專利名稱：：燈盞花素注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療心腦血管疾病的中藥制劑，尤其涉及燈盞花素注射液及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：燈盞花素注射液在臨床上用于治療腦中風后癱瘓有很好的療效。其主要成份為燈盞花乙素(野黃芩苷)。現(xiàn)有技術(shù)文獻中公開了許多燈盞花乙素注射液，其中CN1091301公開了一種由燈盞花浸膏加氯化鈉組成的燈盞花注射液，該注射液直接用燈盞花浸膏制成，其中燈盞花乙素的含量較低，而且注射液中還含有多種雜質(zhì)，難以在制藥工業(yè)中應(yīng)用。CN1095934公開了一種由5-30%燈蓋花素水溶性鹽加藥用輔料制成的燈盞花注射液，其中的燈盞花素水溶性鹽是由市售燈盞花素(純度僅為卯％,且還含有燈盞花曱素等其他成分)加堿制成，由于市售燈盞花素含有較多雜質(zhì)，在加堿成鹽時容易使其中含有的酸性雜質(zhì)如鞣酸也與堿締合從而進入注射液中，制成的注射液依然含有較多雜質(zhì)，難以達到理想的治療效果。而且，有些制備工藝中需要使用大孔吸附樹脂進行純化，例如CN03117754.9號專利中，不僅使用大量高純度乙醇進行提取，而且提取后需要通過大孔吸附樹脂進行柱層析純化，在分離過程中還需要使用丙酮等溶劑，導致最后的產(chǎn)品中混雜有少量樹脂等致痛物質(zhì)。傳統(tǒng)的制備方法需使用為藥材重量幾十倍的高濃度乙醇分為多次進行提取，其中，回收乙醇后還需要將水溶液冷凍以除掉雜質(zhì)，最后再加活性炭煮沸除雜，所制備的注射液依然含有較多雜質(zhì)，導致該產(chǎn)品在使用時容易引起疼痛，發(fā)冷，發(fā)熱，皮滲，皮膚瘙癢等不良反應(yīng)。顯然，現(xiàn)有制備方法存在工藝繁瑣，乙醇耗量大，生產(chǎn)周期長等缺陷，并且，盡管進行反復精制也不能除盡注射液中的如鞣酸和樹脂等致痛物質(zhì)，由于傳統(tǒng)方法所制備的燈盞花素注射液中含有一定的致痛物質(zhì)，只能再向注射液中添加一定的止痛物質(zhì)，諸如苯甲醇止痛等，這類止痛物質(zhì)如長期使用有可能造成人體深部肌肉的壞死。由腦中風所致的癱瘓病人需要長期給藥治療，所以，臨床上亟待需要一種不需要添加止痛物質(zhì)的且制備工藝簡捷的燈盞花素注射液。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的之一是提供一種新的燈盞花素注射液，該燈盞花素注射液不含有鞣酸和樹脂等致痛物質(zhì)且有效成份含量高，提高了療效和使用安全性，LDso大幅度提高。本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述燈盞花素注射液的方法。本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種燈盞花素注射液，該燈盞花素注射液含有燈盞花甲素和燈盞花乙素的組合作為活性成分，且每毫升注射液中含燈盞花乙素2-20mg或以上。此外，該燈盞花素注射液不含有有鞣酸和樹脂等致痛物質(zhì)，且每毫升熾灼殘渣低于0.5mg，每毫升重金屬低于百萬分之十。一種制備上述燈盞花素注射液的方法，包括以下步驟(1)將燈盞細辛用濃度(重量)為50-100%乙醇水溶液(100%乙醇指無水乙醇)滲漉提??；收集滲漉液，將滲漉液的pH值用堿液調(diào)至7-12,靜置，過濾，收集濾液，備用；(2)將濾液的pH值用稀鹽酸調(diào)至1-8,回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加壓下用超濾膜(優(yōu)選用分子截留值為1000的超濾膜)反復過濾；(3)收集濾液，控制濾液中總黃酮的含量為l-10mg/ml，另外補加NaCl使濾液中NaCl的含量為0.3-0.9wt%;再一次用超濾膜過濾，將濾液灌封，滅菌，即得。