專利名稱：：一種淚道塞及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)用器材領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及眼科治療器材，更具體地涉及一種淚道塞。
背景技術(shù)：
：干眼癥是一種淚液質(zhì)和量、或動(dòng)力學(xué)異常導(dǎo)致的淚膜不穩(wěn)定和眼表組織損傷并伴有以眼部不適癥狀為特征的眼表疾病。隨著人們生活方式的改變和計(jì)算機(jī)的普及，干眼癥患病率呈逐年上升的趨勢(shì)，在眼科門診就診率中所占比例不斷增加。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)的干眼癥患病率在7%10%之間。傳統(tǒng)的干眼癥治療方法以人工淚液滴眼為主，皮質(zhì)激素、免疫抑制劑以及淚道塞也被用于干眼癥的治療。使用藥物治療的同時(shí)輔以淚道塞治療能有效改善干眼癥患者的干眼癥狀。但是，由于具體工藝以及專利保護(hù)，進(jìn)口淚道塞的價(jià)格昂貴，為我國(guó)人群的收入水平所難以承受，尚不能得到廣泛應(yīng)用，不能從根本上達(dá)到改善人群千眼癥癥狀和體征的目的。目前國(guó)內(nèi)尚未研制和開發(fā)相關(guān)的淚道塞來治療干眼癥及相關(guān)的疾病，因此很有必要在參照國(guó)外先進(jìn)技術(shù)的基礎(chǔ)上，自主開發(fā)研制一種適合我國(guó)國(guó)情的淚道塞，最終改善人群干眼癥的癥狀和體征。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種安全、有效、成本低廉的淚道塞及其制備方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供的淚道塞，是由聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮以1:3—3:1的重量比制成的棒狀物，所述聚乙烯醇的分子量為20，000200,000，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量為8，000—200，000。制備本發(fā)明淚道塞的原料聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮以醫(yī)用級(jí)為佳。本發(fā)明的淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度一般為6—llmm，半徑一般為0.2-0.6mra。淚道塞的大小可按照使用該淚道塞的人(成人、老年人或兒童)或動(dòng)物的淚道大小進(jìn)行設(shè)計(jì)。例如，一般來說，人用淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為10土lmra，半徑為0.3±0.l鵬；家兔用淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為8士2mm，半徑為0.5±0.lmn]。本發(fā)明提供的淚道塞制備方法包括以下步驟(1)將聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮以1:3—3:1的比例溶于80—95。C熱水中，冷卻至7(TC，灌至模具；(2)在烘箱中6(TC烘20min，過夜冷卻，脫模成型制得淚道塞。本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中使用醫(yī)用級(jí)聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，可將制得的淚道塞在50X乙醇中浸泡2h進(jìn)行純化處理。本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，可將乙醇純化處理的淚道塞再在蒸餾水中浸泡24h。本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，可將經(jīng)乙醇純化和蒸餾水浸泡處理過的淚道塞在恒溫干燥箱中于50-6(TC烘1-3小時(shí)。本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，可將烘干的淚道塞進(jìn)行滅菌處理。