專利名稱：一種新型蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，確切地說它是一種新的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑及其制備方法 和用途。
技術(shù)背景-
在藥物研究中發(fā)現(xiàn)，大量藥物是水難溶性的， 一些藥物甚至難溶于有機(jī)溶劑，導(dǎo)致其難 以給藥。在制劑過程中，采用環(huán)糊精包合技術(shù)、表面活性劑增溶、乳劑、微乳及固體分散技 術(shù)等可解決一些難溶性藥物的溶解問題，但仍有大量的藥物由于溶解問題而被放棄使用。
2005年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了 American Pharmaceutical Partners公司開發(fā)的以人血清白蛋白 (HSA)為載體的紫杉醇產(chǎn)品Abraxane， Abraxane具有勝過紫杉醇注射液(Taxol)的顯著 優(yōu)點(diǎn)。該產(chǎn)品是將紫杉醇與人血清白蛋白結(jié)合的一種納米制劑。由于Abraxane的溶解度較紫 杉醇大大提高,且不使用紫杉醇注射液中易導(dǎo)致過敏反應(yīng)的輔料，無需提前給藥預(yù)防其過敏反 應(yīng),可采用標(biāo)準(zhǔn)靜脈輸注導(dǎo)管、以較Taxol高50%的劑量30分鐘內(nèi)靜脈給藥完畢。臨床試驗(yàn) 顯示，Abraxane用于治療經(jīng)蒽環(huán)類藥物輔助聯(lián)合化療失敗或6個(gè)月內(nèi)又復(fù)發(fā)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌 病人,其療效反應(yīng)率和病人存活率均顯著優(yōu)于Taxol。研究顯示Abraxane在快速生長的腫瘤中 可以被動積蓄。Abraxane中紫杉醇納晶保持長時(shí)間穩(wěn)定的原因在于 一方面在于人血清白蛋 白分子間在高壓和高剪切力作用下二硫鍵交聯(lián)在紫杉醇納晶周圍形成一層外殼；另一方面在 于人血清白蛋白分子荷電所形成的空間靜電排斥力。專利(200310123461.X)介紹了 Abraxane 的制備方法。
但是采用專利200310123461.X方法制備以白蛋白為載體的納米制劑尚存在不足由于單 純依靠人血清白蛋白分子間的二硫鍵在高壓和高剪切力作用下重排而使蛋白質(zhì)分子間交聯(lián)， 高壓均質(zhì)的時(shí)間較長， 一方面藥物的穩(wěn)定性會受到影響，特別紫杉醇等熱不穩(wěn)定的藥物易降 解，高壓均質(zhì)器械的損耗也很大；另一方面白蛋白中的二硫鍵數(shù)目有限，因此在藥物納晶周 圍蛋白質(zhì)分子間重排交聯(lián)的比例較小，形成的外殼不穩(wěn)固，藥物納晶在24小時(shí)內(nèi)還是會聚集 成較大顆粒，不利于穩(wěn)定地生產(chǎn)。 發(fā)明內(nèi)容:
本發(fā)明的目的旨在提供一種新型蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑及其制備方法和用途，此新型制 劑采用安全有效的含巰基或二硫鍵的物質(zhì)，幫助蛋白質(zhì)分子間的二硫鍵在高壓和高剪切力作 用下重排而使蛋白質(zhì)分子間加速交聯(lián)和提高交聯(lián)比例。
本發(fā)明所述的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑是一種藥物輸送系統(tǒng)，其特征包括
含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)通過二硫鍵互相交聯(lián)形 成蛋白質(zhì)包衣，其中所述蛋白質(zhì)包衣具有與其締合的游離蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物，其中難溶 性藥物的一部分包含在所述蛋白質(zhì)包衣中，該藥物的一部分與游離的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物 締合，蛋白質(zhì)包衣顆粒的平均直徑不超過1微米。蛋白質(zhì)包衣顆粒是非晶體或結(jié)晶體或兩者 的混合物。
一些蛋白質(zhì)中含有較多的半胱氨酸殘基，在受熱的情況下含有較多巰基或二硫鍵的蛋白 質(zhì)、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)之間可以通過二硫鍵互相交聯(lián)。
