專利名稱：含有高麗人參的用于使HIV-1具有5’LTR/gag基因缺陷的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有作為有效成分的高麗人參的用于使HIV-1具有 5'LTR和域gag基因缺陷的藥物組合物。
背景技術(shù)：
HIV-1 (人體免疫缺陷病毒-l)是獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired Immunodeficiency Syndrome;以下簡稱為"AIDS")的病因。HIV-1與HIV-2 同屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(retroviridae)的慢病毒亞科(lentivirinae),感染性病 毒體具有由兩條相同的單鏈形成的RNA ( + )染色體。fflV-l感染細(xì)胞時(shí)， 通過上述RNA ( + )編碼的逆轉(zhuǎn)錄酶，RNA轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA，該DNA插 入到宿主細(xì)胞的染色體中，形成前病毒。在前病毒狀態(tài)下，病毒是通過轉(zhuǎn)錄 病毒基因生產(chǎn)在復(fù)制和裝配中所必需的蛋白質(zhì)的mRNA而增殖的。
HIV-1基因組(9.2kb)由gag、 pol、 env的結(jié)構(gòu)基因(structural gene) 禾口tat、 rev、 nef、 vif、 vpu、 vpr等的附加基因(accessorygene)以及兩端的 長末端重復(fù)序列(long terminal repeat sequence (LTRs))構(gòu)成(參照圖8)。 gag和pol蛋白質(zhì)分解形成前驅(qū)體蛋白質(zhì)，env蛋白質(zhì)變成gpl60前體蛋白 (precursor protein),在裝配過程中分解成gpl20和gp41。最初感染HIV時(shí) 沒有癥狀，或者表現(xiàn)為象感冒的癥狀，病毒在CD4T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠 質(zhì)細(xì)胞等中潛伏感染(latent infection),長期處于潛伏狀態(tài)。對gpl20的抗 體在感染后第3-20周出現(xiàn)，此后可以診斷有無感染。經(jīng)過2-10年的潛伏期， 免疫體系中誘導(dǎo)出變化，在出現(xiàn)免疫缺陷癥狀之前，表現(xiàn)為前驅(qū)期癥狀(艾 滋病相關(guān)綜合癥(ARC)—疲勞、發(fā)燒、體重減少、腹瀉)。由于HIV感染 使得CD4T細(xì)胞的數(shù)量降低至200/ul以下，此時(shí)表現(xiàn)出免疫缺陷的癥狀，從而在臨床上定義為AIDS。
高卵人參(Panax ginseng C. A. Meyer (Panax schinseng Nees))屬五力卩 科(Araliaceae)人參屬的多年生宿根草本植物，數(shù)千年來在東亞各國用于各 種疾病的輔助治療。至今為止許多藥理實(shí)驗(yàn)表明高麗人參具有如下活性降 低膽固醇、抗脂質(zhì)過氧化、降低血壓、增加血流、擴(kuò)張腦血管、增進(jìn)心功能、 抗脈律不齊、抗血栓、慢性腎功能衰竭治療效果、免疫調(diào)節(jié)作用、增強(qiáng)記憶 力、增進(jìn)腦代謝、抗壓力、抗氧化作用、抗衰老作用、抗?jié)兒鸵种莆敢悍?泌、抗糖尿病、解毒、增加肝細(xì)胞酶、治療哮喘、抗炎癥、鎮(zhèn)痛作用、治療 貧血、增進(jìn)生殖能力、降低血醇濃度、抗過敏、抗癌等。
此外，高麗人參以及紅參(RedGinseng)是根據(jù)加工方法來區(qū)分的，所 謂的高麗人參在沒有經(jīng)過加工的情況下，將干燥后的高麗人參稱為干參，將 未干燥的高麗人參稱為水參。紅參是通過將高麗人參蒸制并干燥，使得水分 含量為14%以下，在制備過程中促進(jìn)茶色化反應(yīng)，形成顯示為深茶褐色的顏 色的硬質(zhì)的形態(tài)，并保持為圓形的高麗人參。因此，高麗人參在含有75%左 右的水分的水參的狀態(tài)下，難以長期保存，在流通狀態(tài)中由于微生物污染引 起腐敗、或高麗人參自身含有的各種酶使得高麗人參成分發(fā)生分解；而紅參 具有通過加工干燥后水分減少，可以防止細(xì)菌、發(fā)霉以及微生物的污染，且 體積和重量減少，容易保存、運(yùn)送的優(yōu)點(diǎn)。由于作為高麗人參的代表性的有 效成分的皂苷的定量方法和質(zhì)量管理的發(fā)展，從而可以在加工過程中最大限 度地抑制皂苷的分解。除了皂苷之外，還能進(jìn)一步生成麥芽醇、人參皂苷 Rh2等的有效成分。g卩，高麗人參的主要成分為皂苷，紅參是加工后未改變 功效的高麗人參。
紅參尤其對于中樞神經(jīng)具有鎮(zhèn)靜作用和興奮作用，作用于循環(huán)系統(tǒng)具有 預(yù)防高血壓和動(dòng)脈硬化的效果，另外，能使造血作用和血糖值降低，保護(hù)肝， 作用于內(nèi)分泌系統(tǒng)間接地對性功能和生殖功能有效，具有抗炎以及抗腫瘤作用，有防御放射線的效果、起保護(hù)及柔滑皮膚的作用。此外，在紅參的效果
中重要的是作為適應(yīng)素(adaptogen)效果來增加對于來自周圍環(huán)境的各種有 害作用的溢淚病、各種壓力等的防御能力，使得身體更容易地適應(yīng)的效果。 目前為止，對紅參的成分以及藥理功效，韓國國內(nèi)外已經(jīng)有了很多研究，尤 其是報(bào)道了紅參具有抗氧化活性(，* > 3 > 7 >《t'、高麗人參學(xué)會(huì) 誌,24(1)，29國34，2000)。
