專利名稱：：具有長循環(huán)作用的甘草次酸前體脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑的新
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種含難溶性藥物甘草次酸的前體脂質(zhì)體制劑及其可工業(yè)化應(yīng)用的制備方法。尤其涉及該制劑經(jīng)注射給藥能達到長循環(huán)作用的目的，具有提高肝靶向作用。另固體前體脂質(zhì)體可制備硬膠囊、片劑或顆粒劑，經(jīng)口服給藥可顯著提高生物利用度35倍。
背景技術(shù)：
：甘草次酸(Glycyrrhetinicacid)又名甘草亭酸，是甘草中一類三萜皂苷甘草酸水解脫去糖酸鏈的產(chǎn)物。甘草次酸有抗肝炎、抗腫瘤、抗免疫、降血脂、抗?jié)兒涂蛊苽L(fēng)毒素及抗HIV活性等作用[謝世榮，趙潔，劉琳等.甘草次酸的研究與展望.大連大學(xué)學(xué)報.2005,26(4):85-88]。藥理學(xué)研究還發(fā)現(xiàn)，甘草次酸有提高內(nèi)耳聽力抗缺氧、抗乙酰膽堿脂酶、抗心律失常的作用，并具有抗HIV活性。甘草次酸在抗肝臟疾病的應(yīng)用研究中取得了突破性研究，通過提高對肝細(xì)胞的吸附能力達到保肝作用，并具有抑制肝癌的基本機理。NoseM.等人采用同分異構(gòu)體中吸附性能更強的18a-甘草次酸，通過CCU誘導(dǎo)的肝細(xì)胞毒性實驗，證實肝細(xì)胞中抗肝毒性化合物的能力與其吸附能力平行。王吉耀等研究發(fā)現(xiàn)甘草次酸能抑制CCU與乙醇聯(lián)合誘導(dǎo)的慢性肝損傷大鼠肝臟內(nèi)NF-KB結(jié)合活性增加。甘草次酸幾乎不溶于水，市售制劑一般為甘草酸鹽，由于口服給藥體內(nèi)經(jīng)過水解可能吸收，不同患者的生物利用度及藥動學(xué)數(shù)據(jù)差別很大。臨床上治療肝炎時需要長期口服甘草酸鹽，絕大部分甘草次酸衍生物在體內(nèi)先經(jīng)胃酸及腸道細(xì)菌水解為甘草次酸，然后經(jīng)由小腸吸收入血液，甘草次酸經(jīng)膽汁排至腸道被腸內(nèi)細(xì)菌作用，以甘草次酸或3-表-甘草次酸吸收入血液，形成肝腸循環(huán)，甘草次酸為其鹽的代謝物以發(fā)揮藥效作用。中國專利主要通過將甘草次酸進行結(jié)構(gòu)修飾或成鹽來降低其毒副作用和增大其在水中的溶解度，甘草次酸琥珀酸半酯二鈉鹽臨床上用于胃潰瘍的治療；甘草次酸鈉口服給藥有抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用[朱任之.甘草次酸鈉口服給藥的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用.中國藥理學(xué)通報.1996，12(6):542-544.]，中國專利CN1948332公開了甘草次酸-30-酰胺類衍生物的合成方法及其制劑的用途，將ll位的酮還原，3位羥基改造和30位羧基改造，制備了注射劑、固體和液體的口服制劑，期望增強抗炎作用。CN1762967A公開了甘草次酸與堿性氨基酸或有機堿形成鹽的制備方法及用途，改變了甘草次酸的水溶性，制備其注射劑和凍干粉針劑等劑型。以上中國專利公開的甘草次酸鹽雖然能提高藥物的水溶性，但由于甘草次酸結(jié)構(gòu)修飾的合成反應(yīng)步驟繁多，條件苛刻，且成本高，容易造成污染環(huán)境，可能引入制劑生產(chǎn)中含雜質(zhì)難以控制等問題，尤其是注射劑的原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需嚴(yán)格控制，否則可能導(dǎo)致較大的毒副作用。國內(nèi)產(chǎn)品有甘草次酸普通注射劑，由于藥物不溶于水該處方中需添加大量的非水溶媒如乙醇、丙二醇等，靜脈注射途徑對患者的血管造成嚴(yán)重刺激性，由于藥物代謝半衰期短，進入血液消除快，體內(nèi)維持時間短，嚴(yán)重影響制劑臨床安全性和療效。脂質(zhì)體是具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的定向藥物載體，磷脂作為內(nèi)源性物質(zhì)無毒副作用，該脂質(zhì)體有天然磷脂雙分子層作為粒膜構(gòu)成單位，具有原位振動性與流動性，有一定的柔性，可擠壓變形，不存在因工藝不慎或儲存中聚結(jié)形成少數(shù)大粒子、栓塞血管導(dǎo)致生命危險的可能性。含有PEG修飾材料的脂質(zhì)體能夠增大脂質(zhì)體粒子間的斥力，其表面的"構(gòu)象云"結(jié)構(gòu)能夠產(chǎn)生空間位阻效應(yīng)，親水性的PEG基團形成的水化膜，進一步降低屏蔽網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)細(xì)胞的識別和攝取，修飾脂質(zhì)體能夠更穩(wěn)定地在血液中存在，延長了脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)的時間，增強了藥效作用，可提高臨床治療肝病的療效和安全性。