專利名稱：：基質、細胞移植物以及制備和使用它們的方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及基于生物耐受性聚合物或聚合物混合物的多孔基質，涉及建立于其上的細胞移植物，涉及基于由肝細胞和胰島組成的細胞混合物的其它細胞移植物，涉及制備多孔基質的方法和使用該方法獲得基質，并涉及獲得用于接種可移植基質的細胞的特定方法。
背景技術：
：組織工程是一個跨學科領域，其將工程和材料科學與醫(yī)學結合在一起。目標在于恢復受損組織或改善其功能。組織工程的原理是極其簡單的:首先從患者中取出一些細胞，并進行體外繁殖。然后將繁殖的細胞植入到構架物質中，結果形成一個完整的活組織替代物，將其再次移植到患者中。與傳統(tǒng)的異體移植相反，傳統(tǒng)的異體移植要求合適的供體，而且通常需要終身藥物免疫抑制，本方法提供了能使用內源(自體)細胞的極其重要的優(yōu)點。所使用的構架物質(其在下文也稱之為基質)的性質和構造對于移植物(能)被接納的和能發(fā)揮功能的是特別重要的。除了待用的材料(通常也就是生物可降解聚合物)、孔徑、孔隙度和表面之外，就如同孔型那樣，孔壁形態(tài)以及孔間的連通度，對于被植入構架物質中的細胞的進一步發(fā)育、而且最終對于待再生的組織或器官的三維構造，都起到關鍵的作用。對生產(chǎn)這種性質的生物基質的方法已經(jīng)有所描述。因此，來自紡織領域的技術已經(jīng)用于生產(chǎn)織造和非織造的纖維生物基質。另一種常見方法，是首先將鹽晶體引進生物可降解聚合物，然后再溶出，這使得有可能通過鹽顆粒的大小來控制孔徑，并通過鹽/聚合物比率來控制孔隙度(WO98/44027)。在一種修飾的方法中，將溶于溶劑中的生物可降解聚合物施加到稱之為致孔材料的物質中，然后將所述致孔材料從復合材料中再次溶出，留下了具有所述致孔材料的負像形狀的孔(WO01/87575A2)。涂層基質也已經(jīng)有描述(參見，例如，WO99/09149Al)。不過，迄今使用該法生產(chǎn)的生物基質不是在任何情況下都令人滿意，尤其考慮到建立在這些基質上的移植物被接納和發(fā)揮作用的能力。特別是，到目前為止使用肝和胰腺移植物還沒有獲得可接納的器官替代物。
發(fā)明內容本發(fā)明實現(xiàn)了實施本發(fā)明的潛在目的，即通過可使用特定方法獲得的特殊生物材料和相應的移植物，提供了這樣的功能性移植物。本發(fā)明因此涉及本專利的權利要求中所限定的主題。孔隙度是以基質總容積的分數(shù)％進行的數(shù)字描述，其表示為孔容積。措詞"孔"用于指存在于根據(jù)本發(fā)明的基質中的洞，而且，在本案中，其二維截面是具有多角的形狀，尤其是八角形，和/或當從三維角度看時具有傾斜的形狀。其形狀還優(yōu)選地以延伸為特征，從而洞的形狀可與神經(jīng)細胞的形狀相當。孔徑可通過直徑描述，其是在二維截面中觀察到的孔的最長和最短直徑的平均值。根據(jù)本發(fā)明的基質具有不同大小的孔，該大小分布(孔徑分布)在特定范圍內。根據(jù)本發(fā)明，對于基質來說具有寬的孔徑分布是重要的。該分布應從大小范圍為大約150fim的孔延伸到大小范圍為大約300|Lim的孑L，或比這更寬的范圍。因此，根據(jù)一個方面，本發(fā)明的基質具有大小為150fim或更小的孔。具有大小為140nm或更小的孔的基質是優(yōu)選的。具有大小為130jim或更小的孔的基質是尤其有利的。根據(jù)另一個方面，本發(fā)明的基質具有大小為300nm或更大的孔。具有大小為350jim或更大的孔的基質是優(yōu)選的。具有大小為370nm或更大的孔的基質是尤其有利的。本發(fā)明包括既具有大小為150、140或130nm或更小的孔，又具有大小為300、350或370nm或更大的孔的基質。這些值可以任意方式組合以提供孔徑分布得以延伸的最小范圍，尤其要提及的是150到300、140到350以及130到370jim的范圍。尤其優(yōu)選的是具有150到300范圍之外的頻率最大值的給定孔徑分布，即，一個頻率最大值是高于300fim的孔徑，而另一個頻率最大值是低于150nm的孔徑。根據(jù)本發(fā)明的典型基質具有以下的孔徑分布。大約0.5%到6%、優(yōu)選大約1%到5%、甚至更優(yōu)選大約2%到4%、尤其是大約3%的孔的平均直徑在70到100jim的范圍內；大約2%到8%、優(yōu)選大約3%到7%、甚至更優(yōu)選大約4%到6%、尤其是大約5%的孔的平均直徑在101到115nm的范圍內；大約2%到8%、優(yōu)選大約3%到7%、甚至更優(yōu)選大約4%到6%、尤其是大約5%的孔的平均直徑為116到130ftm的范圍內；大約1%到7%、優(yōu)選大約2%到6%、甚至更優(yōu)選大約3%到5%、尤其是大約4%的孔的平均直徑為131到300nm;大約11%到23%、優(yōu)選大約13%到21%、甚至更優(yōu)選大約15%到19%、尤其是大約17%的孔的平均直徑為301到330nm的范圍內；大約4°/。到10%、優(yōu)選大約5%到9%、甚至更優(yōu)選大約6%到8%、尤其是大約7%的孔的平均直徑為331到360fim的范圍內；大約5%到17%、優(yōu)選大約7%到15%、甚至更優(yōu)選大約9%到13%、尤其是大約11%的孔的平均直徑為361到3卯fim的范圍內；大約7%到19%、優(yōu)選大約9%到17%、甚至更優(yōu)選大約11%到15%、尤其是大約13%的孔的平均直徑為391到420jim的范圍內；大約3%到9%、優(yōu)選大約4%到8%、甚至更優(yōu)選大約5%到7%、尤其是大約6%的孔的平均直徑為421到450nm的范圍內；大約12%到24%、優(yōu)選大約14%到22%、甚至更優(yōu)選大約16%到20%、尤其是大約18%的孔的平均直徑為451到480的范圍內；和大約5%到17%、優(yōu)選大約7%到15%、甚至更優(yōu)選大約9%到13%、尤其是大約ll。