此外，本發(fā)明人之前已經(jīng)研究了對HIV-1感染患者進(jìn)行單獨(dú)的高麗人參 (KRG， Korean red ginseng)治療(參見參考文獻(xiàn)1-4)、 1991年以后的并用 高麗人參與疊氮胸苷(ZDV,zidovudine)的治療(參見參考文獻(xiàn)5)、以及1997 年以后的并用高麗人參與非常強(qiáng)的高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的治療(HAART， highly active antiretroviral drug therapy)(參見參考文獻(xiàn)6)。經(jīng)過臨床學(xué)應(yīng)用 期間(參見參考文獻(xiàn)l-7)， KRG治療與獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的 進(jìn)展速度(progression rate)之間表現(xiàn)出顯著的逆向相關(guān)關(guān)系(參見參考文 獻(xiàn)8)。 HIV-1基因的變異率與KRG治療存在相反關(guān)系。而且，KRG治療能 延緩對疊氮胸苷的抗藥性的發(fā)展。根據(jù)本發(fā)明人的研究結(jié)果，KRG治療與 治療法或患者等的其它的特性無關(guān)，可以減緩CD4 T細(xì)胞的減少。分析了 KRG與HARRT的組合治療后發(fā)現(xiàn)，沒有發(fā)生耐藥突變，通過該組合治療能 夠進(jìn)行一貫的病毒調(diào)節(jié)(參見參考文獻(xiàn)7)。
本發(fā)明人的研究團(tuán)體(cohorts)在此說明從長期間疾病未惡化的人 (long-term nonprogressor; LTNPs)或者長期生存者(long-term surviviors; LTSs)可見的獲得性免疫缺陷綜合癥的緩慢進(jìn)展的原因。最近，本發(fā)明人對 持續(xù)接受KRG治療的10個(gè)LTS的nef基因的大規(guī)模缺陷的比例與KRG攝 取時(shí)間之間的關(guān)聯(lián)性作了報(bào)道(參見參考文獻(xiàn)9)。比較這10個(gè)長期生存者 的nef基因中擴(kuò)增的生成物，結(jié)果在gag區(qū)域和5'LTR區(qū)域擴(kuò)增的生成物中， 前病毒全長的堿基序列以高比例表現(xiàn)出兩個(gè)帶(band)(野生型以及未縮短的帶(band))。
對于LTNP中(參見參考文獻(xiàn)10-18)的nef基因大規(guī)模缺陷已經(jīng)進(jìn)行了 許多研究，但是，至今為止僅在幾種場合報(bào)道了在gag區(qū)域和5，LTR區(qū)域中 大規(guī)模缺陷的相關(guān)性。更具體地說，已經(jīng)報(bào)道了在感染了 HIV亞型C的一 個(gè)LTS的gag基因中的三個(gè)氨基酸密碼子中的一個(gè)的缺陷(參見參考文獻(xiàn) 19)。在其它的研究中，24個(gè)沒有治療經(jīng)歷的人中的兩個(gè)在5，LTR中表現(xiàn)為 16bp的缺陷和9bp的小缺陷(參見參考文獻(xiàn)20)。但是，沒有關(guān)于維持長期 間未惡化的狀態(tài)或fflV感染的緩慢進(jìn)展與5'LTR和gag區(qū)域的基因缺陷之 間的可能的聯(lián)系的報(bào)道。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在研究AE)S的治療方法時(shí)，通過對感染有HIV-1的患者長期 給予紅參以確認(rèn)HIV-1中的5，LTR和gag基因的缺陷，從而完成本發(fā)明。
本發(fā)明的目的是提供一種含有作為有效成分的高麗人參的用于使HIV-1 具有5'LTR和/或gag基因缺陷的藥物組合物。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種含有作為有效成分的高麗人 參的用于使HIV-1具有5'LTR和/或gag基因缺陷的藥物組合物。
下面詳細(xì)說明本發(fā)明。
本發(fā)明特征在于查明了高麗人參的攝取能使得與病毒成長和AIDS病因 有密切聯(lián)系的fflV-l中的5，LTRygag基因產(chǎn)生缺陷。
優(yōu)選情況下，本發(fā)明的特征在于所述高麗人參為紅參。 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，為了確定在5'LTR和gag區(qū)域的大規(guī)模缺陷 (gA)的發(fā)生與KRG攝取之間是否存在關(guān)聯(lián)性，本發(fā)明人從用KRG (總 共13,364士5，364g)治療12年以上的10個(gè)長期生存者(long-term surviviors; LTSs)和未攝取或少量攝取高麗人參(總共1，436土l，027g)的8個(gè)長期生 存者(對照組)中檢査了圍繞該5，LTR和gag區(qū)域的1,125個(gè)堿基序列。上 述10個(gè)LTS中，在80個(gè)外周血單核細(xì)胞(PBMC)樣品中獲得189個(gè)PCR 產(chǎn)物，總共80個(gè)PBMC中的44個(gè)(55%)與189個(gè)PCR產(chǎn)物中的71個(gè)(37.6 %)表現(xiàn)出大規(guī)模缺陷(gA )。在10個(gè)LTS中發(fā)現(xiàn)55%的PBMC與37.6X的PCR產(chǎn)物，但是，8個(gè)對照組LTS的值分別為30.3%和14.8%。這樣 的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，且P可以為0)。此外，未服用紅參的28 個(gè)一般對照組患者的缺陷基因比例以PBMC和PCR產(chǎn)物為基準(zhǔn)分別為13.3 %和8.3% (參考實(shí)施例3，圖1至圖3)。
因此，通過向個(gè)體給予紅參可以誘導(dǎo)HIV-1中的5，LTR/gag基因產(chǎn)生缺 陷，從而可以在AIDS的預(yù)防以及治療中起作用。
用作本發(fā)明的藥物組合物的有效成分的紅參可以通過公知的方法制備。 一般情況下，紅參是經(jīng)過在一定的溫度條件下對水參(水分約75%)進(jìn) 行水蒸氣蒸制的蒸煮階段以及對蒸煮后的水參進(jìn)行干燥的干燥階段而制得 的。將這樣制得的紅參進(jìn)行加熱提取，制得紅參提取液，將該紅參提取液濃 縮，可以制得紅參濃縮液。
另外，本發(fā)明中，上述紅參提取液或濃縮液可以單獨(dú)使用，也可以加入 一種以上的藥學(xué)上允許的載體、賦形劑或稀釋劑，按照常規(guī)的方法進(jìn)行制劑 化后使用。上述"藥學(xué)上允許"是指生理學(xué)上允許，是指在對人體進(jìn)行給藥 時(shí)， 一般不會(huì)引起腸胃障礙、頭暈等的過敏反應(yīng)或與此類似的反應(yīng)。此外， 如上所述的制劑化的本發(fā)明的紅參可以通過適當(dāng)?shù)慕o藥途徑進(jìn)行給藥。適當(dāng) 的給藥途徑可以是口服給藥。