目前，關(guān)于甘草次酸的研究報道，中國專利和文獻主要集中于結(jié)構(gòu)修飾的發(fā)明專利，曰本對于甘草次酸的藥理作用報道較多，尚無前體脂質(zhì)體，特別是未見具有PEG修飾的新型脂質(zhì)體發(fā)明專利和文獻報道。嵌段共聚物作為一類新型的高分子化合物，具有良好的表面活性作用，mPEG-PLA可在脂質(zhì)體表面修飾達到長循環(huán)的作用。通常使用的嵌段共聚物為使其形成膠束，需要使親脂端有一定的長度，一般至少與親水鏈等長。而合成的親脂鏈遠小于親水鏈的共聚物，在水中不能自發(fā)形成膠束，但其親脂鏈可以插入脂質(zhì)體的磷脂雙分子層達到修飾脂質(zhì)體的目的。本發(fā)明合成的兩親性嵌段共聚物具有以下優(yōu)勢(1)合成的兩親性小分子量載體mPEG2000-PLA(8:2)，毒性低，生物相容性和安全性好，體內(nèi)可生物降解；(2)脂質(zhì)體的表面PEG化可以達到長循環(huán)作用。由于脂質(zhì)體的表面組成經(jīng)過PEG化修飾，可有效的避免被血漿中內(nèi)源性物質(zhì)破壞，緩慢而有效的富集于肝臟及其它病變部位，體內(nèi)甘草次酸的吸收增加，可延長藥物作用時間，減小毒副作用。本發(fā)明采用脂質(zhì)體包裹甘草次酸，能夠避免藥物本身結(jié)構(gòu)修飾的復(fù)雜反應(yīng)，克服成本高，污染環(huán)境等問題，顯著降低甘草次酸的毒副作用。本發(fā)明的有益優(yōu)勢為(1)在脂質(zhì)體中加入PEG修飾材料，能夠有效地避免RES對脂質(zhì)體的消除，增加體內(nèi)循環(huán)時間，延長藥效。(2)將脂溶性的甘草次酸制成脂質(zhì)體凍干粉，革除了有機溶劑，臨用前用水合介質(zhì)高度分散為靜脈滴注液，也可靜脈滴注給藥，有效控制及延長體內(nèi)游離甘草次酸有效濃度，防止副作用的發(fā)生，提高臨床注射給藥的順應(yīng)性。(3)緩控釋保肝治療作用?？芍苽涓什荽嗡崆绑w脂質(zhì)體固體劑型如片劑、膠囊劑等，增加了制劑貯藏的穩(wěn)定性，甘草次酸前體脂質(zhì)體通過口服給藥，由于親水載體修飾了甘草次酸脂質(zhì)體，使其緩慢的進入肝臟釋放藥物以達到緩控釋作用，以減輕普通劑型引起的肝臟代謝過重問題，可提高口服藥物生物利用度35倍，增強病人用藥的順應(yīng)性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是采用長循環(huán)脂質(zhì)體新技術(shù)，制備一種具有長循環(huán)作用的甘草次酸前體脂質(zhì)體，由于長循環(huán)脂質(zhì)體表面覆蓋著一層PEG凝膠，可成功逃脫免疫系統(tǒng)的吞噬和破壞，改變藥物在體內(nèi)的分布，從而延長其在血中的滯留時間，緩慢地濃集于肝臟，降低了藥物在其它各組織的毒副作用；且長循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑小于150nm。也可解決了甘草次酸口服溶解度、吸收差，延長了藥效，大大提高制劑口服的生物利用度，本發(fā)明的前體脂質(zhì)體和PEG修飾脂質(zhì)體，提供一種具有長循環(huán)作用、包封率高、且制劑儲存穩(wěn)定性的脂質(zhì)體處方，制備工藝簡單，重現(xiàn)性好，適用可工業(yè)化實施的制備方法。本發(fā)明的目的在于提供一種生物降解的兩親性二嵌段共聚物聚乙二醇單甲醚2000-聚乳酸(mPEG2000-PLA)合成的方法，聚合過程中需氮氣保護，無需抽真空，在保證產(chǎn)品性能的前提下可縮短反應(yīng)時間、降低能耗。本發(fā)明所合成的兩親性聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸(mPEG-PLA，w/w80:20)二嵌段共聚物，其特點具有能生物降解的小分子量兩親性載體，本發(fā)明的兩親性載體能夠修飾甘草次酸脂質(zhì)體，體內(nèi)達到長循環(huán)作用，也可作為口服藥物緩控釋釋藥系統(tǒng)的新型載體。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的甘草次酸前體脂質(zhì)體，含有以下各成分及重量百分比0.38%甘草次酸、590%磷脂、0.525%膽固醇、0.520%表面活性劑、0.525%PEG修飾材料、585%水溶性載體，緩沖鹽適量。其中磷脂采用天然磷脂、半合成磷脂或合成磷脂中的一種或幾種，磷脂酰膽堿的含量在75%98%，包括大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、心磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、二鯨蠟磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂乙醇胺、二月桂酰磷脂酰膽堿或二油酰磷脂酰膽堿中的一種或幾種。本發(fā)明的表面活性劑包括甘氨膽酸鈉、去氧膽酸鈉、鵝去氧膽酸鈉、去氫膽酸鈉、膽酸鹽或?；悄懰猁}的一種或幾種。優(yōu)選甘氨膽酸鈉和/或去氧膽酸鈉。