本發(fā)明所述的含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)包括下列物質(zhì)的一種或多種白蛋白、免 疫球蛋白、酪蛋白、胰島素、血紅蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、巨球蛋白、纖維連接素、玻 璃連接素纖維蛋白原、脂肪酶等。本發(fā)明優(yōu)選的蛋白質(zhì)是白蛋白，白蛋白包括各種人血清白 蛋白、重組人血清白蛋白、牛血清白蛋白等，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的白蛋白均在本發(fā)明的保 護(hù)范圍之內(nèi)。
本發(fā)明所述的其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)包含本領(lǐng)域技術(shù)人員己知的除蛋白質(zhì)外任意 含有巰基或二硫鍵的可藥用物質(zhì)，其中包括下列的一種或多種半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、 胱氨酸、二巰基丙醇、二巰基丙磺酸、二巰基丙磺酸鈉、二巰基丁二酸、二巰基丁二酸鈉、 青霉胺、巰乙胺、2,3-二巰基乙二酸、1,2-乙二硫醇、巰基殼聚糖、鹽酸半胱氨酸、谷甘胱肽、
N-巰基乙酰絲氨酸、N-乙酰半胱氨酸、輔酶A、 N- (2-巰基丙酰基)-甘氨酸(硫普羅寧)、 巰基乙酸、巰基乙酸鈉、巰基乙酸鈣、巰基丙酸、巰基丙酸鈉、巰基乙醇、巰基乙胺、巰基 丙酸鈣、二硫蘇糖類、鹽酸巰乙胺、泛酰巰基乙胺、含有巰基的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類 藥物等，及它們的各種有機(jī)或無機(jī)鹽、各種異構(gòu)體、各種晶型、各種混合物。
目前用于對蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)優(yōu)選的是胱氨酸、半胱氨酸、乙 酰半胱氨酸、谷甘胱肽、輔酶A、 N- (2-巰基丙?；?-甘氨酸、二巰基丙醇、二巰基丙磺酸、 二巰基丙磺酸鈉、二巰基丁二酸、二巰基丁二酸鈉、青霉胺、巰乙胺以及它們的各種有機(jī)或 無機(jī)鹽、各種異構(gòu)體、各種晶型、各種混合物，它們是非常安全的藥用原料。
本發(fā)明所述的難溶性藥物指在室溫每毫升水中溶解度小于1 mg或1 ^的物質(zhì)，包括(但 不僅限于)下列的一種或多種紫杉垸類、喜樹堿類、長春堿類、阿霉素類、環(huán)孢菌素類、 黃酮類、二氫吡啶類、維A酸類、揮發(fā)油類物質(zhì)或上述物質(zhì)的衍生物中的難溶性藥物。
本發(fā)明所述的藥物輸送系統(tǒng)，它是由難溶性藥物、含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)、其 它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)借助適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑接觸而制備的。更確切的它是由難溶性藥物、 含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)借助適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑通過包
括(但不僅限于)下列的一種或多種組合而制備的擠壓、混合、研磨、均質(zhì)、乳勻、剪切、
碰撞、超聲。本發(fā)明所述的藥物輸送系統(tǒng)制備方法可以更具體地說明如下
(1) 將蛋白質(zhì)溶于水中，必要時(shí)調(diào)節(jié)pH;藥物溶于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中；其它含有巰基或 二硫鍵的物質(zhì)溶于蛋白質(zhì)溶液中或藥物溶液中，混合兩種溶液，攪拌成乳液(該步驟有的藥 物可以沒有)，通過包括(但不僅限于)下列的一種或多種組合操作擠壓、混合、研磨、均 質(zhì)、乳勻、剪切、碰撞、超聲，分離未交聯(lián)到蛋白質(zhì)上的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)(根據(jù)需 要也可以不分離未交聯(lián)到蛋白質(zhì)上的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì))，干燥，即得到本發(fā)明所述的 藥物輸送系統(tǒng)。
或者
