專(zhuān)利名稱(chēng)：一種制備高純度莫西克汀的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種制備高純度莫西克汀的方法。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種制備莫西克汀的方法。莫西克汀(INN: Moxidectin)是一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)的
農(nóng)用抗生素，主要用于治療牛羊等動(dòng)物體內(nèi)的寄生蟲(chóng)病，可以通過(guò)鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生尼莫克汀
(1NN:Nemadectin)，再通過(guò)化學(xué)反應(yīng)得到。美國(guó)專(zhuān)利US4916154A (其全部?jī)?nèi)容在此引入作為
參考)提供了一種制備莫西克汀的方法，即將鏈霉菌發(fā)酵后產(chǎn)生的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)固液分離，浸取
后得到的尼莫克汀溶液通過(guò)萃取，硅膠柱層析，凝膠層析得到純度90%以上(HPLC)的尼莫克
汀，將提純的尼莫克汀通過(guò)上保護(hù)氧化，脫保護(hù)肟化反應(yīng)得到莫西克汀，再經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得
到高純度的莫西克汀。該方法能得到純度90%以上的莫西克汀，但該方法工藝復(fù)雜，需要操作
及控制都繁瑣的硅膠凝膠層析，該層析溶劑用量較大，對(duì)進(jìn)入硅膠柱的上柱物無(wú)水要求高，重
復(fù)使用性低，致使該層析收率降低，成本較高。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明致力于提供一種更簡(jiǎn)單有效成本更低的制備高純度莫西克汀的方法。我們經(jīng)過(guò)研究驚 奇的發(fā)現(xiàn)，通過(guò)固液分離，浸取后得到的尼莫克汀通過(guò)一種廉價(jià)的可以重復(fù)使用多次的大孔吸 附樹(shù)脂去除大部分發(fā)酵液殘留的糖類(lèi)，蛋白質(zhì)及一部分脂溶性雜質(zhì)，經(jīng)樹(shù)脂層析后得到的尼莫
克汀初步提純液純度在40% 50%,我們更驚奇的發(fā)現(xiàn)，上述初步提純液直接上保護(hù)反應(yīng)得到上 保護(hù)液經(jīng)過(guò)大孔吸附樹(shù)脂層析后得到純度85%以上的上保護(hù)物，該組分經(jīng)過(guò)氧化，脫保護(hù)肟化 后經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析得到純度93%以上的莫西克汀溶液，從而我們可以通過(guò)常規(guī)的濃縮結(jié)晶 把莫西克汀從溶液中分離出來(lái)。
本發(fā)明涉及的預(yù)提純的尼莫克汀的制備方法參見(jiàn)THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4， 1988， 519-528 )，其固形物所含的尼莫克汀含量在15%—25%，其全文在此引入作為參考。 本發(fā)明涉及的制備高純度的莫西克汀的方法的特征在于.-
(1) 將預(yù)提純的尼莫克汀溶液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，采用極性有機(jī)溶劑和水的混合溶液洗脫；
(2) 將上述洗脫液通過(guò)二氯甲垸萃取后經(jīng)常規(guī)濃縮去除溶劑；
(3) 將上述濃縮物通過(guò)上保護(hù)反應(yīng)得到上保護(hù)液；
(4) 將上述上保護(hù)液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；
(5) 將上述上保護(hù)洗脫液經(jīng)過(guò)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)得到莫西克汀反應(yīng)液；
(6) 上述莫西克汀反應(yīng)液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到 的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液；
(7) 如有需要可用常規(guī)的濃縮結(jié)晶技術(shù)將產(chǎn)物從溶液中分離出來(lái)。
其中步驟(1)進(jìn)入樹(shù)脂柱的尼莫克汀溶液優(yōu)選為經(jīng)過(guò)固液分離，浸取后得到的尼莫克汀 溶液(參照THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4, 1988 519-528 ))。其中步驟(1)大孔吸附 樹(shù)脂為一種非離子交換非極性的顆粒度較粗的大孔樹(shù)脂，其中優(yōu)選20-40目的大孔吸附樹(shù)脂。 其中步驟(4) (6)大孔吸附樹(shù)脂為一種非離子交換非極性的顆粒度較細(xì)的大孔樹(shù)脂，其中優(yōu) 選80-100目的大孔吸附樹(shù)脂；步驟(1) (4) (6)所述極性溶劑包括乙醇、丙酮或者甲醇， 優(yōu)選溶劑為乙醇；在所述混合溶劑中，優(yōu)選所述的極性溶劑的濃度為50%—90% (V/V)，更 優(yōu)選50-75% (V/V );優(yōu)選步驟(1) (4) (6)進(jìn)入樹(shù)脂柱的料液濃度為0.5-1% (W/W)。
與現(xiàn)有技術(shù)中的方法相比，本發(fā)明的方法由于使用了大孔樹(shù)脂層析代替的硅膠層析分離， 該方法不僅穩(wěn)定可控、容易工業(yè)化，而且提高了產(chǎn)品純度、質(zhì)量和收率。
本發(fā)明測(cè)定尼莫克汀及莫西克汀的含量方法采用高效液相色譜法，下面通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一 步闡述本發(fā)明所提到的方法。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實(shí)施例的制備方法僅僅是用于
說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對(duì)本發(fā)明制備方法的簡(jiǎn)單改進(jìn)都 屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)，另外，本發(fā)明 說(shuō)明書(shū)中的(W/W)是指重量比或者重量比濃度，(V/V)是指體積比或者體積比濃度。
