專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療腦中風(fēng)的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腦中風(fēng)的治療，具體涉及用LJP1207治療腦中風(fēng)或其他神經(jīng)科疾 病/障礙。 背聚技術(shù)腦中風(fēng)是一組好發(fā)于中、老年人的急性腦血管病，其特點(diǎn)是發(fā)病率高、死 亡率高、致殘率高、并發(fā)癥多，因此又稱(chēng)"三高一多"癥，是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的 疾病。有關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全國(guó)共約有515-745萬(wàn)人患中風(fēng)，郎在我國(guó)每年每W 萬(wàn)人口中就有185-219例。統(tǒng)計(jì)顯示，中風(fēng)發(fā)病率隨年齡增加而增長(zhǎng)，在每W萬(wàn) 人口中70%左右的是65歲以上的老年人首次發(fā)生中風(fēng)，患病率在每10萬(wàn)人口中約 有430-615例，中風(fēng)的死亡率為每年每10萬(wàn)人口中有116-l幼例，中風(fēng)存活后的 病人約60-80%有不同程度的殘疾，嚴(yán)重者甚至喪失正常生活能力。另外，有中 風(fēng)病史的患者，約25-80%可能在2-5年內(nèi)復(fù)發(fā)。多數(shù)患者由于偏癱致殘喪失勞動(dòng) 力和生活自理能力，精神和肉體蒙受著極大的痛苦，同時(shí)也給社會(huì)和家庭帶來(lái) 了沉重的負(fù)擔(dān)。所以，積極有效的治療中風(fēng)及其后遺癥，減少中風(fēng)患者的致殘 率，可以解除患者病痛，同時(shí)也為社會(huì)和家庭減輕負(fù)擔(dān)，它是擺在醫(yī)藥工作者 面前的一項(xiàng)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。但是，迄今為止，臨床上缺乏有效的治療中風(fēng)的方法和藥物，世界上公認(rèn) 的溶栓療法僅限于中風(fēng)發(fā)生三小時(shí)內(nèi)，可多數(shù)病人送到醫(yī)院救治時(shí)，已超過(guò)溶 栓療法的有效作用時(shí)間。另外，大多數(shù)針對(duì)急性中風(fēng)治療(,神經(jīng)保護(hù))的治療 劑主要涉及靶向谷氨酸受體及其已知參與急性細(xì)胞死亡的下游信號(hào)傳導(dǎo)途徑。 然而，在臨床試驗(yàn)中已經(jīng)證明這些策略是不成功的，它們經(jīng)常與劑量局限性副 作用有關(guān)。另一方面，近年來(lái)的大量研究表明，腦中風(fēng)后的神經(jīng)病理?yè)p傷與腦血管白 細(xì)胞的粘附與滲出有關(guān)(l),腦中風(fēng)后炎癥反應(yīng)在中風(fēng)引起的腦損害中起著重要 作用。血管粘附蛋白-l (VA P — 1 /SSAO)是一種內(nèi)皮唾液酸糖蛋白，其細(xì)胞表面 表達(dá)受炎癥條件誘導(dǎo)。先前已顯示它能調(diào)節(jié)再循環(huán)淋巴細(xì)胞以L(fǎng)選擇蛋白非依賴(lài)方式與人外周淋巴結(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合。V A P — 1是一種有雙重功能的 新型粘著分子。伴隨適當(dāng)?shù)奶腔?，和恰?dāng)?shù)难装Y環(huán)境，在調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞粘著 位點(diǎn)中的管腔內(nèi)皮細(xì)胞表面上表達(dá)的V A P —1使其作為與淋巴細(xì)胞歸巢有關(guān) 的一種粘著受體而發(fā)揮功能。VAP-l在其它位點(diǎn)的主要功能可取決于其內(nèi)在胺氧 化酶的活性。VAP在促進(jìn)白細(xì)胞的粘附與遷移中起重要作用。因此，研究抑制 VAP-l的表達(dá)的藥物，尋找選擇性的VAP-l抑制劑成為治療包括腦中風(fēng)在內(nèi)炎癥 相關(guān)疾病一條新途徑(2)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明推出的治療腦中風(fēng)藥物具有如下主要特征以L(fǎng)JP1207[N'-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]為有效成份。本發(fā) 明所涉及的LJP1207是一種小分子化合物，包含一個(gè)肼功能基團(tuán)，分子量為 184 67。 LJP1207是VAP-l的強(qiáng)效、高選擇性抑制劑。