本發(fā)明的淚道塞經(jīng)毒理試驗(yàn)和動(dòng)物模型試驗(yàn)證實(shí)，具有安全性和良好的生物相容性，可明顯改善干眼癥狀，具有臨床實(shí)用性。其制作工藝簡(jiǎn)單，成本較低，符合我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平，有利于今后開發(fā)、應(yīng)用。圖1表示干燥狀態(tài)下的淚道塞。圖2A表示浸水24h后的淚道塞；圖2B表示浸水24h后淚道塞的橫徑。圖3A、3B分別為對(duì)照組(H.EX10)和試驗(yàn)組(H.EX10)皮下植入部位的光鏡檢査結(jié)果。圖4A、4B分別為對(duì)照組B4(H.EX10)和試驗(yàn)組E3(H.EX40)(置入兩個(gè)月后)角膜的光學(xué)顯微鏡檢查結(jié)果。圖5A、5B分別為對(duì)照組D3(H.EX10)和試驗(yàn)組E4(H.EX10)淚道周圍組織的光學(xué)顯微鏡檢査結(jié)果。圖6A、6B分別為對(duì)照組C5(H.EX10)和試驗(yàn)組E2(H.EX20)(置入兩個(gè)月后)結(jié)膜組織的光學(xué)顯微鏡檢査結(jié)果。圖7A、7B分別為對(duì)照組D3(X1500)和試驗(yàn)組E4(X2000)角膜標(biāo)本的電鏡檢查結(jié)果。圖8A、8B分別為ATD組置入淚道塞前和置入淚道塞后40天的結(jié)膜印跡細(xì)胞檢查結(jié)果。具體實(shí)施例方式以下用實(shí)施例和試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的描述。它們僅僅是對(duì)本發(fā)明最佳實(shí)施方式的描述，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。實(shí)施例1(1)將聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮以1:1的比例溶于8(TC水中，冷卻至70°C，灌至模具；(2)在烘箱中6(TC下烘20min，過夜冷卻，脫模成型；(3)在50X的酒精中浸泡2h進(jìn)行純化處理；(4)再在蒸餾水中浸泡24h;(5)放入恒溫干燥箱中6(TC下烘lh;和(6)裝入無菌玻璃瓶中。用兩種模具，制成兩種大小的淚道塞。其中一種在千燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為10土lram，半徑為O.3±0.lmrn;另一種在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為8土2tnm，半徑為0,5±0.lmm。將第二種大小的淚道塞于室溫下浸泡在蒸餾水中，24小時(shí)后長(zhǎng)度為ll土O.2mm，半徑為2.2±0.3mm。將這種淚道塞于38t長(zhǎng)時(shí)間浸泡，約在62±4天時(shí)完全降解。實(shí)施例2除了將聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮以1:3的比例溶于9(TC水之外，其余同實(shí)施例l,同樣制成淚道塞。實(shí)施例3除了將聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮以3:1的比例溶于85C水之外，其余同實(shí)施例l,同樣制成淚道塞。試驗(yàn)例實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭白兔，雌雄不限，體重23kg，購自同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SYXK(滬)2002—0038;豚鼠，雌雄不限，體重200350g，1-2月齡，由中國(guó)科學(xué)院上海動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。試驗(yàn)例1生物相容性試驗(yàn)1.細(xì)胞毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組為本發(fā)明的淚道塞(用肥皂水清洗，雙蒸水洗滌，濾紙吸干，高壓蒸汽滅菌20min);陽性對(duì)照組為64g/L苯酚溶液(lml)，陰性對(duì)照組為含醫(yī)用不銹鋼絲的空白管。