(2) 將蛋白質(zhì)溶于水中，必要時(shí)調(diào)節(jié)pH;其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)溶于蛋白質(zhì)溶液 中或適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中，加入適當(dāng)粒度的藥物粉末混合，攪拌成乳液(該步驟有的藥物可以 沒有)，通過包括(但不僅限于)下列的一種或多種組合操作擠壓、混合、研磨、均質(zhì)、乳 勻、剪切、碰撞、超聲，分離未交聯(lián)到蛋白質(zhì)上的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)(根據(jù)需要也可 以不分離未交聯(lián)到蛋白質(zhì)上的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì))，干燥即得到本發(fā)明所述的藥物輸送 系統(tǒng)。
根據(jù)上述的制備方法，制備過程中蛋白質(zhì)與其它含有巰基或二硫鍵的質(zhì)量比為1 : l
100000:1 ，優(yōu)選為10 :1 10000:1。
根據(jù)上述的制備方法，制備過程中蛋白質(zhì)的水溶液濃度為0.001 X 30。/。(w/v,后同)，優(yōu) 選為0.1% 10%。
根據(jù)上述的制備方法，制備過程中其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)的水溶液濃度為0.0001 % 60%，優(yōu)選為0.001 % 10%。
根據(jù)上述的制備方法，必要時(shí)需要調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH,合適的pH范圍為2-8,pH調(diào)節(jié) 劑包括藥學(xué)上可以接受的各種無機(jī)酸、無機(jī)堿、有機(jī)酸、有機(jī)堿、氨基酸。
根據(jù)上述的制備方法，分離未交聯(lián)到蛋白質(zhì)上的含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)可以采用包括 (但不僅限于)下列的一種或多種方法的組合超濾、高速離心、透析等方法，優(yōu)選超濾。 根據(jù)上述的制備方法，溶液的干燥方法可以采用包括(但不僅限于)下列的一種或多種方 法的組合冷凍干燥、噴霧干燥、減壓干燥、常壓干燥，優(yōu)選采用下列的一種或多種方法的
組合冷凍干燥、噴霧干燥和減壓干燥。
根據(jù)上述的制備方法，用于溶解藥物或其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)的溶劑并無特殊限 制，只要有適當(dāng)?shù)娜芙舛燃纯伞＿m合的溶劑實(shí)例包括甲醇、無水乙醇、含一定量水的乙醇、
正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、二甲基亞砜、N,N — 二甲基甲酰胺、N，N — 二甲基乙酰胺、乙酸甲酯、乙酸乙酯、醋酸異丙酯、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、甲
苯、四氫呋喃、1,4 一二氧六環(huán)、二甲氧基乙垸、二氯甲烷、二氯乙垸、三氯甲烷、四氯甲 烷、乙醚等，這些溶劑可能單獨(dú)使用或兩種或多種溶劑聯(lián)合使用。優(yōu)選自下列溶劑的一種或 多種二氯甲垸、三氯甲垸、四氯甲烷、乙醇。
根據(jù)上述的制備方法，藥物有機(jī)溶液的濃度為0.001 % 60%，優(yōu)選為0.01% 30%。 根據(jù)上述的制備方法，其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)的有機(jī)溶液的濃度為0.0001 %
60%，優(yōu)選為0.001 % 30%。
本發(fā)明所述的藥物輸送系統(tǒng)其用途在于將水難溶性藥物輸送到生物體內(nèi)的藥物制劑中的
用途，本發(fā)明所述的體內(nèi)概念包括口腔、胃腸道、鼻腔、皮下、肌肉組織、血液循環(huán)、器官等。
本發(fā)明的用途包括將紫杉醇等難溶性藥物制備成蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑，不借助表面活 性劑和有機(jī)溶劑僅采用的一般的注射用水或輸液即可輸注入人體內(nèi)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于通過安全的含有巰基的物質(zhì)幫助蛋白質(zhì)分子間的二硫鍵在高壓和高剪 切力作用下重排而使蛋白質(zhì)分子間交聯(lián)，與專利(200310123461. X)介紹的單純依靠人血清 白蛋白分子間的二硫鍵在高壓和高剪切力作用下重排而使蛋白質(zhì)分子間交聯(lián)的制備方法相 比，高壓均質(zhì)操作的時(shí)間短，有利于紫杉醇等易降解的藥物保持穩(wěn)定，對高壓均質(zhì)等器械的 損耗也比較小，而且由于有更多的巰基參與形成蛋白質(zhì)分子間的交聯(lián)，因此在藥物納晶周圍 蛋白質(zhì)分子間重排交聯(lián)的比例較大，形成的外殼穩(wěn)固，藥物納晶在更長的時(shí)間內(nèi)可以保持穩(wěn) 定，有利于穩(wěn)定地生產(chǎn)。
