專利名稱：超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬涉及藥物載體制備領(lǐng)域，具體地是一種納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
藥物與載體相結(jié)合形成藥物載體系統(tǒng)后，藥物的吸收和分布不再由藥物本身決定，而 是受到載體理化性質(zhì)的影響。根據(jù)臨床要求選擇適當(dāng)?shù)乃幬镙d體材料，不僅可以將藥物輸 送到靶器官，而且對于藥物的理化性質(zhì)和藥理活性起到有益的作用。
鹽酸小檗堿(黃連素)是從黃連、黃柏、三顆針等植物干燥根莖中提取出的一種異喹啉 類生物堿，過去主要應(yīng)用于通過腸道給藥來治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾以及一般腸道感染等。 近年來的研究發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿對人類肝癌細(xì)胞，結(jié)腸腫瘤細(xì)胞，食管癌細(xì)胞系，惡性畸胎 瘤細(xì)胞、大鼠9L腦腫瘤細(xì)胞，Lewis肺癌細(xì)胞等都有一定的抑制和殺滅作用。但研究還 發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿體內(nèi)抑瘤作用沒有體外作用明顯，可能是因?yàn)辂}酸小檗堿腸道吸收較差， 在體內(nèi)很難達(dá)到對腫瘤細(xì)胞直接作用的較高的血藥濃度。鹽酸小檗堿靜脈給藥，可能引起 藥疹、過敏反應(yīng)、血色素及紅細(xì)胞減少、藥敏性休克等副作用，1982年我國已經(jīng)禁止使 用鹽酸小檗堿靜脈給藥。由于鹽酸小檗堿具有價(jià)格低廉，安全性高的特點(diǎn)，使其成為一種 值得在腫瘤防治方面深入研究的藥物。因此，如何發(fā)揮鹽酸小檗堿在癌癥治療上的效果， 抑制其副作用是我們面臨的一大問題。為了提高鹽酸小檗堿療效，同時(shí)降低其毒副作用， 本專利提出制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的新方法。
脂質(zhì)體是類脂雙分子層形成的超微型球體，類似生物膜結(jié)構(gòu)，它能將藥物包裹于囊 內(nèi)而成為一種新型藥物載體。其基本組分磷脂是生物體內(nèi)固有的成分，在生物體內(nèi)經(jīng)生物 轉(zhuǎn)化而降解，無毒性及免疫原性，因此，脂質(zhì)體被認(rèn)為是最具發(fā)展前途的藥物載體之一。
目前，制備脂質(zhì)體的方法主要有薄膜分散法，逆向蒸發(fā)法，超聲波分散法，凍融法， 冷凍干燥法，乙醇注入法，乙醚注入法，逆相蒸發(fā)法，表面活性劑處理法等，但上述制備 方法存在嚴(yán)重的缺點(diǎn)，如產(chǎn)物中有機(jī)溶劑殘留導(dǎo)致脂質(zhì)體的安全性下降，顆粒單分散性 差不利于體系的穩(wěn)定，藥物的包封率低等。超臨界二氧化碳流體是一種環(huán)境友好型溶劑， 在制備結(jié)束后易于與產(chǎn)物分離且不造成環(huán)境污染，并具備優(yōu)良溶劑的特性。近幾年來，隨著超臨界二氧化碳流體技術(shù)的迅速發(fā)展，應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)大，其漸漸被應(yīng)用于脂質(zhì)體的 制備中。在脂質(zhì)體制備過程中，超臨界二氧化碳的優(yōu)勢主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面第一， 與脂質(zhì)體的其它制備方法比較，超臨界二氧化碳法制備的脂質(zhì)體粒徑較為均勻，單分散性 高。第二，與蒸發(fā)、萃取或稀釋等操作比較，利用超臨界二氧化碳法制備的脂質(zhì)體無有機(jī) 溶劑殘留，為脂質(zhì)體的安全臨床應(yīng)用提供了可能。第三，在孵化過程中，超臨界二氧化碳 流體可以溶解磷脂中的小分子雜質(zhì)，釋放二氧化碳時(shí)雜質(zhì)會同時(shí)被帶離體系，以達(dá)到純化 磷脂提高脂質(zhì)體質(zhì)量的作用。第四，超臨界二氧化碳流體是一種新興的優(yōu)良溶劑，傳質(zhì)速 率高，這有利于孵化過程中藥物分子從膜外向膜內(nèi)的擴(kuò)散，同時(shí)超臨界二氧化碳流體是二 氧化碳?xì)怏w在一定溫度下經(jīng)高壓作用形成的，體系中的高壓同樣有利于藥物進(jìn)入脂質(zhì)體的 內(nèi)水相，進(jìn)而提高脂質(zhì)體的包封率。此外，超臨界二氧化碳流體環(huán)境可以塑化磷脂分子的 結(jié)構(gòu)，這種塑化作用有利于磷脂分子形成熱力學(xué)更穩(wěn)定的構(gòu)象，使雙分子層的排列更加均 勻，以達(dá)到提高脂質(zhì)體穩(wěn)定性的目的。上述優(yōu)點(diǎn)說明超臨界二氧化碳法在制備鹽酸小檗堿 脂質(zhì)體方面具有一定的優(yōu)勢。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有的制備脂質(zhì)體的方法中普遍存在的產(chǎn)物中有機(jī)溶劑殘留導(dǎo)致脂質(zhì)體的安.全 性下降，顆粒單分散性差不利于體系的穩(wěn)定等缺陷，本發(fā)明提出一種超臨界二氧化碳法制 備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的新方法，以有效地克服傳統(tǒng)制備方法中粒徑不均勻、穩(wěn)定性差、 包封率低、有機(jī)溶劑殘留的缺點(diǎn)。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