本發(fā)明采用修飾脂質(zhì)體的PEG修飾材料，包括聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸(mPEG-PLA)、聚乙二醇—聚乳酸、聚乙二醇一二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇一膽固醇、聚乙二醇一聚己內(nèi)酯、聚乙二醇一聚十六烷基氰基丙烯酸酯、聚乙二醇一磷脂酰膽堿、聚乙二醇一單羧酸3000—二棕櫚酰磷脂酰二乙醇胺、聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯或聚氧乙烯脂肪醇醚中的一種或幾種。優(yōu)選聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸。本發(fā)明緩沖鹽溶液包括磷酸鹽緩沖液、氨-氯化銨緩沖液、硼砂-氯化鈣緩沖液、硼酸-氯化鉀緩沖液，且pH值范圍為68.0。上述水溶性載體包括甘露醇、海藻糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、氯化鈉、環(huán)糊精、麥芽糖、微晶纖維素、右旋糖苷、蔗糖或果糖的一種或幾種。優(yōu)選甘露醇、海藻糖或乳糖。研究發(fā)現(xiàn)，磷脂是甘草次酸被包裹在磷脂雙分子層內(nèi)主要載體，采用乙醇注入法制備脂質(zhì)體混懸液，處方組成以重量份數(shù)計(w/w)，甘草次酸:磷脂:膽固醇:表面活性劑，磷脂對脂質(zhì)體粒徑及包封率的影響見表h表1磷脂用量對甘草次酸脂質(zhì)體物理特性的影響處方組成(w/w)粒徑(nm)包封率(％)Zeta電位(mV)1:1:6:4415.636.5一20.21:10:6:4288.765.5一18.61:20:6:4145.587.9_23,31:30:6:472.998.2_30.11:40:6:481.497.7一32.1表1結(jié)果表明，甘草次酸:磷脂高于1:20時，脂質(zhì)體的包封率提高，粒徑變小，綜合考慮生產(chǎn)成本，故磷脂的用量范圍為590%，優(yōu)選2085%。膽固醇與甘草次酸有相似的結(jié)構(gòu)，對甘草次酸脂質(zhì)體的包封率有重要影響，處方組成以重量份數(shù)計(w/w)，甘草次酸:磷脂:膽固醇:表面活性劑，膽固醇對脂質(zhì)體粒徑及包封率的影響見表2:表2膽固醇用量對甘草次酸脂質(zhì)體物理特性的影響處方組成(w/w)粒徑(nm)包封率(％)Zeta電位(mV)1:30:0:4251.4卯.l一32.11:30:1:4137.592.9_34.81:30:4:468.998.2_36.01:30:7.5:496.396.9一31.31:30:10:4151.478.1一25.9結(jié)果表明，膽固醇可增加脂質(zhì)膜的穩(wěn)定性，但加入量太多可能阻礙甘草次酸嵌入磷脂雙分子層的親脂性結(jié)構(gòu)作用，膽固醇用量大于10份會降低甘草次酸脂質(zhì)體的包封率，故膽固醇的用量范圍為0.525%。表面活性劑可提高難溶性藥物載藥量，并適當(dāng)減小脂質(zhì)體的粒徑，處方組成以重量份數(shù)計(w/w)，甘草次酸:磷脂:膽固醇表面活性劑，表面活性劑對脂質(zhì)體粒徑及包封率的影響見表3:表3表面活性劑對甘草次酸脂質(zhì)體物理特性的影響處方組成(w/w)粒徑(nm)包封率(％)Zeta電位(mV)1:30:5:0—20.51:30:5:1128.482.5—23.61:30:5:264.998.2—30.41:30:5:578.495.5—31.8結(jié)果表明，甘草次酸與表面活性劑的用量比高于1:4時，脂質(zhì)體的載藥量降低，粒徑變大。兩親性嵌段共聚物比例的選擇本發(fā)明選用mPEG2000-PLA(簡，P-P)作為脂質(zhì)體表面修飾載體，研究了不同比例的嵌段共聚物對脂質(zhì)體物理特性的影響，結(jié)果見表。表4mPEG2000-PLA對脂質(zhì)體物理特性的影響修飾材料mPEG2000-PLA主藥(mg)磷脂(mg)膽固醇(mg)脫氧膽酸鈉(mg)P-P(mg)粒徑Cnm)包封率(%)80:2048.51250.0242.597.295.272.398.470:3050.11050.2236.0跳388.5450.272.1560:4050.51207.9243.199.792.7-沉淀050.41190.6239.698.693.4-沉淀本發(fā)明的甘草次酸前體脂質(zhì)體的制備方法，步驟如下(1)將甘草次酸、磷脂、膽固醇、表面活性劑和PEG修飾材料溶于乙醇、叔丁醇或者它們中任選的混合液中，形成類脂質(zhì)溶液，將水溶性載體加純凈水適量溶解，加入磷酸鹽緩沖液，將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移至梨型瓶中，加熱至60'C以上，并放入攪拌器，將有機溶液用注射器緩緩注入至磷酸鹽緩沖液中，形成脂質(zhì)溶液，將脂質(zhì)溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，反復(fù)過濾膜，除去熱原，冷凍干燥，即得甘草次酸前體脂質(zhì)體?；?2)將甘草次酸、磷脂、膽固醇、表面活性劑和PEG修飾材料溶于乙醇、乙醚或者它們中任選的混合液中，超聲溶解，在40'C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，形成脂質(zhì)膜。