其中，步驟(l)中用乙醇水溶液進行滲漉提取時，乙醇的用量沒有限制，只要可以將有效成分有效地提取出來即可，但通常以沒過藥材為宜，具體量根據(jù)藥材含水量的不同略有差異，但一般為藥材重量的0.5至15倍體積量，優(yōu)選為2至12倍體積量，更優(yōu)選5倍至12倍體積量，即如果藥材為lkg，則乙醇的用量為500ml至15L之間，優(yōu)選2L至12L,更優(yōu)選5L至12L;為了達到更好的制備效果，步驟(l)中所述的滲漉提取按照以下方法進行將燈盞細辛裝入提取罐加70-95%乙醇沒過藥材，在10。C-80。C的溫度條件下(更優(yōu)選為在50。C)保溫一定時間(該保溫時間本領(lǐng)域技術(shù)人員可視情況掌握或調(diào)控，可長可短，對于發(fā)明的效果或?qū)嵤┎粯?gòu)成實質(zhì)性影響；作為參考，可選擇保溫30分鐘-6小時)后滲漉提??；其中，更優(yōu)選的，將出液速度控制在5-50ml/cm2.min(更優(yōu)選為10-20ml/cm2.min);按v/w計，控制出液體積達原料料重量的5-15倍(更優(yōu)選為7-10倍)，至提取液無色為止。步驟(1)中所述的過濾優(yōu)選為用100目的濾布過濾；步驟(1)中將滲漉液的pH值用堿液調(diào)至8-12,進一步優(yōu)選至9-12，更優(yōu)選為9-11;靜置1-20小時；其中，所ii^喊選自無積堿，例如碳酸鈉(Na2C03),碳酸氬鈉(NaHC03)，碳酸鉀，碳酸氬鉀，氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化釣，氧化4丐，碳酸釣，磷酸氫鉀，磷酸苯二鈉，乙醇鈉，三(鞋甲基)氨基甲烷，氨三乙酸鈉等；或者有機堿，例如乙二胺四乙酸四鈉，三乙胺；或者選自精氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸等堿性氨基酸。優(yōu)選的，步驟(2)中將濾液的pH值用稀鹽酸調(diào)至1-7，進一步優(yōu)選為1-5，再進一步優(yōu)選為2-5,最優(yōu)選為2-4;步驟(2)或(3)中所述的超濾膜優(yōu)選為分子截留值為1000的超濾膜進行過濾；步驟(2)中所述的過濾次數(shù)優(yōu)選為兩次以上，更優(yōu)選為過濾三次或者四次，最優(yōu)選為過濾五次。本發(fā)明制備燈盞花素注射液方法可有效除盡鞣質(zhì)等致痛雜質(zhì)，提高有效成份含量(每毫升含燈盞花乙素2-20mg或以上)，乙醇用量少，不需添加止痛劑(苯曱醇)，工藝簡化，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本低，具有良好的經(jīng)濟效益，提高了用藥安全性。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。實施例1取燈盞細辛飲片5kg,裝入滲漉提取器，加50%乙醇沒過藥面，夾套通蒸汽，于80。CM呆溫浸4h，之后從滲漉提取器下方訪文液，上方補加50%乙醇，出液流速控制為20ml/citf.min，至流出液無色為止，得滲漉液40000ml;將滲漉液放冷至室溫，緩緩攪動，滴加20%(重量)Na2C03水溶液至無白色沉淀生成，調(diào)pH=12,靜置6h,用IOO目濾布，離心濾去沉淀，濾液加10%的HCl,回調(diào)pH二7，回收乙醇，至稠膏狀，稠膏加5000ml注射用水，加熱至60。C使溶，過0.45nm微孔濾膜過濾，濾液加壓下過分子截留值為1000的超濾膜，測總黃酮含量二3.2mg/ml(聲丁標準曲線法)，NaCl含量0.2%(AgN03滴定法)，補加NaC142.8g及注射用水1260ml，攪拌溶解測得總黃酮含量2.5mg/ml，NaCl含量0.9%，再用分子截留值為1000的超濾膜過濾一次，得注射液5600ml，灌裝2ml/支，100。