優(yōu)選以粉末、顆粒、片劑、丸劑、糖衣片劑、膠囊劑、液體制劑、凝膠 劑、漿劑、懸濁液等的用于口服給藥的制劑的形態(tài)按照本領(lǐng)域公知的方法進(jìn) 行制劑化。例如，口服用制劑是通過將活性成分與固體賦形劑混合后，將其 粉碎并添加適當(dāng)?shù)闹鷦┖?，加工成顆?；旌衔?，從而可以獲得片劑或糖衣片 劑。適當(dāng)?shù)馁x形劑例如可以為包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露 醇、木糖醇、赤蘚糖醇以及麥芽糖醇等在內(nèi)的糖類，包括玉米淀粉、小麥淀 粉、米淀粉以及土豆淀粉等在內(nèi)的淀粉類，包括纖維素、甲基纖維素、羧甲 基纖維素鈉以及羥丙基甲基纖維素等在內(nèi)的纖維素類，包括明膠、聚乙烯吡咯垸酮等在內(nèi)的填充劑。此外，根據(jù)情況也可以添加包括交聯(lián)聚乙烯吡咯烷
酮、瓊脂、海藻酸或海藻酸鈉(SodiumAlginate)等在內(nèi)的崩解劑。另外， 本發(fā)明的藥物組合物還可以含有抗絮凝劑、潤滑劑、濕潤劑、香料、乳化劑 以及防腐劑等。此外，作為本發(fā)明的藥物組合物的有效成分的紅參可以商購 得到。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中使用了韓國人參公社銷售的紅參粉末膠囊。
本發(fā)明的藥物組合物可以用于對哺乳動(dòng)物，尤其是包括人在內(nèi)的動(dòng)物進(jìn) 行給藥。優(yōu)選以有效量對感染有HIV-1的患者進(jìn)行給藥。上述"有效量"是 指對于在體外或者生物體內(nèi)使得HIV-l中的nef基因產(chǎn)生缺陷的有效果的量。
本發(fā)明的藥物組合物的有效量需要考慮給藥途徑、治療次數(shù)、治療必要 的個(gè)體的年齡、體重、健康狀況、性別、疾病的嚴(yán)重度、飲食以及排泄率等 多種因素，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)特定的用途來確定適當(dāng)?shù)挠行Ыo藥量。 優(yōu)選情況下，本發(fā)明的含紅參的藥物組合物的有效量，男性為50-100毫克/ 千克/天，女性為20-70毫克/千克/天。
本發(fā)明的藥物組合物可以在個(gè)體診斷后進(jìn)行持續(xù)給藥來延緩AIDS疾病 的發(fā)展。
另外，本發(fā)明中，上述5'LTR和/或gag基因的缺陷可以定義為具有提 前終止密碼子(premature stop codon)、缺少起始密碼子(initiation codon)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，從10個(gè)LTS生成的擴(kuò)增產(chǎn)物中觀察到如非 蛋氨酸起始密碼子、G至A超變異(hypermutation)引起的提前終止密碼子、 以及小缺陷的基因缺陷(實(shí)施例4)。在各個(gè)患者以及10個(gè)LTS內(nèi)，缺陷、 重復(fù)或插入的大小不完全相同。即使在8個(gè)對照組LTS中，也觀察到了提前 終止密碼子、非蛋氨酸起始密碼子引起的基因缺陷(圖4)。
優(yōu)選情況下，通過本發(fā)明的方法產(chǎn)生的缺陷的5'LTR和/或gag基齒可 以表示為如下的序列GenBank登錄號為EF 370172， EF 370173， EF 370175， EU 047612， EF 370184， EF 370186， EF 370187， EF 370188， EF 370191，EF 370192， EF 370193， EF 370196， EF 370197， EF 370199， EF 370201， EF 370200， EF 370202， EF 370205， EF 370207， EF 370211， EF 370213， EF 3702115, EF 3702116， EF 3702118， EF 370219， EF 370221， EF 370223， EF 370224， EF 370225， EF 370226， EF 370227， EF 370228， EF 370231, EF 370235， EF 370237， EF 370239， EU 047647， EF 370245, EF 370250， EF 370251， EF 370252， EF 370253， EF 370256， EF 370259, EF 370262， EF370261, EF370265, DQ295196, EF370275, EF370276, EF370277, EF 3702778， EF 370279, EF 370282， EU 047673， EF 370283， EF 370285， EF 370286， EF 370287， EF 370288， EF 370292。
如上所述，本發(fā)明的藥物組合物通過對HIV感染個(gè)體進(jìn)行給藥，可以 誘導(dǎo)HIV-1具有5'LTR和/或gag基因缺陷。因此，本發(fā)明可以用于AIDS 的預(yù)防和治療。


圖1是表示未進(jìn)行抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療、給予最小量的KRG或不給予 KRG的8個(gè)對照組LTS (圖lk~r)和接受最大量的KRG給藥的10個(gè)LTS (圖la~j)的CD4 T細(xì)胞數(shù)的變化的圖。給予紅參期間利用條(bar)來表 示。三個(gè)的PCR反應(yīng)伴隨著一個(gè)樣品的擴(kuò)增，5'LTR和gag基因的序列中使 用的樣品與表示5，LTR和gag基因大規(guī)模缺陷的樣品分別在下部以向下箭頭 和向上箭頭表示。在兩個(gè)組中，CD4 T細(xì)胞數(shù)在IO年后減少。由此，除了 KRG給藥量，兩個(gè)組之間沒有顯著的差別。
圖2是表示從最初確診的3個(gè)LTS得到的外周血單核細(xì)胞中的5'LTR 和gag的序列分析的圖。分離通過1%瓊脂糖凝膠的電泳進(jìn)行擴(kuò)增的產(chǎn)物。 來自患者87-05、 89-17、 90-05的PCR產(chǎn)物分別以道(lane) 1-10、 11-18、 19-31來表示?；颊?7-05具有4種野生型(wildtype，道1、 3、 6、 9)、與3個(gè)重復(fù)帶(道2、 7、 10)和兩個(gè)單條短帶(道4、 8)那樣的五條短帶。患 者89-17表示7個(gè)短帶(道ll、 12、 13、 14、 16-18)，其中，道14是一條 短帶(14%)。患者90-05具有7條短帶(道19、 22、 23、 24、 26、 29、 30)， 其中，道22、 24、 26、 29、 30表現(xiàn)為一條短帶(71%)。 (M:標(biāo)記，WT:野生型帶(wild type band))