/。的孔的平均直徑為481到510nm的范圍內；因此，通常獲得具有不止一個最大值的孔徑分布，這對應于一組不止一個大小范圍的孔。這對于根據(jù)本發(fā)明的基質的特性是尤其重要的。洞容積進而是孔隙度，可通過孔隙率計以其本身已知的方式來進行測定。例如，孔徑進而是孔徑分布，可通過掃描電子顯微鏡檢進行測定。為此，制備待研究基質的薄切片并用金進行涂層。通過測量限定區(qū)域內的所有孔，即測定每個孔的最大和最小直徑、確定兩個值的總和并把該總和除以2，來對掃描電子顯微鏡照片進行評價。術語"基質"指三維支持物，其適于為細胞所移殖。就此而言，基質可用作可為細胞或組織所移殖的三維模板。這種移殖可發(fā)生在體外或體內。此外，就移植而言，基質可用于定位移植物，而且也可用作逐漸在體內形成的組織的位置固定器。聚合物原則上可以是能用于醫(yī)學，尤其是移植醫(yī)學領域的任何聚合物。因此，被宿主識別為異己、但是其排斥可通過合適的免疫抑制來進行抑制的聚合物也是生物學耐受性的。使用本質上不是生物學可降解的聚合物是可能的。不過，優(yōu)選要屬至少主要地是生物學可降解的聚合物。術語"生物學可降解的"是指活有機體(或源于活有機體的體液或細胞培養(yǎng)物)能將其轉化成代謝產(chǎn)物的材料。例如，生物學可降解聚合物包括可生物再吸收的和/或可生物侵蝕的聚合物。"可生物侵蝕的"指可溶解于或可懸浮于生物學液體中的能力。可生物再吸收指能被活有機體的細胞、組織或液體吸收的能力。原則上，適于本發(fā)明的生物學可降解聚合物，包括可用于醫(yī)學領域的任何聚合物，例如，除了在組織工程領域已經(jīng)確立的聚合物之外，其中也包括在活性化合物釋放裝置如石膏和活性化合物移植物中已經(jīng)確立的聚合物。例如，合適的天然聚合物包括多肽，如白蛋白、纖維蛋白原、膠原蛋白和明膠、以及多糖，如幾丁質、殼聚糖、藻酸鹽和瓊脂糖。這些天然聚合物也可以適當?shù)剡M行修飾，例如，蛋白質如膠原蛋白可以被交聯(lián)。例如，合適的合成聚合物包括特定的聚酸酐，尤其是聚(癸二酸-十六烷二酸)、聚(s-己內酯)、聚(原酸酯)，并且特別是聚(a-羥基酯)如聚(羥基乙酸)、聚(乳酸)和聚(羥基乙酸-乳酸)。因此，根據(jù)本發(fā)明的基質和移植物優(yōu)選基于含有式(I)的重復單元的生物學可降解聚合物HOR其中，R是羥基或曱基。對于乳酸單元，L型(S對映體)是優(yōu)選的。要提及的尤其優(yōu)選的聚合物是聚(羥基乙酸-乳酸)，其中羥基乙酸與乳酸比以mol。/。計，為99:1到1:99，優(yōu)選10:卯到卯:10，例如15:85。由兩個或多個聚合物組成的混合物同樣是有利的。除了聚合物的性質，其分子量也決定了所得的基質的特性。一般而言適用的是，隨著所采的聚合物的分子量增加，基質的孔隙度降低。這特別地適用于制備基質時材料起泡沫的情況，即在壓力下與氣體如C02—起添加材料，C02最初溶解于聚合物中而當壓力降低時形成孔的情況。另外，采用的聚合物的結晶度影響所得基質的性能。在這種情況中，適用的是，隨著結晶度降低，所得基質的孔隙度通常增加，由于該原因，非晶態(tài)聚合物是優(yōu)選的，對于高孔隙度的基質尤為如此。當制備基質期間，材料起泡沫的情況下，這方面也是尤其重要的。本發(fā)明更進一步涉及這樣的多孔基質，其基于生物學可降解聚合物，而且其特征在于基質的表面涂層有至少一種胞外基質蛋白。胞外基質蛋白是眾所周知的。本發(fā)明優(yōu)選的胞外基質蛋白是膠原蛋白，尤其是i和iv型膠原蛋白、層粘連蛋白和纖連蛋白。這些蛋白質可以其本身已知的方法以純化形式制備，或商購獲得。根據(jù)一個實施方案，根據(jù)本發(fā)明基質的涂層包含纖連蛋白作為胞外基質蛋白。根據(jù)另一個實施方案，根據(jù)本發(fā)明基質的涂層包含I型膠原蛋白、層粘連蛋白和iv型膠原蛋白的混合物作為胞外基質蛋白，在該情況中，優(yōu)選的當屬包含大約相等重量百分比的所述蛋白質的混合物。根據(jù)本發(fā)明，尤其優(yōu)選提供以上述方式進行涂層，并滿足至少下述附加標準之一的基質-基質的孔表現(xiàn)出上文規(guī)定的孔徑或孔徑分布；-孔隙度為93到98%;-孔表現(xiàn)出上文規(guī)定的形式；13_生物學可降解聚合物是上文規(guī)定的天然或合成聚合物之一，尤其是聚(羥基乙酸-乳酸)，其中乳酸含量為大約85mol%，而羥基乙酸含量為大約15mol%。例如，以這種方式涂層的基質可這樣獲得，即通過把未涂層的基質浸沒于含有設計用于涂層的蛋白質或蛋白質混合物的溶液中，然后對已用溶液潤濕的基質進行干燥。關于這一點，通常的情況是，根據(jù)待涂層基質體的尺寸，溶液潤濕基質體的外層區(qū)域，然而，尤其是相當少的溶液滲入到基質體的內部。這可導致基質表面的整體沒有均勻涂層，但是，相反，導致涂層密度從外向內逐步降低。作為涂層的備選方案，或除涂層之外，生物學活性物質可吸收到聚合物中或甚至與聚合物連接。這些物質包括，例如，合成的活性化合物(無機或有機分子)，蛋白質，多糖和其它糖，脂類以及例如，影響細胞生長、細胞遷移、細胞分裂、細胞分化和/或組織生長、或具有治療、預防或診斷作用的核酸。作為舉例提及的生物學活性物質為血管活性化合物，神經(jīng)活性化合物，激素，生長因子，細胞因子，類固醇，抗凝血劑，抗炎活性化合物，免疫調節(jié)活性化合物，細胞毒性活性化合物，抗生素和抗病毒活性化合物。