專利名稱：半邊蓮總黃酮有效組分及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種中藥半邊蓮的總黃酮有效 組分及制備方法及其在醫(yī)藥和保健食品領域的應用。
背景技術：
半邊蓮又名急解索、蛇舌草，為桔?？浦参锇脒吷?^W^
W&mw's Lour.)的帶根全草。始載于《滇南本草》，后李時珍在 《本草綱目》中亦有記載。多生長于稻田岸畔、溝邊或潮濕的荒地。 主產(chǎn)于安徽、江蘇、四川、浙江等地。半邊蓮性味辛、平，具利尿消 腫、清熱解毒之功效，臨床主要用于治療大腹水腫，面足浮腫，癰腫 疔瘡，蛇蟲咬傷，晚期血吸蟲病腹水，各種癌癥。半邊蓮為臨床常用 中藥，療效顯著，用藥量大，然而對于半邊蓮化學成分及其制備方法 的專利及相關文章未見報道，我們對其進行系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)了其中主 要含有黃酮類，且為其主要有效組分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種半邊蓮總黃酮有效組分及其制備方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種半邊蓮總黃酮有效組分與某 些堿或金屬鹽形成的金屬鹽類衍生物。
本發(fā)明的再一個目的在于提供一種半邊蓮總黃酮有效組分與某 些金屬離子形成的金屬絡合物。
本發(fā)明的再一個目的在于提供半邊蓮總黃酮有效組分及其某些 降解產(chǎn)物、某些金屬鹽類衍生物和某些金屬絡合物的用途。
本發(fā)明提出的半邊蓮總黃酮有效組分，是從中藥半邊蓮中提取的
含有多種黃酮類活性成分的組合，其中主要化合物結(jié)構如下
<formula>formula see original document page 5</formula>
化合物RlR2R3R4英文名
香葉木素HH .HCH3Diosmetin
白楊黃酮HHCH3H
木犀草素HHHHluteolin
香葉木苷Rha-gluHHCH3Diosmin
木犀草素lutedin-7-
7-0-P陽D-葡GluHHHO-p-D-gluco
萄糖苷side
0R2廣o、 o、
化合物RlR2R3英文名稱
芹菜素HHHELpigenin
芹菜素 國7-0-P-D-葡 萄糖苷GluHHapigenin-7-O-p-D誦 glucoside
蒙花苷 Rha-glu H CH3 linarin
<formula>formula see original document page 6</formula>橙皮苷(英文名hesperidin)
本發(fā)明所述原料半邊蓮，來源于桔?？瓢脒吷弻俚娜我庖环N植 物。作為提取半邊蓮總黃酮的原材料，可以是市售半邊蓮，也可以是 這些植物的莖、葉、花穗、果實、地下根等任一部位或全部植株，其 中優(yōu)選的藥材部位為這些植物未的全草。
本發(fā)明所述的半邊蓮總黃酮有效組分，是指從上述任一植物的任 何部位提取得到的，包含多種黃酮類活性成分的組合物，其中優(yōu)選的 是從丄o^"ac/K'"em/sLour.的全草，含有多種黃酮類活性成分的組合 物。這些黃酮類成分主要包括蒙花苷和香葉木苷以及以其為母核的糖 苷類化合物和其它衍生物。
作為半邊蓮總黃酮有效組分，其中各種黃酮類成分百分含量的總 和為5 100%(w/w)，其中優(yōu)選的為50 100% (w/w)。
本發(fā)明所述的半邊蓮總黃酮有效組分，可以與某些堿如氫氧化 鈉、氫氧化鉀等以及鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋅鹽等金屬鹽如碳酸鈉、碳 酸鉀、碳酸鈣、醋酸鈉、醋酸鋅等，形成金屬鹽類衍生物。這些衍生 物具有與上述半邊蓮總黃酮有效組分相同或相近的藥理活性和用途。
本發(fā)明所述的半邊蓮總黃酮有效組分，還可以與鈉、鉀、鈣、鐵、 鋁、鋅、銅、鋇、鉻、鍶等金屬離子形成金屬絡合物。這些金屬絡合 物不僅具有與上述半邊蓮總黃酮有效組分相同或相近的藥理活性或 用途，而且具有某些新用途，如鐵絡合物可以作為補鐵劑，鋅絡合物 可以作為補鋅劑，鉻絡合物可以用于防治糖尿病等。
在本發(fā)明所述的半邊蓮總黃酮有效組分所涵蓋的各種黃酮類活 性成分之中，最主要的是芹菜素、木犀草素、香葉木素、白楊黃酮、
橙皮苷、木犀草素7-0-P-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0-P-D-葡萄糖苷、蒙
花苷、香葉木苷等。
本發(fā)明還提出了所述半邊蓮總黃酮有效組分的制備工藝，它可以 采用以下任意一種方法，或這些方法的任意組合進行制備(l)溶劑 萃取法；(2)大孔吸附樹脂法；(3)鉛鹽沉淀法；(4)超臨界C(V流 體萃取法；(5)柱層析法；(6)液-液逆流分配色譜法。其中優(yōu)選的方 法為大孔吸附樹脂法和聚酰胺色譜法。