頸椎脫位法處死小鼠，眼球放血，將鼠浸入75%乙醇中移入無菌室；放入瓷盤，用75%乙醇消毒；剪開皮膚取出部分皮膚組織放入含有PBS液的平皿中；用醫(yī)用剪刀將組織剪成1.5-2.Omm小塊，用PBS洗滌后加入0.25%胰蛋白酶并轉(zhuǎn)移到小三角瓶?jī)?nèi)，37。C消化20min，棄上清液；用0.25%胰蛋白酶消化組織塊3次，每次7-lOmin，棄上清液。沉淀部分為小鼠成纖維細(xì)胞，經(jīng)48-72h傳代生長(zhǎng)得到旺盛細(xì)胞，供試驗(yàn)用。用DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基將上述小鼠成纖維細(xì)胞配制4Xl(T個(gè)/ml細(xì)胞懸液，分注于試管內(nèi)(lml/管)，試驗(yàn)組10管(l管備用)，陽性對(duì)照組3管，陰性對(duì)照組13管(l管備用)，置37'C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。將細(xì)胞培養(yǎng)基按lcm2淚道塞表面積10ml的比例加入放有試樣的試管中，37r恒溫下浸提24h。24h后，每管舍棄原培養(yǎng)液，試驗(yàn)組、陰性對(duì)照組管換入新鮮培養(yǎng)液，陽性對(duì)照組換入含64g/L苯酚的細(xì)胞培養(yǎng)液，并對(duì)3管陰性對(duì)照管進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)作為空白對(duì)照組，其余置37。C繼續(xù)培養(yǎng)。分別于2、4、7天將對(duì)照組和試驗(yàn)組各取3管，用分光光度計(jì)進(jìn)行吸光度測(cè)定，以判斷細(xì)胞的增殖度。測(cè)定方法棄去原細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌，10%甲醛溶液固定10min，水洗3次，加5g/L結(jié)晶紫羅蘭1.5ml染色3min，水洗3次，加10g/L十二烷基硫酸鈉3.5ral，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)588nm下測(cè)定吸光度。計(jì)算公式RGR(%)=(試驗(yàn)組吸光度一空白組吸光度)/(陽性對(duì)照組吸光度一空白對(duì)照組吸光度)XIOO。按標(biāo)準(zhǔn)將RGR值轉(zhuǎn)換成六級(jí)反應(yīng)后評(píng)定材料毒性作用，結(jié)果見表1。表1不同觀測(cè)階段毒性分級(jí)表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由于試驗(yàn)組各時(shí)限細(xì)胞毒性評(píng)定均在0-1級(jí)，故認(rèn)為本發(fā)明淚道塞材料的細(xì)胞毒性試驗(yàn)合格。2.致敏試驗(yàn)選用健康豚鼠，分為試驗(yàn)組、陽性組、陰性組，4^組各5"，試驗(yàn)前24h，剃除豚鼠背部4X6cm2區(qū)域毛發(fā)。生理鹽水為浸提介質(zhì)，制取淚道塞材料浸提液。陽性對(duì)照為5%甲醛溶液，陰性對(duì)照為生理鹽水。經(jīng)預(yù)試后，試驗(yàn)液體最終濃度若導(dǎo)致局部潰瘍、壞死或全身反應(yīng)則將濃度降低到最大耐受劑量。.70%乙醇清潔豚鼠去毛區(qū)，在每只豚鼠背脊兩側(cè)6點(diǎn)對(duì)稱皮內(nèi)注射，各點(diǎn)相距l(xiāng)一1.5cm，每點(diǎn)注射量為O.lml。皮內(nèi)注射1周后，在豚鼠去毛區(qū)再度剃毛，70%乙醇清潔，如未產(chǎn)生刺激癥狀，各注射部位以100g/L十二烷基硫酸鈉石蠟液(SLS)涂布，24h后貼敷于浸提液或陰陽對(duì)照液中浸泡至飽和的2X4cn/濾紙片，固定并留置48h土2h。局部斑貼14d后，將豚鼠腹部一側(cè)毛發(fā)剃除，用70%乙醇清潔，在腹部去毛區(qū)貼敷同上述處置的濾紙片，固定并留置24h土lh。除去貼敷物24h、48h、72h后觀察激發(fā)部位反應(yīng)，按標(biāo)準(zhǔn)記錄每一觀察時(shí)間和每一激發(fā)部位紅斑和水腫反應(yīng)分級(jí)，評(píng)定致敏反應(yīng)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組各時(shí)段每一激發(fā)部位均無紅斑和水腫反應(yīng)，評(píng)定為皮膚反應(yīng)0級(jí)，認(rèn)為該供試品皮膚致敏試驗(yàn)合格。