本發(fā)明還涉及一種用于制備多孔基質的方法，該多孔基質基于生物學耐受性聚合物或聚合物混合物，而且其特征在于將由具有限定粒徑的聚合物顆粒和氯化鈉顆粒組成的混合物擠壓，然后將氯化鈉溶出。已經(jīng)證實，粒徑范圍為大約20到950jim、有利地范圍為大約20到760Hm、而且尤其是范圍為大約108到250nm的聚合物顆粒，和粒徑范圍為大約90到670nm、有利地范圍為大約IIO到520nm、而且尤其是范圍為大約250到425jtm的氯化鈉顆粒，對于確立所需的孔徑或孔徑分布是有物顆粒與氯化鈉顆粒的重量比率范圍為1:100到1:10、有利地范圍為1:50到1:15、而且尤其是范圍為1:20到1:18，對于確立所需的孔隙度是有利的。更進一步證實了使用具有特定粒徑分布的鹽和聚合物是有利的。就用于制備基質的氯化鈉而言，有利的是粒徑為250到320nm的鹽的含量為大約15%到50%,有利地為大約18%到42%,并優(yōu)選為大約22%到28%;粒徑為330jim到380的鹽的含量為大約20°/。到65%，有利地為大約30%到52%，并優(yōu)選為大約42%到46%;而粒徑為3卯nm到425的鹽的含量為大約15%到62%，有利地為大約25%到42%,并優(yōu)選為大約29%到33%，其中百分值指的是用于制備的鹽的總重量。這并不因此排除粒徑高于和/或低于該指定范圍的級分。根據(jù)一個具體的實施方案，已經(jīng)證實有利的是粒徑為108pm到140jtm的氯化鈉顆粒的重量含量為1到15%重量，優(yōu)選4到12%重量，尤其為7到9%重量，粒徑為145fim到180的鹽的含量為1到11%重量，優(yōu)選3到9%重量，尤其為5到7%重量，粒徑為185pm到220fim的鹽的含量為3到21%重量，優(yōu)選7到17%重量，尤其為10到14%重量，粒徑為225nm到250nm的鹽的含量為l到11%重量，優(yōu)選3到9%重量，尤其為5到7%重量，粒徑為250nm到320nm的鹽的含量為15到50%重量，優(yōu)選18到42%重量，尤其為22到28%重量，粒徑為330到380jim的鹽的含量為15到50%重量，優(yōu)選18到42%重量，尤其為22到28%重量，粒徑為390nm到425jim的鹽的含量為5到29%重量，優(yōu)選10到24%重量，尤其為15到19%重量。就用于制備基質的聚合物而言，有利的是粒徑為108jrni到140nm的聚合物的含量為大約5%到50%，有利地為大約10%到30%，并且優(yōu)選地15為大約14%到18%;粒徑為145fim到180fim的聚合物的含量為大約10%到55%，有利地為大約15%到40%,并且優(yōu)選地為大約20%到24%;粒徑為185jim到220的聚合物的含量為大約18%到88%，有利地為大約32%到76%，并且優(yōu)選地為大約43%到49%，而粒徑為225pm到250fim的聚合物的含量為大約5。/。到45。/。，有利地為大約10%到28%，并且優(yōu)選地為大約14%到18%，其中百分值指的是用于制備的聚合物的總重量。為了獲得所需粒徑分布的鹽和/或聚合物顆粒，通常有利的是首先粉碎商業(yè)可獲得的產(chǎn)品。這可在傳統(tǒng)用于該目的的裝置如擠壓系統(tǒng)或研磨機中實現(xiàn)。不過，對于所需粒徑分布起決定性作用的是使用傳統(tǒng)的分析篩選進行的后續(xù)篩選。擠壓優(yōu)選通過壓力的作用來實現(xiàn)。為此，聚合物/氯化鈉混合物可在常規(guī)水壓下以大約780psi到1450psi，有利地以大約840psi到大約1230psi，尤其是卯0psi到1100psi的沖壓進行擠壓。已經(jīng)證實有利的是允許該壓力作用大約10s到360s，有利地為大約40s到180s,尤其是大約50s到70s，溫度在18。C到25。C的范圍內。例如，使用水或水溶液，將氯化鈉溶出。首先，被擠壓的混合物(基質坯)可以浸泡大約12h到80h，有利地為大約12h到62h,尤其是大約36h到60h。更有利的是在將氯化鈉溶出之前，將被擠壓的混合物最初貯存于co2氣體中。因此，例如，已經(jīng)證實被擠壓的混合物在大約140psi到1650psi,有利地大約360psi到1120psi,尤其是800psi到900psi的<:02壓力下進行充氣，進行時間為大約1h到180h，有利地大約3h到60h，尤其是大約12h到36h，在這點上是有利的。之后減小壓力，其中壓力降低的速度對孔的形成有影響。雖然優(yōu)選使用C02，其它的氣體，如空氣、氮氣、氦氣、氖氣、氪氣、氬氣、氙氣或氧氣同樣是合適的。隨后，為了千燥起見，將水或水溶液以其本身已知的方法除去。為了達到該目的，基質可例如置于吸水紙上。根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，將聚合物溶液添加到由聚合物顆粒和氯化鈉顆粒組成的混合物中，在進行擠壓之前，除去溶劑。關于這一點，聚合物顆粒和聚合物溶液可基于相同的聚合物。不過，聚合物也可以是不同的聚合物，尤其是具有不同生物學可降解性的聚合物。使用所述聚合物溶液的優(yōu)點是，能有效支撐支柱的物質在基質中是直立的，這使得改善基質的機械性能成為可能。尤其，這種性質的基質表現(xiàn)出了較低的破碎傾向。使用的溶劑應當溶解聚合物而不是鹽。這確保了鹽的致孔特性不受影響，或者僅僅可忽略不計地受影響。例如，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、六氟異丙醇、氯代及氟代的脂肪烴和芳香烴、四氫呋喃、乙基曱基酮、二乙基曱酮及其混合物，適于溶解上述聚合物。