在使用這些方法進行制備時， 一般包括以下幾個步驟
(1) 提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及脂類溶 劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿、 鹽配成的酸性或堿性溶劑。提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提 取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等。
優(yōu)選的提取工藝為半邊蓮藥材加30 90%乙醇，回流提取2 3次, 每次提取1 2小時，溶劑用量為5 15倍量(L/kg)。
(2) 過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使 用以下任意一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂， 聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、 ZTC+1天然澄清劑等。
(3) 濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及減
壓、煎煮濃縮等。 .
(4) 干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。 當采用溶劑萃取法進行制備時， 一般先將提取物混懸于水中，然
后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽 油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如 氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲 得其中的總黃酮成分，得到總黃酮有效組分。
當采用大孔吸附樹脂法或聚酰胺色譜法進行制備時，所用的大孔
樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種
類型，這些樹脂的代號由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如D101、 D4020、 HPD400、 AB-8、 S_8、 HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的 樹脂，如AB-8、 HP廳、D101等。所用的聚酰胺為30-90目，所用 的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中優(yōu)選的為0 100 %的乙醇。
優(yōu)選的半邊蓮黃酮有效組分樹脂純化工藝為選用AB-8、 HPD400等 中等極性或弱極性大 L吸附樹脂作為純化用樹脂活30-60目聚酰胺為純 化用填料，半邊蓮乙醇提取物上樣液濃度2 4mg/mL (以總黃酮量計)， 吸附流速3 9BV/h,樹脂柱徑高比1: 5 1:10，上樣量為5 10mg/mL (以 總黃酮量計)，0 30%乙醇洗脫1 4倍樹脂體積進行除雜，除雜流速為 3 8BV/h，用40 90 %乙醇洗脫3 6倍樹脂體積，洗脫流速為5 9 BV/h。
當采用鉛鹽沉淀法進行制備時，所用的鉛鹽試劑為醋酸鉛或堿式 醋酸鉛，所用的脫鹽劑H2S、磷酸鹽及硫酸鹽等。
當采用超臨界C(V流體萃取法進行制備時，可以對半邊蓮原材料 直接進行萃取，也可以對上述任一方法和步驟所獲得的產(chǎn)物進行萃 取。萃取時可以使用或不使用以下任一種類溶劑及溶劑混合物水、 醇類、酮類及酯類溶劑。
當采用柱層析法進行制備時，其處理的對象可以是上述提取步驟 所獲得的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、鉛鹽 沉淀法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。所用的固定相可以是 硅膠、聚酰胺、氧化鋁、葡聚糖(S印hadex系列或S印hadex LH-20 系列)、C-8、 C-18、活性炭、纖維素等，所用的洗脫液因固定相的不 同而不同， 一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油 醚等組成的混合溶劑。
當采用液-液逆流萃取法進行制備時，其處理的對象可以是上述 提取步驟的的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、 鉛鹽沉淀法或超臨界萃取法初步純化后的產(chǎn)物。 一般先將提取物混懸 于水中，然后用低極性的酯類、垸烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的 溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物， 萃取獲得其中的總黃酮成分，得總黃酮有效組分。