3.熱原試驗(yàn)新西蘭白兔在同一環(huán)境條件下，用同一飼料飼養(yǎng)、觀察1周，家兔體重不減輕，精神、食欲、排泄無異常，進(jìn)行預(yù)篩選，即每隔lh測(cè)量體溫l次，共測(cè)4次，體溫均在38.0-39.6匸范圍內(nèi)，且最高與最低體溫差不超過0.4。C的兔入選。采用預(yù)試熱原檢查合格的0.9%氯化鈉注射液為浸提介質(zhì)，制取本發(fā)明淚道塞材料浸提液。與浸提液接觸的所有器具均應(yīng)置于電熱千燥箱內(nèi)，18(TC干烤2h去除熱原物質(zhì)。試驗(yàn)前2天，供試用兔應(yīng)處于同一環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室溫差不大于5'C，一次試驗(yàn)過程中，室溫變化不大于5。C。材料浸提液用3只兔作初試，再用5只兔進(jìn)行復(fù)試。兔禁食2h后預(yù)測(cè)體溫3次，間隔時(shí)間30min，后兩次體溫差不超過0.2°C，以此兩次體溫平均值作為該兔的正常體溫。使用兔體溫應(yīng)在38.0-39.6°C范圍內(nèi)，各兔間正常體溫不超過rC。為避免躁動(dòng)，將兔置于固定器內(nèi)，30min后開始第一次測(cè)溫，將肛門體溫計(jì)插入兔肛門，深度5cm，測(cè)溫時(shí)間每兔至少2ndn。測(cè)定兔正常體溫符合要求后15min內(nèi)，耳緣靜脈緩慢注入材料浸提液，劑量為10ml/kg，浸提液溫度38'C，注射完畢后每隔lh測(cè)溫1次，共測(cè)3次，以3次體溫中最高1次減去正常體溫，即為該兔的體溫升高度數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定。復(fù)試兔的體溫變化記錄見表2。5只兔體溫升高均在0.4'C以下，且升溫總值在1.(TC以下，認(rèn)為淚道塞材料符合熱原檢査要求，試驗(yàn)合格。表2試驗(yàn)兔體溫變化記錄兔編號(hào)體重(kg)注射劑量(ml)基礎(chǔ)體溫rc)注射后體溫(°C)123體溫增值(°C)12,52.538.538.538.538.60.0323.03.038.638.838.839.00.3332,62.638.738.638,738.7043.13,138.538.638.638.60.152.82.838.839.039.039.00.24.皮下植入試驗(yàn)家兔試驗(yàn)前24h，剪去脊柱兩側(cè)背毛。以3%戊巴比妥納鈉lml/kg，i.v.,進(jìn)行麻醉。按外科常規(guī)要求用碘酒消毒手術(shù)區(qū)。在脊柱兩側(cè)約4cm處作皮膚切口，鈍性分離皮下組織，一側(cè)植入試驗(yàn)用材料，另一側(cè)植入對(duì)照用可降解的淚道塞材8料(膠原)，縫合切口，做好標(biāo)記。植入4周后，處死，取出脊柱兩側(cè)皮下組織的試驗(yàn)材料和對(duì)照材料，肉眼觀察植入部位有無異常，切取試樣周圍0.5-lcm的皮下組織，作HE染色鑒定。標(biāo)本處理步驟和HE染色步驟略，尤其在沒有鏡檢結(jié)果的情況下。肉眼觀察結(jié)果，材料試驗(yàn)組和對(duì)照組植入部位均未見明顯紅腫和纖維包塊，取材時(shí)未發(fā)現(xiàn)植入物與周圍組織粘連。鏡檢結(jié)果見圖3A、3B。圖3A顯示對(duì)照組(H.EX10)結(jié)構(gòu)正常；3B顯示試驗(yàn)組(H.EX10)結(jié)構(gòu)大體無特殊改變。試驗(yàn)例2正常家兔置入淚道塞試驗(yàn)置入方法(1)3%戊巴比妥鈉以lml/kg劑量行耳緣靜脈麻醉，麻醉程度以角膜反射消失為準(zhǔn)，麻醉前后以1%地卡因進(jìn)行角膜表面麻醉，麻醉后背位固定家兔；(2)翻開家兔左眼下瞼，用生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，持植入鑷經(jīng)淚點(diǎn)將淚道塞全長(zhǎng)置入淚道內(nèi)；(3)麻醉結(jié)束后，將試驗(yàn)兔置于兔籠，標(biāo)記植入時(shí)間及眼別。新西蘭白兔20只，左眼(L)置入淚道塞(試驗(yàn)眼)，右眼(R)為對(duì)照眼。A-E組分別于置入后觀察3天(3d)、7天(7d)、2周(2w)、1月(1m)、2月(2m)，并進(jìn)行兩眼解剖和鏡檢。1.日常觀察置入淚道塞后，A—E組試驗(yàn)兔均無異常表現(xiàn)，進(jìn)食、排泄情況正常。