根據(jù)超臨界二氧化碳流體的傳質(zhì)均勻及速率高等特點(diǎn)，運(yùn)用超臨界二氧化碳流體作為 介質(zhì)，制備單分散性好、藥物包封率高的納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體，并可通過調(diào)節(jié)制備壓力 控制脂質(zhì)體的尺寸。
依照上述技術(shù)方案，本發(fā)明的具體操作是
1) 成膜 ■
稱取適量卵磷脂及膽固醇置于圓底燒瓶中，卵磷脂與膽固醇的重量比為3.8-2.5: 1。 再以體積比2.5-2: 1配制的氯仿甲醇混合液，加入其中至將其溶解為止。完全溶解后，
在35-42。C恒溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中成膜，然后抽真空使有機(jī)溶劑完全揮 發(fā)。
2) 包封藥物a) 鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液的制備
移取鹽酸小檗堿藥物溶液，置于步驟l)中具有的圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落， 獲得鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液。其中鹽酸小檗堿藥物溶液與卵磷脂的質(zhì)量比(藥脂比)為
1: 9-12。
b) 在超臨界二氧化碳流體中孵化
將a)中制得的混懸液置于高壓反應(yīng)釜中，另加入適量無水乙醇，再將高壓反應(yīng)釜置 于恒溫水浴中，通入二氧化碳?xì)怏w，達(dá)到一定溫度和壓力后，二氧化碳進(jìn)入其臨界區(qū)域， 呈現(xiàn)超臨界流體狀態(tài)。制備壓力是可以調(diào)節(jié)的。如16， 18， 20， 22， 24MPa等。只要該 壓力下二氧化碳呈超臨界態(tài)即可。然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在40-45。C的水浴中攪拌孵化半個(gè)小 時(shí)。無水乙醇與鹽酸小檗堿藥物溶液的質(zhì)量比為1: 4-5.5。取無水乙醇密度為0.789g/mL， 鹽酸小檗堿藥物溶液的密度近似為lg/mL。
3)釋放二氧化碳
孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。 比較現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下積極效果
1) 制備獲得的鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的粒徑分散均勻，單分散性好，穩(wěn)定性高(圖1， 圖2，表l);
2) 如表2的比較可見，本發(fā)明所得的藥物的包封率高于傳統(tǒng)的方法；
3) 有機(jī)溶劑殘留量少；
4) 可通過調(diào)節(jié)孵化時(shí)高壓釜中超臨界二氧化碳的壓力控制脂質(zhì)體粒徑的尺寸大小和 穩(wěn)定性(包封壓力對尺寸及其分散的影響，見圖3)。制備壓力與鹽酸小檗堿脂質(zhì)體粒徑
的關(guān)系壓力越大，粒徑越小。


圖1是納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的粒徑與形態(tài)(原子力顯微鏡)
圖2a和圖2b是本發(fā)明提出的制備方法與傳統(tǒng)的薄膜分散法制備的鹽酸小檗堿脂質(zhì)體 的粒徑比較(激光光散射測定結(jié)果)。
其中圖2a是本發(fā)明提出的超臨界二氧化碳法制備納米脂質(zhì)體的粒徑和粒徑分布，圖 2b是薄膜分散法制備的脂質(zhì)體的粒徑和粒徑分布。
6圖3表明通過調(diào)節(jié)超臨界二氧化碳的制備壓力，可以控制納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的尺 寸和分散性
實(shí)施例
以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明