該有效組分可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配 伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠 囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏 劑、散劑、飲料等。
具體實施例方式
實施例l:半邊蓮總黃酮制備工藝
取半邊蓮lkg， 50%乙醇10L回流提取3次，每次提取1小時，減 壓回收溶劑，得提取物，加水分散，使水溶液濃度為3. 84mg/mL (以總黃 酮量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30min，取使上清液，，通過5LAB-8 大孔吸附樹脂，吸附流速1.0mL/min，樹脂柱徑高比為1:8，上樣量為 7.68mg/mL (以總黃酮量計)，10%乙醇洗脫2倍樹脂體積進行除雜，除 雜流速為1.0 mL/min， 70%乙醇洗脫5倍樹脂體積，洗脫流速為 2.0mL/min，收集70%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為半邊蓮總 黃酮有效組分，經(jīng)測定總黃酮含量為59% 實施例2:半邊蓮總黃酮制備工藝
半邊蓮lkg， 60X乙醇15L，回流提取3次，每次提取1.5小時，回 收溶劑，提取物加水分散，使上樣液濃度為3.84mg/mL (以總黃酮量計)， 使水溶液濃度為3. OOmg/mL (以總黃酮量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離 心30min，取使上清液，，通過6L聚酰胺層析柱(30-60目)，吸附流速 1. OmL/min，樹脂柱徑高比為1: 7，上樣量為7. OOmg/mL (以總黃酮量計)， 10%乙醇洗脫2倍樹脂體積進行除雜，除雜流速為1. 0 mL/min， 50%乙 醇洗脫4倍樹脂體積，洗脫流速為2. OmL/min，收集50%乙醇洗脫液， 回收溶劑，減壓干燥，即為半邊蓮總黃酮有效組分，經(jīng)測定總黃酮含量 為62%。
實施例3:半邊蓮總黃酮制備工藝
半邊蓮lkg， 70X乙醇12L回流提取2次，每次提取2小時，回收
溶劑，提取物加水分散，使上樣液濃度為3.84mg/mL (以總黃酮量計)， 使7jC溶液濃度為4. 00mg/mL (以總黃酮量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離 心30min，取使上清液，，通過7LAB-8大孔吸附樹脂，吸附流速1. OmL/min, 樹脂柱徑高比為l: 10,上樣量為8.00mg/mL (以總黃酮量計)，水洗脫4 倍樹脂體積進行除雜，除雜流速為1.0 mL/min， 90%乙醇洗脫4倍樹脂 體積，洗脫流速為2.0mL/min,收集90%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓 千燥，即為半邊蓮總黃酮有效組分，經(jīng)測定總黃酮含量為65%。 實施例4:半邊蓮總黃酮制備工藝
半邊蓮lkg， 70X乙醇12L回流提取2次，每次提取2小時，回收 溶劑，減壓干燥，干燥物加甲醇多次提取至無色，合并甲醇提取液，減 壓回收溶劑，得甲醇萃取干浸膏，加水分散溶解，使上樣液濃度為 3.84mg/mL (以總黃酮量計)，通過7LAB-8大孔吸附樹脂，吸附流速 1. OmL/min，樹脂柱徑高比為1: 9，上樣量為7. 68mg/mL (以總黃酮量計)， 水洗脫4倍樹脂體積進行除雜，除雜流速為1. 0 mL/min， 90%乙醇洗脫 4倍樹脂體積，洗脫流速為2. OmL/min，收集90%乙醇洗脫液，回收溶劑， 減壓千燥，即為半邊蓮總黃酮有效組分，經(jīng)測定總黃酮含量為70%。 實施例5:半邊蓮總黃酮片的制備
半邊蓮總黃酮有效組分 100g
淀粉 100g
上述組分混合均勻，裝入硬明膠膠囊中，共iooo粒膠囊。
實施例6:半邊蓮總黃酮復方制劑的制備
半邊蓮總黃酮有效組分 100g 白花蛇舌草有效組分 200g 半枝蓮有效組分 1000g 上述組分混合均勻，裝入硬明膠膠囊中，共1000粒膠囊。
權利要求
1、一種總黃酮有效組分，其特征在于該有效組分由中藥半邊蓮中提取獲得，并含有以下黃酮類成分香葉木苷、蒙花苷、芹菜素，木犀草素，白楊黃酮，橙皮苷，木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，香葉木素等。