圖3是表示比較3組大規(guī)模缺陷頻率的圖。表示大規(guī)模缺陷的外周血單 核細(xì)胞樣品的比例，KRGLTS (55%)不僅比其它的28個(gè)患者(13.3%)高， 而且比9個(gè)對照組LTS的26.7%高。而且，對大規(guī)模缺陷陽性的PCR產(chǎn)物 的比例，給予了 KRG的IO個(gè)LTS (37.6%)不僅比其它的28個(gè)患者(8.3 %)顯著地高，而且比8個(gè)對照組LTS的13.9%顯著地高。28個(gè)患者中還 包括87-05和90-50的妻子。而且，他們的一部分即使在確診為HIV-1之后 未超過10年，也可能成為LTS。
圖4是表示感染了 HIV-1的10個(gè)LTS中代表性的部分gag蛋白質(zhì)的預(yù) 想氨基酸序列的圖。來自美國的非進(jìn)展患者的gag蛋白質(zhì)的共同氨基酸序列 顯示在最上列(參見參考文獻(xiàn)23)，而且10個(gè)LTS的預(yù)想序列如下所示。 點(diǎn)(dot)表示序列的相同部分，條(bar)表示除變異部分之外的部分缺陷 或大規(guī)模缺陷。另外，問號表示提前終止密碼子。氨基酸序列由一個(gè)文字編 碼表示。各序列的出處由各患者編碼(最初兩位數(shù)字表示HIV確診年度，連 字符后的兩位數(shù)字表示在韓國向各個(gè)患者分配的固有的號碼)進(jìn)行確認(rèn)。各 自的GenBank號碼對應(yīng)的樣品的日期如圖7所示。圖7中看不到在gag基因 中不含缺陷的7種堿基序列。
圖5是表示感染有HIV-1的18個(gè)LTS的臨床學(xué)特征的表。除了過去的 一年，LTS中的患者91-20的順應(yīng)度與90-05同樣是最好的，而且他的實(shí)際 KRG服用量通過個(gè)人購買達(dá)到了 22，422g以上?；颊?1-22和91-23是由于 接受了 91-20提供的血液而被感染HIV-1的。除了 LTS 87-05，所有的患者為感染有HIV-1亞型B的韓國分支(subclade)。
圖6是表示18個(gè)LTS以及28個(gè)非KRG給藥患者的5'LTR/gag基因的 大規(guī)模缺陷的特征。
圖7是表示與nef基因的大規(guī)模缺陷相比較，5'LTR/gag基因的大規(guī)模 缺陷的頻率的表。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對本發(fā)明作更詳細(xì)的說明。但是，以下實(shí)施例是用于對 本發(fā)明進(jìn)行舉例說明的例子，本發(fā)明并不受以下實(shí)施例的限定，可以進(jìn)行各 種修改以及改變。
實(shí)施例1
實(shí)驗(yàn)對象以及KRG治療
研究組包括攝取最大量KRG的10個(gè)長期生存者(LTSs;long-term surviviors)， 8個(gè)對照組LTS， 28個(gè)未攝取KRG的HIV感染患者。
本研究中，10個(gè)LTS已經(jīng)在本發(fā)明人的以前的研究中進(jìn)行了詳細(xì)說明 (參見參考文獻(xiàn)9)。上述10個(gè)LTS均在1987年至1996年3月間被確診， 在本研究中，餘了一個(gè)患者(93-04)之外，對其他患者均未給予任何的抗 逆轉(zhuǎn)錄病毒治療。該患者(93-04)在1993年4月至1997年8月間斷地使 用了 ZDV (日劑量200mg或300mg)。
8個(gè)對照組LTS由本發(fā)明人的研究團(tuán)體(cohorts)選擇。被分到上述對 照組LTS中的患者在1996年之前被診斷為感染有HIV-1，他們在沒有進(jìn)行 強(qiáng)的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的情況下，使用了最小劑量(1，526士l,183g)的 KRG或者完全不使用KRG (患者89-05完全未使用KRG)。唯一一個(gè)患者 91-23從1993年4月至1999年8月使用了 ZDV。患者89-05在1997年去了其它國家，因此從本發(fā)明的研究樣本中刪除。在8個(gè)對照組LTS中，包括接 受了長期生存者91-20輸血的兩個(gè)受血者(recipients,患者91-22和91-23)。 患者89-26和92-23抵制攝取KRG?；颊呙?01為進(jìn)行了 83次有償提供血 漿的血漿提供者。該患者90-01被記作提供者0 (參見參考文獻(xiàn)21)。因此， 在對10個(gè)高KRG攝取LTS和8個(gè)對照組LTS進(jìn)行比較時(shí)，最基本的特征 (baseline characteristics )是相同的。
換言之，10個(gè)LTS和8個(gè)對照組LTS之間，除了 KRG的攝入量不同之 外，基本的疾病進(jìn)展速度(progression rate)或CD4 T細(xì)胞數(shù)沒有顯著的差 別。
此外還調(diào)査了其他28個(gè)對照組患者。這28人中也包括87-05和90-50 的妻子。這28個(gè)患者中的一部分為長期生存者。但是，他們是在1997年以 后被確診的，因此，不包括在長期生存者組中。各參加者提供了同意書。
對感染有HIV-1的患者進(jìn)行KRG治療是從1991年下半年在韓國的NIH 開始的。實(shí)驗(yàn)中使用的KRG為韓國人參公社銷售的紅參粉末膠囊。對各個(gè) 患者的KRG的一日給藥量，男性為5.4g (—天服用三次，每次六粒300mg 的膠囊)，女性為1.8g。各患者的KRG給藥時(shí)間如圖1所示。
10個(gè)LTS服用的紅參的平均劑量為在155±28個(gè)月期間為13，364± 5，364g， 8個(gè)對照組LTS服用的紅參的平均劑量為在132±29個(gè)月期間為 1,436土l,027g (圖5)。在10個(gè)LTS和8個(gè)對照組LTS中，KRG的年劑量 各自為l,035g和131g。在KRG攝入水平中，7.9倍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.001)。
實(shí)施例2
