專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用離子交換樹(shù)脂分離益母草總生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分的提取分離方法，特別是涉及一種從中藥益母草提取液中提取分離益母草總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥生物堿是自然界中存在的一類(lèi)重要物質(zhì)，目前已分離到700多種，它們是中藥中最大一類(lèi)療效確切，用途廣泛的有效成分，尤其對(duì)癌癥、肝病及心腦血管、風(fēng)濕重大疾病等有獨(dú)特療效，如黃連中的小檗堿用于抗菌消炎，麻黃中的麻黃堿用于平喘，蘿芙木中的利血平用于降壓，石蒜中的加蘭他敏對(duì)小兒麻痹后遺癥有療效，罌粟果皮中所含的嗎啡堿是著名鎮(zhèn)痛劑；奎寧堿是有價(jià)值的解熱藥；苦參中的苦參素類(lèi)對(duì)乙型肝炎有療效；辣椒堿具有許多生理活性和強(qiáng)而持久的消炎鎮(zhèn)痛作用；長(zhǎng)春花中的長(zhǎng)春新堿用于抗腫瘤等。由于現(xiàn)代疾病對(duì)人類(lèi)的生存威脅的增大，近幾十年來(lái)，心腦血管疾病、腫瘤及肝病日益成為威脅人類(lèi)的主要的原因，因此該類(lèi)制劑臨床需求量極大。由于生物堿在中藥材中的含量偏低(多數(shù)含量為0. 01 % 1 % )，要保證最后制劑的安全有效，必須對(duì)其進(jìn)行精制純化，制備成有效部位甚至有效成分來(lái)應(yīng)用，因此有效部位的精制純化技術(shù)就顯得十分重要。中藥制劑行業(yè)的“純化”技術(shù)是中藥現(xiàn)代化最大的“瓶頸”。由于“純化”技術(shù)的落后，中藥整體還是“粗、大、黑”的狀態(tài)。通過(guò)創(chuàng)新純化技術(shù)，可達(dá)到“去粗取精”的目的，而被純化了的中藥有效部位，則可滿足各種現(xiàn)代劑型要求，制備出三效(高效、速效、長(zhǎng)效)、 三小(劑量小、毒性小、副作用小)、五方便(生產(chǎn)、運(yùn)輸、攜帶、貯存、應(yīng)用方便)的現(xiàn)代中藥制劑?，F(xiàn)階段，含中藥生物堿類(lèi)藥材的提取，多根據(jù)生物堿的理化特性，采用適宜的溶劑如水、酸水、酸醇及堿醇等，利用浸漬、滲漉、煎煮、回流、超聲等技術(shù)將生物堿類(lèi)成分提取出來(lái)，提取工藝已較完善，生物堿提取率能達(dá)到90%以上。但由于生物堿在中藥中的相對(duì)含量較低，提取時(shí)勢(shì)必引入大量的雜質(zhì)類(lèi)成分，如大量的淀粉、樹(shù)膠、果膠、粘液質(zhì)、色素等，給進(jìn)一步的去粗取精、純化精制帶來(lái)了很大的困難。目前，生物堿純化工藝生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的純化方法主要是堿化后有機(jī)溶劑萃取法及大孔吸附樹(shù)脂法(《中藥化學(xué)》，肖崇厚主編， 1997年，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社；《中草藥中生物堿的提取與分離》，蔡艷華，四川化工，2005. (1)39)。有機(jī)溶劑萃取法是利用親脂性生物堿溶于親脂性有機(jī)溶劑，而其鹽溶于水的性質(zhì)，通過(guò)將生物堿酸堿轉(zhuǎn)化，利用有機(jī)溶劑(常用的如苯、三氯甲烷、乙醚等)萃取，去除大量的雜質(zhì)，最后得到中藥總生物堿有效部位。有機(jī)溶劑萃取法應(yīng)用較為廣泛，但堿化后易帶入大量中性及非極性色素等雜質(zhì)，因此分離效率和純度較低，且具有使用大量有機(jī)溶劑 (一般萃取5次)、操作不便(萃取罐效率不高，且易乳化)、安全性不佳(有機(jī)溶劑毒性大， 且易燃易爆)等缺點(diǎn)，屬于實(shí)驗(yàn)室工藝，不適合工業(yè)大生產(chǎn)。通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂分離技術(shù)純化中藥提取液時(shí)，可以選擇性吸附其中的有效成分，同時(shí)去除雜質(zhì)。