專利名稱：：一種陰溝腸桿菌及其多糖和多糖的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，特別設(shè)計(jì)一種具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力和抗病毒等生物活性的陰溝腸桿菌Z0206細(xì)菌多糖的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：多糖在自然界分布很廣，在高等植物、動(dòng)物、微生物體內(nèi)均有存在，是自然界含量最豐富的生物聚合物之一。多糖具有多方面的功能，如能量?jī)?chǔ)存、結(jié)構(gòu)支持、防御功能等。早在上世紀(jì)40年代，多糖就開始用作藥物，1951年美國(guó)人ReihyH首次發(fā)現(xiàn)微生物擔(dān)子菌中的多糖有抑制腫瘤的活性，到了60年代，多糖作為廣泛的免疫促進(jìn)劑引起人們的極大興趣，開發(fā)多糖為保健食品與藥物也倍受關(guān)注。已有研究證明飼料中添加活性多糖能顯著提高動(dòng)物免疫功能，改善動(dòng)物生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能，降低動(dòng)物死亡率。很多多糖具有免疫增強(qiáng)活性，表現(xiàn)出對(duì)宿主免疫的介導(dǎo)和調(diào)節(jié)作用，通過(guò)刺激免疫細(xì)胞的成熟、分化和增殖，改善宿主機(jī)體平衡，達(dá)到恢復(fù)和提高宿主細(xì)胞對(duì)淋巴因子、激素及其他生理因子的反應(yīng)性。以此為基礎(chǔ)，多糖表現(xiàn)出與免疫力相關(guān)的多種活性功能，如抗腫瘤、降血糖、抗衰老、促進(jìn)肝臟和骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)和核酸的合成、抗炎及抗輻射作用等。近年來(lái)，我們通過(guò)分離、篩選和純化，從肉靈芝中分離得到了一株高產(chǎn)胞外多糖的細(xì)菌菌株陰溝腸桿菌Z0206。所謂肉靈芝，在民間被稱之為"太歲"，據(jù)《本草綱目》記載，肉靈芝為本草上品，它是在我國(guó)發(fā)現(xiàn)的一種天然珍稀物種，即被我國(guó)科學(xué)界早已認(rèn)定的一種原生質(zhì)生命體，確切定名應(yīng)為"特大型粘菌復(fù)合體"。研究表明，菌株陰溝腸桿菌Z0206具有高產(chǎn)多糖的特性，這種細(xì)菌多糖以分泌的形式到達(dá)胞外，具有產(chǎn)量高、安全、無(wú)毒副作用等優(yōu)點(diǎn)。陰溝腸桿菌Z0206細(xì)菌多糖具有一定的抗氧化、抗腫瘤、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等活性。因此，陰溝腸桿菌Z0206細(xì)菌多糖制備在抗氧化和抗腫瘤藥物及添加劑開發(fā)和應(yīng)用上具有重要的意義和廣闊的前景。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一種陰溝腸桿菌Z0206，已于2007年12月3日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)(北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏號(hào)CGMCCNO:2279。分類命名陰溝腸桿菌Enterobactercloacae。一種陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，依次包括以下步驟-(1)陰溝腸桿菌Z0206菌種活化取出冷凍保存的本發(fā)明的陰溝腸桿菌Z0206菌種，室溫放置lh后，接種到滅菌PDA加富固體培養(yǎng)基上,28i:32。C培養(yǎng)36h48h，再次轉(zhuǎn)接到PDA加富固體培養(yǎng)基上，28。C32。C培養(yǎng)36h48h，得到活化菌種；(2)將活化好的菌種，接種至PDA加富液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，28。C32。C往復(fù)振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間18h20h，得到發(fā)酵罐發(fā)酵種子液，發(fā)酵罐內(nèi)加入70%發(fā)酵培養(yǎng)基，12rC蒸汽滅菌20min，接種種子液，發(fā)酵時(shí)間48h72h，得到含有陰溝腸桿菌Z0206多糖的發(fā)酵液；(3)發(fā)酵液于6(TC70。C濃縮至原體積的1/10，再8(TC9(TC水浴lh1.5h，5000rpm離心10min15min，收集上清液，加入35倍體積預(yù)冷的95%乙醇，4。C靜置12h后，5000rpm離心10min15min，沉淀再依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚洗滌，離心，沉淀真空干燥，即得到粗多糖粉末；(4)蛋白酶處理將步驟(3)得到的粗多糖溶解于20倍體積的熱的蒸餾水中，用Na2C03調(diào)pH至7.09.0，加入0.25%1%胰蛋白酶(w/v)，55°C水解12h后，用草酸調(diào)pH至5.05.7，然后加入0.25%1%木瓜蛋白酶(w/v)，65。C70。C水解2h3h后，于100。