2.眼前段觀察(1)角膜A—E組20只試驗(yàn)眼(L)均為O級(jí)反應(yīng)。(2)淚點(diǎn)A—E組20只試驗(yàn)眼淚點(diǎn)擠壓均無溢膿、血性滲出等。3.組織學(xué)檢查H.E染色標(biāo)本及光學(xué)鏡檢(1)角膜組織A-E組20只試驗(yàn)眼(L)的角膜組織與對(duì)照眼(R)角膜組織相比，未見明顯異常，角膜細(xì)胞及基質(zhì)層排列比較規(guī)則，數(shù)目無明顯減少，未及巨噬細(xì)胞等明顯炎性反應(yīng)(圖4A、4B)。(2)淚道周圍組織試驗(yàn)組(圖5A)與對(duì)照組(圖5B)相比，可見上皮層略增厚，有少量巨噬細(xì)9胞浸潤(rùn)。(3)結(jié)膜組織試驗(yàn)組(圖6A)與對(duì)照組(圖6B)相比，可見表層增厚，有少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，但層次清楚(圖6A、6B)。角膜標(biāo)本電鏡檢査透射電鏡下，角膜基質(zhì)層及細(xì)胞層排列整齊，數(shù)目無減少，細(xì)胞器無明顯腫脹、破損，胞內(nèi)可見空泡。角膜各層清晰，排列規(guī)則，對(duì)照組與A-E試驗(yàn)組無明顯差異(圖7A、7B)。試驗(yàn)例3淚道塞對(duì)干眼癥的實(shí)驗(yàn)性治療1.干眼動(dòng)物模型的制作ATD組新西蘭白兔10只，術(shù)前雙眼滴林可霉素眼液，每天3次。3天后，IO只兔均取左眼為實(shí)驗(yàn)眼，右眼作為對(duì)照。3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，實(shí)驗(yàn)眼局部滴地卡因兩次。將兔固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，手術(shù)區(qū)75%酒精消毒，鋪洞巾。于穹隆部剪開顳側(cè)球結(jié)膜，向前下方輕輕推壓眼球以暴露淚腺組織并予完整摘除；在第三眼瞼鼻側(cè)尋找兔哈氏腺總導(dǎo)管，并沿著導(dǎo)管仔細(xì)完整分離整個(gè)哈氏腺并完整摘除之；最后將第三眼瞼完整摘除。術(shù)后實(shí)驗(yàn)眼涂紅霉素眼膏，林可霉素眼液滴眼3天。E組新西蘭白兔10只，術(shù)前雙眼滴林可霉素眼液，每天3次。3天后，10只兔均取左眼為實(shí)驗(yàn)眼，右眼作為對(duì)照。3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，實(shí)驗(yàn)眼局部滴地卡因兩次。將兔固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，手術(shù)區(qū)75%酒精消毒，鋪洞巾。使用眼科手術(shù)用燒灼器逐個(gè)燒灼實(shí)驗(yàn)眼上下瞼緣處所有瞼板腺開口，每個(gè)開口燒灼時(shí)間約2秒，燒灼完畢后，將兔的第三眼瞼完整摘除。術(shù)畢實(shí)驗(yàn)眼涂紅霉素眼膏。術(shù)后第二天檢查瞼板腺開口有無重新開放，如有開放則重新予以燒灼。2.淚道塞置入及效果觀察置入淚道塞前及置入后進(jìn)行一般狀況觀察；第l、4、11、18、25、32、40天分別行實(shí)驗(yàn)眼SchirraerI實(shí)驗(yàn)和角膜熒光素染色；第四周行淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)和結(jié)膜印跡細(xì)胞檢查。(1)置入淚道塞后連續(xù)觀察3天，淚點(diǎn)周圍未見紅腫等炎癥反應(yīng)，淚道塞無脫出現(xiàn)象；觀察至置入后第40天，所有實(shí)驗(yàn)兔均未出現(xiàn)局部或全身的感染跡象。(2)Schirmerl試驗(yàn)將Schirraer試紙圓頭端沿折線處折疊插入兔下方結(jié)膜囊的后半部，5分鐘后取出試紙并測(cè)量其濕長(zhǎng)。結(jié)果見表3。表3置入淚道塞前后SchirmerI試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注*號(hào)表示該數(shù)據(jù)與對(duì)照眼相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)從表3可以看出，置入淚道塞后第2天，2組不同的實(shí)驗(yàn)眼Schirmer試紙的濕長(zhǎng)均有不同程度的增加(P<0.05)，增幅在l-2mm左右，并長(zhǎng)期維持在一個(gè)穩(wěn)定的狀態(tài)。