氯仿尤其適于溶解聚(羥基乙酸)，聚(乳酸)或聚(羥基乙酸-乳酸)，而且從醫(yī)學應用的角度而言也是適合的?；旌暇酆衔锶芤号c聚合物顆粒/鹽顆?；旌衔?，最初形成了流動的糊狀物，然后隨著溶劑的去除迅速變成為固體。一方面，選擇溶液中聚合物的濃度，從而聚合物能完全被溶解是有利的，另一方面，可以迅速地除去溶劑，而聚合物顆粒沒開始任何顯著程度的溶解。已經(jīng)證實聚合物與溶解的聚合物重量比為10:1到1:100，有利的為2:1到1:25，尤其是為1:1到1:10是有益的。就聚合物顆粒與氯化鈉顆粒的重量比而言，在該實施方案的環(huán)境下，有可能選擇就氯化鈉而言較高的重量比，即高達1:200，l:500或1:1000，而總聚合物與氯化鈉的重量比仍然高于1:100。這樣，有可能獲得高于98%的孔隙度。在上文所述的方法中，氯化鈉用作致孔材料，作為定義，其應理解為是固體的、或至少是半固體的材料，該材料最初與形成基質的聚合物混合以產(chǎn)生混合物，然后從混合物中除去，導致洞(孔)的形成。為此，有利的是致孔材料能溶于至少一種溶劑，而且基本上不溶于至少一種另外的溶劑。尤其是在處理條件下，即通常在18。C到25。C的溫度范圍下，在大氣壓下，當?shù)陀?0%重量，優(yōu)選低于20%重量，尤其低于10%重量，例如，低于5、4、3、2和1%重量可溶時，該材料基本上是不溶的。所得基質的結構和特性，基本上是由制備它們的致孔材料決定的。關于這一點，不僅致孔材料的性質是重要的，而且，特別地，致孔顆粒的粒徑分布也是重要的。因此，通常適用的是，不僅孔徑，而且連通度，即彼此連接的洞的網(wǎng)絡，都隨著粒徑增大而增大。該網(wǎng)絡，其也被稱之為大型結構或大孔結構，應當與通過起泡沫形成的孔區(qū)別開來，后者通常是封閉的孔，并因此形成命名為微型結構或微孔結構的結構。本發(fā)明因此也涉及用于制備基于生物學耐受性聚合物或聚合物混合物的多孔基質的方法，其特征在于擠壓由聚合物顆粒、致孔材料顆粒和聚合物溶液組成的混合物，然后使致孔材料溶出。該方法原則上不限于前面所述的特征。因此，聚合物可選自聚酸酐，聚(原酸酯)，聚(a-羥基酯)，聚(酯酰胺)，聚酰胺，聚醚酯，聚碳酸酯，聚亞烷基，聚亞烷基二醇，聚環(huán)氧烷，聚對苯二甲酸乙二醇酯，聚乙烯醇，聚乙烯醚，聚乙烯酯，聚卣乙烯，聚乙烯吡咯烷酮，聚硅氧烷，聚苯乙烯，聚氨基曱酸酯，^f汙生的纖維素和(甲基)丙烯酸聚合物以及共聚物。而致孔材料優(yōu)選選自水溶性鹽，例如氯化鈉，氯化鉀，氟化鈉，氟化鉀，碘化鈉，碘化鉀，硝酸鈉，硫酸鈉，種檬酸鈉，酒石酸鈉，糖(例如，蔗糖，果糖和葡萄糖)及其混合物，所述材料也可選自蠟質物質如石蠟，蜂蠟等等。原則上，聚合物、致孔材料和用于形成溶液的溶劑應當彼此匹配，從而所述溶液含有溶解形式的聚合物和固體形式的聚合物顆粒，以及基本上保持不溶解的致孔材料。使用上述方法可獲得的基質同樣也是本發(fā)明的主題部分。本發(fā)明還涉及包含至少一種上述基質和至少一種細胞的移植物。關于這一點，根據(jù)移植物的目的，細胞尤其可選自肝細胞，胰腺細胞，脂肪細胞，腸細胞，皮膚細胞，血管細胞，神經(jīng)細胞，肌肉細胞，甲狀腺細胞和牙根細胞。根據(jù)本發(fā)明移植物的具體實施方案涉及肝細胞和胰腺細胞。本發(fā)明進一步涉及包含至少一種基于生物學耐受性聚合物和至少兩種細胞類型的細胞的移植物，其中第一種細胞類型的細胞是肝細胞，而第二種細胞類型的細胞是胰島細胞。該主題不局限于上述基質，也即基于根據(jù)本發(fā)明基質的移植物。根據(jù)移植物的目的，也即，尤其是要實現(xiàn)的功能，肝細胞與胰島細胞的特定比例是有利的。因此，本發(fā)明的一個實施方案涉及這樣的移植物，其在移植后，表現(xiàn)出等效胰腺器官的內分泌特性。已經(jīng)證實，肝細胞與胰島細胞的比例大約為106:3000對于此目的是有利的。本發(fā)明的另一個實施方案涉及這樣的移植物，其在移植后，執(zhí)行肝臟的代謝功能。已經(jīng)證實，肝細胞與胰島細胞的比例為大約106:3-200，有利地為106:10-200，特別地為106:20-80,尤其優(yōu)選大約106:35-45,對于此目的是有利的。應當注意，這種移植物通常含有除肝細胞和胰島細胞以外的其它細胞，具體地也就是，與細胞分離相關的相伴增長的其它肝細胞和胰腺細胞。用于移殖根據(jù)本發(fā)明基質的細胞或細胞混合物，可由其本身已知的方法獲得。為了產(chǎn)生自體同源的移植物的目的，細胞優(yōu)選得自待插入移植物的個體。因此，合適的組織，例如肝或胰腺的部分，通常取自該個體，并以合適的方式制備，用于體外接種和培養(yǎng)基質。關于這一點，細胞表現(xiàn)出盡可能高的活力比例是重要的。如果肝細胞是從肝組織獲得的，應該考慮肝細胞被一層厚的結締組織層包圍的事實，尤其是在肝硬化的情況中。根據(jù)本發(fā)明，使用具有確定成分的溶液，以便能分離含有盡可能高比例的活力細胞的肝細胞。本發(fā)明因此涉及一種含水組合物A，其含有NaCl、KC1和HEPES，而且pH為大約7.4，并且涉及其用于灌注肝或胰腺部分的用途。特別地，1000ml這種溶液含有大約8.3gNaCl，0.5gKC1和2,38gHEPES。優(yōu)選以大約37。C的溫度，大約30ml/min的流速進行灌注。幾分鐘，尤其是大約5到10分鐘，例如大約7分鐘，對于以上述流速充分灌輸組織部分是足夠的?？蛇x擇地，也有可能使用含有乙二醇四乙酸(EGTA)的含水組合物A，用于灌注肝或胰腺部分。本發(fā)明更進一步涉及含水組合物B,其pH為大約7.3到7.4，優(yōu)選大約7.35，而且含有NaCl、KC1、HEPES、CaCl2、膠原酶和胰蛋白酶抑制劑，還涉及它用于灌注肝或胰腺部分的應用。