專利名稱：一種含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬化學(xué)合成領(lǐng)域，涉及含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物及其制備方法。

背景技術(shù)：
血栓栓塞類疾病具極高的致死率和致殘率，全世界每三例死亡中就有一例死于血栓類疾病，因此這類疾病是人類健康中極不和諧的因素?？鼓委熥鳛榭顾ㄖ委煹闹髁饕延?0余年的歷史，臨床實(shí)踐以及有關(guān)報(bào)道強(qiáng)有力的證明了抗凝治療可預(yù)防深部靜脈血栓形成引起的血管性疾病及降低其病死率。
現(xiàn)有技術(shù)公開了較多種類的抗凝藥物，能夠臨床應(yīng)用的大致包括肝素和低分子量肝素、口服抗凝劑、水蛭素及新型抗凝藥物。肝素Heparin(一種硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽)作用迅速，多用于短期治療，由于其不能從腸道吸收，只能注射給藥，故使用時(shí)需要投入大量細(xì)致的監(jiān)護(hù)以避免并發(fā)癥的出現(xiàn)；低分子量肝素LMWH(從肝素中分離出來(lái)的分子量為6.5D的葡胺聚糖鏈混合物)經(jīng)皮下注射后生物利用度高，故可大致預(yù)測(cè)用藥劑量，但因其是一類具有獨(dú)特化學(xué)性質(zhì)，藥代及藥效動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)的化合物，常常因?yàn)橹苿┥a(chǎn)工藝的不同而不能隨意混用。臨床監(jiān)測(cè)表明肝素類化合物的不當(dāng)使用會(huì)造成出血，骨質(zhì)疏松等并發(fā)癥或誘導(dǎo)血小板減少癥?？诜鼓幬锶A法林(如Warfarin為雙香豆素類中效抗凝劑)抗凝作用機(jī)制獨(dú)特，可作為靜脈血栓栓塞的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防等，但由于它們抗凝效果過(guò)強(qiáng)而易引發(fā)出血并發(fā)癥，且有可能導(dǎo)致皮膚壞死等副作用而使其應(yīng)用受到很大范圍的限制。非腸道的直接凝血酶抑制劑有水蛭素、Bivalirudin和阿加曲班等。早期的天然凝血酶抑制劑水蛭素(IC500.3pM)(Hirudin是由65—66個(gè)氨基酸組成的多肽)提取于藥用水蛭的唾液腺分泌物，用于防止重大矯形外科手術(shù)后深部靜脈血栓的形成，其與肝素和低分子量肝素相比有較大的優(yōu)越性，但不能口服的特點(diǎn)使它成為預(yù)防和治療亞急性和慢性血栓栓塞類疾病的重要障礙。Bivalirudin是一個(gè)能與凝血酶活性位點(diǎn)結(jié)合的由20個(gè)氨基酸殘基組成的半合成多肽鏈。但其抑制作用較為短暫。
有關(guān)具有口服抗凝活性的凝血酶抑制劑的研究已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)展。從總體發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，凝血酶抑制劑的合成大致經(jīng)歷了兩個(gè)階段。第一代凝血酶抑制劑如阿加曲班(Argatroban，Ki＝38nM)—首次(1990年于日本)能夠應(yīng)用于臨床的第一代凝血酶抑制劑，用來(lái)治療動(dòng)脈栓塞和由急性中風(fēng)而引起的出血。2000年，其已經(jīng)通過(guò)了美國(guó)FDA認(rèn)證，專門用于治療血小板減少癥(HIT)。但阿加曲班的口服生物利用度較低，只能通過(guò)靜脈給藥，且在人體中的半衰期僅有30分鐘。此即第一代凝血酶抑制劑所存在的普遍缺點(diǎn)。因此，第一代凝血酶抑制劑始終向著具有高效的，選擇性好和高口服生物利用度以及合適的藥代、藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)方向發(fā)展。而針對(duì)以上存在的缺點(diǎn)，在其應(yīng)對(duì)策略上發(fā)展起來(lái)了第二代凝血酶抑制劑部分正在進(jìn)入二期臨床階段的研究。典型的如希美加群(Ximelagatran)是一種不帶電的親脂類藥物，是Melagatran的雙前酯化合物。在腸胃道吸收好，血漿半衰期為3—4小時(shí)。每天給藥2次，劑量固定，不需凝血監(jiān)測(cè)。但副作用可使轉(zhuǎn)氨酶升高。二期臨床試驗(yàn)證明Ximelagatran用于選擇性髖或膝關(guān)節(jié)成形術(shù)后可預(yù)防靜脈血栓的形成，同時(shí)對(duì)靜脈栓塞的治療也有作用，其特點(diǎn)是用藥時(shí)不增加出血風(fēng)險(xiǎn)，安全性高。由于該藥使用方便，可代替華發(fā)林治療心房顫動(dòng)。Ximelagatran長(zhǎng)期應(yīng)用于治療急性冠脈綜合癥的效果正在接受二期臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)。