實(shí)施例l:制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液，稱取50mg卵磷脂及16.5mg膽固醇置于 圓底燒瓶中，用3mL體積比2.2: 1的氯仿與甲醇混合液溶解，完全溶解后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜， 水浴溫度設(shè)定為4rc，再抽真空使溶劑揮發(fā)。移取6mllmg/mL鹽酸小檗堿溶液，置于上 述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落。將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，另加入1.3mL 無水乙醇，通二氧化碳?xì)怏w至12MPa。然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在一定溫度的水浴中攪拌孵化 半個(gè)小時(shí)。孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。
實(shí)施例2:制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液，稱取50mg卵磷脂及16.5mg膽固醇置于 圓底燒瓶中，用4mL體積比2: 1的氯仿與甲醇混合液溶解，完全溶解后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜， 水浴溫度設(shè)定為45。C，再抽真空使溶劑揮發(fā)。移取5mL lmg/mL鹽酸小檗堿溶液，置于 上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落。將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，另加入 1.3mL無水乙醇，通二氧化碳?xì)怏w至16MPa。然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在一定溫度的水浴中攪 拌孵化半個(gè)小時(shí)。孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。
實(shí)施例3:制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液，稱取50mg卵磷脂及16.5mg膽固醇置于 圓底燒瓶中，用3.5mL體積比2.5: 1的氯仿與甲醇混合液溶解，完全溶解后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成 膜，水浴溫度設(shè)走為42t:，再抽真空使溶劑揮發(fā)。移取5mL lmg/mL鹽酸小檗堿溶液， 置于成膜的圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落。將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，另 加入1.3mL無水乙醇，通二氧化碳?xì)怏w至20MPa。然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在一定溫度的水浴 中攪拌孵化半個(gè)小時(shí)。孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。
實(shí)施例4:制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液，稱取55mg卵磷脂及16.5mg膽固醇置于 圓底燒瓶中，用體積比2丄1的氯仿與甲醇混合液溶解，完全溶解后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，水 浴溫度設(shè)定為43。C，再抽真空使溶劑揮發(fā)。移取5mL lmg/mL鹽酸小檗堿溶液，置于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落。將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，另加入1.3mL 無水乙醇，通二氧化碳?xì)怏w至24MPa。然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在一定溫度的水浴中攪拌孵化 半個(gè)小時(shí)。孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。
本發(fā)明根據(jù)超臨界二氧化碳流體的傳質(zhì)均勻及速率高等特點(diǎn)，運(yùn)用超臨界二氧化碳流 體作為介質(zhì)，制備單分散性好、藥物包封率高的納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體，并可通過調(diào)節(jié)孵 化時(shí)高壓釜中超臨界二氧化碳的壓力控制脂質(zhì)體粒徑的大小。
表l、本發(fā)明提出的超臨界二氧化碳法與傳統(tǒng)超臨界二氧化碳法制備的脂質(zhì)體穩(wěn)定性比較
-_______JI定常數(shù)(KE) 方法~~~~______________KE 。771' 25天J
本發(fā)明提出的超臨界二氧化碳法 一般的超臨界二氧化碳法0.112 0.429
(注1、穩(wěn)定常數(shù)的測定條件a穩(wěn)定常數(shù)的計(jì)算公式KEKA2sd-Ao)/A();b溫度為277.2K;