1000ml的這種溶液優(yōu)選含有8,3gNaCl，0.5gKCl和2.38gHEPES，0.7gCaCl2x2H20，500mg膠原酶H和7.5mg胰蛋白酶抑制劑。在該情況中，以大約37。C和大約30ml/min的流速進行灌輸也證實是有利的。幾分鐘，尤其是大約5到10分鐘，例如大約6到7分鐘，對于充分灌輸組織部分是足夠的。可選擇地，有可能使用含有膠原酶和透明質酸酶的含水組合物B，，用于灌輸肝或胰腺部分。1000ml的該溶液優(yōu)選含有5到10U的膠原酶/ml以及5到10U的透明質酸酶/ml。如果組織部分最初用組合物A處理，然后用組合物B進行處理，那么對于分離有活力的細胞是有利的?？蛇x擇地，有可能最初使用組合物A，，然后使用組合物B'。繼灌輸開始之后，則可以對組織部分進行切割，并小心地在合適的培養(yǎng)基，例如Willams培養(yǎng)基E中進行振蕩(培養(yǎng))。如果得到的細胞懸液仍然含有相對大粒的細胞碎片，可由其本身已知的方法，例如通過尼龍網(wǎng)(200nm)過濾細胞懸液，來除去該細胞碎片。然后小心沉淀濾液中的細胞，就此而言于4。C以50g離心3分鐘證實是有利的。將分離的細胞以其本身已知的方法裝載到基質上。通常，把細胞作為含有細胞的溶液裝載到基質上，然后通常在細胞培養(yǎng)條件下，對細胞和基質進行孵育，直到細胞附著到基質上。如果不止一種細胞類型例如肝細胞和胰島細胞被裝載到基質上，原則上不同的細胞類型可以一起裝載，否則就相繼進行裝載。根據(jù)一個具體的實施方案，首先裝載胰島細胞，接著裝載肝細胞，在每種情況中，裝載之后都進行孵育，直到至少一部分細胞附著到基質上。根據(jù)本發(fā)明的基質和移植物顯示了至關重要的優(yōu)點。因此，該內部尺寸使基質能有效地為細胞所移殖。一方面，基質可自由地模壓，而另一方面，其提供了足夠經(jīng)受外科移植操作和抵抗作用于移植位點的機械應力的穩(wěn)定性和剛性。移植之后開始的最初的細胞J皮壞是有限的，而且，短時間之后，移植組織能呈現(xiàn)預期的功用。移植之后不久，血管或血管豐富的肉芽組織，以及神經(jīng)組織，開始增殖到移植物中?？梢圆槐厥褂蒙韺W有毒的溶劑，例如甲醛，來制備根據(jù)本發(fā)明的基質，這意味著不需要特殊的方法來消除溶劑，而且沒有這些殘量溶劑的殘留的危險。根據(jù)本發(fā)明的基質和移植物具有許多不同的可能用途。尤其可提及的是用于醫(yī)學領域的用途。本發(fā)明因此也涉及用于治療用途的根據(jù)本發(fā)明的基質和移植物。本領域的特殊用途是合成組織(組織工程)。在該情況中，根據(jù)本發(fā)明的基質多多少少地可用作細胞遷移到其中和/或細胞附著于其上的支架。為此，例如，基質可在體外接種所需的細胞，即用含細胞的溶液進行處理，并進行孵育直到細胞已經(jīng)附著于基質上。然后可以對這種基質連同附著于其上的細胞(這里稱為移植物)，進行進一步的操作步驟，例如，進行進一步培養(yǎng)(適當?shù)臅r候在活性化合物的影響下培養(yǎng)，例如，為了進一步擴增細胞或修飾它們的特性)，和/或貯存(例如貯存于冰上或標準條件下的生物流反應器(bioflowreactor)中)直到以合適的方法進行移植。在該用途的環(huán)境下，有利的是最初分離，而且，適當?shù)臅r候，也能體外擴增旨在用于移植的細胞。特別地，這因此使得有可能把不同的細胞類型，如上面所述的肝細胞以及胰島細胞一起施用于基質。作為體外接種的代替，另一種可能性是移植基質(沒有任何事先的細胞附著)，其目標是引入前體細胞，該前體細胞能進行組織再生，以遷移到受傷的組織中并在已經(jīng)喪失組織的地方再生組織。為此，基質必須進行設置，以便所需的細胞，而不是不想要的細胞，能遷移到基質中。這種用途通常描述為引導組織再生(GTR)。因此，根據(jù)本發(fā)明的基質或根據(jù)本發(fā)明的移植物可用于治療人類或動物體。為此，通過外科干預，將一種或多種基質，或一個或多個移植物，引入到待治療的機體中。如果移植物包含具有器官功能的細胞，或者如果具有器官功能的細胞，將會遷移到基質中，例如，正如肝細胞或胰島細胞的情況，則可以例如將基質或移植物移植到待治療個體的腸系膜、皮下組22織、腹膜后、腹膜前空間(properitonealspace)或肌肉空間。原則上，需要合適的組織替換的任何個體，都可用根據(jù)本發(fā)明的基質或移植物進行治療。這些個體通常是正患有特定的紊亂或疾病的個體，該紊亂或疾病的病程涉及功能性組織的喪失。這有可能潛在地影響整個器官，例如肝或胰腺。因此，本發(fā)明尤其涉及治療導致慢性肝或胰腺衰竭的疾病。這些疾病包括，例如，成人的慢性肝炎和膽硬化，以及兒童的膽硬變和先天性代謝缺陷。肝移植也適于肝癌的情況。另一方面，胰腺移植尤其適于所有形式的糖尿病，尤其是i型或n糖尿病的情況。.明因Jh^,沐及才S^雖灰勞胡的復席i5.4良;fe太勞印體進行移植的治療劑可獲得的用途，在這點上，尤其是用于治療正經(jīng)受至少部分喪失將要被移植物代替的功能性組織的個體。下面的實施例是為了解釋本發(fā)明的目的，而不是為了限制其范圍。實施例1制備基質a)無聚合物溶液聚合物顆粒(Resomer⑧RG858，獲自勃林格公司(Boehringer),殷格翰(Ingelheim))，冷凍于液氮中，并在冷凍狀態(tài)下進行破碎(DSschle擠壓系統(tǒng)；12000rpm，2min)。對破碎的聚合物顆粒進行篩選。大小為108jim到250nm的顆粒用于制備基質。在這點上，采用的16%重量的聚合物，顆粒大小為108nm到140nm之間，而采用的22%重量的聚合物，顆粒大小為145nm到180jim之間，采用的46%重量的聚合物，顆粒大小為185nm到220fim之間，而且采用的16%重量的聚合物，顆粒大小為225Hm到250nm之間。