德國(guó)Boehringer Ingelheim Pharma KG公司開發(fā)的第二代凝血酶抑制劑BIBR-953及其前藥BIBR-1048其結(jié)構(gòu)中含有新的1，2，5—三取代苯并咪唑的中心骨架，與凝血酶結(jié)合后的晶體結(jié)構(gòu)顯示它的作用模式是非極性的親脂作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)顯示它與凝血酶具有極高的親和力(Ki＝9.3nm)，并具有良好的體內(nèi)活性前景(J.Med.Chem.2002，45，1757-1766)。在此基礎(chǔ)上合成的雙前藥BIBR-1048具有優(yōu)越的口服生物活性，現(xiàn)已經(jīng)進(jìn)入二期臨床試驗(yàn)。最近報(bào)道了它與Ximelagatran的口服生物活性比較，結(jié)構(gòu)表明，盡管體內(nèi)血藥濃度BIBR-1048(約5％)較Ximelagatran(20％)低，但是BIBR-953的半衰期(約12小時(shí))比Ximelagatran的活性原藥Melagatran的半衰期(3-5小時(shí))大大提高。因此該化合物被認(rèn)為是目前繼Ximelagatran之后最有可能被開發(fā)成功的高活性口服凝血酶抑制劑。

BIBR-953及其前藥BIBR-1048作為一種高效、高選擇性的凝血酶抑制劑，體內(nèi)外試驗(yàn)顯示它與凝血酶具有極高的親和力，并具有良好的體內(nèi)活性前景。有研究以此為基礎(chǔ)，對(duì)其合成路線進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，(見(jiàn)中國(guó)專利申請(qǐng)，公開號(hào)CN1861596)。并且發(fā)展起來(lái)一種合成胍基取代脒基的新型凝血酶抑制劑的方法，經(jīng)過(guò)體內(nèi)活性篩選，部分化合物具有較好的活性。(見(jiàn)中國(guó)專利申請(qǐng)申請(qǐng)?zhí)?00710046223.1)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的旨在提供上述抑制劑類化合物的制備方法。本方法以構(gòu)建1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新骨架為中心的新型凝血酶目的，通過(guò)體內(nèi)篩活性數(shù)據(jù)選為指導(dǎo)，提供一種具有新骨架的非肽類的雜環(huán)化合物。
本發(fā)明的更進(jìn)一步目的旨在提供該類化合物的抗凝血酶生成的用途。
本發(fā)明所述的含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物，核心骨架C-2位用氨基取代了原有核心骨架中的氨甲基，具有如下結(jié)構(gòu)式
其中R1部分為吡啶、對(duì)氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；也可為其它取代的苯基、吡啶、嘧啶的取代基，R2為脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2。
本發(fā)明所述的抑制劑類化合物含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架，并以體內(nèi)活性篩選為指導(dǎo)，優(yōu)化了R1和R2不同取代基對(duì)時(shí)對(duì)活性的影響。優(yōu)選出了對(duì)凝血酶的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用的化合物。
本發(fā)明的具體合成路線如下，在下文的陳述實(shí)施例中，中間體通式是根據(jù)結(jié)構(gòu)式中的編號(hào)，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，X1；X2表示N或C，R1表示取代基；R2表示CN、NO2。


本發(fā)明的優(yōu)選化合物是具有下述結(jié)構(gòu)I，II，III，IV，V，VI的化合物
上述反應(yīng)中，步驟1化合物1與化合物2在一種醇類溶劑中反應(yīng)2-20小時(shí)后經(jīng)過(guò)濃縮，得到具有化合物3結(jié)構(gòu)的混合物，不需要分離純化。所說(shuō)的醇類溶劑是指甲醇、乙醇、樹丁醇、正辛醇，特別是甲醇和乙醇。
步驟2具有化合物3結(jié)構(gòu)的上述混合物和一種縮合劑在一種溶劑反應(yīng)5-30小時(shí)后，純化得到具有化合物4結(jié)構(gòu)的化合物(R2＝CN、NO2)。所說(shuō)的一種溶劑是指N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和四氫呋喃，特別是N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜；所說(shuō)的一種縮合劑是指DCC、EDCI、CDI和碘甲烷，特別是碘甲烷和EDCI。