在對(duì)其藥理學(xué)特性的研究 表明，LJP1207對(duì)于大鼠VAP-1/SSAO的IC50值為7.5nM,對(duì)于人MP-1/SSA0的IC50 值為17nM,而對(duì)于其它胺氧化酶，如MA0"A和MA0"B的IC50值分別為225uM和 100uM,因此，LJP1207對(duì)于VAP-1結(jié)合力至少是其它胺氧化酶的1000到10000倍, 具有很好的選擇性(3)。本發(fā)明旨在推出一種以L(fǎng)JP1207為有效成分的抗缺血/出血及再灌注損傷藥 物，并將其用于腦中風(fēng)的治療或預(yù)防。該藥物也可用于治療或預(yù)防其它神經(jīng)科 疾病包括創(chuàng)傷性腦損傷，脊髄損傷，阿爾茨海默病，額顳癡呆(tau蛋白病)，周 圍神經(jīng)^^病，帕金森病，亨廷頓舞蹈病和多發(fā)性硬化。藥理研究表明，LJP1207是一種優(yōu)良的炎性滲出抑制劑，能顯著抑制急慢 性炎癥反應(yīng)，對(duì)于降低腦血管急慢性損傷后導(dǎo)致的炎性損傷和腫脹反應(yīng)具有重 要意義。該作用注射與口服給藥均有效。LJP1207對(duì)于炎癥的抑制，與其對(duì)于VAP-1/SSA0介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的抑制有 關(guān)。LJP1207在阻斷VAP-1的胺氧化酶的催化位點(diǎn)時(shí)，也降低了該分子的粘附， 而且，這種作用是呈劑量依賴(lài)性的。此外，在暫時(shí)性局灶性腦缺血模型上還觀(guān) 察到缺血即刻給予LJP1207抑制了白細(xì)胞的滲出，改善了神經(jīng)功能(2)。 口服 LJP1207還能顯著減輕水腫，降低包括PGE2， OT-a在內(nèi)的數(shù)種局部炎癥介質(zhì)的表達(dá)(3)。本發(fā)明所述的LJP1207的首次使用可在中風(fēng)發(fā)生當(dāng)時(shí)至發(fā)生1月內(nèi)，較優(yōu)的 選擇是發(fā)生當(dāng)時(shí)至發(fā)生72小時(shí)內(nèi)。首次注射后每隔24小時(shí)給藥一次，連續(xù)給藥3 到7天。與溶栓療法相比，LJP1207的治療時(shí)間窗更為寬廣，治療效果顯著，具 有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明所述藥物的特征在于給藥途徑以口服給藥為主，也可采用注射給藥, 包括靜脈滴注、靜脈注射，或可采用肌肉、腹腔注射。藥物劑型以口服劑型為 主，也包括注射劑型。制備這些劑型的方法在藥劑學(xué)中是已知的，該領(lǐng)域的技 術(shù)人員根據(jù)需要可以理解和實(shí)施。本發(fā)明所述藥物的特征還在于在組成上包括有效劑量的LJP1207和藥學(xué)上 可以接受的載體、輔料和(或)其它藥物。有關(guān)LJP1207的合成已公布，見(jiàn)參考文獻(xiàn)(4)。以下是本發(fā)明的實(shí)施例，該敘述的目的是為了更好地說(shuō)明本發(fā)明如何實(shí)施 及其效果。目的僅在于說(shuō)明，而并不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例中所使用 的LJP1207按照上述公布的方法合成。實(shí)施例lLJP1207對(duì)腦缺血后白細(xì)胞粘附和滲出的影響選用SD大鼠，用含l. 2%異 ^-70%笑氣-3W&氧氣的麻醉混合氣體麻醉SD大 鼠，顱窗制備及微循環(huán)觀(guān)測(cè)如下，固定大鼠，右側(cè)顱頂部皮膚切開(kāi)，暴露顱骨。 以矢狀縫外2咖、冠狀縫下2咖處為中心，用牙科鉆打一個(gè)圓孔，揭去顱骨， 暴露腦膜。將大鼠頭部固定在立體定位儀上，置于顯微鏡下，以冷光源照射。 應(yīng)用微循環(huán)顯微鏡及其圖像分析系統(tǒng)觀(guān)察大鼠右側(cè)軟腦膜小動(dòng)脈和小靜脈管徑 (AD、 W)的動(dòng)態(tài)變化。給予大鼠右側(cè)前腦缺血，具體方法如下夾閉右側(cè)頸 總動(dòng)脈，同時(shí)從鎖骨下靜脈抽血，使得皮層腦血流降到基礎(chǔ)值的20%(用激光多 普勒檢測(cè))，30分鐘后松開(kāi)動(dòng)脈夾，將抽出的血液回輸入大鼠體內(nèi)。腦缺血手術(shù) 后，進(jìn)行顱窗觀(guān)察，將一直徑為O. 8鵬的激光多普勒探針置于右頂葉皮層，圃定 在顱窗上。使用能過(guò)濾羅丹明的數(shù)碼照像記錄系統(tǒng)，該系統(tǒng)與顯微鏡相連。靜 脈注射l邁l羅丹明，繼以lml/h的速度連續(xù)輸入羅丹明。白細(xì)胞被羅丹明標(biāo)記， 用MetaMorph軟件系統(tǒng)存取圖像。分別在缺血再灌注后2， 4, 6,. 