與傳統(tǒng)的除雜方法和工藝相比，本法可縮小服藥劑量，提高制劑的質(zhì)量。 該法對(duì)水溶性較好的黃酮、皂苷等有良好的分離精制效果，如目前在銀杏類(lèi)制劑及人參皂苷的制備中經(jīng)常應(yīng)用。但對(duì)于生物堿的精制來(lái)說(shuō)，本法最大的不足在于首先是吸附困難， 上樣藥液必須是稀溶液，且堿度要適宜堿度低則生物堿仍為離子化狀態(tài)，樹(shù)脂的吸附率低；堿度高，生物堿為游離型，大分子生物堿水溶性差而析出，仍然無(wú)法上柱。因此該法適用的生物堿范圍很小，品種太少；其次，大孔吸附樹(shù)脂的非極性靜電吸附原理對(duì)生物堿有效成分和脂溶性雜質(zhì)的分離選擇性太差，且在溶劑洗脫過(guò)程中由于沒(méi)有特異性的洗脫溶劑，生物堿和大量脂溶性雜質(zhì)往往一起被洗滌下來(lái)，最后得到的總生物堿純度較低。而新興的離子交換樹(shù)脂分離技術(shù)，則是通過(guò)離子交換反應(yīng)達(dá)到分離和純化的目的。目前在中藥領(lǐng)域普遍所采用的技術(shù)是將含有生物堿的溶液過(guò)柱后，以氨液或NaOH溶液洗脫，收集洗脫液后再用有機(jī)溶劑萃取總生物堿；或者將吸附生物堿后的樹(shù)脂以堿液浸泡，再用有機(jī)溶劑回流提取總生物堿。但上述方法步驟繁瑣，以有機(jī)溶劑萃取或?qū)?shù)脂進(jìn)行有機(jī)溶劑回流提取等工藝在工業(yè)上較難實(shí)現(xiàn)，且以堿液洗脫生物堿的效率很低。目前該法僅停留于實(shí)驗(yàn)室制備小樣品的水平，也無(wú)法實(shí)現(xiàn)大生產(chǎn)。綜上所述，以上方法普遍存在成本高、有機(jī)溶劑消耗大、選擇性差、總生物堿純度低以及無(wú)法實(shí)現(xiàn)大生產(chǎn)等缺陷，因此，純化技術(shù)仍是從中藥中分離總生物堿的“瓶頸”問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種安全、低成本、高效率的提取分離中藥益母草總生物堿的方法。該發(fā)明目的是通過(guò)如下工藝實(shí)現(xiàn)的取含有中藥益母草的提取液，調(diào)整PH值1 7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以去離子水洗至pH值5 7，再以0. 5 % 20%鹽溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)脫鹽處理，即得所需的益母草總生物堿。在上述工藝過(guò)程中，將益母草提取液調(diào)至合適的酸度后，生物堿被電離成為陽(yáng)離子，非堿性物質(zhì)不被電離。提取液過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱后，電離的生物堿離子與樹(shù)脂柱上的氫離子交換而被牢固地吸附于樹(shù)脂柱上。這里提取液的PH值不宜過(guò)高或過(guò)低如果過(guò)高， 提取液呈中性或堿性，生物堿不能被電離，也就無(wú)法完成樹(shù)脂上的交換過(guò)程；如果過(guò)低，提取液中的氫離子濃度太高，阻礙了樹(shù)脂柱上的氫離子解離，同樣不能順利地完成樹(shù)脂交換過(guò)程，因而實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)調(diào)整提取液的pH值為1 7是比較合適的。以水洗脫樹(shù)脂柱時(shí)，選擇使用去離子水，以確保不引入新的離子干擾。在洗脫過(guò)程中，那些沒(méi)有被樹(shù)脂吸附的非堿性物質(zhì)很容易被水洗脫下來(lái)，從而與被吸附在樹(shù)脂柱上的生物堿離子分離開(kāi)來(lái)。此后先加鹽溶液進(jìn)行浸泡，使鹽的陽(yáng)離子和生物堿的陽(yáng)離子充分交換，然后再以鹽溶液洗脫。最后， 采用適宜的方法將洗脫液中的生物堿和鹽分離，而分離得到鹽則又可以配成適宜濃度的溶液作為洗脫液重復(fù)利用，同時(shí)可以得到純度較高的益母草總生物堿。