篩選氯化鈉(普通鹽)，粒徑為250jim到425jim的氯化鈉顆粒用于制備基質。在這點上，采用的25%重量的鹽，顆粒大小為250fim到320nm之間，采用的44%重量的鹽，顆粒大小為330|tim到380pm之間，采用的31%重量的鹽，顆粒大小為390nm到425nm之間。760mg氯化鈉顆粒和40mg聚合物顆粒彼此進行混合。把混合物引入到?jīng)_孔沖模中，并用水壓機以1000psi的沖壓，沖壓1分鐘。之后，將基質坯置于聚四氟乙烯(Teflon)平板上，并在C02氣中(850psi)充氣24小時。然后把坯浸泡24小時以便溶出包含的鹽粒。最后，將基質在吸水紙上干燥12小時。得到的聚合物基質的孔隙度為95±2%，和250nm±120jun的確定孔徑，這是通過掃描電子顯微鏡檢確定的。b)有聚合物溶液對氯化鈉(分析純)進行研磨(Daschle擠壓系統(tǒng)；12000rpm，2min)，然后進行篩選，并利用粒徑為108到425nm的氯化鈉顆粒制備基質。在這點上，采用的8%重量的鹽，顆粒大小為108jim到140nm之間，而采用的6%重量的鹽，顆粒大小為145jim到180之間，采用的12%重量的鹽，顆粒大小為185nm到220jim之間，采用的6%重量的鹽，顆粒大小為225jim到250之間，采用的重量為25%的鹽，顆粒大小為250^im到320fim之間，采用的重量為26%的鹽，顆粒大小為330jim到380fim之間，采用的重量為17%的鹽，顆粒大小為390ftm到425nm之間。將96g氯化鈉顆粒與1g聚合物顆粒(實施例la中描述的)進行混合，然后用100ml含有4g溶解形式的聚合物的氯仿溶液進行處理。以這種方式獲得的混合物，于45。C到65。C加熱，導致氯仿在大約25分鐘內蒸發(fā)。剩余的鹽/聚合物混合物然后用水壓機以1000psi的沖壓進行沖壓1分鐘，接著24浸泡24小時以便溶出包含的鹽粒。如上所述，然后對基質進行充氣，最后在吸水紙上千燥12小時。得到的聚合物基質的孔隙度為96%。如果將98.5g鹽顆粒與0.5g聚合物顆粒進行混合，且混合物用100ml含有1g聚合物的氯仿溶液進行處理，則可獲得孔隙度為99%的基質。如果將99.2g鹽顆粒與0.1g聚合物顆粒進行混合，且該混合物用含有大約0.9g聚合物的氯仿溶液進行處理，則可獲得孔隙度為99%的聚合物基質。實施例2a)用纖連蛋白對基質進行涂層將來自實施例1的基質浸沒于碳酸鹽緩沖溶液中，其含有3jig人血漿來源的纖連蛋白(西格瑪(Sigma))/ml，而且其pH為9.4。大約60s之后，把基質從溶液中取出來，凍干并進行Y射線滅菌。實施例3細胞分離以其本身已知的方法，從待移植的個體取出一部分肝。取出的肝部分首先于37。C以30ml/min的流速用溶液(8.3gNaCl;0.5gKC1;2.38gHEPES;用蒸餾水補至1000ml，pH7.4)灌注7分鐘。肝部分然后于37。C以30ml/min的流速用膠原酶/胰蛋白酶抑制劑溶液(8.3gNaCl;0.5gKC1;2.38gHEPES;0.7gCaCl2x2H20;500mg膠原酶(膠原酶H,寶靈曼公司(BoehringerMannheim),曼海姆，德國)；7.5mg胰蛋白酶抑制劑(ICN，Eschwege，德國)；用蒸餾水補至1000ml，pH7.35)灌注另外的6到7分鐘。灌輸結束之后，對肝部分進行切割，并在Willams培養(yǎng)基E中小心震蕩培養(yǎng)。過濾細胞懸液(尼龍網(wǎng)，200nm)，然后用Willams培養(yǎng)基E進行洗滌。之后，細胞于4°C50g離心3分鐘。細胞的活力為95%,這是4吏用錐蟲藍(TryptanBlue)測定的。以同樣的方法從胰腺部分分離胰島細胞。實施例4細胞移殖第一步，將在實施例2中涂層的基質，與如實施例3中所述的分離的胰島細胞一起孵育。為此，將3000個胰烏細胞/ml懸浮于由M199和FCS組成的溶液混合物(體積比為19:1)中。通過在倒置的Olympus顯微鏡下，在0.25mm計數(shù)管中，對細胞進行計數(shù)來確定細胞數(shù)。然后使用移液管將8ml到10ml的這種溶液施加于基質中。棄去未保留在基質中的過量溶液。然后將業(yè)已由這種方式處理過的基質置于細胞培養(yǎng)孵育器中4小時，以允許細胞粘附。然后將由Williams培養(yǎng)基E組成的溶液施加到基質中，其每ml含有包含大約5.0x107活肝細胞和大約1.0x106非實質(non-perenchymatous)肝細胞的未純化肝細胞懸液。使用移液管裝載8ml到12ml的溶液，棄去未被基質吸收的過量溶液。在移植之前，基質可以在冰上保持大約1.5小時。如果計劃稍后的時間進行移植，基質可在標準條件下，在生物流反應器(bioflowreactor)中J^存長達5天。實施例5肝細胞的分泌活性和增殖速率26Lewis大鼠用實施例4中所述的移殖了細胞的基質進行移植。在不同的時間從該動物中再次取出移植物，并進行形態(tài)測量學檢測。表現(xiàn)出直徑為15mm、厚度為2mm的圓盤形狀的移植物中的細胞數(shù)，在移植后1、6、12個月分別是94xl03、140x103和146x103。來自移植后l個月取出的移植物的肝細胞，表現(xiàn)出白蛋白的正常表達。在所有的制備物中都發(fā)現(xiàn)了正在增殖中的肝細胞，而在增殖速率方面不存在任何病理學增大。業(yè)已根據(jù)本發(fā)明移植的肝細胞，與標準的肝制備物相比，表現(xiàn)出BrdU的摻入增強3倍。實施例6血管形成對實施例4中所述的基質進行的進一步研究表明，這些基質在移植后僅僅一個月，就已顯著良好地形成了血管。