實(shí)例l:制備高純度莫西克丁的方法
1，鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的發(fā)酵液經(jīng)固液分離，浸取后的得到的尼莫克汀預(yù)提純液100g，純度15 %,流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型號(hào)HP-20 (40目，三菱化學(xué)，日本)，柱內(nèi)填充物體積10L， 流完后改用乙醇水溶液梯度洗脫，從50%—90% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一L5 倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體積的二氯甲烷萃取后減壓濃縮至干。濃縮 物中含尼莫克汀85g，含量46%。
2，上述尼莫克汀濃縮物經(jīng)上保護(hù)反應(yīng)(常規(guī)反應(yīng))后得到上保護(hù)物80g，流過(guò)大孔吸附樹(shù) 脂柱，樹(shù)脂型號(hào)H-60 (80目，購(gòu)自南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積10L,流完后改用乙醇水 洗脫劑洗脫，從60%—80% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1 — 1.5倍柱體積收集含上 保護(hù)液純度在85%以上的組分，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲烷萃取，減壓濃縮至干。 該濃縮物中含上保護(hù)物68g，純度87.8%。
3，上述上保護(hù)濃縮物經(jīng)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)(常規(guī)反應(yīng))后得到莫西克汀55g,流過(guò) 大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型號(hào)H-60 (80目，購(gòu)自南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積10L，流完后 改用乙醇水洗脫劑洗脫，從50%—70% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一1.5倍柱體 積，收集含莫西克汀純度在93X以上的組分，合并后含莫西克汀42g，純度94.8X，加入1/10(V/V) 洗脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4，將上述濃縮物加入無(wú)水乙醇至莫西克汀濃度40%，溶解過(guò)濾后放入冰箱48小時(shí)后過(guò)濾干 燥得到固體的莫西克汀，經(jīng)測(cè)定莫西克汀含量94.6% (折干)。
實(shí)例2:制備高純度莫西克丁的方法
l，鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的發(fā)酵液經(jīng)固液分離，浸取后的得到的預(yù)提純液，純度18%，固形物中含 尼莫克汀1.2% (W/W) 120g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型號(hào)XAD-1600 (40目，羅姆-哈斯公司 生產(chǎn)，美國(guó))，柱內(nèi)填充物體積12L，流完后改用丙酮水溶液梯度洗脫，從50%—80% (V/V) 梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一1.5倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體 積的二氯甲垸萃取后減壓濃縮至干。濃縮物中含尼莫克汀98g，含量43.6%。
2,上述尼莫克汀濃縮物經(jīng)上保護(hù)反應(yīng)后得到上保護(hù)物95g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型號(hào) H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積10L，流完后改用丙酮水洗脫劑洗脫，從60
% — 75% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一1.5倍柱體積收集含上保護(hù)液純度在85% 以上的組分，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲烷萃取，減壓濃縮至干。該濃縮物中含上保護(hù) 物80g，純度86. 5%。
3, 上述上保護(hù)濃縮物經(jīng)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)后得到莫西克汀65g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱， 樹(shù)脂型號(hào)H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積IOL，流完后改用丙酮水洗脫劑洗脫， 從50%—70% (V/V)梯度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一1.5倍柱體積，收集含莫西克汀純度 在93%以上的組分，合并后含莫西克汀48g，純度93.5%，加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯 甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4, 將上述濃縮物加入無(wú)水乙醇至莫西克汀濃度40%,溶解過(guò)濾后放入冰箱48小時(shí)后過(guò)濾干 燥得到固體的莫西克汀，經(jīng)測(cè)定莫西克汀含量93.2% (折干)。
實(shí)例3:制備高純度莫西克丁的方法
1, 鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的發(fā)酵液經(jīng)固液分離，浸取后的得到的預(yù)提純液，純度13.8%，固形物 中含尼莫克汀0.8% (W/W) 80.6g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型號(hào)HP-20 (40目，三菱化學(xué)， 日本)，柱內(nèi)填充物體積10L，流完后改用乙醇水溶液85%濃度洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)l一 1.5倍柱體積，收集尼莫克汀組分，洗脫組分加入1/10體積的二氯甲垸萃取后減壓濃縮至干。 濃縮物中含尼莫克汀68.2g，含量41.5%。