將水溶性載體加純凈水適量溶解，加入的磷酸鹽緩沖液，再將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移至梨型瓶，與脂質(zhì)膜水合，直至脂質(zhì)膜完全脫落，形成粗脂質(zhì)體混懸液，冷凍干燥，得甘草次酸的前體脂質(zhì)體。前體脂質(zhì)體處方中加入的水溶性載體作為凍干保護劑或賦性劑，以保證脂質(zhì)的體固體狀態(tài)和穩(wěn)定性，選擇甘露醇、乳糖和山梨醇為凍干保護劑進行處方篩選，其處方組成以重量份數(shù)計(w/w)，甘草次酸:磷脂:膽固醇:去氧膽酸鈉:水溶性載體，考察前體脂質(zhì)體經(jīng)緩沖鹽溶液重建后脂質(zhì)體物理特性，結(jié)果見表5:表5水溶性載體對脂質(zhì)體物理特性影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果表明，水溶性載體對脂質(zhì)體粒徑、包封率均有一定影響，特別是凍干效果十分重要，水溶性載體用量需為甘草次酸5倍，故水溶性載體的用量為585%。采用兩種脂質(zhì)體制備技術(shù)，注入超聲法、薄膜分散，脂質(zhì)體按照處方組成以重量份數(shù)計(w/w)，甘草次酸:磷脂:膽固醇:表面活性劑為1:30:6:4，結(jié)果見表6。表6脂質(zhì)體制備方法對脂質(zhì)體物理特性影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明所制備的脂質(zhì)體粗混懸液可通過超聲、高壓勻質(zhì)或者過膜一種或幾種方法來減/」粒徑，通過冷凍千燥法或噴霧干燥法制備脂質(zhì)體凍干粉，包封率均大于85%，乙醇注入法制備的脂質(zhì)體形成的多是小單室脂質(zhì)體，粒徑小于150nm，載藥量偏低，包封率大于85%，薄膜分散法制備的脂質(zhì)體形成的多是大多室脂質(zhì)體，粒徑小于150300nm，載藥量較高，包封率大于90%，兩種制備方法簡單易行，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。將上述脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體用5。/。葡萄糖或0.9%氯化鈉等滲溶液水合后，形成的脂質(zhì)體混懸劑可用于靜脈注射，PEG親水基團表面修飾的脂質(zhì)體，其立體位阻增強了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，并避免與血液中的調(diào)理素結(jié)合，降低與單核巨噬細(xì)胞的親和力，從而延長脂質(zhì)體在血液中的循環(huán)時間，延長了藥效，增強了甘草次酸在肝的聚集，可降低藥物在其它各組織中的毒性。將上述前體脂質(zhì)體按常規(guī)工藝可制備成固體劑型，例如膠囊劑，片劑和顆粒劑等，向前體脂質(zhì)體添加微晶纖維素、乳糖、淀粉等填充劑，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮等崩解劑，可制備成顆粒劑；按照片劑常規(guī)制備方法可制備成片劑；將前體脂質(zhì)體直接裝入硬膠囊，或?qū)㈩w粒劑裝入硬膠囊中制備成膠囊劑；所制備的固體制劑能夠增加甘草次酸在體內(nèi)的吸收，顯著提高其口服生物利用度，增強其抗肝炎療效和具有較好的保肝作用。圖1是本發(fā)明甘草次酸溶液、脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體的體外釋放曲線(n=6)甘草次酸溶液劑(—一)，脂質(zhì)體(一D—)，修飾脂質(zhì)體(一A—)圖2是本發(fā)明大鼠靜脈注射甘草次酸脂質(zhì)體、修飾脂質(zhì)體和普通注射劑血藥濃度曲線(n=6)甘草次酸注射劑(一*一)，脂質(zhì)體(一口一)'修飾脂質(zhì)體(一A-)具體實施例方式實施例1(1)中間體丙交酯的合成將定量乳酸投入到三頸瓶中，通N2氣，機械攪拌下加入氧化鋅，加熱至120'C，蒸去乳酸中所含的水。然后升溫至14(TC左右，反應(yīng)1小時減壓將反應(yīng)中生成的水蒸去。反復(fù)多次，直至無水蒸出。再升溫至18(TC,收集餾分，用乙酸乙酯重結(jié)晶兩次，得白色片狀結(jié)晶。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(2)mPEG2000-PLA嵌段共聚物的合成一定比例的丙交酯和mPEG2000，加入到三頸瓶中，密封，N2流下除盡空氣，加熱套加熱至160。C，待內(nèi)容物全部熔融，加入0.5wt。/。的辛酸亞錫，磁力攪拌條件下，反應(yīng)8小時停止。產(chǎn)物用二氯甲烷溶解，用無水乙醚沉淀，反復(fù)3次。產(chǎn)物真空干燥24小時，計算得率(以PLA量計算)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>反應(yīng)得率(％)=生成的共聚物的量X0.8/投入丙交酯的量X100。/。反應(yīng)得率為84.8±3.9%(n=3)(3)嵌段共聚物的結(jié)構(gòu)表征本發(fā)明通過開環(huán)聚合反合成mPEG2000-PLA嵌段共聚物，進行嵌段共聚物的純度檢查，鑒定表征共聚物結(jié)構(gòu)。