3.角膜熒光素染色將熒光素試紙輕觸兔眼下方結(jié)膜囊，并使其均勻涂布于整個(gè)眼表，在裂隙燈鈷藍(lán)光下觀察角膜的染色情況，按如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分過角膜中心作水平與垂直兩條線將角膜分為四個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)按O、1、2、3評(píng)分，共12分。其中0分為無染色；l分為染色在IO個(gè)點(diǎn)以下；2分為染色在IO個(gè)點(diǎn)以上，30個(gè)點(diǎn)以下；3分為染色在30個(gè)點(diǎn)以上或呈片狀。結(jié)果見表4。表4置入淚道塞前后角膜熒光素染色結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*號(hào)表示該數(shù)據(jù)與對(duì)照眼相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)從表4可見，置入淚道塞后約10天，2組模型的實(shí)驗(yàn)眼角膜熒光素染色積分開始出現(xiàn)明顯下降(P<0.05)，并隨著時(shí)間的推移呈穩(wěn)步下降趨勢(shì)，至置入后40天，2組模型的實(shí)驗(yàn)眼角膜已經(jīng)基本觀察不到大片的熒光素著染區(qū)，僅見少量散在的細(xì)點(diǎn)狀著染；ATD組實(shí)驗(yàn)眼淚河高度明顯增加，連續(xù)性良好。4.淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)用毛細(xì)玻璃管在兔眼下淚河處吸取少量淚液，置于載玻片上，室溫下自然干燥，在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)晶形態(tài)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)參照Rolando分級(jí)法。I級(jí)均勻、致密的羊齒狀分支結(jié)晶圖，分支間的空間間隔很?。籌I級(jí):結(jié)晶圖的分支數(shù)量較少、形態(tài)較小，分支間的空間間隔增大；III級(jí)結(jié)晶圖分支明顯減少，分支間的空間間隔顯著增大，增大的間隔足以形成新的結(jié)晶；IV級(jí)幾乎觀察不到羊齒狀的結(jié)晶圖，只能看見少量、不定型的結(jié)晶。光學(xué)顯微鏡觀察可見，實(shí)驗(yàn)眼的淚液結(jié)晶雖然仍以ni級(jí)結(jié)晶為主，但其形態(tài)已經(jīng)發(fā)生了明顯變化。置入淚道塞前，淚液結(jié)晶為散在的，碎片狀的模糊的結(jié)晶，而置入淚道塞后40天，盡管結(jié)晶間的空隙依然較大，但已能形成成形的、較為清晰的羊齒狀結(jié)晶(表5)。表5置入淚道塞后第40天淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(1)實(shí)驗(yàn)眼滴地卡因一滴，用濾紙吸去下穹隆內(nèi)的淚液。(2)用鑷子將約3mmX2mm大小的醋酸纖維素濾紙粗糙面朝下置于角膜顳側(cè)水平2rnm外的球結(jié)膜上，輕輕加壓約6秒以印取表層上皮細(xì)胞。(3)用鑷子夾取濾紙尖角，將濾紙從結(jié)膜表面取下，放入含95%乙醇固定液的培養(yǎng)槽中固定10分鐘。(4)蒸餾水水化5分鐘。(5)過碘酸氧化7分鐘。(6)蒸餾水漂洗5分鐘。(7)席夫試劑染色4分鐘。(8)自來水沖洗5分鐘。(9)蘇木精染色3分鐘。(10)75%、95%乙醇各脫水兩次。(11)二甲苯透明15分鐘。(12)中性樹脂封片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察杯狀細(xì)胞。結(jié)膜印跡細(xì)胞檢查的結(jié)果見圖7A、7B。從圖中可看出，置入淚道塞前后結(jié)膜印跡細(xì)胞檢查無變化。置入淚道塞前結(jié)膜印跡細(xì)胞檢查(取自ATD組)置入淚道塞40天后結(jié)膜印跡細(xì)胞檢査(與上圖為同一只眼)如上所述，通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、皮下植入試驗(yàn)，證實(shí)本發(fā)明的淚道塞的材料及產(chǎn)品具有良好的生物相容性，毒理試驗(yàn)合格。