)液中含有超氧化物歧化酶制劑、蘆薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為戸薈汁200—650,透明質(zhì)酸溶液100—750，a-硫辛酸0.03—0.1，維生素E0.5—4;每百克所述的細(xì)胞修復(fù)液中含有40000—4000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%—20%。一種SOD細(xì)胞修復(fù)液的制備方法，其特征在于所述細(xì)胞修復(fù)液中含有戸薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E的重量比為，200—650:100—750:0.03—0.1:0.5一4，每百克所述組合物中含有40000—4000000活力單位的超氧化物歧化酶，制備步驟如下-I、超氧化物歧化酶的制備A、取仙人掌植物的莖進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；B、將殺菌處理后的仙人掌植物的莖粉碎磨漿，并兌入蔗糖緩沖液，然后勻漿處理，得到仙人掌細(xì)胞懸浮液；所述蔗糖緩沖液與仙人掌的重量比是1:2—2.5;所述蔗糖緩沖液的預(yù)冷溫度是(TC一4'C;C、對所述仙人掌細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲波破碎處理，生成仙人掌細(xì)胞破碎液，超聲波處理溫度保持在0。C一4。C;D、對所述的仙人掌細(xì)胞破碎液進(jìn)行過濾，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌上清液；E、將所述仙人掌上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得仙人掌一次濃縮液；F、將所述的仙人掌一次濃縮液快速冷卻到-20°C，然后快速升溫到4(TC，后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得仙人掌無色濃縮液;所述仙人掌一次濃縮液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C;G、將所述的仙人掌無色濃縮液在95t:—10(rC的水浴鍋內(nèi)快速升溫到65°C—68°C，移出水浴鍋靜置降溫到56"C—58"，再移入水浴鍋快速升溫到65X:—68"C，移出水浴鍋靜置保溫5—15分鐘，快速冷卻到4"C，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌無色上清液；H、將所述的仙人掌無色上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得仙人掌二次濃縮液；I、對所述的仙人掌二次濃縮液進(jìn)行多級沉淀分離處理，獲得仙人掌粗酶上清液；第一級處理包括在所述的仙人掌二次濃縮液中加入該液體重量30%的硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮一級上清液；第二級處理包括在仙人掌二次濃縮一級上清液中加入該液體重量40%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮二級上清液；第三級處理包括在仙人掌二次濃縮二級上清液中加入該液體重量50%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮三級上清液；第四級處理包括在仙人掌二次濃縮三級上清液中加入該液體重量60%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮四級上清液；第五級處理包括在仙人掌二次濃縮四級上清液中加入該液體重量70%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌粗酶上清液；J、將所述的仙人掌粗酶上清液預(yù)冷到4'C后，在攪拌處理過程中加入-20"C的丙酮，然后進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集仙人掌沉淀物；所述仙人掌粗酶上清液與丙酮的體積比是1:2;K、對所述的仙人掌沉淀物進(jìn)行三級純化處理，獲得含有仙人掌SOD的沉淀物；第一級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解所述仙人掌沉淀物，在攪拌處理過程中加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得仙人掌一級純化沉淀物，所述的仙人掌沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:5，磷酸鉀緩沖液的濃度為25mmol/L;第二級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌一級純化沉淀物，然后加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得仙人掌二級純化沉淀物，所述的仙人掌一級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:3，磷酸鉀緩沖液的濃度為50mmol/L;第三級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌二級純化沉淀物，然后加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得含有仙人掌SOD的沉淀物，所述的仙人掌二級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:1，磷酸鉀緩沖液的濃度為75mmol/L;所述三級純化處理中，磷酸鉀緩沖液的溫度是4。