C水浴加熱56min，以終止酶反應(yīng)；(5)三氯乙酸法脫蛋白取步驟(4)后得到的蛋白酶處理液，用草酸調(diào)pH值至7.0，加入2%4%三氯乙酸(w/v)，室溫下磁力攪拌lh后，11000rpm離心1015min，取上清；(6)Sevag法脫蛋白向步驟(5)取得的上清液中加入1/3體積的Sevag試劑，充分振蕩，混合2030min，充分靜置分層，4000rpm離心5min，重復(fù)操作數(shù)次至兩相界面不再出現(xiàn)蛋白沉淀；然后用35倍體積預(yù)冷的95%乙醇醇析，所得的沉淀再依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚洗滌兩次，真空干燥，得到脫蛋白多糖；(7)脫色將經(jīng)步驟(6)脫蛋白后的多糖配成0.5%多糖溶液，用氨水調(diào)pH至8.0，在50卩下滴加20%的11202，至溶液為淡黃色，保溫2h，然后用稀鹽酸中和至7.0;自來(lái)水透析23d，再蒸餾水透析23d后，加入35倍體積預(yù)冷的95%乙醇沉淀，4。C靜置12h后，5000rpm離心10min15min，沉淀真空干燥，得多糖精品。所述步驟(1)和(2)中，PDA加富培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯20%，蛋白胨0.20.5%，酵母浸膏0.3%，葡萄糖2%，瓊脂粉1.6%;發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為蔗糖2.5%，酵母浸膏0.5%，蛋白胨0.5°/。，K2HPO40.2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%。所述步驟(2)中，搖瓶發(fā)酵條件為接種量35環(huán)，往復(fù)振蕩沖程410cm，振蕩頻率200250rpm。所述步驟(2)中，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為接種量3%，pH為7.0，溫度3(TC，通氣量為0.250.75vvm，機(jī)械攪拌轉(zhuǎn)速200300rpm，每12h向發(fā)酵罐補(bǔ)充1%3%的葡萄糖。所述步驟(6)中的Sevag試劑的配方為，氯仿和正丁醇的體積比為4:1。一種陰溝腸桿菌Z0206多糖在制備增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健品或添加劑中的應(yīng)用。一種陰溝腸桿菌Z0206多糖在制備抗腫瘤藥物和抗病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)采用苯酚-硫酸法和凱氏定氮法測(cè)定陰溝腸桿菌Z0206多糖中多糖和蛋白質(zhì)含量。測(cè)定結(jié)果顯示粗多糖中多糖、蛋白質(zhì)含量分別為68.02%、28.41%;多糖精品中多糖、蛋白質(zhì)含量分別為99.6%和0.03%。結(jié)果表明，上述提取多糖的生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單，產(chǎn)品產(chǎn)量和純度較高。(2)陰溝腸桿菌Z0206多糖可顯著提高免疫低下小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞因子水平，對(duì)免疫低下小鼠的免疫功能具有顯著的調(diào)節(jié)作用。(3)陰溝腸桿菌Z0206多糖對(duì)由環(huán)磷酰胺所致的氧化損傷有明顯的拮抗作用，可以顯著提高機(jī)體抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的功能，防止有害自由基對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子的損傷。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例l、陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法(1)菌種活化PDA加富培養(yǎng)基配方如下馬鈴薯20%，蛋白胨0.3%，酵母浸膏0.3%，葡萄糖2%，瓊脂粉1.6%。培養(yǎng)用的平板及PDA加富培養(yǎng)基12rC滅菌20min，在無(wú)菌室倒平板，待培養(yǎng)基冷卻凝固之后，取冷凍保存的陰溝腸桿菌Z0206菌種，用接種環(huán)接種于PDA加富培養(yǎng)基平板上，3(TC培養(yǎng)2d，重復(fù)操作一次，得到活化的陰溝腸桿菌Z0206菌種。(2)陰溝腸桿菌Z0206多糖發(fā)酵液的制備向250ml三角瓶中加入70ml上述PDA加富液體培養(yǎng)基，12rC滅菌20min，向培養(yǎng)基中接種5環(huán)活化菌種后放置于搖床中30"C振蕩培養(yǎng)，往復(fù)振蕩的沖程4-10cm，振蕩頻率200rpm，培養(yǎng)18h后得到發(fā)酵罐種子液。發(fā)酵罐內(nèi)加入70%發(fā)酵培養(yǎng)基(發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為蔗糖2.5%，酵母浸膏0.5%,蛋白胨0.5%，K2HPO40.2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%)，121"C蒸汽滅菌20min，接種種子液，接種量3%，發(fā)酵條件為pH為7.0、溫度30°C、通氣量為0.5vvm、機(jī)械攪拌轉(zhuǎn)速200rpm，每12h向發(fā)酵罐補(bǔ)充1%葡萄糖，發(fā)酵時(shí)間48h，得到含有陰溝腸桿菌Z0206多糖的發(fā)酵液。