步驟3化合物4(R＝CN)在一種有機(jī)溶劑中與一種氣體反應(yīng)1-2天后再與另一種氣體反應(yīng)1-3天，經(jīng)過(guò)濃縮硅膠柱層析后得到脒基化合物5。所說(shuō)的一種有機(jī)溶劑特別指N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、四氫呋喃、甲醇、乙醇；特別是乙醇和甲醇；所說(shuō)的一種氣體是指氯化氫；所說(shuō)的另一種氣體是指氨氣。
步驟4化合物4(R＝NO2)一種醇類溶劑或醚類溶劑中，在金屬催化劑的催化下，與一種還原性氣體反應(yīng)5-20小時(shí)，經(jīng)過(guò)過(guò)濾、濃縮后得到化合物6。所說(shuō)的醇是指C1～C3的醇，特別是甲醇、乙醇和叔丁醇；所說(shuō)的醚是指脂環(huán)醚，特別是四氫呋喃；所說(shuō)的金屬催化劑特別是指鈀炭和瑞尼鎳；所說(shuō)的還原性氣體特別是指氫氣。
步驟5化合物6溶于一種有機(jī)溶劑中，加入一種有機(jī)堿，再加入甲硫基甲脒9，隨后加入一種無(wú)機(jī)鹽。連續(xù)攪拌1～10h，經(jīng)過(guò)濾，萃取，濃縮硅膠柱層析后得到化合物7。這里所說(shuō)的一種有機(jī)溶劑指甲醇，乙醇，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺，環(huán)丁砜，二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳等，特別是N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜。所說(shuō)的有機(jī)堿指二甲胺，三乙胺，異丙胺，N，N-二異丙基乙胺，叔丁胺，正丁胺等，特別是N，N-二異丙基乙胺或三乙胺。這里所說(shuō)的一種無(wú)機(jī)鹽指高價(jià)金屬氯化物，包括氯化鐵，氯化汞，氯化鈣，氯化銅等，特別是氯化汞。
步驟6化合物7溶于一種醇溶液，加催化劑，通入氫氣，連續(xù)反應(yīng)3～10h，經(jīng)過(guò)濾，濃縮即得到胍基化合物8。所說(shuō)的醇溶液是甲醇，乙醇，叔丁醇，正己醇等，特別是甲醇或乙醇；所說(shuō)的催化劑是指金屬催化劑，包括鈀，鈷，鐵，鋅等，或者指這些金屬催化劑的固載物或合金，包括氫氧化鈀碳，鈀碳，瑞尼鎳，鐵鎳合金，鐵鋅合金等，特別是鈀碳或氫氧化鈀碳。
步驟7化合物4或化合物8溶于一種醇與水的混合液中，加入無(wú)機(jī)堿，攪拌2～20h，加水稀釋，酸化即有沉淀析出，過(guò)濾即得化合物I～VI。這里所說(shuō)的醇特別是指甲醇或乙醇。所說(shuō)的無(wú)機(jī)堿指氫氧化鉀，氫氧化鈉或氫氧化鋰。
上述合成I～VI的最初原料1按照現(xiàn)有技術(shù)(中國(guó)發(fā)明專利CN1861596)制備
根據(jù)文獻(xiàn)(Synthesis2004，1，37-42)方法制備胍基原料9
本發(fā)明提供了抑制劑類化合物，進(jìn)一步構(gòu)建了一種含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架凝血酶抑制劑，并對(duì)部分活性位點(diǎn)進(jìn)行了修飾。所述的合成方法步驟操作分離簡(jiǎn)單，所用的試劑均為常用試劑，路線較短，各步驟產(chǎn)率較高。所得目標(biāo)化合物經(jīng)過(guò)活性測(cè)試，具有抑制凝血酶產(chǎn)生的效果。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 當(dāng)X1＝N；X2＝C；R1＝H(吡啶)時(shí) 合成3-({2-[(4-氰基-苯亞胺基)-1甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(4R2＝CN) 將化合物1(4.0g，11.68mmol)溶于60mL無(wú)水甲醇中，加入化合物2(2.24g，14.0mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)后濃縮，再加入80毫升DMF和EDCI(2.77g，14.5mmol)，相同溫度下反應(yīng)30小時(shí)，用水稀釋，乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)相，并用板和食鹽水洗三次，干燥濃縮后硅膠柱純化得到白色固體化合物，收率為38％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝5.1Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，2H)，7.48(d，J＝8.4Hz，2H)，7.39-7.72(m，1H)，7.27(s，1H)，7.10(m，1H)，6.94(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，6.74(d，J＝7.8Hz，1H)，6.61(d，J＝7.8Hz，1H)，4.43(t，J＝6.9Hz 2H)，4.10(m，2H)，3.28(s，3H)，2.82(m，2H)，1.23(t，J＝7.2Hz，2H)ppm； ESI-MS(M/z)469.4(M+H+) 合成3-([2-(4-脒基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(5) 