C、pH值為7.6;L、將含有仙人掌SOD的沉淀物加入海藻糖溶液中，攪拌均勻后-4(TC凍結(jié)，真空冷凍干燥，干燥后粉碎、過篩、得到S0D凍干粉；含有仙人掌SOD的沉淀物與海藻糖溶液的重量比為1:1，所述海藻糖溶液是4t:的0.25raol/L海藻糖；II、蘆薈汁的制備A、取戸薈植物的葉子進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；B、將殺菌處理后的蘆薈葉粉碎磨漿，然后勻漿處理，得到蘆薈勻漿液；C、將所述的蘆薈勻漿液用磷酸調(diào)節(jié)其pH值到3.5，然后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得蘆薈脫色凝膠液；所述蘆薈勻漿液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C;D、對所述蘆薈脫色凝膠液進(jìn)行離心分離處理，去除活性炭和懸浮微膠粒，得到透明的蘆薈凝膠液；E、將所述的戸薈凝膠液進(jìn)行過濾、滅菌，得到蘆薈汁；III、原料混配A、按配制重量比稱取SOD凍干粉組分，用磷酸緩沖液溶解SOD凍干粉，對SOD溶液離心分離處理，采集含有SOD的上清液；SOD凍干粉與磷酸緩沖液的重量比是l:200;磷酸緩沖液的濃度為62.5mmol/L、pH值7.8;B、按配制重量比稱取蘆薈汁，將所述含有S0D的上清液與蘆薈汁混合均勻，生成混合液；C、按配制重量比稱取透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E，將所述的透明質(zhì)酸液使用水浴鍋預(yù)熱到60—8(TC，將a-硫辛酸加入透明質(zhì)酸溶液中，移出水浴鍋冷卻至4(TC，加入維生素E，生成輔助液；D、將所述的混合液與輔助液混合均勻，磷酸氫二鈉稀溶液調(diào)整該混合液ra值到6.8-7.5，獲得SOD細(xì)胞修復(fù)液。本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明將原料中各自具有的抗氧化、消炎、保濕、修復(fù)、平衡酸堿度的有效成分及積極作用有機(jī)結(jié)合，利用SOD的催化作用、靶向性、專一性的特點(diǎn)，使?fàn)I養(yǎng)物的有效成分迅速達(dá)到人體最需要的部位，去清除自由基恢復(fù)、快速修復(fù)細(xì)胞。2、本發(fā)明的修復(fù)作用廣泛，可以外用內(nèi)服，具有抗氧化功能，可以清除致病因子自由基，可以清除現(xiàn)有化妝品對皮膚的損害，增強(qiáng)人體免疫力。具體實(shí)施例方式實(shí)施例一一種SOD細(xì)胞修復(fù)液，所述細(xì)胞修復(fù)液中含有超氧化物歧化酶制劑、戸薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為戸薈汁200—650，透明質(zhì)酸溶液100—750，a-硫辛酸0.03—0.1，維生素E0.5_4;每百克所述的細(xì)胞修復(fù)液中含有40000—4000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%—20%。本實(shí)施例所用重量單位為千克。在本實(shí)施例中，所用的超氧化物歧化酶制劑是純度較高的仙人掌S0D凍干粉，其比活力在4000U—6000U/mg蛋白范圍內(nèi)，該超氧化物歧化酶制劑的提取參見中國專利申請?zhí)?00710123191.0公開的內(nèi)容。此外，超氧化物歧化酶制劑也可在市場購買得到，還可以參照實(shí)施例六的方法制備。所述的戸薈汁可在市場購買得到，還可以參照實(shí)施例五的方法制備。本實(shí)施例中使用的維生素E組分可以是30%—50%水溶性維生素E，也可以是脂溶性維生素E。在本實(shí)施例中，所述細(xì)胞修復(fù)液中的各組分也可以采用市場上出售的常規(guī)產(chǎn)品，也可以在給出的配比范圍內(nèi)靈活組合，在此不一一枚舉。該細(xì)胞修復(fù)液的制備方法可以參照實(shí)施例五公開的方法實(shí)施。實(shí)施例二本實(shí)施例是在實(shí)施例一基礎(chǔ)上的優(yōu)選方案，所用原料(組分)的品質(zhì)與實(shí)施例一相同，所述的細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為戸薈汁500，透明質(zhì)酸溶液500，a-硫辛酸0.065，維生素E2;所述維生素E組分是30。/。-507。水溶性維生素E，每百克所述組合物中含有2000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%。