通過DSC圖譜的研究，可以確認(rèn)是否有未反應(yīng)的丙交酯存在，考察嵌段共聚物理化性質(zhì)，如熔點的改變，晶型的轉(zhuǎn)變等。在IR圖譜中。通過對共聚物特征峰出現(xiàn)和消失，峰強度改變情況的研究，確定了共聚物的結(jié)構(gòu)，通過NMR圖譜中特異氫的面積比可以推算出分子量。①DSC圖譜解析取mPEG2000-PLA嵌段共聚物、丙交酯與mPEG2000的物理混合物、丙交酯和mPEG2000單體適量裝入鋁制坩鍋內(nèi)，以1(TC/min的速度程序升溫，20300'C的范圍內(nèi)記錄DSC圖譜。從DSC圖譜得知，mPEG2000、丙交酯及嵌段共聚物mPEG2000-PLA(80:20)的熔點(rm)分別為50.4。C(mPEG2000)、123.7°C(Lactide)、47.0°C。mPEG和丙交酯的物理混合物均出現(xiàn)了各自的吸熱熔融峰，而嵌段共聚物只出現(xiàn)了mPEG2000的峰，并沒出現(xiàn)丙交酯的峰，這預(yù)示嵌段共聚物的生成，且共聚物中無殘留丙交酯。嵌段共聚物中mPEG的熔點與mPEG單體相比有所降低，可能的原因在于mPEG熔融與PLA相分離，并且PLA影響了mPEG的晶型，使得mPEG的結(jié)晶度降低。②IR圖譜取mPEG2000-PLA(80:20)嵌段共聚物、丙交酯與mPEG2000的物理混合物、丙交酯和mPEG2000單體適量，以1%溴化鉀壓片，掃描IR光譜。IR譜圖中丙交酯的特征峰在波數(shù)1700cm-1處，是CK)雙鍵的伸縮振動，在1200cm"處也有C-O鍵的伸縮振動的峰，在3000cm"C-H鍵伸縮振動微弱，2920cm—1處是-CH3的吸收峰，在3500cm—i處出現(xiàn)了很強的-OH吸收峰。mPEG2000的有兩個特征峰，波數(shù)2900cm—1處是C-H鍵的伸縮振動和1200cm-l處是C-0鍵的伸縮振動，無C=0雙鍵的伸縮振動峰；在各嵌段共聚物的IR圖譜上均有mPEG2000和丙交酯的特征峰，預(yù)示著嵌段共聚物的生成。mPEG和丙交酯的物理混合物與合成的聚合物具有相似的IR圖譜。③!H-NMR圖譜取mPEG2000-PLA(80:20)嵌段共聚物、丙交酯與mPEG2000的物理混合物、丙交酯和mPEG2000單體適量，以D-氯仿為溶劑，記錄NMR圖譜。!H-NMR圖譜表明，mPEG中CHz的峰在5=3.5ppm;丙交酯中CH3和CH的峰分別在5=1.5ppm和S=5.1ppm處。嵌段共聚物出現(xiàn)了mPEG和丙交酯的峰，表明嵌段共聚物由mPEG和聚乳酸組成。通過圖譜可計算共聚物中mPEG/PLA的重量比。具體方法如下a處為PLA中CH的峰，b處為mPEG中CH2的峰，峰面積與氫的數(shù)目存在以下關(guān)系A(chǔ)reab/Areaa=4n/m，已知11=2000/44=45.5，則可求出m。結(jié)果表明，根據(jù)NMR算出來的共聚物中m=9.6，聚合物分子量約為2700。實施例2處方:甘草次酸氫化大豆磷脂膽固醇鵝去氧膽酸鈉百分比(％)2.5080.07.5010.0將甘草次酸、氫化大豆磷脂酰膽堿、膽固醇和鵝去氧膽酸鈉用50mL無水乙醇超聲溶解；另取50mLpH7.4磷酸鹽緩沖液置梨型瓶中，6(TC加熱攪拌均勻。將乙醇溶液緩緩注入至磷酸鹽緩沖液中，超聲20min，形成脂質(zhì)溶液，將脂質(zhì)溶液于45"C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，反復(fù)過0.22pm濾膜三次，除去熱原即得甘草次酸脂質(zhì)體混懸液。將上述脂質(zhì)體用5%葡萄糖水溶液水合重建，即得靜脈注射的甘草次酸脂質(zhì)體混懸劑。采用光子相關(guān)光譜儀測定脂質(zhì)體的粒徑為83.6nm，采用葡聚糖凝膠柱法HPLC測定藥物的包封率為96.5%。實施例3百分比(％)甘草次酸1.12蛋黃卵磷脂40.45膽固醇6.74甘氨氧膽酸鈉2.25mPEG2000-PLA4.49乳糖44.94將甘草次酸，磷脂，膽固醇，mPEG2000-PLA和甘氨氧膽酸鈉用50mL乙醇超聲溶解，45。C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，形成膠狀液，將乳糖加純凈水適量溶解，加入pH7.4磷酸鹽緩沖液50mL,用此磷酸鹽緩沖液稀釋上述膠狀液，超聲20min，依次過0.8、0.45和0.22pm濾膜，反復(fù)過濾膜三次，除去熱原，經(jīng)冷凍干燥法，得甘草次酸前體脂質(zhì)體制品。將上述前體脂質(zhì)體用0.9%氯化鈉水合重建即得靜脈注射的甘草次酸脂質(zhì)體混懸劑。包封率為96.1%，粒徑為123.4nm。實施例4處方百分比(％)甘草次酸1.18蛋黃卵磷脂23.53膽固醇7.06甘氨氧膽酸鈉4.70聚乙二醇一膽固醇4.70甘露醇(無熱原)58.82將甘草次酸、磷脂、膽固醇、聚乙二醇一膽固醇和甘氨氧膽酸鈉用50mL乙醇超聲溶解;另取50mLpH7.4磷酸鹽緩沖液置入梨型瓶中，6(TC加熱攪拌均勻。將乙醇溶液用注射器緩緩注入至磷酸鹽緩沖液中，超聲20min，形成脂質(zhì)溶液，將脂質(zhì)溶液于45'C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，高壓勻質(zhì)機處理兩次，反復(fù)過0.22pm濾膜三次，除去熱原，冷凍干燥，得甘草次酸修飾脂質(zhì)體。