將化合物4(R＝CN)(2.0g，4.27mmol)溶于100mL無(wú)水乙醇中，室溫通入氯化氫氣體反應(yīng)2天后濃縮，殘余物中加入800mL的無(wú)水甲醇，通入氨氣反應(yīng)3天后濃縮，并經(jīng)過(guò)硅膠柱純化得到白色固體1.62g，收率為78％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.30(brs，1H)，9.10(brs，1H)，8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，2H)，7.87(d，J＝8.7Hz，2H)，7.58-7.51(m，1H)，7.33(s，1H)，7.22(m，1H)，7.11(m，1H)，7.00(m，1H)，6.87(m，1H)，4.21(t，J＝6.9Hz，2H)，3.97(m，2H)，3.76(s，3H)，2.67(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)508.4(M+Na+) 合成3-({2-[(4-氨基-苯亞胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(6) 將化合物4(R＝NO2)(5.0g，10.25mmol)溶于100mL無(wú)水乙醇中，加10％Pd/C0.6g，20℃～60℃下通氫氣反應(yīng)20小時(shí)，濾出固體，濾液濃縮，得白色固體6(4.47g，95.0％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，7.56-7.49(m，1H)，7.36(d，J＝7.8Hz，2H)，7.13(s，1H)，7.12-7.05(m，2H)，6.93-6.89(m，1H)，6.83(d，J＝8.1Hz，1H)，6.55(m，2H)，4.21(m，2H)，3.97(m，2H)，3.57(s，3H)，2.66(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)481.3(M+Na+) 合成3-({2-(-4-(2，3-二芐氧基酰亞胺)甲基亞胺-苯亞胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(7) 將化合物6(1.5g，3.27mmol)，甲硫基甲咪9(1.17g，3.27mmol)與三乙胺(5.0mmol)溶于50mL的DMF中攪拌1小時(shí)后加入三氯化鐵(5mmol)后連續(xù)攪拌25小時(shí)，用水稀釋，乙酸乙酯萃取濃縮后硅膠柱純化得到白色固體7(2.36g，94％). 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.47(brs，1H)，9.97(brs，1H)，9.05(brs，1H)，8.40(d，J＝5.1Hz，1H)，7.96(s，IH)，7.45(m，2H)，7.56-7.31(m，12H)，7.27(s，1H)，7.15(d，J＝8.1Hz，1H)，7.10(m，1H)，6.98(m，1H)，6.86(m，1H)，5.27(s，2H)，5.05(s，2H)，4.23(m，2H)，3.98(m，2H)，3.65(s，3H)，2.69(m，2H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)769.4(M+H+) 合成3-([2-(4-呱基-苯亞胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(8) 將化合物7(2.0g，2.60mmol)溶于60mL無(wú)水乙醇中，加入催化量的鈀碳，20-60℃攪拌15小時(shí)，過(guò)濾濃縮，得到化合物8，收率為93％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.40(d，J＝4.8Hz，1H)，7.73(m，2H)，7.57-7.52(m，1H)，7.21(s，1H)，7.15-7.09(m，2H)，6.98-6.94(m，2H)，6.86(m，1H)，4.23(m，2H)，3.98(m，2H)，3.64(s，3H)，2.68(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)501.5(M+H+). 合成化合物IV 將化合物8(3.0mmol)溶于30mL無(wú)水乙醇和15mL水中，加入氫氧化鈉(4.71mmol)，室溫下攪拌8h。加水稀釋，以適量乙酸中和后，靜置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醚淋洗，即得到白色固體IV，收率為79％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ9.89(brs，1H)，8.38(d，J＝4.8Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.53-7.45(m，3H)，7.30-7.24(m，4H)，7.16-7.12(m，1H)，7.08(m，1H)，6.99(m，m，1H)，6.99(m，1H)，4.17(m，1H)，3.69(s，3H)，2.62(m，2H)ppm； ESI-MS(M/z)473.3(M+H+). 