實(shí)施例三本實(shí)施例是在實(shí)施例一基礎(chǔ)上的優(yōu)選方案，所用原料(組分)的品質(zhì)與實(shí)施例一相同，所述的細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為盧薈汁200，透明質(zhì)酸溶液100，a-硫辛酸0.03，維生素E0.5輔酶QIO0.8。本實(shí)施例中所述的輔酶Q10為水溶性輔酶QIO，可以從市場購買得到。本實(shí)施例所述維生素E組分是30%-50%水溶性維生素￡，每百克所述細(xì)胞修復(fù)液中含有2500000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是腦。實(shí)施例四本發(fā)明的另一個實(shí)施例是所述的修復(fù)液的組分在實(shí)施例一的基礎(chǔ)上添加還原型谷胱甘肽、牛磺酸、維生素B6、輔酶QIO、右旋糖苷70、金屬硫蛋白、迷迭香、抗壞血棕櫚酸、魚膠原蛋白水解物、溶菌酶溶液、檜木芬多精、精致乳香酸、N月桂酰肌氨酸鈉，所述的修復(fù)液中各個組分的重量份數(shù)配比為蘆薈汁500，透明質(zhì)酸溶液500，a-硫辛酸0.065，維生素E2，還原型谷胱甘肽2，?；撬?，維生素B650，輔酶QIO2，右旋糖苷701，金屬硫蛋白2，溶菌酶溶液2，迷迭香0.2，抗壞血棕櫚酸0.5，魚膠原蛋白水解物2，溶菌酶溶液5，檜木芬多精0.05，精致乳香酸1，N月桂酰肌氨酸鈉5，所述維生素E組分是30%-5(2000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%;所述的溶菌酶溶液的濃度為lmg/mL，由pH值為6.2的磷酸緩沖液配制而成。本實(shí)施例所用重量單位為千克或克。所述的溶菌酶溶液的濃度為lmg/mL，用pH值為6.2的磷酸鹽緩沖液配制；本實(shí)施例中所述細(xì)胞修復(fù)液的各組分的來源參見實(shí)施例一。本實(shí)施例中所述的輔酶Q10為水溶性輔酶Q10，可以從市場購買得到。本實(shí)施例中所述的N月桂酰肌氨酸鈉、右旋糖苷70、輔酶QIO、金屬硫蛋白、魚膠原蛋白水解物、迷迭香、抗壞血棕櫚酸、檜木芬多精、溶菌酶、還原型谷胱甘肽、?；撬?、維生素B6均可以從市場購買得到。本實(shí)施例的制備方法參見實(shí)施例六。本發(fā)明的細(xì)胞修復(fù)液的檢測結(jié)果如下1、外觀檢測檢測項(xiàng)目結(jié)果檢測外觀細(xì)膩、潤滑、透明色澤無色香氣清淡檜木精油味PH值6.8離心測穩(wěn)定性2000r/min均一無分層耐寒(一5。C一15。C)，24均一無分層、渾濁小時恢復(fù)室溫)耐熱(39土rC)，30天均一無分層、渾濁、變色2、衛(wèi)生指標(biāo)檢測細(xì)菌總數(shù)〈10CFU/g霉菌和酵母菌總數(shù)〈10CFU/g鉛〈2PPM砷<0.2PPM束〈0.05PPM3、功效成分檢測(1)S0D活性檢測方法取四份適量SOD細(xì)胞修復(fù)液分別測起始活性，然后在恒溫水浴39士rc、44士rc、49士rc、54士rc中加熱，于39士rc間隔io天、44±rc間隔5天、49土rC間隔l天、54±1°。間隔1小時測定。樣品處理0.5mLS0D細(xì)胞修復(fù)液溶解在5mL去離子水中，4000r/min離心30min，取上清測定。采用黃嘌呤氧化酶法，操作步驟按南京建成生物工程研究所S0D試劑盒推薦程序測定，于波長550nm處測定管，對照管吸光度，借助反應(yīng)體系得稀釋倍數(shù)，通過公式計算可求出被測液的SOD活力。被測液S0D活性定義為每毫升反應(yīng)中S0D抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的S0D量為一個活力單位。測定:<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>混勻IO分鐘后倒入Icm光徑比色杯中，蒸餾水調(diào)零，波長550nm.計算-SOD活力U/mL二(對照管吸光度一測定管的吸光度)+對照管吸光度+50%X稀釋倍數(shù)殘余活性％二加熱后SOD活力+加熱前SOD活力X100%<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(2)SOD細(xì)胞修復(fù)液氨基酸含量測定方法根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14965—94《食物中氨基酸的測定方法》。蛋白質(zhì)物質(zhì)經(jīng)水解成氨基酸，經(jīng)氨基酸分析儀的離子交換柱分離后，與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng)，再通過分光光度計比色測定氨基酸含量。儀器Beckman-6300型氨基酸自動分析儀稱樣準(zhǔn)確稱取5g樣品，精確到0.0001g。水解在水解管內(nèi)加6mol/L鹽酸10mL，，加入新蒸餾的苯酚34滴，再將水解管放入冷凍劑中，冷凍35min，再接到真空泵的抽氣管上，抽真空(接近0psi)，然后充入高純氮?dú)?