將上述修飾脂質(zhì)體用5%葡萄糖水合重建即得靜脈注射的甘草次酸前體脂質(zhì)體。采用Zetamaster光子相關(guān)光譜儀測定前體脂質(zhì)體的粒徑為73.6nm。采用葡聚糖凝膠柱法HPLC測定藥物的包封率為97.5%。實施例5百分比(％)處方甘草次酸1.14大豆磷脂45.45(含磷脂酰膽堿卯％)膽固醇4.54去氧膽酸鈉I.I4mPEG2000-PLA6.82海藻糖40.91將甘草次酸，磷脂(含磷脂酰膽堿90%)，膽固醇，mPEG2,-PLA和去氧膽酸鈉加入梨型瓶，用50mL甲醇超聲溶解，45'C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，形成脂質(zhì)膜待用；將海藻糖加純凈水適量溶解，加入pH7.48.0的磷酸鹽緩沖液50mL，將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移至梨型瓶，與脂質(zhì)膜水合，直至脂質(zhì)膜完全脫落，形成粗脂質(zhì)體混懸液，依次過0.8、0.45和0.22pm濾膜，冷凍干燥，得甘草次酸前體脂質(zhì)體。包封率為92.1%，粒徑為180.1nm。將上述10g前體脂質(zhì)體與8g微晶纖維素、7g無水乳糖、0.2g硬脂酸鎂和0.05g二氧化硅混合均勻，用自動填充機直接裝入硬膠囊中，即成膠囊劑。實施例6處方:甘草次酸大豆磷脂(含磷脂酰膽堿卯％)膽固醇甘氨膽酸鈉mPEG2000-PLA百分比(％)1.2344.449.882.477.41山梨醇34.57將甘草次酸、大豆磷脂(含磷脂酰膽堿卯％)、膽固醇、mPEG2,-PLA和甘氨膽酸鈉用50mL叔丁醇超聲溶解，另取50mLpH7.4磷酸鹽緩沖液置入梨型瓶中，6(TC加熱攪拌均勻，將叔丁醇溶液緩緩注入至磷酸鹽緩沖液中，超聲20min，形成脂質(zhì)溶液，將脂質(zhì)溶液于45'C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去叔丁醇，依次過0.8、0.45和0.22^m濾膜，即得甘草次酸脂質(zhì)體混懸液，冷凍干燥，得甘草次酸固體脂質(zhì)體。稱取25g固體前體脂質(zhì)體與6.75g微晶纖維素、3.5g可壓性淀粉和硬脂酸鎂0.35g，混合均勻，加入2%聚乙烯吡咯垸酮乙醇液適量制軟材，45i:千燥lh，過篩，整粒，采用異型壓片機壓片，每片750mg(每片含甘草次酸10.0mg)。測定固體水合后藥物的包封率為95.7%，粒徑為165.9nm。實施例7處方百分比(％)甘草次酸1.25大豆磷脂37.5(含磷脂酰膽堿80%)膽固醇5.00去氧膽酸鈉5.00聚乙二醇一磷脂酰膽堿6.25乳糖(120目)45.0將甘草次酸，大豆磷脂(含磷脂酰膽堿80%)、膽固醇、聚乙二醇一磷脂酰膽堿和去氧膽酸鈉加入梨型瓶，用50mL乙醇醇超聲溶解，45'C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，形成脂質(zhì)膜待用；將乳糖加純凈水適量溶解，加入50mLpH7.4磷酸鹽緩沖液，將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移至梨型瓶，與脂質(zhì)膜水合，直至脂質(zhì)膜完全脫落，形成粗脂質(zhì)體混懸液，高壓勻質(zhì)機處理兩次，經(jīng)冷凍干燥，得甘草次酸前體脂質(zhì)體，將脂質(zhì)體水合后測定包封率為88.7%，粒徑為151.1nm。將上述10g固體脂質(zhì)體與4g微晶纖維素，3g可壓性淀粉和2g乳糖混合均勻，用2%聚維酮乙醇液制軟材，4(TC干燥2h，過篩，整粒，即成顆粒劑。實施例8處方百分比(％)甘草次酸1.20氫化大豆磷脂38.55膽固醇9.64去氧膽酸鈉2.41聚乙二醇一二硬脂酰磷脂酰乙醇胺9.64山梨醇38.55將甘草次酸、氫化大豆磷脂、膽固醇和去氧膽酸鈉溶解于50mL乙醇，聚乙二醇一二硬脂酰磷脂酰乙醇胺用氯仿15mL超聲溶解，6CTC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，形成脂質(zhì)膜；將山梨醇加純凈水適量溶解，加入50mLpH7.8磷酸鹽緩沖液，將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移至梨型瓶，與脂質(zhì)膜水合，直至脂質(zhì)膜完全脫落，形成粗脂質(zhì)體混懸液，高壓勻質(zhì)機處理兩次，經(jīng)冷凍干燥，得甘草次酸前體脂質(zhì)體。包封率為88.4%，粒徑為153.8nm。將上述前體脂質(zhì)體用5%葡萄糖水合重建，即得靜脈注射的甘草次酸前體脂質(zhì)體混懸劑。實施例9以甘草次酸溶液劑為對照，進行甘草次酸普通脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體的體外釋放試驗，分別吸取甘草次酸溶液劑、甘草次酸普通脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體混懸劑各2mL至透析袋(截留相對分子質(zhì)量800010000)，將透析袋兩頭扎緊，放入200mLpH7.4磷酸鹽緩沖液釋放介質(zhì)中，以200r/min速度磁力攪拌48h，分別在0.25，0.5,1，2，3，4,6，8，12，24和48h吸取釋放介質(zhì)0.5mL，同時補液0.5mL，樣品用甲醇適量稀釋破膜，吸取20pL進樣分析，采用HPLC測定藥物含量。