以新西蘭兔作為動(dòng)物模型，植入淚道塞后進(jìn)行植入后3d至2m的眼前段觀察以及組織學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)均無明顯組織炎性反應(yīng)。以新西蘭兔制作干眼模型后植入本淚道塞，經(jīng)數(shù)據(jù)顯示可明顯改善干眼癥狀。1權(quán)利要求1.一種淚道塞，其特征在于由聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮以1∶3-3∶1的重量比制成的棒狀物，所述聚乙烯醇的分子量為20,000～200,000，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量為8,000-200,000。2.如權(quán)利要求1所述的淚道塞，其中所述原料聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮為醫(yī)用級(jí)。3.如權(quán)利要求l所述的淚道塞，所述淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為6—llmra，半徑為0.2-0.6mm。4.如權(quán)利要求3所述的淚道塞，所述淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為10士lram，半徑為0.3±0.lmm。5.如權(quán)利要求3所述的淚道塞，所述淚道塞在干燥狀態(tài)下長(zhǎng)度為8土2mra，半徑為0.5±0.lmm。6.權(quán)利要求1所述淚道塞的制備方法，包括以下步驟(1)將聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮以1:3—3:1的比例溶于80—95t:熱水中，冷卻至7(TC，灌至模具。(2)在烘箱中6(TC烘20inin，過夜冷卻，脫模成型制得淚道塞。7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其中所述原料為醫(yī)用級(jí)聚乙烯醇和聚乙烯吡咯垸酮。8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，進(jìn)一步包括將淚道塞在50%乙醇中浸泡2h進(jìn)行純化處理。9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，進(jìn)一步包括將乙醇純化處理的淚道塞在蒸餾水中浸泡24h。10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，進(jìn)一步包括將經(jīng)乙醇純化和蒸餾水浸泡處理過的淚道塞在恒溫干燥箱中于50-6(TC烘1-3小時(shí)。11.如權(quán)利要求10所述的制備方法，進(jìn)一步包括將烘干的淚道塞進(jìn)行滅菌處理。全文摘要本發(fā)明提供一種淚道塞，系由聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮以1∶3-3∶1的重量比制成的棒狀物，所述聚乙烯醇的分子量為20,000～200,000，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量為8,000-200,000。本發(fā)明淚道塞的制備方法包括以下步驟將原料溶于80℃以上熱水中，冷卻至70℃，灌至模具；在烘箱中60℃烘20min；過夜冷卻，脫模成型。本發(fā)明的淚道塞經(jīng)毒理試驗(yàn)和動(dòng)物模型試驗(yàn)證實(shí)，具有安全性和良好的生物相容性，可明顯改善干眼癥狀，具有臨床實(shí)用性。其制作工藝簡(jiǎn)單，成本較低，符合我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平，有利于今后開發(fā)、應(yīng)用。文檔編號(hào)A61L31/06GK101683538SQ20081020075公開日2010年3月31日申請(qǐng)日期2008年9月28日優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日發(fā)明者盛敏杰,菲趙,鄭一仁申請(qǐng)人:上海市第十人民醫(yī)院