；再抽真空充氮?dú)猓貜?fù)三次后，在充氮?dú)鉅顟B(tài)下封口或擰緊螺絲蓋將已封口的水解管放在no士rc的恒溫干燥箱內(nèi)，水解22h后，取出冷卻。打開水解管，將水解液過濾后，用去離子水多沖洗水解管，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶內(nèi)用去離子水定容。吸取濾液lmL于5mL容量瓶內(nèi)，用真空干燥器在4050'C干燥，殘留物用12mL水溶解，再干燥，反復(fù)進(jìn)行兩次，最后蒸干，用lmLpH2.2的緩沖液溶解，供儀器測定用。準(zhǔn)確吸取0.200mL混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(3.4)，用pH2.2的緩沖液(3.5.1)稀釋到5mL，此標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度為5.00nmol/50uL，作為上機(jī)測定用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)，用氨基酸自動分析儀以外標(biāo)法測定樣品測定液的氨基酸含量。計算X=[(CX1/50XFXVXM)/mX10(9)]X100式中X:樣品氨基酸含量，g/100g;C:樣品測定液中氨基酸含量，nmol/50uL;F:樣品稀釋倍數(shù)；V:水解后樣品定容積，mL;M:氨基酸分子量；M:樣品質(zhì)量，g;1/50:折算成每毫升樣品測定的氨基酸含量，nmol/mL;10(9)—一將樣品含量由ng折算成g的系數(shù)。注①樣品氨基酸含量在1.00g/100g以下，保留兩位有效數(shù)字結(jié)果各氨基酸的百分含量為天門冬氨酸0.27、蘇氨酸0.08、絲氨酸0.14、谷氨酸0.58、甘氨酸0.07、丙氨酸O.10、纈氨酸0.08、蛋氨酸0.06、異亮氨酸0.09、亮氨酸O.11、酪氨酸0.06、苯丙氨酸O.12、賴氨酸0.23、組氨酸0.08、精氨酸0.09、脯氨酸0.28;<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>以上氨基酸的總和(TotalAminoAcids)23144、功能檢測本發(fā)明對下列癥狀有較好的修復(fù)作用青春痘、過敏皮膚、腳氣、霉菌性陰道炎、痔瘡、口腔潰瘍、眼結(jié)膜炎、過敏性鼻炎。將所述的細(xì)胞修復(fù)液無菌<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>過敏155159156.733.360.0100.0性鼻108521553.333.313.3100.0炎1512211580.013.36.7亂實(shí)施例五一種SOD細(xì)胞修復(fù)液的制備方法，所述細(xì)胞修復(fù)液中含有蘆薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E的重量比為，200—650:100—750:0.03—0.1:0.5—4，每百克所述組合物中含有40000—4000000活力單位的超氧化物歧化酶，在本實(shí)施例中重量單位可以采用克或者千克，制備步驟如下I、超氧化物歧化酶的制備A、取仙人掌植物的莖進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；先用流動自來水清洗干凈，后用流動無菌水反復(fù)漂洗干凈，用甩干機(jī)甩干然后在無菌室內(nèi)進(jìn)行紫外殺菌。B、將殺菌處理后的仙人掌植物的莖粉碎磨漿，并兌入蔗糖緩沖液，然后勻漿處理，得到仙人掌細(xì)胞懸浮液；所述蔗糖緩沖液與仙人掌的重量比是1:2一2.5，最佳比例為l:2;所述蔗糖緩沖液的預(yù)冷溫度是(TC一4。C，最佳溫度為4'C;磨漿機(jī)、勻漿機(jī)是常規(guī)設(shè)備，預(yù)冷是在冰庫內(nèi)進(jìn)行，蔗糖緩沖液參數(shù)是O.25M蔗糖，10mMTris，1mMEDTA,pH值7.8。C、對所述仙人掌細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲波破碎處理，生成仙人掌細(xì)胞破碎液，超聲波處理溫度保持在0'C—4'C，最佳溫度為4T:;超聲波破碎處理是在冰浴器上進(jìn)行，超聲波處理器功率設(shè)定為850W，超聲波破碎處理25分鐘；D、對所述的仙人掌細(xì)胞破碎液進(jìn)行過濾，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌上淸液；所述的過濾采用300目篩子，產(chǎn)生仙人掌過濾液；對所述的仙人掌過濾液進(jìn)行離心處理時間為20分鐘，轉(zhuǎn)速為6000rpm;E、將所述仙人掌上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得仙人掌一次濃縮液；超濾濃縮處理設(shè)各選擇截留分子量l萬的中空纖維超濾機(jī)；仙人掌一次濃縮液體積是仙人掌上清液體積的5%10%;F、將所述的仙人掌一次濃縮液快速冷卻到-2(TC，然后快速升溫到4(TC，后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得仙人掌無色濃縮液;所述的仙人掌一次濃縮液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C，最佳溫度為40。