CD4 T細(xì)胞數(shù)和血漿HIV-1 RNA復(fù)制水平(copy level) 間隔3個(gè)月至6個(gè)月后，對實(shí)施例1的各患者進(jìn)行采血，分別將各樣本 中的外周血單核細(xì)胞和結(jié)合有藻紅蛋白(phycoerythrin， PE)以及異硫氰酸熒光素(FITC)的與CD4抗原對應(yīng)的抗體進(jìn)行培養(yǎng)(Simultestreagent;Becton Dickinson,San Jose，CA，USA ) 。 CD4 T細(xì)胞的水平通過FACScan (Becton-Dickinson)流式細(xì)胞儀(flow cytometry)進(jìn)行測定。血漿的HIV-1 RNA 、濃度通過Amplicor HIV-1 Monitor kit(Roche Diagnostics,Branchburg，NJ) 進(jìn)行測定(參見參考文獻(xiàn)7)。
每6個(gè)月目測攝入了紅參的10個(gè)LTS和8個(gè)對照組LTS的CD4 T細(xì)胞 數(shù)，結(jié)果與圖l所示相同。
接受最大紅參治療給藥量的10個(gè)LTS的CD4 T細(xì)胞數(shù)從最初測得的 555±208/ul顯著地減少到168±29個(gè)月后測定的245±160/ul (—年減少22/ul， 圖la至圖lj)。此外，8個(gè)對照組LTS的CD4 T細(xì)胞數(shù)從最初測得的 574±222/ul減少到132±29個(gè)月后測定的353±297/ul (—年減少20/ul，圖lk 至圖lr)。
可以確認(rèn)在兩個(gè)組中CD4T細(xì)胞數(shù)在IO年中均以類似的方式減少。 實(shí)施例3
部分5'LTR區(qū)域(region)和gag基因的擴(kuò)增
前病毒DNA從實(shí)施例2中得到的未培養(yǎng)的PBMCs中提取。通過利用 了第一輪弓l物(first round primer) CE23 (5'陽tgtggatctaccacacacaaggctactt-3'; 46至73;序列號l)、 514 (5'國tccagaatgctggtagggtatac-3'; 1,617至1,640;序 列號2)、第二輪引物CE1 (5'-cgagagctgcatccggagtacta-3'; 297至319;序列 號3)、 512 (5'誦ctgcagcttcctcattgatggtc國3'; 1,398至1,420;序列號4)、第三輪 引物501 (5'-gtgtggcctgggcgggactg-3'; 380至399;序列號5)以及510 (5'-gatgtaccatttgcccctgga-3'; 1，202至1，222;序列號6)的雙重(極少的三 重)巢式聚合酶鏈反應(yīng)(nested PCR)，從297號至1,421號(在此以及以下， 編號來源于HIV NL4-3的序列)的1,125bp的PCR產(chǎn)物由各樣品擴(kuò)增(上述從297號至1,421號的位置為代表部分的5，LTR部分和gag基因的部分)。
含陰性對照組的各樣本一次進(jìn)行的最大PCR反應(yīng)為4個(gè)，而為了擴(kuò)增 nef基因，含陰性對照組的各樣本一次進(jìn)行的最大PCR反應(yīng)為5個(gè)。精制PCR 產(chǎn)物，直接排序。PCR有無污染通過PCR產(chǎn)物的物理分離來進(jìn)行監(jiān)控，PCR 產(chǎn)物的物理分離通過BLAST檢索、由人工排列(manual alignment)進(jìn)行的 氨基酸密碼子比較以及系統(tǒng)分析的各手續(xù)來進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差來表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)意義用SPSS package version 12.0進(jìn)行雙尾t檢驗(yàn)(Student's two-tailed West)以及卡方檢驗(yàn) (Chi國square test)來確認(rèn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果，由在不同的時(shí)間點(diǎn)從10個(gè)LTS獲得的80個(gè)PMBC樣品擴(kuò) 增成189個(gè)PCR產(chǎn)物(圖la至圖lj)。在大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)，所有的10個(gè)LTS 在5'LTR/gag基因區(qū)域表現(xiàn)出gA (圖1)。 80個(gè)樣本中的44個(gè)(55%)觀察 到缺陷(圖2)。 189個(gè)PCR產(chǎn)物中，71個(gè)(37.6%)表現(xiàn)出gA5'LTR/gag。 其中，23個(gè)(32.4%)的擴(kuò)增僅表現(xiàn)為一條短帶(short band),沒有野生型 基因。71個(gè)的gA5'LTR/gag的特征在圖7中進(jìn)行了概括。
5個(gè)PCR產(chǎn)物(2007年1月從患者87-05、 2001年7月從患者89-17、 1993年10月從患者90-05、以及2006年2月和2004年5月從患者92-13獲 得)和2個(gè)PCR產(chǎn)物(1993年10從患者90-05獲得的A 86bp和2006年從 患者90-50獲得的A420bp)僅在5'LTR區(qū)域內(nèi)或gag基因內(nèi)分別含有g(shù)A(表 3)。剩余的PCR產(chǎn)物中的缺陷位于5'LTR的兩側(cè)末端的部分(至少含有753 位置；A37bp)和gag基因的起始部分(在HIV-1NL43中的818號位置的A 29bp)。換言之，缺陷在gag基因的起始密碼子的附近為66bp以上。
因此，在5'LTR區(qū)域的gA的比例為36.5X (69/189)，基于gag基因的 gA的比例為34.9% (66/189)。這說明了 KRG給藥對5'LTR的影響大于對 gag基因的影響。除去任何樣品都沒有用的患者91-20和93-60之外，在KRG攝取開始 后5'LTR和gag區(qū)域的gA的最初觀察早于nef基因缺陷的最初觀察。從KRG 的攝取開始至最初gA觀察的中間時(shí)間為26個(gè)月(19個(gè)月至101個(gè)月)。這 比nef基因缺陷觀察所要求的時(shí)間更短。