(3)陰溝腸桿菌Z0206多糖的分離提取a.粗多糖的提取發(fā)酵液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，于6(TC將其濃縮為原體積的1/10，9(TC水浴lh，5000rpm離心15min,收集上清液，用磁力攪拌器邊攪拌邊向上清液中緩緩加入3倍體積的冷無(wú)水乙醇，放入4t:冰箱沉淀過(guò)夜，然后5000rpm離心15min，沉淀依次用預(yù)冷的丙酮和無(wú)水乙醚洗滌，離心，最后將沉淀置于真空干燥器中干燥，得到粗多糖粉末。b.蛋白酶處理取粗多糖10g溶于200mL蒸餾水中(稍加熱促溶)，用Na2C03調(diào)PH值至8.0，加胰蛋白酶0.5g，55'C水解2h后，用草酸調(diào)PH值至5.5，加木瓜蛋白酶0.5g，70'C水解3h后，加熱至10(TC，5min終止酶反應(yīng)。7C.三氯乙酸法脫蛋白取200mL的蛋白酶處理液，用草酸調(diào)PH值至7.0，加入8g三氯乙酸，用磁力攪拌器攪拌lh，11000rpm離心10min，取上清。d.Sevag法脫蛋白取上述上清液中，加入1/3體積的Sevag試劑(氯仿和正丁醇的體積比為4:1)，充分振蕩，混合25min，充分靜置分層，4000rpm離心5min，重復(fù)數(shù)次直至兩相界面無(wú)變性蛋白出現(xiàn)為止。然后用3倍體積預(yù)冷的95%乙醇醇析，所得的沉淀再依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚洗滌兩次，真空干燥，得到脫蛋白多糖。e.脫色將脫蛋白后的多糖配成0.5%的多糖溶液，用氨水調(diào)PH值至8.0，在50'C下滴加20%的11202，至溶液為淡黃色，保溫2h，然后用稀鹽酸中和至7.0。自來(lái)水透析48h，蒸餾水透析48h后，加入3倍體積預(yù)冷得95%乙醇，4"C靜置12h后，5000rpm離心10min，沉淀真空干燥，得多糖精品。實(shí)施例2、應(yīng)用苯酚-硫酸法檢測(cè)陰溝腸桿菌Z0206多糖中多糖含量方法如下準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，吸取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、l.Oml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、1.8ml分別加水補(bǔ)至2.0ml，然后加入6.0%苯酚l.Oml和濃硫酸5.0ml，靜置10min，搖勻，30min水浴，20min后于490nm測(cè)定光密度，以2.0ml水按同樣操作為空白，橫坐標(biāo)x為多糖含量，縱坐標(biāo)y為光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取樣品液1.0ml(相當(dāng)于40嗎左右的多糖)，按上述步驟操作，測(cè)定光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。實(shí)施例3、應(yīng)用凱氏定氮法測(cè)定陰溝腸桿菌Z0206多糖中蛋白質(zhì)含量。采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的凱氏定氮法(GB/T5009.5-1985)測(cè)定陰溝腸桿菌Z0206多糖中蛋白質(zhì)含量。實(shí)施例2和實(shí)施例3:采用苯酚-硫酸法和凱氏定氮法測(cè)定陰溝腸桿菌Z0206多糖中多糖和蛋白質(zhì)含量。測(cè)定結(jié)果顯示粗多糖中多糖、蛋白質(zhì)含量糖精品中多糖、蛋白質(zhì)含量分別為99.6%和0.03%。結(jié)果表明，上述提取多糖的生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單，產(chǎn)品產(chǎn)量和純度較高。實(shí)施例4、陰溝腸桿菌Z0206多糖免疫調(diào)節(jié)活性及抗氧化活性研究。取ICR小鼠40只(雌雄各半)，隨機(jī)分為對(duì)照組(I)、環(huán)磷酰胺組UI)、環(huán)磷酰胺+多糖組(III)和多糖組(IV)，I、1I組每天灌胃生理鹽水0.4mL，III、IV組每天灌胃多糖0.4mL(400mg/kg體重)，II、11I組在第12d腹腔注射環(huán)磷酰胺(50mg/kg體重)誘導(dǎo)免疫低下，試驗(yàn)期14d，在試驗(yàn)的第10天，所有的試驗(yàn)鼠腹腔注射0.2mL10n/。的SRBC進(jìn)行免疫。于最后一次給藥后12小時(shí)，頸椎脫臼處死小鼠，取樣進(jìn)行以下指標(biāo)分析。