本發(fā)明的有益成果在于可以幫助難溶性藥物安全輸送到生物體內(nèi)，例如紫杉醇注射液 (Taxol) 1ml中含有527mg聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)和49.7%無水乙醇，該溶劑系 統(tǒng)對血管具有極大的刺激性，導(dǎo)致Taxol的使用很麻煩,需采用手術(shù)用的大的特殊輸注導(dǎo)管才能 順利給藥,且用藥后還可能引起過敏反應(yīng),其靜脈輸注時(shí)間通常至少需要3小時(shí)。此注射劑在靜 脈給藥前必須采用抗過敏治療。而本發(fā)明制備的紫杉醇藥物輸送系統(tǒng)不含有表面活性劑和有 機(jī)溶劑，僅采用的一般的輸液即可輸注入人體內(nèi)，而且本發(fā)明制備的紫杉醇藥物輸送系統(tǒng)與 紫杉醇注射液比較顯示了更好的治療效果。
以下通過非限定性實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。 實(shí)施例1
(按專利200310123461.X的方法制備)將30mg紫杉醇(Paclitaxel)溶于3.0ml 二氯甲烷，
溶液中加入27.0ml人血清白蛋白(lX， w/v，下同)，混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形成
粗制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi)(Avestin),高壓勻質(zhì)在9000 —18000磅/英寸(psi)
下進(jìn)行循環(huán)5次，勻質(zhì)液在40'C減壓下蒸發(fā)20分鐘，迅速除去氯仿,得到半透明分散液，紫
杉醇顆粒的平均直徑為190nm，冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐劑。所得餅塊加入無菌 水或生理鹽水后很容易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍干燥前相同，分散液 穩(wěn)定16小時(shí)后出現(xiàn)沉淀。
(按本發(fā)明的方法制備)將30mg紫杉醇(Paclitaxel)和3mg 二巰基丙醇溶于3.0ml 二氯甲 垸，溶液中加入27.0ml人血清白蛋白(lX)，混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形成粗制乳化 液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi)(Avestin),高壓勻質(zhì)在9000—18000磅/英寸(psi)下進(jìn)行循 環(huán)4次，勻質(zhì)液在4(TC減壓下蒸發(fā)20分鐘，迅速除去氯仿，得到半透明分散液，紫杉醇顆粒 的平均直徑為180nm，冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐劑。所得餅塊加入無菌水或生理 鹽水后很容易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍干燥前相同，分散液穩(wěn)定28小 時(shí)出現(xiàn)沉淀。
本實(shí)施例說明與專利(200310123461.X)介紹的單純依靠人血清白蛋白分子間的二硫鍵 在高壓和高剪切力作用下重排而使蛋白質(zhì)分子間交聯(lián)的制備方法相比，本發(fā)明提供的方法高 壓均質(zhì)操作的時(shí)間短，藥物納晶分散液在更長的時(shí)間內(nèi)可以保持穩(wěn)定。
實(shí)施例2
將200mg紫杉醇(Paclitaxel)溶于3.7ml的氯仿和0.3ml的無水乙醇中,加入97.0ml含有人 血清白蛋白(3%)和二巰基丁二酸鈉(0.02%)的水溶液,混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形成粗 制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi),高壓勻質(zhì)循環(huán)4 5次，勻質(zhì)液在4CTC減壓下蒸發(fā) 20分鐘，迅速除去氯仿,得到半透明分散液，紫杉醇顆粒的平均直徑一般為130 160nm，加 水稀釋，分子量為1萬的超濾膜超濾，將濃縮液冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐劑。所 得餅塊加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍干燥前 相同。
