專利名稱：：一種治療腫瘤的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，主要涉及一種用于治療腫瘤的含有蟾毒配基提取物的組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：藥用蟾蜍為兩棲綱蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍(BufobufogargarizansCantor)或黑眶蟾蜍(BufomelanostictusSchneider),蟾酥為中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮膚腺分泌的白色漿液，經(jīng)加工干燥制成。古今驗(yàn)方廣泛應(yīng)用蟾蜍、蟾酥拔毒消腫、定痛殺蟲、強(qiáng)心利尿。現(xiàn)代研究表明，蟾酥中的脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈三種脂溶性成分的混合物不但具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞(誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞新生血管形成、降低腫瘤轉(zhuǎn)移等作用。中藥注射劑是一種新型的給藥系統(tǒng)，能使中藥的有效成分能很好的地發(fā)揮其治療作用。目前已有的文獻(xiàn)所報(bào)道三種脂溶性成分的總含量低于80%，不符合現(xiàn)行中藥注射劑的新藥申報(bào)要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是如何獲得符合現(xiàn)行中藥注射劑技術(shù)要求的中藥組合物。為此，本發(fā)明的目的之一是提供了一種符合中藥注射技術(shù)要求的中藥組合物。具體的技術(shù)方案是提供了一種中藥組合物，該組合物含有脂蟾毒配基、華蟾毒精和蟾毒靈的蟾毒配基提取物和溶解劑，所述蟾毒配基提取物中三種成分的總含量不低于92%。所述組合物可進(jìn)一步被制成注射用的溶液劑或凍干粉針劑，或額外加入凍干支架劑，進(jìn)一步被制成注射用粉針劑。所述中藥組合物中的溶解劑可以是醫(yī)用的含水溶媒，或醫(yī)藥的含PEG的溶4媒，或含水和PEG按任一比例的混合的醫(yī)用溶媒，優(yōu)選水或PEG400或其按任一比例的混合，特別優(yōu)選水或PEG400。上述中藥組合物除蟾毒配基提取物和溶解劑外，還可以附加其他的治療腫瘤的活性藥物，也可以含其他的輔助藥物如葡萄糖等。所述提取物是采用以下方式獲得的。以醇類溶劑為提取溶劑，以硅膠柱為分離柱，采用一定比例的石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，不僅提取效率高，簡(jiǎn)化了操作步驟，還進(jìn)一步提高了上述三種蟾毒配基提取物的含量，含量不低干92%，優(yōu)選不低于95%，特別優(yōu)選不低于97。Z。上述提取溶劑優(yōu)選無水乙醇或95%乙醇；上述蟾毒配基提取物中脂蟾毒配基、華蟾毒精和蟾毒靈三者的重量比為重量比為23:1~2:1~2，優(yōu)選重量比為2:1~1.5:1~1.3。本發(fā)明另一目的是提供一種所述中藥組合物的制備方法。這種方法包括以下步驟a、取蟾酥藥材適量，加醇類溶劑，加熱回流提取，提取液趁熱過濾，濃縮后制備成濃縮液，上述醇類溶劑優(yōu)選無水乙醇或95%乙醇；和b、將上述濃縮液與適量硅膠攪拌，以石油醚乙酸乙酯(體積比4:1)浸泡后濕法裝柱，用石油醚乙酸乙酯(體積比27:1)洗脫劑進(jìn)行等速洗脫，收集洗脫液，蒸干，即得本發(fā)明的蟾毒配基提取物，所述提取物中三種組分的總含量不低于92%，上述洗脫劑石油醚乙酸乙酯的體積比優(yōu)選4.5:1;和c、取上述提取物適量，用溶解劑將其溶解，溶解后濃度為0.01~2g/L，超聲15min，放置48h。在無菌條件下，用0.45pm或0.22pm的濾膜過濾，得透明澄清液體，將此液體灌封于安瓿中，滅菌，即得本發(fā)明的中藥組合物，所述濃度優(yōu)選0.05lg/L，特別優(yōu)選0.10.5g/L，溶解劑可以是醫(yī)用的含水溶媒，或醫(yī)藥的含PEG的溶媒，或含水和PEG按任一比例的混合的醫(yī)用溶媒，優(yōu)選水或PEG400或其按任一比例的混合，特別優(yōu)選水或PEG400，該中藥組合物可被制成注射用溶液劑或粉針劑；或d、取上述提取物適量，用溶解劑溶解，溶解后濃度為0.01~2g/L，超聲15min，放置48h。