C，脫色處理時間是10分鐘，可以不斷攪拌，快速冷卻設(shè)備是冰柜，快速升溫的設(shè)備是水浴鍋；G、將所述的仙人掌無色濃縮液在95'C—10(TC的水浴鍋內(nèi)快速升溫到65°C—68°C，最佳溫度為60"C，移出水浴鍋靜置降溫到56°C—58°C，再移入水浴鍋快速升溫到65'C—68"C，最佳溫度為6(TC，移出水浴鍋靜置保溫5—15分鐘，最佳保溫時間是10分鐘，快速冷卻到4'C，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌無色上清液；在所述的離心處理中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6000rpm，離心處理時間為20分鐘；H、將所述無色上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得二級濃縮液；超濾濃縮處理設(shè)備選擇截留分子量l萬的中空纖維超濾機(jī)，處理溫度4X:;二級濃縮液體積是原來體積5%10%;I、對所述的仙人掌二次濃縮液進(jìn)行多級沉淀分離處理，獲得仙人掌粗酶上清液；第一級處理包括在所述的仙人掌二次濃縮液中加入該液體重量30%的硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮一級上清液；第二級處理包括在仙人掌二次濃縮一級上清液中加入該液體重量40%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮二級上清液；第三級處理包括在仙人掌二次濃縮二級上清液中加入該液體重量50%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮三級上清液；第四級處理包括在仙人掌二次濃縮三級上清液中加入該液體重量60%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮四級上清液；第五級處理包括在仙人掌二次濃縮四級上清液中加入該液體重量70%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌粗酶上清液；在所述的離心處理中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速是3000r/min，分離處理時間是20—30分鐘，最佳時間為25分鐘；J、將所述的仙人掌粗酶上清液預(yù)冷到4'C后，在攪拌處理過程中加入-20x:的丙酮，然后進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集仙人掌沉淀物；所述的仙人掌粗酶上清液與丙酮的體積比是1:2;在所述的離心處理中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速是3000r/min，分離處理時間是20—30分鐘；K、對所述的仙人掌沉淀物進(jìn)行三級純化處理，獲得含有仙人掌SOD的沉淀物；第一級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解所述沉淀物，在攪拌處理過程中加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集沉淀物，即為仙人掌一級純化沉淀物，所述的仙人掌一級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是l:5，磷酸鉀緩沖液的濃度為25mmol/L;第二級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌一級純化沉淀物，然后加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集沉淀物，即為仙人掌二級純化沉淀物，所述的仙人掌一級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是l:3，磷酸鉀緩沖液的濃度為50mmol/L;第三級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌二級純化沉淀物，然后加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集沉淀物，即為含有仙人掌S0D的沉淀物，所述的仙人掌二級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:1，磷酸鉀緩沖液的濃度為75mmol/L;所述三級純化處理中，磷酸鉀緩沖液的溫度是4°C、pH值為7.6;在所述的離心處理中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速是3000-6000r/min，優(yōu)選為4500r/min，分離處理時間是20—30分鐘；L、將含有仙人掌S0D的沉淀物加入海藻糖溶液中，攪拌均勻后-4(TC凍結(jié)，真空冷凍干燥，干燥后粉碎、過篩、得到S0D凍干粉，即為超氧化物歧化酶；將所述的S0D凍干粉裝袋-2(TC儲藏備用；含有仙人掌SOD的沉淀物與海藻糖溶液的重量比為l:1，所述海藻糖溶液是4'C的0.25M海藻糖；所述的凍結(jié)過程為將含有仙人掌SOD的沉淀物和海藻糖溶液的混合物攪拌均勻后倒進(jìn)幾個不銹鋼盤子里-4(TC凍結(jié)，液面要薄約lcra;所述的過篩采用120目篩子。