實施例10取SD大鼠18只，體重200250g，隨機分為三組，每組6只，雌雄各半，禁食12h。甘草次酸鈉注射劑為參比對照組，普通脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體注射劑為受試制劑兩組，按lmg/kg劑量尾靜脈注射給藥，分別于0.08、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8禾Q10h經(jīng)目艮眶靜脈叢取血0.5mL置肝素化離心管中，以4000r/min離心20min，吸取血漿lOOpL置離心管中，采用乙腈直接沉淀蛋白法沉淀蛋白，以10000r/min高速離心20min，吸取上清液20|xL進樣，分析，采用HPLC測定體內(nèi)藥物含量，計算血藥濃度。經(jīng)藥動學(xué)DAS2.0軟件數(shù)據(jù)處理，得藥動學(xué)參數(shù)見表7和表8。表7大鼠靜脈注射三種甘草次酸制劑的房室模型藥動學(xué)參數(shù)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>k12(l/h)k21(l/h)T1/2a(h)Ti鄰(h)CL(L/h/kg)AUC(。-t)(嗎/L-h)0.383±0.182*0.366±0.144*0.153±0.023*2.365±0.8660.715±0.082*1278.1±154.4*0,176±0.045"0.215±0.074**0.183±0.0193.939±2.0210.531±0.064"畫.6士95.1"0.608±0.147***0.407±0.0800.186±0.0352.140士0.4080.286±0.044***3449.2±487.2****P<0.05與脂質(zhì)體比較；**尸<0.05與長循環(huán)脂質(zhì)體比較；***尸<0.05與注射劑比較表8大鼠靜脈注射三種甘草次酸制劑的非房室模型藥動學(xué)參數(shù)(n=6)普通注射劑脂質(zhì)體長循環(huán)脂質(zhì)體C隨(ng/L)AUC(0-t)(ng/L'h)MRT(o-t)(h)2074.0±跳43*1302.8士151.35151.209±0.05*2788.1士220.2"3441.2±252.2***1697.1士87.1"3588.6±483.6***1.453±0.194**2.052±0.165****P<0.05與脂質(zhì)體比較；**尸<0.05與長循環(huán)脂質(zhì)體比較；***尸<0.05與注射劑比較實施例11取SD大鼠18只，體重200250g，隨機分為三組，每組6只，雌雄各半，禁食12h。以甘草次酸鈉注射劑為參比制劑，甘草次酸混懸劑(1%羥丙甲基纖維素)、甘草次酸普通前體脂質(zhì)體和修飾前體脂質(zhì)體三組制劑為受試制劑，按80mg/kg劑量分別灌胃給藥，分別于0.08、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24和36h經(jīng)眼眶靜脈叢取血0.5mL置肝素化離心管中，將離心管置離心機以3500r/min離心20min,取血漿lOO^L置離心管中，采用乙腈直接沉淀蛋白法沉淀蛋白，吸取上清液2(VL進樣，分析，采用HPLC測定藥物含量，計算血藥濃度。經(jīng)藥動學(xué)DAS2.0軟件數(shù)據(jù)處理，得藥動學(xué)參數(shù)見表9。表9大鼠口服給予三種甘草次酸制劑的藥動學(xué)參數(shù)(n=6)參數(shù)混懸劑脂質(zhì)體長循環(huán)脂質(zhì)體T隨(h)0.58±0.380.44±0.493,08±2.50CmaxOg/L)2.73±0.189.07±3.1013.52±4.11AUC(o-t)(pg/L-h)22.28±12.7154.66±26.8895.11±20.69MRT,(h)6.17±0.5213.69±4.2316.45±9.58T1/2(h)5.68±0.9713.85±4.2118.82±12.15F(%)136.2334.1581,權(quán)利要求1.一種具有長循環(huán)作用的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于各成分重量百分比為0.3～8％甘草次酸、5～90％磷脂、0.5～25％膽固醇、0.5～20％表面活性劑、0.5～25％PEG修飾材料、5～85％水溶性載體，緩沖鹽適量。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述PEG修飾材料，兩親性修飾材料聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸(mPEG-PLA)，其特征在于mPEG為小分子量，mPEG與PLA按照重量比(w/w)為80:20、70:30、60:40和50:50，優(yōu)選80:20。