8和10小時(shí)記錄白細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，再灌注同時(shí)至io小時(shí)內(nèi)靜脈給予LJP1207(30mg/kg),顯著抑制了缺血引起的白細(xì)胞的粘附及滲出。 實(shí)施例2LJP1207對(duì)腦缺血所致的缺血梗塞灶的影響。使用大腦中動(dòng)脈缺血模型，方法如下采用含l. 2%異氟烷-70%笑氣-30%氧 氣的混合氣體麻醉SD大鼠，應(yīng)用恒溫儀使直腸溫度保持在37C，分離右側(cè)頸外、 頸內(nèi)、頸總動(dòng)脈，結(jié)扎橋動(dòng)脈(連接頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈的小動(dòng)脈，位于頸內(nèi)頸外 動(dòng)脈的分叉處)，結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)離頸總動(dòng)脈的一端，在其另一端剪一小口，將 帶有硅膠的尼龍線(xiàn)從小口插向頸總動(dòng)脈，在小口處剪斷頸外動(dòng)脈，辨與頸總動(dòng) 脈相連的頸外動(dòng)脈殘端往下拉直至與頸內(nèi)動(dòng)脈成一直線(xiàn)，尼龍線(xiàn)沿頸內(nèi)動(dòng)脈方 向插入長(zhǎng)度為19-20咖，阻斷大腦中動(dòng)脈血流60 min后，將尼龍線(xiàn)撤出，進(jìn)行再 灌注。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中腦血流用多普勒光纖探頭進(jìn)行監(jiān)測(cè),探頭位置為囟門(mén)旁開(kāi)5 nm, 后lmm,只有腦血流值降低到基礎(chǔ)值的10-15%,再灌注血流恢復(fù)到90%以上為梗 死再灌注模型成功。在各實(shí)驗(yàn)組中，分別在再灌注后2小時(shí)，6小時(shí)及12小時(shí)給 予LJP1207 (30rag/kg，口服)，每隔24小時(shí)重復(fù)給藥一次，直至再灌后72小時(shí)。 再灌3天時(shí)，斷頭取腦，腦組織被切成l咖厚腦片，立即應(yīng)用2%氯化三苯氮唑染 色，應(yīng)用顯像分析系統(tǒng)區(qū)分梗死區(qū)和非梗死區(qū)并計(jì)算梗塞灶體積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組梗塞體積(222土74nun3)相比，使用LJP1207各組的 梗塞體積均顯著下降，其中，再灌后2小時(shí)給予LJP1207的梗塞體積(104:t43nitfi, p<0. 01), 6小時(shí)組為(84 ± 69咖3， p<0.01),再灌后12小時(shí)給予LJP1207的梗塞 體積(91 ± 57mm3， p<0.01)。實(shí)施例3LJP1207對(duì)腦缺血后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用大腦中動(dòng)脈缺血模型，各實(shí)驗(yàn)分組同實(shí)施例2。腦缺血后神經(jīng)功能評(píng)估實(shí)施 如下從缺血后第一天起，每日一次，直至缺血后三天。神經(jīng)功能評(píng)價(jià)分為六 項(xiàng)，包括感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估(l)意識(shí)知覺(jué)，0正常l不安；2怠惰，不愿 動(dòng)；3昏迷；4癍癇；5死亡(2)走路，0正常；l前肢內(nèi)收；2運(yùn)動(dòng)減弱；3朝偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈4不能站起(3)平臺(tái)攀爬運(yùn)動(dòng)，0爬上平臺(tái)；1后肢上提，肢體 懸吊平臺(tái)達(dá)5秒2肢體懸吊平臺(tái)達(dá)5秒3肢體懸吊平臺(tái)少于5秒；4無(wú)法 抓住平臺(tái)(4)翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，0翻轉(zhuǎn)180°,四肢抓住翻轉(zhuǎn)平臺(tái)的時(shí)間超過(guò)5秒1翻 轉(zhuǎn)180°,四肢抓住翻轉(zhuǎn)平臺(tái)的時(shí)間少于5秒3翻轉(zhuǎn)卵n,四肢抓住翻轉(zhuǎn)平臺(tái)的 時(shí)間超過(guò)5秒；；4翻轉(zhuǎn)穿，無(wú)法抓住平臺(tái)，摔下(5)肢體肌張力，0正常/ 對(duì)稱(chēng)；1—側(cè)下降(6)疼痛反射，0反應(yīng)正常；1反應(yīng)下降。各項(xiàng)得分高表明 神經(jīng)損傷重，得分低表明功能恢復(fù)好。