實(shí)施例3
將200mg紫杉醇(Paclitaxd)、 20mg 二巰基丙醇溶于3.7ml的氯仿和0.3ml的無水乙醇中， 加入97.0ml人血清白蛋白(3%)溶液,混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形成粗制乳化液，然后 將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi),高壓勻質(zhì)循環(huán)4 5次，勻質(zhì)液在40。C減壓下蒸發(fā)20分鐘，迅速除 去氯仿,得到的分散液為半透明，紫杉醇顆粒的平均直徑一般為130 150nm，加水稀釋，分 子量為l萬的超濾膜超濾，將濃縮液冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐劑。所得餅塊加入 無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍干燥前相同。
實(shí)施例4
將20mg 二巰基丙醇溶于3.7ml的氯仿和0.3ml的無氷乙醇中,加入97.0ml的檸檬酸調(diào)節(jié) pH為5.5人血清白蛋白(3X)溶液，再加入200mg紫杉醇(Paclitaxel)粉末,混合，然后將其轉(zhuǎn)移 到高壓勻質(zhì)器內(nèi),高壓勻質(zhì)循環(huán)5 6次，勻質(zhì)液在40。C減壓下蒸發(fā)20分鐘迅速除去氯仿,得到 的分散液為半透明，紫杉醇顆粒的平均直徑一般為110 160nm，加水稀釋，分子量為1萬的 超濾膜超濾，將濃縮液冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐劑。所得餅塊加入無菌水或生理 鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍干燥前相同。 實(shí)施例5
將30mg紫杉醇(PaclitaxeI)、 3mg 二巰基丙醇溶于3.0ml的二氯甲垸中,加入27.0ml人血 清白蛋白(1%),混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形成粗制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì) 器內(nèi),高壓勻質(zhì)循環(huán)4 5次，勻質(zhì)液在4CTC減壓下蒸發(fā)20分鐘迅速除去氯仿,得到的分散液為 半透明，紫杉醇顆粒的平均直徑一般為150 200nm，冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干支撐 劑。所得餅塊加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與冷凍 干燥前相同。
實(shí)施例6
將30mg紫杉醇(PacIitaxel)、 lmg 二巰基丙醇溶于3.0ml的二氯甲烷中,加入27.0ml含有 人血清白蛋白(1%)和二巰基丁二酸鈉(0.01%)的水溶液,混合物在低轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘,以形 成粗制乳化液，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻質(zhì)器內(nèi),高壓勻質(zhì)循環(huán)4 5次，勻質(zhì)液在40'C減壓下 蒸發(fā)20分鐘迅速除去氯仿,得到的分散液為半透明，紫杉醇顆粒的平均直徑一般為150 200nm，加水稀釋，分子量為1萬的超濾膜超濾，將濃縮液冷凍干燥48小時(shí)，不加任何凍干 支撐劑。所得餅塊加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，再構(gòu)成后顆粒大小與 冷凍干燥前相同。
急性毒性試驗(yàn)
試驗(yàn)動物昆明種小鼠，體重18 22g，雌雄各半，由南京軍區(qū)南京總醫(yī)院動物中心提 供，飼以全價(jià)顆粒飼料,自由飲水。