血管肉眼可見地延伸到基質，而且作為充分毛細管形成的結果，移植的肝細胞和胰島細胞實現(xiàn)了與移植受體的心臟血管系統(tǒng)的接觸?？蛇M一步地觀察到，共移植的胰島細胞在受體中沒有？1起任何的低血糖癥。這些細胞的內分泌性能，以及受體自身的胰島細胞的內分泌性能，據(jù)推測受到反饋機制的調節(jié)。實施例7肝功能的過繼Gunn大鼠認為是人類Grigler-Najar(克納二氏)綜合癥的動物模型，這是因為，作為特定先天性代謝,陷的結果，它們的肝不能充分地結合膽紅素。結果，未結合的膽紅素的毒性血漿水平，作為重大的間接損害而導致死亡。3只Gunn大鼠用實施例4中所述的移殖了細胞的基質進行移植。基質的外面積總計為10cm2。實驗動物的膽紅素水平在移植之后僅僅4周就降低了。膽紅素從現(xiàn)在開始被結合。在所有的3種情況中，使用膽管探針，可以檢測仍然存在的肝臟膽管中結合的膽紅素。結果，基質中結合的膽紅素，造血性地到達肝，而且可以通過膽管系統(tǒng)自肝中消除。實施例8人類患者將如實施例4中所述的移殖了細胞的基質移植到正患有明顯的肝硬化患者的腹腔中。下表l總結了移植之前的患者實驗調查結果。表l參數(shù)患者1GOT27GPT35gGt89j6l清白蛋白2421CHE24.1給予患者1(乙基毒性肝硬化，以前代謝失調過數(shù)次，現(xiàn)在不是活躍的)4個基質(每例為124mmx45mmx5mm)。下表2分別概括了移植后3、10和20周的肝值。28<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>權利要求1、一種基于生物學耐受性聚合物或聚合物混合物的多孔基質，其特征在于該基質具有大小為150μm或更小的孔，以及大小為300μm或更大的孔，而且孔隙度為93到98％。2、如權利要求1所述的基質，其特征在于所述基質具有大小為130nm或更小的孔。3、如權利要求1或2所述的基質，其特征在于所述基質具有大小為370nm或更大的孔。4、如前述權利要求中任一項所述的基質，其特征在于所述生物學耐受性聚合物為生物學可降解聚合物。5、如前述權利要求中任一項所述的基質，其特征在于所述生物學可降解聚合物選自天然聚合物如白蛋白、纖維蛋白原、膠原蛋白、明膠、幾丁質、殼聚糖、瓊脂糖、藻酸鹽，以及合成聚合物如聚酸酐、聚(s-己內酯)和聚(a-羥基酯)。6、如權利要求5所述的基質，其特征在于該生物學可降解聚合物是乳酸含量為大約85mol%，羥基乙酸含量為大約15moP/o的聚(羥基乙酸-乳酸)。7、如權利要求1至6中任一項所述的多孔基質，其特征在于所述基質的表面用至少一種胞外基質蛋白進行涂層。8、如權利要求7所述的基質，其特征在于所述胞外基質蛋白選自膠原蛋白、層粘連蛋白和纖連蛋白。9、權利要求8所述的基質，其特征在于所述涂層含有纖連蛋白。10、如權利要求8所述的基質，其特征在于所述涂層含有I型膠原蛋白、層粘連蛋白和IV型膠原蛋白的混合物。11、如權利要求IO中所述的基質，其特征在于所述混合物含有大約相等重量含量的所述蛋白質。12、一種制備基于生物學可降解聚合物或聚合物混合物的多孔基質的方法，其特征在于將粒徑為大約20到950pm范圍、有利地大約為50到760pii范圍、尤其是大約108到250fun范圍的聚合物顆粒，與粒徑為大約90到670nm范圍、有利地大約110到520范圍、尤其是大約250到425nm范圍的氯化鈉顆粒的混合物擠壓，然后將氯化鈉溶出。13、如權利要求12所述的方法，其特征在于所述氯化鈉顆?；旌衔锇亓繛?5到50%、優(yōu)選重量為18到42%、尤其是重量為22到28%的粒徑為250jim到320nm的顆粒，重量為20到65%、優(yōu)選重量為30到52%、尤其是重量為42到46%的粒徑為330到380jim的顆粒，以及重量為15到62%、優(yōu)選重量為25到42%、尤其是重量為29到33%的粒徑為390nm到425nm的顆粒。14、如權利要求12所述的方法，其特征在于所述氯化鈉顆?；旌衔锇亓繛?到15%、優(yōu)選重量為4到12%、尤其是重量為7到9%的粒徑為108jun到140nm的顆粒，重量為1到11%、優(yōu)選重量為3到9%、尤其是重量為5到7%的粒徑為145nm到180pm的顆粒，重量為3到21%、優(yōu)選重量為7到17%、尤其是重量為10到14%的粒徑為185jim到220ftm的顆粒，重量為1到11%、優(yōu)選重量為3到9%、尤其是重量為5到7%的粒徑為225nm到250fim的顆粒，重量為15到50%、優(yōu)選重量為18到42%、尤其是重量為22到28%的粒徑為250nm到320的顆粒，重量為15到50%、優(yōu)選重量為18到42%、尤其是重量為22到28%的粒徑為330pm到380^im的顆粒，以及重量為5到29%、優(yōu)選重量為10到24%、尤其是重量為15到19%的粒徑為390pm到425jim的顆粒。15、如權利要求12到14中任一項所述的方法，其特征在于聚合物顆?；旌衔锇亓繛?到50%、優(yōu)選重量為10到30%、尤其是重量為14到18%的粒徑為108nm到140jim的顆粒，重量為10到55%、優(yōu)選重量為15到40%、尤其是重量為20到24%的粒徑為145fim到180fim的顆粒，重量為18到88%、優(yōu)選重量為32到76%、尤其是重量為43到49%的粒徑為185jim到220nm的顆粒，以及重量為5到45%、優(yōu)選重量為10到28%、尤其是重量為14到18%的粒徑為225jim到250的顆粒。16、如權利要求12至15中任一項所述的方法，其特征在于聚合物顆粒與氯化鈉顆粒的重量比為1:100到1:10，有利地為1:50到1:15，尤其是1:20到1:18。