患者87-05同時(shí)感染了來自在國外產(chǎn)生的污染的血液凝固因子9的 HIV-1亞型B以及HCV。該患者在1994年6月開始進(jìn)行KRG給藥。雖然 在所有的擴(kuò)增物中有9bp的小缺陷，但是在10個(gè)LTS中，只有該患者不表 現(xiàn)gAnef (參見參考文獻(xiàn)9)。令人驚訝的是，本發(fā)明人在1997年4月得到 的最初有用的樣品中觀察到了 gA，從12個(gè)樣品中的4個(gè)得到的36個(gè)PCR 產(chǎn)物中觀察到了總共7個(gè)gA (圖la至圖lj，圖5)。該患者從2007年4月 開始未表現(xiàn)出任何的與獲得性免疫缺陷綜合癥相關(guān)的癥狀，這是韓國首例未 經(jīng)過任何的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療而生存20年以上的患者。
患者89-17在1991年12月開始進(jìn)行KRG給藥。但是對于給藥的順應(yīng) 度不是始終如一的。1993年7月報(bào)告的一個(gè)gA是一個(gè)例外。原因?yàn)锳 917bp 被pol基因(在相反方向NL4-3的4,296號至4,037號)的474bp以及gag 基因(2，029bp至1,838bp)的終止部分替換。該患者在2002年2月幵始進(jìn) 行HARRT治療，CD4T細(xì)胞數(shù)在2007年4月為513/ul。
患者90-05在1990年2月確診為HIV-1感染，在1991年12月開始攝 取KRG。該患者在本研究中對于KRG治療表現(xiàn)出最好的順應(yīng)度。除了供給 的21，522g的KRG，該患者還攝取了自己持有的KRG。在95%的順應(yīng)度下 KRG的日劑量為6.0g (—天兩次，每次10粒300mg的膠囊)。gA的最初觀 察相比在2001年1月(KRG給藥開始后第111個(gè)月，共攝取KRG12,012g) 的gAnef最初觀察要早87個(gè)月(圖6a、 6b、 6c)。 gA的例子和剩余7個(gè)LTS 的詳細(xì)情況如圖1以及圖6所示。
此外，將從追加的8個(gè)對照組LTS得到的33個(gè)PBMC樣品的88個(gè)PCR產(chǎn)物進(jìn)行了擴(kuò)增。13個(gè)gA (擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物中的14.8%)存在于10個(gè) PBMC樣品中(總共的30.3%)。在PBMC樣品和PCR產(chǎn)品上，10個(gè)LTS 相比8個(gè)對照組LTS，含有顯著高的比例的gA(前者P<0.05，后者PO.0001)
(圖3)。
此外，將在臨床學(xué)階段無關(guān)地從未給予KRG的28個(gè)患者中得到的30 個(gè)PBMC樣品的60個(gè)PCR產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增。5個(gè)gA (擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物中 的8.3%)存在于4個(gè)PBMC中(總共的13.3%)。
實(shí)施例4
遺傳缺陷和小缺陷
除了大規(guī)模缺陷之外，本發(fā)明人觀察到了如下的基因缺陷，例如，非蛋 氨酸起始密碼子、G至A超變異(hypermutation)引起的提前終止密碼子以 及小缺陷。在IO個(gè)LTS中，患者87-05在4個(gè)序列(EU047601、 EU047605、 EU047607、 EU047609)中顯示出提前終止密碼子，患者89-17也含有作為 提前終止密碼子和起始密碼子(GenBankEF370193)的異亮氨酸?；颊?0-18 在gag基因中具有6bp的插入，患者92-13具有102bp (GenBankEF370252) 的兩個(gè)重復(fù)(duplications)、在5'LTR區(qū)域的159bp的缺陷、以及G至A超 變異(Genbank EF370256)，另外該患者在327和328區(qū)域(GenBank EF370258)具有6bp的插入(圖4)。
在8個(gè)對照組LTS中，患者91-22在提前終止密碼子或3個(gè)序列 (GenBankEF370314、 EU047654、 EU047655)中具有作為起始密碼子的異 亮氨酸?；颊?9-26在一個(gè)序列(EU047635)中具有兩個(gè)提前終止密碼子。
實(shí)施例5
隨著CD4 T細(xì)胞數(shù)而不同的大規(guī)模缺陷的頻率本發(fā)明人分析了隨著CD4T細(xì)胞數(shù)而不同的大規(guī)模缺陷的頻率。其中， 最好將IO個(gè)LTS的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物按照CD4 T細(xì)胞數(shù)200/ul以下、200-400/ul、 400/ul以上進(jìn)行分組。在給予了 KRG的10個(gè)LTS中大規(guī)模缺陷的頻率為 47.4% (9/19)、 51.8% (14/27)以及61.8% (21/34),這表明對CD4 T細(xì)胞 數(shù)的若干依賴性。但是，在8個(gè)對照組LTS中，大規(guī)模缺陷比例為44.4%(4/9)、 20% (4/20)、 50% (2/4),此外未給予KRG的28個(gè)HIV-1陽性患者為18.2% (2/11)、 14.3% (1/7)、 8.3% (1/12)。
討論
本發(fā)明人在韓國長期關(guān)注LTS或LTNP的健康，其結(jié)果即使不存在像 CCR5中的32bp缺陷這樣的有益的寄主因子(host factor)或韓國人的 HLA-B57,本發(fā)明人可以對從1993年12月31日開始確診的323個(gè)HIV-1 感染者中的多數(shù)LTS進(jìn)行觀察。
更具體地說，9個(gè)fflV-l感染患者在1987年在韓國被確診，其中三個(gè)患 者仍然存活，該三人均使用單獨(dú)的KRG治療或與HARRT并用。長期生存 者87-05作為這些患者中的一個(gè)，在1996年6月以后開始攝取KRG(圖la)。 這些患者中的其他的兩人從1998年至1999年同時(shí)接受HARRT和KRG治 療，他們的CD4 T細(xì)胞數(shù)從1998年的231/ul、 1999年的6/ul增加至2004 年12月的l,052/ul、 2006年的l,127/ul。
此外，22個(gè)fflV-l患者在1988年被確診，僅有進(jìn)行KRG治療的兩個(gè) 患者(9%)仍然存活?；颊叩腍IV-1亞型為CRP02—AG,因此該患者不包 括在本發(fā)明的研究中，但是，該患者被分到CD4 T細(xì)胞數(shù)為500/ul以上的 LTNP中。1997年以后確診的多數(shù)患者同時(shí)進(jìn)行KRG治療和HARRT治療， 他們不存在耐藥突變(drug resistance mutations),這些患者對該并行治療法 表現(xiàn)出良好的反應(yīng)。本發(fā)明人通過以前的研究，己經(jīng)報(bào)道了 fflV-l感染患者的KRG治療與 nef基因大規(guī)模缺陷(參見參考文獻(xiàn)9)的高頻率之間有關(guān)聯(lián)，KRG治療能 減緩疾病的發(fā)展(參見參考文獻(xiàn)18)。