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于所述磷脂包括大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、磷脂酸、天然或合成心磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、二鯨蠟磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂乙醇胺、二月桂酰磷脂酰膽堿或二油酰磷脂酰膽堿中的一種或幾種，且磷脂酰膽堿的含量在60%99%。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于表面活性劑包括甘氨膽酸鈉、去氧膽酸鈉、鵝去氧膽酸鈉、去氫膽酸鈉、膽酸鹽或?；悄懰猁}的一種或幾種。優(yōu)選甘氨膽酸鈉和/或去氧膽酸鈉。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于PEG修飾材料包括聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸、聚乙二醇一聚乳酸、聚乙二醇一二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇一膽固醇、聚乙二醇一聚己內(nèi)酯、聚乙二醇—聚十六垸基氰基丙烯酸酯、聚乙二醇一磷脂酰膽堿、聚乙二醇一單羧酸3000—二棕櫚酰磷脂酰二乙醇胺、聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯或聚氧乙烯脂肪醇醚中的一種或幾種，優(yōu)選聚乙二醇單甲醚2000—聚乳酸。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于緩沖鹽溶液包括磷酸鹽緩沖液、氨一氯化銨緩沖液、硼砂—氯化鈣緩沖液、硼酸一氯化鉀緩沖液，且pH值范圍為6.58。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體，其特征在于水溶性載體包括甘露醇、海藻糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、氯化鈉、環(huán)糊精、麥芽糖、微晶纖維素、右旋糖苷、蔗糖或果糖的一種或幾種。優(yōu)選甘露醇、海藻糖或乳糖。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸前體脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于-(1)將甘草次酸、磷脂、膽固醇、表面活性劑和PEG修飾材料溶于乙醇、叔丁醇或者他們中任選的混合液中，形成類脂質(zhì)溶液，將水溶性載體加純凈水適量溶解，加入磷酸鹽緩沖液，將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移到梨型瓶，6(TC加熱攪拌均勻，將有機相溶液緩緩注入磷酸鹽緩沖液中，形成脂質(zhì)溶液。將脂質(zhì)溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，高壓乳勻兩次，在用反復(fù)過濾膜，除去熱原，經(jīng)冷凍干燥，即得甘草次酸前體脂質(zhì)體?；?2)將甘草次酸、磷脂、膽固醇、表面活性劑和PEG修飾材料溶于乙醇、乙醚或者他們中任選的混合液中，45'C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，形成脂質(zhì)膜待用；將水溶性載體加純凈水適量溶解，加入的磷酸鹽緩沖液，再將磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移到梨型瓶，與脂質(zhì)膜水合，直至脂質(zhì)膜完全脫落，形成粗脂質(zhì)體混懸液，經(jīng)冷凍干燥，即得甘草次酸前體脂質(zhì)體。全文摘要本發(fā)明屬于藥物制劑的新
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種含甘草次酸前體脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明的甘草次酸前體脂質(zhì)體由甘草次酸、磷脂、膽固醇、表面活性劑和水溶性材料組成，采用乙醇注入法或薄膜分散法制備甘草次酸脂質(zhì)體混懸液，經(jīng)冷凍干燥法或噴霧干燥法制備固體脂質(zhì)體粉末，該工藝簡單，重現(xiàn)性好，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。前體脂質(zhì)體經(jīng)靜脈注射給藥具有長循環(huán)作用，可顯著降低藥物毒性，達到延長藥效作用；其脂質(zhì)體固體制劑經(jīng)口服給藥能增加吸收，提高生物利用度3～5倍。文檔編號A61K47/24GK101366698SQ20081015614公開日2009年2月18日申請日期2008年9月28日優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日發(fā)明者娟李,帥李,鐵李,王廣基,銘范,洋陸申請人:中國藥科大學(xué)