1、采集脾臟，MTT法進(jìn)行脾臟淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)，測(cè)定T/B淋巴細(xì)胞增殖效果試驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，用75%酒精浸泡5min，取脾臟(無(wú)菌操作)，置于Hank，S液中于200目網(wǎng)中研磨，無(wú)菌制備成單細(xì)胞懸液，用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2xl06/ml，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔分別加入不同處理的小鼠脾細(xì)胞懸液90pL，50昭/mL的ConA液10pL或100jig/mL的LPS液10pL，對(duì)照孔加入90pL的脾細(xì)胞懸液和lOpLRPMI-1640培養(yǎng)液，置5%C02，37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，于培養(yǎng)第68h，取出培養(yǎng)板，每孔加入MTT(0.4%)10pL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后每孔加入10(^LDMSO，用平板搖床搖勻，紫色結(jié)晶完全溶解后用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(BIO-RAD)于570nm處測(cè)OD值。2、采集血樣制備血清，采用ELISA方法試劑盒測(cè)定血清中細(xì)胞因子IL-2和TNF-a含量。采集肝臟樣本，制備10%肝臟勻漿，采用試劑盒測(cè)定肝臟中SOD和GSH-Px活性。試驗(yàn)結(jié)果如下表所示表1為陰溝腸桿菌Z0206多糖對(duì)ICR小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響；表2為陰溝腸桿菌Z0206多糖對(duì)ICR小鼠血清細(xì)胞因子IL-2和TNF-a含量的影響；表3為陰溝腸桿菌Z0206多糖對(duì)ICR小鼠肝臟中SOD和GSH-Px活性的影響。9表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注同列上標(biāo)字母不同表示差異顯著(p<0.05).與對(duì)照組相比，小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后，ConA誘導(dǎo)的脾臟T淋巴細(xì)胞增殖率和LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖率分別降低32.16%(/<0.05)和43.37%(;^0.05);與環(huán)磷酰胺單獨(dú)作用組相比，小鼠經(jīng)400mg/kg多糖預(yù)防性灌胃再腹腔注射環(huán)磷酰胺，ConA誘導(dǎo)的脾臟T淋巴細(xì)胞增殖率和LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖率分別提高10.14%(p<0.05)和22.68%(/<0.05)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注同列上標(biāo)字母不同表示差異顯著(p<0.05).與對(duì)照組相比，小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后，血清中IL-2和TNF-a水平分別降低40.04%(p<0.05)和47.41%(pO.05);與環(huán)磷酰胺作用組相比，小鼠經(jīng)400mg/kg多糖預(yù)防性灌胃再腹腔注射環(huán)磷酰胺，血清中TNF-a水平提高34.30%(;<0.05);與對(duì)照相比，單獨(dú)灌胃400mg/kg的多糖組血清中TNF-a水平提高7.84%，但差異不顯著(p>0.05)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注同列上標(biāo)字母不同表示差異顯著(pO.05).與對(duì)照組相比，小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后，肝臟中SOD和GSH-Px活性分別降低7.14%(;<0.05)和18.64%(/K0.05);與環(huán)磷酰胺作用組相比，小鼠經(jīng)400mg/kg多糖預(yù)防性灌胃再腹腔注射環(huán)磷酰胺，肝臟中SOD和GSH-Px活性分別提高6.61%(p<0,05)和22.38%(;O.05);與對(duì)照相比，單獨(dú)灌胃400mg/kg的多糖組肝臟SOD活性提高7.49%(/<0.05)。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實(shí)施例子。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例子，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1、一種陰溝腸桿菌，其特征在于該陰溝腸桿菌為陰溝腸桿菌Z0206CGMCCNO2279。2、一種陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，其特征依次包括以下步驟(1)陰溝腸桿菌Z0206菌種活化取出冷凍保存的如權(quán)利要求1所述陰溝腸桿菌Z0206菌種，室溫放置lh后，接種到滅菌PDA加富固體培養(yǎng)基上，28。C32。C培養(yǎng)36h48h，再次轉(zhuǎn)接到PDA加富固體培養(yǎng)基上，28。C32。C培養(yǎng)36h48h，得到活化菌種；(2)將活化好的菌種，接種至PDA加富液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，28'C32'C往復(fù)振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間18h20h，得到發(fā)酵罐發(fā)酵種子液，發(fā)酵罐內(nèi)加入70%發(fā)酵培養(yǎng)基，12rC蒸汽滅菌20min，接種種子液，發(fā)酵時(shí)間48h72h，得到含有陰溝腸桿菌Z0206多糖的發(fā)酵液；(3)發(fā)酵液于60。