2、穩(wěn)定常數(shù)越小脂質(zhì)體越穩(wěn)定)
表2、本發(fā)明提出的超臨界二氧化碳法與傳統(tǒng)超臨界二氧化碳法制備的脂質(zhì)體包封率比較
^-^^^^參數(shù)制備壓強(qiáng)/MPa孵化溫度廠C包封率/%
本發(fā)明提出的超臨界二氧化碳法 一般的超臨界二氧化碳法16 1643 4355.22 50.87
(注包封率的計(jì)算公式包封率=(1-游離藥《吻質(zhì)量/藥物總質(zhì)量>100%)8
權(quán)利要求
1，一種超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法，其特征在于它包括以下步驟1)成膜稱取適量卵磷脂及膽固醇置于圓底燒瓶中，卵磷脂與膽固醇的重量比為3.8-2.5∶1，再以體積比2.5-2∶1配制的氯仿甲醇混合液，加入其中至將其溶解為止；完全溶解后，在35-42℃恒溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中成膜，然后抽真空使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)；2)包封藥物a)鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液的制備移取鹽酸小檗堿藥物溶液，置于步驟1)中具有的圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，獲得鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液；所述的鹽酸小檗堿藥物溶液與卵磷脂的質(zhì)量比為1∶9-12；b)在超臨界二氧化碳流體中孵化將a)中制得的混懸液置于高壓反應(yīng)釜中，另加入適量無水乙醇，再將高壓反應(yīng)釜置于恒溫水浴中，通入二氧化碳?xì)怏w，增加壓力后，二氧化碳進(jìn)入其臨界區(qū)域，呈現(xiàn)超臨界流體狀態(tài)；然后關(guān)閉進(jìn)氣閥，在40-45℃的水浴中攪拌孵化20-45分鐘；無水乙醇與鹽酸小檗堿藥物溶液的質(zhì)量比為1∶4-5.5；3)釋放二氧化碳孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，得到產(chǎn)品。
2，如權(quán)利要求1所述的超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法，其特征在于所述的鹽酸小檗堿與卵磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1:10。
3，如權(quán)利要求1所述的超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法，其特征在于所述的無水乙醇與鹽酸小檗堿藥物溶液中兩者的質(zhì)量比優(yōu)選為1: 5。
4，如權(quán)利要求1所述的超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法，其特征在于在超臨界二氧化碳流體中孵化中，水-洛的溫度優(yōu)選為43'C。
5,如權(quán)利要求1所述的超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方 法，其特征在于在超臨界二氧化碳流體中孵化中，攪拌孵化的時(shí)間優(yōu)選為30分 鐘。
6，如權(quán)利要求1所述的超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方 法，其特征在于步驟l)中的膽固醇與卵磷脂的最優(yōu)質(zhì)量比為1: 3.
全文摘要
本發(fā)明是一種超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法，本發(fā)明的具體操作步驟包括1)成膜；2)包封藥物；a)鹽酸小檗堿脂質(zhì)體混懸液的制備；b)在超臨界二氧化碳流體中孵化；3)釋放二氧化碳孵化結(jié)束后，釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得產(chǎn)品。比較現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明根據(jù)超臨界二氧化碳流體的傳質(zhì)均勻及速率高等特點(diǎn)，運(yùn)用超臨界二氧化碳流體作為介質(zhì)，制備單分散性好、藥物包封率高的納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體，并可通過調(diào)節(jié)制備壓力控制脂質(zhì)體的尺寸。
文檔編號A61K9/127GK101683322SQ20081020054
公開日2010年3月31日 申請日期2008年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月26日
發(fā)明者安學(xué)勤, 敏 張, 沈偉國, 丹 裘 申請人:華東理工大學(xué)