C流通蒸汽滅菌40min,得成品2800支。經(jīng)檢測，本實施例所制備的燈盞花素注射液中不含有鞣酸或樹脂等致痛物質(zhì)，其它成分的含量檢測結(jié)果見表1。表1本實施例所制備的燈盞花素注射液檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2取燈盞細辛飲片5kg,裝入滲漉提取器，力口80%乙醇沒過藥面，夾套通蒸汽，于50。C保溫浸3h,之后從滲漉提取器下方放液，上方補加80%乙醇，出液流速控制為5ml/crtf.min,至流出液無色為止，得滲漉液50000ml;將滲漉液》丈冷至室溫，緩緩攪動，滴加20o/o(重量)CaOH水溶液至無白色沉淀生成，調(diào)pH二9.5,靜置4h，用100目濾布，離心濾去沉淀，濾液加10%的HCl,回調(diào)pEK3，回收乙醇，至稠膏狀，稠膏加4500ml注射用水，加熱至60。C使溶，過0.45^im微孔濾膜過濾，濾液加壓下過分子截留值為1000的超濾膜，測總黃酮含量二3.8mg/ml(,丁標準曲線法)，NaCl含量0.2。/。(AgNCV滴定法)，補加NaC142.8g及注射用水860ml,攪拌溶解測得總黃酮含量3mg/ml,NaCl含量0.9。/。，再用分子截留值為1000的超濾膜過濾一次，得注射液5000ml，灌裝2ml/支，100。C流通蒸汽滅菌40min,得成品2500支。經(jīng)檢測，本實施例所制備的燈盞花素注射液中不含有鞣酸或樹脂等致痛物質(zhì)，其它成分的含量檢測結(jié)果見表2。表2本實施例所制備的燈盞花素注射液檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例3取燈盞細辛飲片10kg，裝入滲漉提取器，加90。/。乙醇浸沒藥面，夾套通蒸汽50。C保溫3h后，下部放液，上方不斷補加90%乙醇，出液流速控制在10ml/cnf.min，待流出液無黃色為止，得滲漉液約80000ml;放冷至室溫，緩緩攪動下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成為止，pH=10,靜置4h,用100目濾布離心過濾，除去沉淀，濾液加10%HC1回調(diào)至pH二6，回收乙醇，得稠膏，加8000ml60。C的注射用水攪溶，用0.45pm微孔濾膜過濾，濾液加壓下過分子截留值為1000的超濾膜，對超濾液測總黃酮含量為4.4mg/ml,(,丁標準曲線法)，NaCl含量為0.2%(AgN03滴定法)，補加注射用水2900ml,及NaC181.9g,攪溶后，測得總黃酮含量3.5mg/ml,NaCl含量0.9%，再用分子截留值為1000的超濾膜過濾一次，得注射液9000ml，灌裝，2ml/支，100。C流通蒸汽滅菌40min,得成品4500支。經(jīng)檢測，本實施例所制備的燈盞花素注射液中不含有鞣酸或樹脂等致痛物質(zhì)，其它成分的含量檢測結(jié)果見表3。表3本實施例所制備的燈盞花素注射液檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例4取燈盞細辛飲片10kg，裝入滲漉提取器，力口95%乙醇浸沒藥面，夾套通蒸汽10。C保溫6h后，下部》文液，上方不斷補加95%乙醇，出液流速控制在50ml/cnf.min，待流出液無黃色為止，得滲漉液約9萬ml;放冷至室溫，緩緩攪動下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成為止，pH=10,靜置5h，用IOO目濾布離心過濾，除去沉淀，濾液加10%HC1回調(diào)至pP^5,回收乙醇，得稠膏加8000ml60。