C7(TC濃縮至原體積的1/10，再80。C9(TC水浴lh1.5h，5000rpm離心10min15min，收集上清液，加入35倍體積預(yù)冷的95%乙醇，4。C靜置12h后，5000rpm離心10min15min，沉淀再依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚洗滌，離心，沉淀真空干燥，即得到粗多糖粉末；(4)蛋白酶處理將步驟(3)得到的粗多糖溶解于20倍體積的熱的蒸餾水中，用Na2C03調(diào)pH至7.09.0，加入0.25%1%胰蛋白酶(w/v)，55'C水解l2h后，用草酸調(diào)pH至5.05.7，然后加入0.25%1%木瓜蛋白酶(w/v)，65。C70。C水解2h3h后，于100。C水浴加熱56min，以終止酶反應(yīng)；(5)三氯乙酸法脫蛋白取步驟(4)后得到的蛋白酶處理液，用草酸調(diào)pH值至7.0，加入2%4%三氯乙酸(w/v)，室溫下磁力攪拌lh后，11000rpm離心1015min，取上清；(6)Sevag法脫蛋白向步驟(5)取得的上清液中加入1/3體積的Sevag試劑，充分振蕩，混合2030min，充分靜置分層，4000rpm離心5min，重復(fù)操作數(shù)次至兩相界面不再出現(xiàn)蛋白沉淀；然后用35倍體積預(yù)冷的95%乙醇醇析，所得的沉淀再依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚洗滌兩次，真空干燥，得到脫蛋白多糖。(7)脫色將經(jīng)步驟(6)脫蛋白后的多糖配成0.5%多糖溶液，用氨水調(diào)pH至8.0,在5(TC下滴加20。/。的H202，至溶液為淡黃色，保溫2h，然后用稀鹽酸中和至7.0;自來(lái)水透析23d，再蒸餾水透析23d后，加入35倍體積預(yù)冷的95%乙醇，4。C靜置12h后，5000rpm離心10min15min，沉淀真空干燥，得多糖精品。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，其特征在于所述步驟(1)和(2)中，PDA加富培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯20%，蛋白胨0.20.5%，酵母浸膏0.3%，葡萄糖2%，瓊脂粉1.6%;發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為蔗糖2.5%，酵母浸膏0.5%，蛋白胨0.5%，K2HPO40.2°/。，KH2PO40.1%，MgSO40.05%。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中，搖瓶發(fā)酵條件為接種量3%，往復(fù)振蕩沖程410cm，振蕩頻率200250rpm。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為接種量3%，pH為7.0，溫度3(TC，通氣量為0.250.75vvm，機(jī)械攪拌轉(zhuǎn)速200300rpm，每12h向發(fā)酵罐補(bǔ)充1%3%的葡萄糖。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法，其特征在于所述步驟(6)中的Sevag試劑的配方為，氯仿和正丁醇的體積比為4:1。7、一種如權(quán)利要求2所述陰溝腸桿菌Z0206多糖在制備增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健品或添加劑中的應(yīng)用。8、一種如權(quán)利要求2所述陰溝腸桿菌Z0206多糖在制備抗腫瘤藥物和抗病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種陰溝腸桿菌Z0206，已于2007年12月3日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)CGMCCNO2279；還公開了一種陰溝腸桿菌Z0206多糖的制備方法和多糖的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明提取多糖的生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單，產(chǎn)品產(chǎn)量和純度較高；陰溝腸桿菌Z0206多糖可顯著提高免疫低下小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞因子水平，對(duì)免疫低下小鼠的免疫功能具有顯著的調(diào)節(jié)作用；陰溝腸桿菌Z0206多糖對(duì)由環(huán)磷酰胺所致的氧化損傷有明顯的拮抗作用，可以顯著提高機(jī)體抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的功能，防止有害自由基對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子的損傷。文檔編號(hào)A61P31/00GK101440355SQ20081012131公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2008年10月6日優(yōu)先權(quán)日2008年10月6日發(fā)明者徐春蘭,汪以真,羊雪芹,靳明亮申請(qǐng)人:浙江大學(xué)