該工藝過(guò)程與現(xiàn)有技術(shù)相比，不僅工藝流程簡(jiǎn)單，而且其重要的貢獻(xiàn)還在于打破了傳統(tǒng)理論認(rèn)為的只能采用堿液或氨液洗脫生物堿，同時(shí)不使用高濃度的有機(jī)溶劑、高濃度的酸液、高濃度的堿液，而是采用鹽溶液作為洗脫液，對(duì)設(shè)備基本無(wú)腐蝕性，對(duì)工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備要求降低了，成本大大降低，更易實(shí)現(xiàn)大生產(chǎn)的目的。傳統(tǒng)理論認(rèn)為總生物堿的離子交換樹(shù)脂分離法中都是堿液或氨液進(jìn)行洗脫，或者先用堿液中和樹(shù)脂柱再用有機(jī)溶劑回流提取理論上已經(jīng)游離的生物堿，而實(shí)際應(yīng)用中的效果非常不理想且不適于大生產(chǎn)。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，采用離子交換能力強(qiáng)的Ca2+、NH4+、 Na+的鹽溶液作為洗脫劑，從而避免了強(qiáng)酸堿溶液不方便操作的缺點(diǎn)，可以使交換下來(lái)的生物堿離子迅速溶解到洗脫液中，并被沖出柱子，由此保證了生物堿離子的洗脫效果。而洗脫液中的鹽可回收重復(fù)利用，降低成本?；谏鲜龉に囘^(guò)程，發(fā)明人又進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，細(xì)化各步驟的參數(shù)，篩選出最優(yōu)方案，具體內(nèi)容如下1、上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍優(yōu)選為2 5，效果更加明顯。2、所用的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是大孔型或凝膠型強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂，在實(shí)際使用時(shí)可以根據(jù)情況處理成氫型或鹽型中的任一種，優(yōu)選為鹽型，如鈉型。3、所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的柱徑與柱高之比并無(wú)一定之規(guī)，但考慮生產(chǎn)實(shí)際，柱徑柱高=1 5 1 10時(shí)可以取得最好的效果。4、給樹(shù)脂柱上樣的藥液濃度為每ml相當(dāng)于生藥0. 1 3g，具體情況可以根據(jù)藥液的前處理方式?jīng)Q定，如果是采用浸漬、滲漉等方式，得到的藥液就會(huì)比較??；而如果是回流提取、煎煮等方式，尤其是經(jīng)過(guò)濃縮處理，藥液的濃度就會(huì)比較大，但只要是在這個(gè)范圍內(nèi)， 都能實(shí)現(xiàn)上樣。同時(shí)，上樣速度也根據(jù)藥液的濃度進(jìn)行適時(shí)調(diào)整，基本滿足在0. 5 5倍柱體積/小時(shí)即可。5、上樣方式一般選擇為從柱上端上樣，藥液靠自流力而流過(guò)整個(gè)柱子；發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果逆流上樣，即將藥液從柱子底端上樣，通過(guò)一定的壓力，使藥液注滿整個(gè)柱子，這種上樣方式可以發(fā)揮柱子的最大交換效率，也避免了從上端上樣時(shí)由于生物堿交換不完全而發(fā)生的提前穿透問(wèn)題。這一點(diǎn)也是發(fā)明人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)。6、浸泡的鹽溶液的濃度優(yōu)選為10% 15%，洗脫用的鹽溶液濃度優(yōu)選為5% 15%。7、用鹽溶液浸泡樹(shù)脂的時(shí)間應(yīng)為1小時(shí)以上，一般不需超過(guò)5個(gè)小時(shí)，再進(jìn)行洗脫。經(jīng)過(guò)靜置后，大量的生物堿離子已被交換下來(lái)，或者處于半吸附半解離的狀態(tài)，此時(shí)進(jìn)行洗脫，生物堿富集效果明顯，洗脫效率明顯提高。8、洗脫用鹽溶液中的鹽可以是鈉、鉀、鈣、銨的無(wú)機(jī)鹽中的任一種，優(yōu)選為鈉鹽，最好是NaCl。