試驗(yàn)藥物注射用紫杉醇納米粒，規(guī)格30mg/5ml，由中國藥科大學(xué)藥劑教研室提供(按 實(shí)施例1制備，下同)。臨用前用5%葡萄糖注射液配制成所需濃度。紫杉醇注射液，北京協(xié) 和制藥廠，規(guī)格30mg/5ml，臨用前用5%葡萄糖注射液配制成所需濃度。 .試驗(yàn)方法按化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中所述安排設(shè)計(jì)試驗(yàn)。
試驗(yàn)結(jié)論注射用紫杉醇納米粒和紫杉醇注射液小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明 一天內(nèi)兩
次給藥，①注射用紫杉醇納米粒經(jīng)靜脈注射給藥的LD5o為105.76mg/kg。給藥后次日開始出
現(xiàn)小鼠活動和攝食減少，豎毛，體重減輕等癥狀，并且開始有小鼠死亡。給藥后第7天開始，
存活小鼠逐漸恢復(fù)正常。②紫杉醇注射液經(jīng)靜脈注射給藥的LD5o為75.47mg/kg。給藥后次曰
開始出現(xiàn)小鼠活動減少，豎毛，攝食減少等癥狀，并且開始有小鼠死亡。給藥第11天，中劑
量組仍然有小鼠死亡。其余各組存活小鼠逐漸恢復(fù)正常，至給藥后第16天,存活小鼠不再死 亡。解剖死亡小鼠，肉眼未見各臟器出現(xiàn)明顯異常。對小鼠移植瘤EAC的抑制作用
試驗(yàn)動物ICR種小白鼠，18-22g，雌雄各半，由中國藥科大學(xué)動物室提供。飼料顆 粒飼料，由中國藥科大學(xué)動物室供給；飼養(yǎng)條件空調(diào)房間,溫度18-240(:,相對濕度70%。 劑量設(shè)置空白對照組(生理鹽水)，紫杉醇注射液10mg/kg，注射用紫杉醇納米粒
10mg/kg， 5mg/kg， 2.5mg/kg共5個(gè)劑量組。
試驗(yàn)方法取上述規(guī)格小鼠50只按移植性腫瘤研究法接種EAC實(shí)體型，接種后24小時(shí) 稱鼠重，并隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。接種24小時(shí)后iv給藥，隔天一次，共給 藥4次，于停藥后第2天小鼠稱重，處死荷瘤小鼠并分離瘤塊，稱瘤重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì) 學(xué)處理(t檢驗(yàn))。
試驗(yàn)結(jié)果與空白對照組相比，注射用紫杉醇納米粒高、中劑量(10、 5mg/kg)組可顯 著地抑制肉瘤EAC的腫瘤生長(PO.Ol)，并且高劑量組抑制作用較紫杉醇注射液(10mg/kg) 組好(P<0.05)。同時(shí)注射用紫杉醇納米粒對試驗(yàn)小鼠的體重影響較紫杉醇注射液小，低劑量 (2.5mg/kg)組對小鼠EAC肉瘤也有抑制作用，但與空白對照組比較無顯著性差異，同時(shí)對 小鼠體重影響較小。見表l。
表1注射用紫杉醇納米粒對小鼠移植瘤EAC的抑制作用
劑量 體重(g) 瘤重
組另ij
_Ong/kg)給藥前_給藥后_(g)
對照組 0 20.6 ±1.3029.3 ±1.981.65 ±0.33
紫杉醇注射液 10 20.1 ±1.25 23.1 ±2.28** 1.07±0.24**
10 20.4±1.20 25.5±2.18* 0.66±0.26**
注射用紫杉醇納米粒 5 20.5 ±1.23 27.7 ±2.53 0.91 ±0.27**
2.5 20.3 ±1.32 28.2±2.05 1.38±0.25
*P<0.05 **P<0.01 與空白對照組比較


圖1為實(shí)施例2的注射用紫杉醇納米粒的透射電鏡照片。
權(quán)利要求
1. 一種藥物輸送系統(tǒng)，其特征包括含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)通過二硫鍵互相交聯(lián)形成蛋白質(zhì)包衣，其中所述蛋白質(zhì)包衣具有與其締合的游離蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物，其中難溶性藥物的一部分包含在所述蛋白質(zhì)包衣中，該藥物的一部分與游離的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物締合，蛋白質(zhì)包衣顆粒的平均直徑不超過1微米。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物輸送系統(tǒng)，其中所述蛋白質(zhì)包衣顆粒是非晶體或結(jié)晶體，或兩者 的混合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物輸送系統(tǒng)，其中所述含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)包括下列 的一種或多種白蛋白、免疫球蛋白、酪蛋白、胰島素、血紅蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、 巨球蛋白、纖維連接素、玻璃連接素纖維蛋白原、脂肪酶等。