在無菌條件下，用0.45pm或0.22pm的濾膜過濾，得透明澄清液體，取澄明液體適量，加入適量?jī)龈芍Ъ軇?，滅菌，混和后凍干，即得本發(fā)明的中藥組合物，所述濃度優(yōu)選0.05lg/L，特別優(yōu)選0.10.5g/L，所述溶解劑可以是醫(yī)用的含水溶媒，或醫(yī)藥的含PEG的溶媒，或含水和PEG按任一比例的混合的醫(yī)用溶媒，優(yōu)選水或PEG400或其按任一比例的混合，特別優(yōu)選水或PEG400，所述凍干支架劑為甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合，該組合物可被制成注射用凍干粉針劑。本發(fā)明的中藥組合是以蟾酥為原料藥材，主要成分為脂蟾毒配基、華蟾毒精和蟾毒靈的蟾毒配基提取物，是一種對(duì)腫瘤有療效的中藥組合物。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，對(duì)肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等疾病具有良好的治療作用，對(duì)肺癌、肝癌的療效優(yōu)于蟾酥注射液，與劑量相同的環(huán)磷酰胺相當(dāng)。小鼠的毒理學(xué)試驗(yàn)表明，該注射劑毒性低于蟾酥注射液，并具有升高白細(xì)胞作用。圖1為脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈三種蟾毒配基提取物的HPLC分析圖具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受此限制。實(shí)施例1取蟾酥藥材l克，加95。/。乙醇10mL，加熱回流40min，上述條件下提取2次。將提取液趁熱過濾，旋蒸濃縮后加入1克硅膠拌樣，得拌樣硅膠。取20克硅膠以石油醚乙酸乙酯(體積比4.5:1)浸泡后濕法裝柱，加入拌樣硅膠，用石油醚乙酸乙酯(體積比4.5:1)洗脫劑進(jìn)行等度洗脫。通過普通條件下的HPLC分析，如圖1所示，保留時(shí)間為7.184min的為蟾毒靈，8.886min的為華蟾毒精，9.549min的為脂蟾毒配基，收集含有這三種脂溶性成分的洗脫液，蒸干，即得本發(fā)明蟾毒配基提取物，其中三種活性的蟾毒配基占總提取物的重量百分比為97.88%。實(shí)施例2稱取30mg三種蟾毒配基提取物，用蒸餾水將其溶解在250mL棕色容量瓶中，超聲15min，放置48h，用0.45pm的濾膜過濾，得透明澄清藥液，藥液灌6封于2mL安瓿中，流通蒸汽滅菌，即得裝量為2mL的注射用溶液劑。實(shí)施例3稱取30mg三種蟾毒配基提取物，用蒸餾水將其溶解在250mL棕色容量瓶中，超聲15min，放置48h，用0.22pm的濾膜過濾，得透明澄清藥液，加入適量?jī)龈芍Ъ軇?，滅菌，無菌條件下灌裝于10mL的西林瓶中，凍干，即得供注射用凍干粉針劑，凍干支架劑為甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例混和。實(shí)施例4取生長(zhǎng)良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理鹽水稀釋成l-2xl(f個(gè)/mL濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2mL，隨機(jī)分組，設(shè)1)空白對(duì)照組(NS);2)環(huán)磷酰胺(CTX，5mg/kg，ipx7);3)蟾酥注射液(5mg/kg，ivx7);4)脂蟾毒配基組合物注射液(lmg/kg，ivx7);5)脂蟾毒配基組合物注射液(5mg/kg，ivx7)。接種后次日起按以上方案給藥，給藥體積為0.5mL/20g體重。接種后10日脫頸處死動(dòng)物，解剖取瘤塊，稱瘤重，結(jié)果判定根據(jù)以下公式對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重腫瘤抑制率％=-X100%對(duì)照組平均瘤重結(jié)果脂蟾毒配基組合物注射液連續(xù)尾靜脈注射7天，lmg/kg和5mg/kg劑量組對(duì)小鼠肝癌H22的抑瘤率分別為57.36%和65.97%;陽(yáng)性藥物CTX組腹腔注射7天，抑瘤率為69.57%;蟾酥注射液腹腔注射7天，抑瘤率為39.65%。