C的注射用水攪溶，用0.45pm微孔濾膜過濾，濾液加壓下過分子截留值為1000的超濾膜，對超濾液測總黃酮含量為5mg/ml,(,丁標準曲線法)，NaCl含量為0.2%(AgN03滴定法)，補加注射用水2900ml，及NaC181.9g，攪溶后，測得總黃酮含量4mg/ml,NaCl含量0.9%，再用分子截留值為1000的超濾膜過濾一次，得注射液8000ml，灌裝，2ml/支，IO(TC流通蒸汽滅菌40min，得成品4000支。經(jīng)檢測，本實施例所制備的燈盞花素注射液中不含有鞣酸或樹脂等致痛物質(zhì)，其它成分的含量檢測結(jié)果見表4。表4本實施例所制備的燈盞花素注射液檢測結(jié)果品名燈盞花乙素熾灼殘渣重金屬燈盞花素注射液6mg/ml0.5mg/ml百萬分之九實施例5取燈盞細辛飲片10kg，裝入滲漉提取器，加95%乙醇浸沒藥面，夾套通蒸汽10。C保溫6h后，下部放液，上方不斷補加95%乙醇，出液流速控制在50ml/cm2.min,待流出液無黃色為止，得滲漉液約9萬ml;放冷至室溫，緩緩攪動下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成為止，pH-lO,靜置5h,用100目濾布離心過濾，除去沉淀，濾液加10%HC1回調(diào)至pH二5，回收乙醇，得稠膏加4000ml60。C的注射用水攪溶，用0.45pm微孔濾膜過濾，濾液加壓下過分子截留值為1000的超濾膜，對超濾液測總黃酮含量為10mg/ml以上,(,丁標準曲線法)，NaCl含量為0.2%(AgN03滴定法)，補加注射用水1500ml,及NaC181.9g,攪溶后，測得總黃酮含量8mg/ml,NaCl含量0.9%,再用分子截留值為1000的超濾膜過濾一次，得注射液4000ml,灌裝，2ml/支，100。C流通蒸汽滅菌40min,得成品2000支。經(jīng)檢測，本實施例所制備的燈盞花素注射液中不含有鞣酸或樹脂等致痛物質(zhì)，其它成分的含量檢測結(jié)果見表4。表4本實施例所制備的燈盞花素注射液檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實驗例1本發(fā)明燈盞花素注射液的毒理實驗1、小鼠一次靜脈注射本發(fā)明實施例1制備的燈盞花素注射液，經(jīng)檢測，LD5()為573mg/kg，而作為對照的市售燈盞花素注射液相應(yīng)的LDso為871.23mg/kg。2、小鼠一次腹腔注射本發(fā)明實施例2制備的燈盞花素注射液，經(jīng)檢測，LD50為1303mg/kg，而作為對照的市售燈盞花素注射液相應(yīng)的LDs。為1891.78mg/kg。3、SD大鼠腹腔注射本發(fā)明實施例4制備的燈盞花素注射液90天，無毒劑量為20mg/kg,為臨床推薦最大劑量的20倍；安全劑量為低于40mg/kg,是臨床推薦最大劑量的40倍；中毒劑量為100mg/kg,是臨床推薦最大劑量的100倍。權(quán)利要求1、一種燈盞花素注射液，其特征在于該注射液中含有燈盞花甲素和燈盞花乙素的組合作為活性成分，且每毫升注射液中含燈盞花乙素2-20mg或以上。2、按照權(quán)利要求1所述的燈盞花素注射液，其特征在于該燈盞花素注射液不含有致痛物質(zhì)，且每毫升熾灼殘渣低于0.5mg，每毫升重金屬低于百萬分之十。3、一種制備權(quán)利要求1或2所述燈盞花素注射液的方法，包括以下步驟(1)將燈盞細辛用50-100°/。乙醇溶液滲漉提?。皇占瘽B漉液，將滲漉液的pH值用堿液調(diào)至7-12,靜置，過濾，收集濾液，備用；(2)將濾液的pH值用稀鹽酸調(diào)到1-8，回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加壓下用超濾膜反復過濾；(3)收集濾液，控制濾液中總黃酮的含量為l-10mg/ml，另外補加NaCl使濾液中NaCl的含量為0.3-0.9wt%;再一次用超濾膜過濾，將濾液灌封，滅菌，即得。