9、洗脫時(shí)洗脫液的流速不宜過(guò)快或過(guò)慢，如果過(guò)快，則鹽離子與生物堿離子的交換不充分，洗脫液浪費(fèi)較多；如果過(guò)慢，則解離下來(lái)的生物堿離子可能又重新吸附回樹(shù)脂柱上，影響洗脫效率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洗脫速度保持在2 6倍柱體積/小時(shí)為宜。進(jìn)一步優(yōu)選， 洗脫速度保持在4 6倍柱體積/小時(shí)最好。10、工藝中所說(shuō)的脫鹽方法可以是濃縮結(jié)晶除鹽、透析法除鹽、膜濾過(guò)除鹽以及其他各種藥物生物領(lǐng)域常規(guī)的除鹽方法，目前這些方法都已經(jīng)比較成熟，并可以管道化生產(chǎn)。11、該方法中所說(shuō)的益母草提取液可以通過(guò)浸漬、滲漉、超聲、微波或煎煮中的任一種方式提取制得，并且提取的溶媒可以是水、酸水、乙醇溶液、酸性乙醇溶液中的任一種， 但都屬于目前中藥領(lǐng)域的常規(guī)提取方法。區(qū)別點(diǎn)在于，如果是用浸漬或滲漉方法制得，可以直接上樣；如果是用其他方法提取得到的，還要經(jīng)過(guò)醇沉、過(guò)濾或離心除雜等步驟，以保證上樣的順利。
需要說(shuō)明的是，上述優(yōu)選的技術(shù)參數(shù)，可以根據(jù)實(shí)際情況的需要，與基本工藝進(jìn)行任意組合，且均能取得良好的效果，解決技術(shù)問(wèn)題，達(dá)到本發(fā)明的目的。下面通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。一、實(shí)驗(yàn)方案取益母草藥材4kg，各加12倍量水煎煮，提取2次，每次2小時(shí)，濃縮水提液至 4000ml，加乙醇使醇濃度達(dá)到80%后冷藏，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，回收乙醇，藥液濃縮至1 1，將此藥液均為四份，分別按下面四種方法進(jìn)行生物堿的分離提純(1)離子交換樹(shù)脂+鹽溶液洗脫將藥液調(diào)節(jié)PH = 3，上已處理好強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001 X 2.5(鈉型，徑高比為1 7)，上樣速度為3倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止。再用10%氯化鈉鹽酸溶液洗脫， 洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，洗脫液用硅鎢酸檢查有沉淀時(shí)開(kāi)始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢查無(wú)沉淀時(shí)至，合并洗脫液，用氨水中和至pH = 7左右，除鹽(備用)，濃縮干燥，得益母草總生物堿。(2)離子交換樹(shù)脂+回流提取將藥液調(diào)節(jié)pH = 3，上已處理好強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 001X2. 5 (鈉型，徑高比為1 7)，上樣速度為3倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止洗脫，將樹(shù)脂由柱中倒出，置瓷盤(pán)中晾干，加10%氨水適量，攪拌均勻，以手摸有潮濕感，但不沾手為宜。將此樹(shù)脂置索氏提取器中，以氯仿回流提取2小時(shí)，將氯仿液加無(wú)水Na2SO4脫水后，回收氯仿至干糖漿狀，干燥得益母草總生物堿。(3)大孔吸附樹(shù)脂法將藥液調(diào)節(jié)pH = 10，上已處理好的DFOl型大孔吸附樹(shù)脂， 上樣速度為4倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止洗脫。以乙醇-水(70 30)為洗脫劑，以2. 5倍柱體積/小時(shí)的速度進(jìn)行洗脫，洗脫液用硅鎢酸檢查有沉淀時(shí)開(kāi)始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢查無(wú)沉淀時(shí)至， 合并洗脫液，回收乙醇，干燥，得益母草總生物堿。(4)有機(jī)溶劑萃取法將藥液調(diào)節(jié)pH = 10，先用10倍量氯仿分三次萃取，再用10 倍量乙酸乙酯萃取三次，合并所有萃取液，蒸干，得益母草總生物堿。二、結(jié)果計(jì)算分別稱(chēng)量四種工藝所得總生物堿的重量，并與藥材量相除，得總生物堿的收率；分別以酸堿滴定法對(duì)四種方法所得總生物堿進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算總生物堿的純度。三、結(jié)果對(duì)比，見(jiàn)下表四種工藝的效果評(píng)價(jià)表