2、 如權利要求1所述的半邊蓮總黃酮有效組分，其特征在于半邊蓮為市售半邊蓮或半邊蓮屬任一種植物的全部植株或任何部位根、莖、葉、花穗、果實等。
3、 如權利要求1所述的半邊蓮總黃酮有效組分，其特征在于上 述總黃酮類成分含量總和以重量計為5 100%,其中優(yōu)選的為50 100%。
4、 如權利要求1所述的半邊蓮總黃酮有效組分，其特征在于上 述黃酮類成分，還包括與鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋅鹽等金屬鹽形成的金 屬鹽類衍生物以及與鈉、鉀、鈣、鐵、鋁、鋅、銅、鋇、鉻、鍶等金 屬離子形成金屬絡合物。
5、 如權利要求1 4所述的半邊蓮總黃酮有效組分，其特征在于 采用以下任意一種方法，或這些方法的任意組合進行制備1溶劑萃取法；2大孔吸附樹脂法；3聚酰胺色譜法；4鉛鹽沉淀法；5超 臨界C02萃取法；6柱層析法；7液-液逆流分配色譜法。
6、 如權利要求5所述的半邊蓮總黃酮有效組分制備方法，其特征在于，在使用這些方法進行制備時，包括以下一個或幾個步驟提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及脂類溶劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑；提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等；過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂，聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1 天然澄清劑等；濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及減壓、煎 煮濃縮等；干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。
7、 如權利要求5所述的半邊蓮總黃酮有效組分制備方法，其特 征在于當使用大孔吸附樹脂法時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱 極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任何一種類型，這些樹脂的代號 由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如D101、 D4020、 HPD400、 HPD826、 AB-8、 S-8、 HZ-806等，所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等； 當使用聚酰胺色譜法時，所用的聚酰胺為30-90目，所用的洗脫劑為 水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
8、 如權利要求5所述的半邊蓮總黃酮有效組分制備方法，其特 征在于當使用溶劑萃取法時，所用的溶劑為水和含水的乙醇、甲醇、 丙酮以及丙醇、丁醇等溶劑。
9、 如權利要求7、 8所述的半邊蓮總黃酮有效組分制備方法，其 特征在于選用AB-8、 HPD400等中等極性或弱極性大孔吸附樹脂作或聚 酰胺為純化用填料，半邊蓮乙醇有效組分以總黃酮量計的上樣液濃度2 4mg/mL，吸附流速3 9BV/h，樹脂柱徑高比1:5 1:10，以總黃酮量計 的上樣量為5 10mg/raL, 0 30%乙醇洗脫1 4倍樹脂體積進行除雜， 除雜流速為3 8BV/h，用40 90%乙醇洗脫3 6倍樹脂體積，洗脫流 速為5 9BV/h。
10、 如權利要求l、 4所述的有效組分的應用，其特征在于，該有效 組分可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備 藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、 丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等c
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從中藥半邊蓮中提取得到的總黃酮有效組分及其制備方法。該制備物主要包括芹菜素、木犀草素、香葉木素、白楊黃酮、蒙花苷、香葉木苷以及以其為母核的糖苷類化合物和其它衍生物，可由大孔吸附樹脂法、聚酰胺色譜法、溶劑萃取法等多種方法制備獲得。
文檔編號A61K9/10GK101347491SQ200810135340
公開日2009年1月21日 申請日期2008年8月1日 優(yōu)先權日2008年8月1日
發(fā)明者斌 劉, 姜艷艷, 瑩 戴, 王秋瑩, 石任兵 申請人:石任兵