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)是白蛋白。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物輸送系統(tǒng)，其中所述含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)包括下列的一種或多種半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、胱氨酸、二巰基丙醇、二巰基丙磺酸、二巰基丙磺酸鈉、二巰基丁二酸、二巰基丁二酸鈉、青霉胺、巰乙胺、2，3-二巰基乙二酸、1，2-乙二硫醇、巰基 殼聚糖、鹽酸半胱氨酸、谷甘胱肽、N-巰基乙酰絲氨酸、N-乙酰半胱氨酸、輔酶A、 N- (2-巰基丙?；?-甘氨酸(硫普羅寧)、巰基乙酸、巰基乙酸鈉、巰基乙酸鈣、巰基丙酸、巰基 丙酸鈉、巰基乙醇、巰基乙胺、巰基丙酸鈣、二硫蘇糖類、鹽酸巰乙胺、泛酰巰基乙胺、含 有巰基的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類藥物等，及它們的各種有機(jī)或無機(jī)鹽、各種異構(gòu)體、各 種晶型、各種混合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物輸送系統(tǒng)，其中所述含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)選自下列的一種 或多種胱氨酸、半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、谷甘胱肽、輔酶A、 N- (2-巰基丙酰基)-甘氨 酸、二巰基丙醇、二巰基丙磺酸、二巰基丙磺酸鈉、二巰基丁二酸、二巰基丁二酸鈉、青霉 胺、巰乙胺以及它們的各種有機(jī)或無機(jī)鹽、各種異構(gòu)體、各種晶型、各種混合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的難溶性藥物是紫杉醇。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物輸送系統(tǒng)，它是由難溶性藥物、含有較多巰基或二硫鍵的蛋白 質(zhì)、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)借助適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑接觸而制備的。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，它是由難溶性藥物、含有較多巰基或二硫鍵的蛋白質(zhì)、 其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)借助適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑通過下列的一種或多種組合而制備的擠 壓、混合、研磨、均質(zhì)、乳勻、剪切、碰撞、超聲。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物輸送系統(tǒng)，其用途在于將難溶性藥物輸送至生物體內(nèi)的藥物制 劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型蛋白質(zhì)穩(wěn)定的納米制劑及其制備方法和用途。本發(fā)明通過白蛋白、其它含有巰基或二硫鍵的物質(zhì)通過二硫鍵互相交聯(lián)形成蛋白質(zhì)包衣，其中所述蛋白質(zhì)包衣具有與其締合的游離蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物，其中難溶性藥物的一部分包含在所述蛋白質(zhì)包衣中，該藥物的一部分與游離的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物締合，蛋白質(zhì)包衣顆粒的平均直徑不超過1微米，該制劑的用途在于將水難溶性藥物輸送到生物體內(nèi)。
文檔編號A61K47/42GK101385857SQ20081015594
公開日2009年3月18日 申請日期2008年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月21日
發(fā)明者呂慧俠, 周建平, 張振海 申請人:中國藥科大學(xué)