權(quán)利要求
1.一種從益母草提取液中分離益母草總生物堿的方法，其特征在于該方法為取益母草提取液，調(diào)節(jié)PH值1 7，濾過(guò)，過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，先以去離子水洗至pH值5 7，再以0. 5% 20%鹽溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)脫鹽處理，濃縮干燥得益母草總生物堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于益母草提取物溶液的PH值范圍為2 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于藥液上樣方式為逆流過(guò)柱法，且在以鹽溶液洗脫前可以0. 5% 25%的鹽溶液浸泡樹(shù)脂柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、3所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于所用浸泡樹(shù)脂的鹽溶液濃度為10% 15%，洗脫用鹽溶液濃度為5% 15%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于所用的鹽是鈉、鉀、 鈣、銨的無(wú)機(jī)鹽中的任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于所用的鹽是鈉鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于所用鹽溶液浸泡樹(shù)脂的時(shí)間為1 5小時(shí)，洗脫速度為每小時(shí)4 6倍柱體積。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離益母草總生物堿的方法，其特征在于所用的樹(shù)脂是氫型或鹽型。
9.權(quán)利要求1 8中任一項(xiàng)所述方法制備的益母草總生物堿。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用離子交換樹(shù)脂分離益母草總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。該方法包括如下技術(shù)方案取益母草提取液，調(diào)整pH值1～7，濾過(guò)，過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，先以去離子水洗至pH值5～7，再以適當(dāng)濃度的鹽溶液洗脫，檢查無(wú)生物堿為止，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，濃縮干燥得中藥益母草總生物堿。該方法克服了現(xiàn)有技術(shù)提取率低、有機(jī)溶劑用量大、酸堿濃度過(guò)高、工藝復(fù)雜、無(wú)法大生產(chǎn)等不足，可以高效率地從中藥益母草提取液中分離高純度的益母草總生物堿。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102172366SQ20081011831
公開(kāi)日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2008年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月13日
發(fā)明者武建卓, 王廣錄 申請(qǐng)人:北京和潤(rùn)創(chuàng)新醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司