2, 上述尼莫克汀濃縮物經(jīng)上保護(hù)反應(yīng)后得到上保護(hù)物63.8g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂型 號(hào)H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積10L，流完后改用乙醇水溶液75%洗脫，控 制洗脫流速每小時(shí)l一l. 5倍柱體積收集含上保護(hù)液純度在85%以上的組分，加入1/10(V/V)洗 脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。該濃縮物中含上保護(hù)物53.8g，純度86.2%。
3, 上述上保護(hù)濃縮物經(jīng)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)后得到莫西克汀43.6g，流過(guò)大孔吸附樹(shù)脂 柱，樹(shù)脂型號(hào)H-60 (80目，南京林化研究所)，柱內(nèi)填充物體積7L，流完后改用乙醇水溶液70% 洗脫，控制洗脫流速每小時(shí)1一1.5倍柱體積，收集含莫西克汀純度在93%以上的組分，合并后 含莫西克汀29.6g，純度93.6%,加入1/10(V/V)洗脫液體積的二氯甲垸萃取，減壓濃縮至干。
4, 將上述濃縮物加入無(wú)水乙醇至莫西克汀濃度40%,溶解過(guò)濾后放入冰箱48小時(shí)后過(guò)濾干 燥得到固體的莫西克汀，經(jīng)測(cè)定莫西克汀含量93.2% (折干)。
權(quán)利要求
1.一種制備高純度莫西克汀的方法，其特征在于(1)將預(yù)提純的尼莫克汀溶液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，采用極性有機(jī)溶劑和水的混合溶液洗脫；(2)將上述洗脫液通過(guò)二氯甲烷萃取后經(jīng)常規(guī)濃縮去除溶劑；(3)將上述濃縮物通過(guò)上保護(hù)反應(yīng)得到上保護(hù)液；(4)將上述上保護(hù)液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；(5)將上述上保護(hù)洗脫液經(jīng)過(guò)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)得到莫西克汀反應(yīng)液；(6)上述莫西克汀反應(yīng)液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液；(7)如有需要可用常規(guī)的濃縮結(jié)晶技術(shù)將產(chǎn)物從溶液中分離出來(lái)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中步驟(1)進(jìn)入樹(shù)脂柱的預(yù)提純的尼莫克汀溶液為經(jīng)過(guò)固液分 離，浸取后得到的尼莫克汀溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中步驟(1)的大孔吸附樹(shù)脂為一種非離子交換非極性的20-40 目的大孔吸附樹(shù)脂。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中步驟(4)和(6)的大孔吸附樹(shù)脂為一種非離子交換非極性的 80-100目的大孔吸附樹(shù)脂。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l一4之一的方法，其中步驟(1) 、 (4)或(6)所述極性有機(jī)溶劑選自乙醇、 丙酮和甲醇。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中步驟(1) 、 (4)或(6)所述極性有機(jī)溶劑為乙醇。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5的方法，所述的極性溶劑的濃度為50%_90% (V/V)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的方法，所述極性溶劑的濃度為50% — 75% (V/V)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中步驟(l)、 (4)或(6)進(jìn)入樹(shù)脂柱的料液濃度為0.5-1% (W/W)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備高純度莫西克汀的方法，該方法包括以下步驟(1)將預(yù)提純的尼莫克汀溶液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，采用極性有機(jī)溶劑和水的混合溶液洗脫；(2)將上述洗脫液通過(guò)二氯甲烷萃取后經(jīng)常規(guī)濃縮去除溶劑；(3)將上述濃縮物通過(guò)上保護(hù)反應(yīng)得到上保護(hù)液；(4)將上述上保護(hù)液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫；(5)將上述上保護(hù)洗脫液經(jīng)過(guò)氧化，脫保護(hù)，肟化反應(yīng)得到莫西克汀反應(yīng)液；(6)上述莫西克汀反應(yīng)液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析，所述層析用極性溶劑和水混合溶劑洗脫，得到的洗脫液即為高純度的莫西克汀溶液，如有需要可用常規(guī)的濃縮結(jié)晶技術(shù)將產(chǎn)物從溶液中分離出來(lái)。本發(fā)明的方法由于使用了大孔樹(shù)脂層析代替的硅膠層析分離，該方法不僅穩(wěn)定可控、容易工業(yè)化，而且提高了產(chǎn)品純度、質(zhì)量和收率。
文檔編號(hào)A61P33/00GK101372492SQ200810126358
公開(kāi)日2009年2月25日 申請(qǐng)日期2008年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月29日
發(fā)明者繆建玉 申請(qǐng)人:浙江海正藥業(yè)股份有限公司