4、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(l)中在進行滲漉提取時，按V/W計，乙醇溶液的用量為燈盞細辛重量的0.5倍至15倍體積量，優(yōu)選為2倍至12倍體積量，更優(yōu)選為5倍至10倍體積量。5、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(l)中所述的滲漉提取按照以下方法進4亍將燈盞細辛裝入提取罐加70-95%乙醇水溶液沒過藥材，在10°C-80°C的溫度條件下保溫后滲漉提??；優(yōu)選的，在50。C的溫度條件下保溫1-6小時后滲漉提取。6、按照權(quán)利要求5的方法，其特征在于將出液速度控制在5-50ml/cm2.min，優(yōu)選的，將出液速度控制在10-20ml/cm2.min;按v/w計，控制出液量體積達原料料重量的5-15倍，至提取液無色為止。7、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于步驟(l)中將滲漉液的pH值用堿液調(diào)至8-12，進一步優(yōu)選至9-12，更優(yōu)選為9-11。8、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(1)中所述堿選自無積i堿，有才;i4^或堿性氨基酸；其中，所述的無積"喊包括碳酸鈉，碳酸氫鈉，碳酸鉀，碳酸氫鉀，氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鈣，氧化鈣，碳酸鈣，磷酸氫鉀，磷酸苯二鈉，乙醇鈉，三(幾甲基)氨基甲烷或氨三乙酸鈉；所述的有機i威包括乙二胺四乙酸四鈉或三乙胺；所述的堿性氨基酸包括精氨酸、賴氨酸或幾賴氨酸。9、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于步驟(1)中所述的過濾為用100目的濾布過濾。10、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于步驟(2)中將濾液的pH值用稀鹽酸調(diào)至1-7，進一步優(yōu)選為調(diào)至1-5，再進一步優(yōu)選為調(diào)至2-5,最優(yōu)選為調(diào)至2-4。11、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于步驟(2)中所述的過濾次數(shù)為兩次以上，更優(yōu)選為過濾三次或者四次，最優(yōu)選為過濾五次。12、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于步驟(2)或(3)中所述的超濾膜為分子截留值為1000的超濾膜。全文摘要本發(fā)明公開了一種燈盞花素注射液及其制備方法。該注射液含有燈盞花甲素和燈盞花乙素的組合作為活性成分，含燈盞花乙素2-20mg/毫升或以上，不含有致痛物質(zhì)，熾灼殘渣低于0.5mg/毫升，每毫升重金屬低于百萬分之十。其制備方法包括將燈盞細辛用乙醇滲漉提??；收集滲漉液，調(diào)pH值至7-12，靜置，過濾，收集濾液，調(diào)pH值至1-8，回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加壓下用超濾膜反復過濾；控制濾液中黃酮的含量為1-5mg/ml，使濾液中NaCl的含量為0.3-0.9wt％；過濾，灌封，滅菌。本發(fā)明方法可有效除盡鞣質(zhì)等致痛雜質(zhì)，不需添加止痛劑，有效成份含量高，乙醇用量少，工藝簡化，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本低。文檔編號A61K9/08GK101357117SQ20081014664公開日2009年2月4日申請日期2008年9月3日優(yōu)先權(quán)日2008年9月3日發(fā)明者襲開利,郭東宇,韓兆華申請人:郭東宇