II、蘆薈汁的制備A、取蘆薈植物的葉子進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；B、將殺菌處理后的蘆薈葉粉碎磨漿，然后勻漿處理，得到蘆薈勻漿液；C、將所述的蘆薈勻漿液用磷酸調(diào)節(jié)其pH值到3.5，然后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得蘆薈脫色凝膠液；所述蘆薈勻漿液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C，最佳溫度4(TC;攪拌處理30—60分鐘；D、對所述蘆薈脫色凝膠液進(jìn)行離心分離處理，去除活性炭和懸浮微膠粒，得到透明的蘆薈凝膠液；在所述的離心處理中，離心機(jī)轉(zhuǎn)速是12000r/min，分離處理時間是IO分鐘。E、將所述的蘆薈凝膠液進(jìn)行過濾、滅菌，得到蘆薈汁；過濾器采用孔徑0.45微米的不銹鋼濾膜過濾器，在無菌間或凈化臺減壓過濾滅除細(xì)菌。III、原料混配A、按配制重量比稱取SOD凍干粉組分，用磷酸緩沖液溶解SOD凍干粉，對SOD溶液離心分離處理，采集含有SOD的上清液；SOD凍干粉與磷酸緩沖液的重量比是l:200;磷酸緩沖液的濃度為62.5mmol/L、pH值7.8;在所述的離心處理中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速是4000r/min，分離處理時間是20分鐘；B、按配制重量比稱取蘆薈汁，將所述含有SOD的上清液與蘆薈汁混合均C、按配制重量比稱取透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E，將所述的透明質(zhì)酸液使用水浴鍋預(yù)熱到60—80'C，將a-硫辛酸加入透明質(zhì)酸溶液中，移出水浴鍋冷卻至4(TC，加入維生素E，生成輔助液；所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%—20%;D、將混合液與輔助液混合均勻，磷酸氫二鈉稀溶液調(diào)整該混合液PH值到6.8-7.5，獲得SOD細(xì)胞修復(fù)液。本實(shí)施例所述的磨漿機(jī)是常規(guī)設(shè)備，可以是青島即墨市超微粉碎機(jī)廠生產(chǎn)的FMJ系列不銹鋼雙盤臥式磨漿機(jī)；所述的勻漿機(jī)是常規(guī)設(shè)備，可以是美國ProSciencetfic400D型勻漿器；所述的冰柜和水浴鍋是常規(guī)設(shè)備；所述的冰浴器是常規(guī)設(shè)備，可以是ECHOtherraTMModelIC10型電子冰浴器；所述的離心機(jī)是常規(guī)設(shè)備，可以是上海安亭科學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)GL-20B4000r/min高速冷凍離心機(jī)；所述的中空纖維超濾機(jī)是常規(guī)設(shè)備，所述的中空纖維超濾機(jī)可以是德國Sartorius公司生產(chǎn)的sartoriusVivaflow200型切向流超濾器；實(shí)施例六本實(shí)施例說明了實(shí)施例四的制備方法將0.5gS0D(8000U/mg)凍干粉溶解在100ml的去離子滅菌水62.5mmol/LpH值7.8磷酸緩沖液(PBS)中攪拌完全溶解，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，取上清液用孔徑0.45微米的不銹鋼濾膜過濾器，在無菌間或凈化臺減壓過濾滅除菌后加入到500ml蘆薈汁中，攪拌均勻，生成A組混合液。在另外一個帶攪拌器的容器中加入去離子滅菌水400mL，加熱到IOCTC，回溫到75—8(TC后依次加入N月桂酰肌氨酸鈉5g、右旋糖苷70lg、水溶性維生素E2g、輔酶Q102g、金屬硫蛋白2g、魚膠原蛋白水解物2g、迷迭香200mg、抗壞血棕櫚酸500mg，攪拌15-20分鐘后加入0.05mL檜木芬多精，得到混合溶液；待上述混合溶液溫度降到40'C時加入5mL的溶菌酶溶液攪拌均勻，生成B組混合液，保溫備用；在另外一個帶攪拌器的容器中加入水浴預(yù)熱到7(TC的500mL10。/。的透明質(zhì)酸溶液；在室溫條件下，500級凈化臺中，向所述的透明質(zhì)酸溶液中加入還原型谷胱甘肽2g、?；撬?0g、維生素B665mg、a-硫辛酸65mg，攪拌至完全溶解，生成C組混合液，4(TC保溫備用。無菌條件下將B組混合液攪拌加入到C組混合液中，攪拌至完全混合。用磷酸氫二鈉稀溶液調(diào)整其PH值為6.8-7.5，生成D組混合液。無菌條件下將A組混合液攪拌加入到D組混合液中，攪拌至完全混合。