結(jié)果見表l。表l.蟾素對(duì)小鼠肝癌H22的抑瘤作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。權(quán)利要求1、一種中藥組合物，其特征在于含有蟾毒配基提取物和溶解劑，所述蟾毒配基提取物由脂蟾毒配基、華蟾毒精和蟾毒靈三種活性成分組成，且所述蟾毒配基提取物中三種活性成分總含量不低于92％。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于所述蟾毒配基提取物中三種活性成分總含量不低于95%。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥組合物，其特征在于所述蟾毒配基提取物中三種活性成分總含量不低于97%。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于述蟾毒配基提取物中脂蟾毒配基、華蟾毒精和蟾毒靈的重量比為2:11.5:11.3。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述溶解劑選自水、PEG400和其按任一比例的混合。6、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于還含有凍干支架劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于所述凍干支架劑為甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合。8、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的中藥組合物，其特征在于所述組合物可被制成注射用溶液劑或凍干粉針劑。9、根據(jù)權(quán)利要求1至7所述的中藥組合物在制備治療腫瘤藥物中的用途，其特征在于所述腫瘤包括肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或結(jié)腸癌。10、一種權(quán)利要求1至7所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于按以下步驟制備a、取蟾酥藥材適量，加95%乙醇，加熱回流提取，提取液趁熱過濾，濃縮后制備成濃縮液；和b、將上述濃縮液與適量硅膠攪拌，以石油醚乙酸乙酯(體積比4:1)浸泡后濕法裝柱，用石油醚乙酸乙酯(體積比4.5:1)洗脫劑進(jìn)行等速洗脫，收集洗脫液，蒸干，即得本發(fā)明的蟾毒配基提取物，所述提取物中三種組分的總含量不低于92%;和c、取上述提取物適量，用適量溶解劑溶解，溶解后濃度為0.012g/L，超聲15min，放置48h。在無菌條件下，用0.45|im或0.22jim的濾膜過濾，得透明澄清液體，將此液體灌封于安瓿中，滅菌，即得本發(fā)明的中藥組合物；或d、取上述提取物適量，用適量溶解劑溶解，溶解后濃度為0.01~2g/L，超聲15min，放置48h。在無菌條件下，用0.45pm或0.22pm的濾膜過濾，得透明澄清液體，取澄明液體適量，加入適量?jī)龈芍Ъ軇?，滅菌，凍干，即得本發(fā)明的所述中藥組合物，所述凍干支架劑為甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療腫瘤的中藥組合物及其制備方法，該中藥組合物含蟾毒配基提取物和藥用載體，所述蟾毒配基提取物由蟾酥藥材提取后以硅膠柱純化后制得，總含量不低于92％，然后經(jīng)溶解、過濾、灌封、滅菌制得中藥組合物，可進(jìn)一步被制成注射用溶液劑或凍干粉針劑。該中藥組合物對(duì)肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等具有良好的抗癌作用，并能升高白細(xì)胞，副作用較少。文檔編號(hào)A61K9/08GK101683359SQ20081020074公開日2010年3月31日申請(qǐng)日期2008年9月28日優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日發(fā)明者何峻瑤,奉建芳,杜狄崢申請(qǐng)人:上海秀新臣邦醫(yī)藥科技有限公司;上海中醫(yī)藥大學(xué)