研究結(jié)果如下，與對(duì)照組相比(24±4),使用LJP1207各組的神經(jīng)功能評(píng)分 顯著下降，神經(jīng)功能顯著恢復(fù)，其中，再灌后2小時(shí)給予LJP1207的神經(jīng)功能評(píng)分 (15 ±4, p<0.01), 6小時(shí)組為(14±3， p〈O.OD，再灌后12小時(shí)給予LJP1207 的神經(jīng)功能評(píng)分(14 ± 2, p<0. 01)。結(jié)論1丄JP1207可抑制腦中風(fēng)引起的細(xì)胞粘附及滲出，進(jìn)而減輕中風(fēng)所致的炎癥， 起到治療中風(fēng)的作用。2.腦中風(fēng)后給予LJP1207可以縮小梗塞灶，促進(jìn)中風(fēng)后神經(jīng)功能的恢復(fù)，而且， LJP1207具有較寬廣的治療窗，從中風(fēng)發(fā)生當(dāng)時(shí)至發(fā)生至少12小時(shí)內(nèi)，均有治 療效果。以上提示，LJP1207對(duì)于腦中風(fēng)的治療有顯著的效果，具有重要的臨床應(yīng) 用價(jià)值。以上盡管我們描述了本發(fā)明的實(shí)施方案與效果，顯然并不意味著僅限于此。 實(shí)際上，本發(fā)明的實(shí)施方案可以進(jìn)行許多改變以充分利用本發(fā)明的用途而不超 出本發(fā)明的范圍和精神。因此應(yīng)該理解，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)由所附權(quán)利要 求書(shū)來(lái)限定，而不是由實(shí)施例方式表示的特定實(shí)施方案來(lái)限定。參考文獻(xiàn)L Fri加s CJ and Kappelle LJ (2002) Inflammatory cell adhesion molecules in ischemic cerebrovascular disease. 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1.一種治療或預(yù)防人的中風(fēng)或其他神經(jīng)科疾病/障礙的藥物，其特征在于(1)以L(fǎng)JP1207[N’-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]為有效成份，(2)不但具有顯著的抗缺血性或出血性腦損傷的作用，還具有顯著的抗再灌注損傷作用(3)是血管粘附蛋白-1(VAP-1)的選擇性抑制劑。
2. —種治療或預(yù)防人的中風(fēng)或其他神經(jīng)科疾病/障礙的方法，所述的方法包括給 予有需要的病人有效量的權(quán)利要求l中的藥物，所述的病人患有中風(fēng)或其它神 經(jīng)科疾病或者處于發(fā)生所述疾病的危險(xiǎn)之中。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2,所述的藥物和方法用于腦中風(fēng)或其他神經(jīng)科疾病/障礙的 治療或預(yù)防，其中所述其它神經(jīng)科疾病包括創(chuàng)傷性腦損傷，脊髓損傷，阿爾茨 海默病，額顳癡呆(tau蛋白病)，周?chē)窠?jīng)科疾病，帕金森病，亨廷頓舞蹈病 和多發(fā)性硬化。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2，所述藥物的可用于腦中風(fēng)發(fā)生當(dāng)時(shí)到發(fā)生l月內(nèi)，較優(yōu)的 選擇是發(fā)生當(dāng)時(shí)至發(fā)生72小時(shí)內(nèi)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2，所述藥物的特征在于給藥途徑以口服給藥為主，也可采用 注射給藥,包括靜脈滴注、靜脈注射，或可采用肌肉、腹腔注射。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l， 2或5，所述藥物的特征在于劑型以口服劑型為主，也包括注射 劑型。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2，所述藥物的特征在于在組成上包括有效劑量的LJP1207和 藥學(xué)上可以接受的載體、輔料和(或)其它藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用一種血管粘附蛋白的抑制劑治療或預(yù)防腦中風(fēng)及其它神經(jīng)科疾病/障礙，具有重要的臨床應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101401802SQ20081020249
公開(kāi)日2009年4月8日 申請(qǐng)日期2008年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月10日
發(fā)明者陶英亮 申請(qǐng)人:陶英亮