權(quán)利要求1、一種SOD細(xì)胞修復(fù)液，其特征在于所述細(xì)胞修復(fù)液中含有超氧化物歧化酶制劑、蘆薈汁、透明質(zhì)酸、α-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為蘆薈汁200-650，透明質(zhì)酸溶液100-750，α-硫辛酸0.03-0.1，維生素E0.5-4；每百克所述的細(xì)胞修復(fù)液中含有40000-4000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10％-20％。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的S0D細(xì)胞修復(fù)液，其特征在于所述的細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為蘆薈汁500，透明質(zhì)酸溶液500，a-硫辛酸0.065，維生素E2;所述維生素E組分是30%-50%水溶性維生素E，每百克所述細(xì)胞修復(fù)液中含有2000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的S0D細(xì)胞修復(fù)液，其特征在于所述的細(xì)胞修復(fù)液中各組分的重量比為盧薈汁200，透明質(zhì)酸溶液100，a-硫辛酸0.03，維生素E0.5，輔酶QIO0.8;所述維生素E組分是30%-50%水溶性維生素E，每百克所述細(xì)胞修復(fù)液中含有2500000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%。4.一種SOD細(xì)胞修復(fù)液，其特征在于所述的修復(fù)液中含有超氧化物歧化酶制劑、蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E、還原型谷胱甘肽、?；撬?、維生素B6、輔酶QIO、右旋糖苷70、金屬硫蛋白、迷迭香、抗壞血棕櫚酸、魚膠原蛋白水解物、溶菌酶溶液、檜木芬多精、精致乳香酸、N月桂酰肌氨酸鈉，所述的修復(fù)液中各個組分的重量份數(shù)配比為蘆薈汁500，透明質(zhì)酸溶液500，a-硫辛酸0.065，維生素E2，還原型谷胱甘肽2，?；撬?，維生素B650，輔酶QIO2，右旋糖苷701，金屬硫蛋白2，溶菌酶溶液2，迷迭香0.2，抗壞血棕櫚酸0.5，魚膠原蛋白水解物2，溶菌酶溶液5，檜木芬多精0.05，精致乳香酸1，N月桂酰肌氨酸鈉5，所述維生素E組分是30%-50%水溶性維生素E，每百克所述組合物中含有2000000活力單位的超氧化物歧化酶，所述透明質(zhì)酸溶液的濃度是10%;所述的溶菌酶溶液的濃度為lmg/mL。5、一種SOD細(xì)胞修復(fù)液的制備方法，其特征在于所述細(xì)胞修復(fù)液中含有蘆薈汁、透明質(zhì)酸、a-硫辛酸、維生素E，所述細(xì)胞修復(fù)液中蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E的重量比為，200—650:100—750:0.03—0.1:0.5—4，每百克所述組合物中含有40000—4000000活力單位的超氧化物歧化酶，制備步驟如下I、超氧化物歧化酶的制備A、取仙人掌植物的莖進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；B、將殺菌處理后的仙人掌植物的莖粉碎磨漿，并兌入蔗糖緩沖液，然后勻漿處理，得到仙人掌細(xì)胞懸浮液；所述蔗糖緩沖液與仙人掌的重量比是h2一2.5;所述蔗糖緩沖液的預(yù)冷溫度是(TC—4°C;C、對所述仙人掌細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲波破碎處理，生成仙人掌細(xì)胞破碎液，超聲波處理溫度保持在0'C—4'C;D、對所述的仙人掌細(xì)胞破碎液進(jìn)行過濾，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌上清液；E、將所述仙人掌上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得仙人掌一次濃縮液；F、將所述的仙人掌一次濃縮液快速冷卻到-2(TC，然后快速升溫到4(TC，后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得仙人掌無色濃縮液；所述仙人掌一次濃縮液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C;G、將所述的仙人掌無色濃縮液在95°C—IO(TC的水浴鍋內(nèi)快速升溫到65'C一68"C，移出水浴鍋靜置降溫到56°C—58°C，再移入水浴鍋快速升溫到65°C—68°C，移出水浴鍋靜置保溫5—15分鐘，快速冷卻到4r，然后進(jìn)行離心分離處理，采集仙人掌無色上清液；H、將所述的仙人掌無色上清液進(jìn)行超濾濃縮處理，獲得仙人掌二次濃縮液；I、對所述的仙人掌二次濃縮液進(jìn)行多級沉淀分離處理，獲得仙人掌粗酶上清液；第一級處理包括在所述的仙人掌二次濃縮液中加入該液體重量30%的硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮一級上清液；第二級處理包括在仙人掌二次濃縮一級上清液中加入該液體重量40%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮二級上清液；第三級處理包括在仙人掌二次濃縮二級上清液中加入該液體重量50%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮三級上清液；第四級處理包括在仙人掌二次濃縮三級上清液中加入該液體重量6Q%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌二次濃縮四級上清液；第五級處理包括在仙人掌二次濃縮四級上清液中加入該液體重量70%硫酸銨，沉淀處理，進(jìn)行離心分離處理，獲得上清液，即為仙人掌粗酶上清液；J、將所述的仙人掌粗酶上清液預(yù)冷到4"C后，在攪拌處理過程中加入-20'C的丙酮，然后進(jìn)行離心分離處理，靜置沉淀，收集仙人掌沉淀物；所述仙人掌粗酶上清液與丙酮的體積比是1:2;K、對所述的仙人掌沉淀物進(jìn)行三級純化處理，獲得含有仙人掌SOD的沉淀物；第一級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解所述仙人掌沉淀物，在攪拌處理過程中加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得仙人掌一級純化沉淀物，所述的仙人掌沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:5，磷酸鉀緩沖液的濃度為25mmol/L;第二級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌一級純化沉淀物，然后加入-2CTC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得仙人掌二級純化沉淀物，所述的仙人掌一級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:3，磷酸鉀緩沖液的濃度為50mmol/L;第三級純化處理包括用磷酸鉀緩沖液溶解仙人掌二級純化沉淀物，然后加入-2(TC的丙酮，進(jìn)行離心分離處理，獲得含有仙人掌S0D的沉淀物，所述的仙人掌二級純化沉淀物與磷酸鉀緩沖液的重量比是1:1，磷酸鉀緩沖液的濃度為75mmol/L;所述三級純化處理中，磷酸鉀緩沖液的溫度是4'C、pH值為7.6;L、將含有仙人掌S0D的沉淀物加入海藻糖溶液中，攪拌均勻后-4(TC凍結(jié)，真空冷凍干燥，干燥后粉碎、過篩、得到S0D凍干粉；含有仙人掌SOD的沉淀物與海藻糖溶液的重量比為1:1，所述海藻糖溶液是4"的0.25mol/L海藻糖；II、蘆薈汁的制備A、取盧薈植物的葉子進(jìn)行潔凈處理然后進(jìn)行紫外殺菌處理；B、將殺菌處理后的蘆薈葉粉碎磨漿，然后勻漿處理，得到蘆薈勻漿液；C、將所述的蘆薈勻漿液用磷酸調(diào)節(jié)其pH值到3.5，然后加入活性炭、果膠酶劑和明膠進(jìn)行降解、脫色處理，獲得蘆薈脫色凝膠液；所述蘆薈勻漿液與活性炭、果膠酶劑、明膠的重量比是l:0.005:0.00025:0.00005，脫色處理溫度是34°C44°C;D、對所述蘆薈脫色凝膠液進(jìn)行離心分離處理，去除活性炭和懸浮微膠粒，得到透明的蘆薈凝膠液；E、將所述的蘆薈凝膠液進(jìn)行過濾、滅菌，得到蘆薈汁；III、原料混配A、按配制重量比稱取S0D凍干粉組分，用磷酸緩沖液溶解S0D凍干粉，對S0D溶液離心分離處理，采集含有S0D的上清液；S0D凍干粉與磷酸緩沖液的重量比是l:200;磷酸緩沖液的濃度為62.5腿ol/L、pH值7.8;B、按配制重量比稱取蘆薈汁，將所述含有SOD的上清液與蘆薈汁混合均勻，生成混合液；C、按配制重量比稱取透明質(zhì)酸溶液、a-硫辛酸、維生素E，將所述的透明質(zhì)酸液使用水浴鍋預(yù)熱到60—80°C，將ci-硫辛酸加入透明質(zhì)酸溶液中，移出水浴鍋冷卻至40'C，加入維生素E，生成輔助液；D、將所述的混合液與輔助液混合均勻，磷酸氫二鈉稀溶液調(diào)整該混合液PH值到6.8-7.5，獲得SOD細(xì)胞修復(fù)液。全文摘要本發(fā)明涉及一種SOD細(xì)胞修復(fù)液及其制備方法，所述修復(fù)液中含超氧化物歧化酶制劑、蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、α-硫辛酸、維生素E，所述修復(fù)液中蘆薈汁、透明質(zhì)酸溶液、α-硫辛酸、維生素E的重量比為200-650∶100-750∶0.03-0.1∶0.5-4，每百克所述組合物中含有40000-4000000活力單位的超氧化物歧化酶制劑；所述制備方法是取仙人掌莖，經(jīng)過破碎細(xì)胞、超濾濃縮、多級沉淀離心分離處理，得粗酶上清液，再將粗酶上清液經(jīng)過三級純化處理、真空干燥粉碎，得SOD凍干粉；取蘆薈植物葉子，經(jīng)降解、脫色、離心分離處理、過濾，得蘆薈汁；將上述原料(組分)按配制重量比進(jìn)行原料混配，得到SOD細(xì)胞修復(fù)液。本發(fā)明具有抗氧化功能，可以緩解體力疲勞，增強(qiáng)人體免疫力。文檔編號A61P37/00GK101590222SQ20081011288公開日2009年12月2日申請日期2008年5月26日優(yōu)先權(quán)日2008年5月26日發(fā)明者劉安榮,董文婕申請人:劉安榮;董文婕