本發(fā)明中，對來自各樣品的三個(gè)PCR產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，盡管這比由nef 基因擴(kuò)增的四個(gè)PCR產(chǎn)物少(參見參考文獻(xiàn)9)，但是本發(fā)明人在相同的IO 個(gè)LTS中觀察到，與nef缺陷(樣品的34.3%和PCR產(chǎn)物的18.8%)(參見 參考文獻(xiàn)9)相比較，大規(guī)模缺陷(樣品的55X和PCR產(chǎn)物的37.6X)的 頻率更高(PO.OOOl)。 5'LTR/gag的缺陷頻率比在nef基因缺陷中確認(rèn)的頻 率高1.6倍/2.0倍。在總共80個(gè)樣品中，61個(gè)之前適用于nef基因的擴(kuò)增。 上述61個(gè)樣品中的13個(gè)(21.3%)在兩個(gè)基因中均有大規(guī)模缺陷。尤其是 患者87-05、 89-17、 90-05、 90-50、 96-51在5'LTR/gag基因中比在nef基因 中顯示出顯著高的大規(guī)模缺陷的頻率(P<0.05)(圖5)。此外，顯示出大規(guī) 模缺陷的樣品的比例在接受KRG治療的IO個(gè)LTS中確認(rèn)為37.6%，這比8 個(gè)對照組LTS (14.8%)和28個(gè)fflV-l感染患者(8.3%)明顯要高。而且， 本發(fā)明中，可以確認(rèn)8個(gè)對照組LTS或其他的28個(gè)患者的任何的組中大規(guī) 模缺陷頻率與CD4T細(xì)胞數(shù)之間不存在任何聯(lián)系(實(shí)施例5),根據(jù)該發(fā)現(xiàn)， 可以證明大規(guī)模缺陷和KRG攝取之間的關(guān)系。
上述發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)出與在IO個(gè)LTS中的相對于CD4T細(xì)胞數(shù)的適當(dāng)?shù)囊蕾?性(modest dependency)的良好的比較。接受KRG治療的10個(gè)LTS中一直 堅(jiān)持的患者87-05、 90-05、 92-13、 96-51維持了 CD4 T細(xì)胞數(shù)(圖la、 lc、 lg、 lj)，但是相反最近.1-2年間未堅(jiān)持的患者90-50、 91-20、 93-60的CD4T 細(xì)胞數(shù)很快減少(圖le、 lf、 li)。如上所述，由態(tài)度引起的CD4 T細(xì)胞數(shù) 減少已經(jīng)在患者89-17和90-18中出現(xiàn)(圖lb、 ld)。在超過10年的長時(shí)間 下沒有任何的AIDS相關(guān)癥狀，因此，多數(shù)患者有不注意他們的健康狀況或 無視KRG的攝取的傾向。最近的幾篇論文公開了 LTNP中的全長病毒序列的遺傳特征。Alexander 等(參見參考文獻(xiàn)22)除了在nef基因中之外沒有在其它的基因中發(fā)現(xiàn)缺陷， 而發(fā)現(xiàn)了提前終止密碼子、無規(guī)缺陷(out-of frame deletions)以及整體缺陷。 不常見的多形性(polymorphism)和nef基因大規(guī)模缺陷在8個(gè)LTNP中被 發(fā)現(xiàn)。此外，Huang等(參見參考文獻(xiàn)23、 24)報(bào)告了 8個(gè)LTS中5'LTR 和gag基因的遺傳性缺陷。在該研究中得到了全長病毒序列，僅在一個(gè)患者 的5'LTR和gag基因中發(fā)現(xiàn)G至A超變異(hypermutations)。最近，Calugi 等在eiw基因(與nef基因相鄰的基因)中確認(rèn)了大規(guī)模缺陷(參見參考文 獻(xiàn)25)。 Blankson等(參見參考文獻(xiàn)26)在比50copies/mL少的血漿RNA 的病毒負(fù)荷量(viral loads)下沒有在抑制因子(supressor)的HIV-l全長的 堿基序列中發(fā)現(xiàn)任何的大規(guī)模缺陷。
HIV-1基因表達(dá)通過在含有TATAbox、轉(zhuǎn)錄因子NF-kB以及Spl (參見 參考文獻(xiàn)27)的結(jié)合區(qū)域的LTR中的幾個(gè)高保存的順式作用調(diào)節(jié)元件 (cis-acting regulatory elements)進(jìn)行調(diào)節(jié)。人參的某些成分抑制了人體細(xì)胞 株中的NF-kB和Ap-l轉(zhuǎn)錄因子活動(dòng)(參見參考文獻(xiàn)28)。相比HIV-1的其 它部分，LTR部分更有可能受KRG攝取的影響。
本發(fā)明中，在包括患者87-05 (未表現(xiàn)出nef基因大規(guī)模缺陷)的10個(gè) LTS中觀察到5'LTR的大規(guī)模缺陷。而且，觀察到的各個(gè)大規(guī)模缺陷的尺寸 較大，但是僅位于基因內(nèi)的單一位置。本發(fā)明人在得到HIV-1全長堿基序列 時(shí)確認(rèn)了6個(gè)LTS (患者卯-05、 90-18、 90-50、 91-20、 92-13以及96-51) 的env基因大規(guī)模缺陷OlOOObp)(數(shù)據(jù)未圖示)。
因此，不考慮KRG攝取和基因缺陷之間的關(guān)系，盡管本發(fā)明的觀察僅 是在本發(fā)明的研究中獲得的各種有益的因素中的一個(gè)發(fā)現(xiàn)，但是本發(fā)明的結(jié) 果提供了初步數(shù)據(jù)，該初步數(shù)據(jù)是指在5'LTR部分和gag部分的大規(guī)模缺陷 與HIV疾病的進(jìn)展率有顯著聯(lián)系(參見參考文獻(xiàn)1-9)。關(guān)于病毒基因缺陷怎樣影響LTS或LNTP的可能的機(jī)理，本發(fā)明人推斷基因缺陷是KRG的攝 取引起的間接的免疫調(diào)節(jié)(immune modulation)的結(jié)果。眾所周知，高麗人 參以通過Thl細(xì)胞因子(cytokines)的細(xì)胞介質(zhì)性免疫反應(yīng)(cell mediated immune response)為媒介(參見參考文獻(xiàn)29-32)，在HIV-1感染中抑制一般 的免疫活性狀態(tài)(generalized immune activation state)。然而，不給予KRG 的LTS相比感染HIV的其它的28個(gè)患者仍舊具有更高的5'LTR/gag缺陷， 因此KRG攝取可能不是唯一的要素。該發(fā)現(xiàn)證明了在LTS或LNTP的生命 延長中由KRG攝取引起的基因缺陷的重要性。 <堿基序列的結(jié)果(SequenceDATA) >