17、如權利要求12至16中任一項所述的方法，其特征在于將聚合物溶液添加到由聚合物顆粒與氯化鈉顆粒組成的混合物中，并在擠壓之前除去溶劑。18、如權利要求17所述的方法，其特征在于所述溶劑溶解聚合物但不能溶解鹽。19、如權利要求18所述的方法，其特征在于所述溶劑選自丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、六氟異丙醇、氯代及氟代的脂肪烴和芳香烴、四氫呋喃、乙基甲基酮、二乙基甲酮及其混合物。20、如權利要求19所述的方法，其特征在于聚合物是聚(羥基乙酸)、聚(乳酸)或聚(羥基乙酸-乳酸)，而溶劑為氯仿。21、如權利要求17至20中任一項所述的方法，其特征在于聚合物顆粒與溶解的聚合物的重量比為10:1到1:100，有利地為2:1到1:25,尤其是l:l到1:10。22、如權利要求12所述的方法，其特征在于擠壓通過壓力作用實現(xiàn)。23、如權利要求22所述的方法，其特征在于壓力為大約780psi到1450psi的范圍，有利地為大約840psi到1230psi的范圍，尤其是大約卯0psi到1100psi的范圍。24、如權利要求22或23所述的方法，其特征在于所述作用持續(xù)大約10s到360s的范圍，有利地為大約40s到180s的范圍，尤其是大約50s到70s的范圍。25、如權利要求22至24中任一項所述的方法，其特征在于實現(xiàn)所述作用的溫度為-76。C到42'C的范圍，有利地0。C到32。C的范圍，尤其是18'C到25。C的范圍。26、如權利要求12所述的方法，其特征在于為了溶出氯化鈉的目的，令水作用于被擠壓的混合物。27、如權利要求26所述的方法，其特征在于所述作用持續(xù)的時間為大約lh到80h的范圍，有利地為大約12h到62h的范圍，尤其是36h到60h的范圍。28、如權利要求26或27所述的方法，其特征在于再次除去水。29、如權利要求12所述的方法，其特征在于首先將被擠壓的混合物貯存于C02氣體中，而隨后將氯化鈉溶出。30、如權利要求29所述的方法，其特征在于C02壓力為大約140psi到1650psi的范圍，有利地為大約360psi到1120psi的范圍，尤其是大約800psi到900psi的范圍。31、如權利要求29或30所述的方法，其特征在于貯存時間為大約1h到180h的范圍，有利地為大約3h到60h的范圍，尤其是大約12h到36h的范圍。32、一種制備基于生物學耐受性聚合物和聚合物混合物的多孔基質的方法，其特征在于將由聚合物顆粒、致孔材料顆粒和聚合物溶液組成的混合物進行擠壓，然后將致孔材料溶出。33、如權利要求32所述的方法，其特征在于所述聚合物選自聚酸酐、聚(原酸酯)、聚(a-羥基酯)、聚(酯酰胺)、聚酰胺、聚醚酯、聚碳酸酯、聚亞烷基、聚亞烷基二醇、聚環(huán)氧烷、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚卣乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚苯乙烯、聚氨基甲酸酯、衍生的纖維素和(曱基)丙烯酸聚合物以及共聚物。34、如權利要求32所述的方法，其特征在于所述致孔材料選自水溶性鹽。35、如權利要求34所述的方法，其特征在于所述水溶性鹽選自氯化鈉、氯化鉀、氟化鈉、氟化鉀、碘化鈉、碘化鉀、硝酸鈉、硫酸鈉、檸檬酸鈉、酒石酸鈉、糖及其混合物。36、如權利要求32所述的方法，其特征在于所述溶液含有溶解形式的聚合物和固體形式的聚合物顆粒。37、如權利要求32所述的方法，其特征在于所述溶液不能溶解致孔材料。38、一種可使用權利要求11至37的方法獲得的基質。39、一種移植物，其含有如權利要求1至11或38中任一項所述的基質，和至少一種細^^。40、一種移植物，其含有基于生物學耐受性聚合物的基質，和至少兩種細胞類型的細胞，其特征在于第一種細胞類型的細胞是肝細胞，而第二種細胞類型的細胞是胰島細胞。41、如權利要求40所述的移植物，其特征在于肝細胞與胰島細胞的比例為大約106:3000。42、如權利要求40所述的移植物，其特征在于肝細胞與胰島細胞的比例為大約106:3-200,有利地為大約106:10-100，尤其是大約106:20-80,尤其優(yōu)選大約106:35-45。43、一種獲得用于接種可移植基質的細胞的方法，其中(i)自個體取出一部分組織；(ii)該組織部分用含有NaCl、KCI、HEPES、CaCl2、膠原酶和胰蛋白酶抑制劑，而且pH為大約7.3到7.4的組合物進行處理；(iii)如果必要，切碎處理的組織部分；(iv)將組織部分在合適的培養(yǎng)基中進行震蕩；(v)而且分離至少一部分所得的細胞懸液。44、如權利要求43所述的方法，其特征在于在取出組織部分之后，首先用含有NaCl、KCl和HEPES，pH為大約7.4的另一種組合物進行處理。45、如權利要求43所述的方法，其特征在于將所得的細胞懸液于4'C,以大約50g進行離心，并分離細胞沉淀。全文摘要本發(fā)明涉及基于生物學相容性聚合物或聚合物混合物的多孔基質，涉及建立在所述基質之上的細胞移植物，以及基于肝細胞和胰島細胞的細胞混合物的其他細胞移植物。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)多孔基質的方法，涉及根據(jù)所述方法獲得的基質，以及獲得可用于接種可移植基質的細胞的特定方法。文檔編號A61L27/26GK101450229SQ20081017402公開日2009年6月10日申請日期2004年6月7日優(yōu)先權日2003年6月6日發(fā)明者M·格爾納,P·M·考夫曼申請人:人類自動化細胞有限公司