總共的336個(gè)堿基序列中的178個(gè)已經(jīng)提交給GenBank，并給出了 GenBank登錄號EF370172至EF370349、EU047600至EU047667、EU047670 至EU047676、以及EU047681至EU047693。
工業(yè)實(shí)用性
具體地說，本發(fā)明的藥物組合物可以通過向HIV感染個(gè)體給藥而誘導(dǎo) HIV-l具有5，LTR和/或gag基因缺陷。因此，本發(fā)明提供的藥物組合物可以 用于AIDS的預(yù)防以及治療。序列表
<110> (株)韓國人參公社
蔚山大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)
<120>含有高麗人參的用于使HIV-1具有5'LTR/gag基因缺陷的藥物組合物
<150> KR10-2008-0037555
<151> 2008-04-23
<160> 6
< 170〉 Patentln version 3.3
<210〉 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 第一輪引物CE23
<400> 1
tgtggatcta ccacacacaa ggctactt
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 第一輪引物514
<400〉 2
tccagaatgc tggtagggta tac
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213〉 人工序列
<220>
<223> 第二輪引物CE1
<400〉 3
cgagagctgc atccggagta cta<210> 4
<211〉 23
<212> DNA <213>人工序列
<220〉
<223> 第二輪引物512
<400〉 4 ctgcagcttc ctcattgatg gtc
<210〉 5
<211> 20
<212〉 DNA <213>人工序列
<220>
<223〉 第三輪引物501
<400〉 5 卿ggcctg ggcgggactg
<210> 6
<211〉 21
<212〉 DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>第三輪引物510
<400〉 6 gatgtaccat ttgcccctgg a
權(quán)利要求
1、一種用于使HIV-1具有5’LTR和/或gag基因缺陷的藥物組合物，其特征在于，該組合物含有作為有效成分的高麗人參。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述高麗人參為紅參。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，該組合物用于對 感染有HIV-1的患者進(jìn)行給藥。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，以50-100毫克/千克/ 天的給藥量對男性進(jìn)行給藥，以20-70毫克/千克/天的給藥量對女性進(jìn)行給 藥。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述5'LTR和/或 gag基因缺陷選自具有提前終止密碼子、缺少起始密碼子。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述5'LTR和/或gag 基因缺陷表示為具有以下GenBank登錄號的序列EF 370172， EF 370173，EF 370175，EU 047612，EF 370184，EF 370186，EF 370187，EF 370188，EF 370191，EF 370192，EF 370193,EF 370196，EF 370197，EF 370199，EF 370201，EF 370200，EF 370202，EF 370205，EF 370207，EF 370211，EF 370213，EF 3702115，EF 3702116， EF 3702118， EF 370219， EF 370221，EF 370223，EF 370224，EF 370225，EF 370226，EF 370227，EF 370228，EF 370231,EF 370235，EF 370237，EF 370239，EU 047647，EF 370245，EF 370250，EF 370251，EF 370252,EF 370253，EF 370256，EF 370259，EF 370262，EF 370261，EF 370265，DQ 295196，EF 370275，EF 370276，EF 370277， EF 3702778， EF 370279， EF 370282， EU 047673， EF 370283， EF 370285， EF 370286， EF 370287， EF 370288， EF 370292。
全文摘要
本發(fā)明涉及以高麗人參作為有效成分的用于使HIV-1具有5’LTR和/或gag基因缺陷的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物通過對HIV感染個(gè)體進(jìn)行給藥，可以誘導(dǎo)HIV-1中的5’LTR和/或gag基因的缺陷。因此，本發(fā)明可以用于AIDS的預(yù)防以及治療。
文檔編號A61K36/185GK101564408SQ20081014440
公開日2009年10月28日 申請日期2008年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月23日
發(fā)明者趙泳杰, 鄭有善 申請人:(株)韓國人參公社;蔚山大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)