合成化合物III 將化合物5(7.0mmol)溶于80mL無(wú)水乙醇和40mL水中，加入氫氧化鋰(21.0mmol)，室溫下攪拌18h。加水稀釋，以適量乙酸中和后，靜置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醚淋洗，即得到白色固體III收率為87％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ8.37(d，J＝5.1Hz，1H)，8.09(d，J＝8.4Hz，1H)，7.83(m，2H)，7.60-7.57(m，1H)，7.33(s，1H)，7.19(m，1H)，7.13-7.09(m，1H)，7.03-6.96(m，2H)，4.12(m，2H)，3.77(s，3H)，2.34(m，2H)ppm. ESI-MS(M/z)458.3(M+H+). 實(shí)施例2 當(dāng)X1＝X2＝C；R1＝F(4-氟苯基)時(shí) 合成3-([2-(4-硝基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(4R2＝NO2) 將化合物1(2.4mmol)溶于15mL無(wú)水甲醇中，加入化合物2(4.48g，28.0mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)后濃縮，再加入200毫升DMF和MeI(30.0mmol)，相同溫度下反應(yīng)28小時(shí)，用水稀釋，乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)相，并用板和食鹽水洗三次，干燥濃縮后硅膠柱純化得到白色固體化合物，收率為84％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.49(d，J＝8.7Hz，2H)，7.20(s，1H)，7.08-7.04(m，1H)，6.93-6.88(m，3H)，6.63(d，J＝8.4Hz，1H)，4.24(m，2H)，4.11(m，2H)，3.27(s，3H)，2.72(m，2H)，1.24(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)486.4(M+H+) 合成3-([2-(4-脒基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(4-氟苯基-2-亞胺)-丙酸乙酯(5)的方法與合成3-([2-(4-咪基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯的方法一致 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.09(d，J＝8.1Hz，2H)，7.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.37-7.19(m，3H)，7.12(m，2H)，7.07-7.02(m，1H)，4.08(m，2H)，4.00(m，2H)，3.74(s，3H)，2.61(m，2H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)503.4(M+H+) 合成化合物II 將化合物5(1.0mmol)溶于20mL無(wú)水乙醇和10mL水中，加入氫氧化鈉(2.5mmol)，室溫下攪拌9h。加水稀釋，以適量乙酸中和后，靜置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醚淋洗，即得到白色固體II收率為84％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，7.90-7.85(m，2H)，7.82(d，J＝9.0Hz，1H)，7.34(d，J＝4.2Hz，，1H)，7.29-7.23(m，2H)，7.20-7.16(m，1H)，7.12-7.02(m，3H)，4.01(m，2H)，3.69(m，3H)，2.45(m，2H)ppm；19F NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ-116.282ppm； ESI-MS(M/z)475.3(M+H+). 實(shí)施例3 當(dāng)X1＝X2＝N；R1＝H(嘧啶)時(shí) 合成3-([2-(4-氰基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(4R2＝NO2) 將化合物1(2.5mmol)溶于15mL無(wú)水甲醇中，加入化合物2(3.0mmol)，室溫?cái)嚢?2小時(shí)后濃縮，再加入22毫升DMF和ECCI(3.5mmol)、HOBt((2.0mmol)，相同溫度下反應(yīng)18小時(shí)，用水稀釋，乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)相，并用板和食鹽水洗三次，干燥濃縮后硅膠柱純化得到白色固體化合物，收率為32％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.84(brs，1H)，8.53(d，J＝4.8Hz，2H)，8.25(d，J＝9.0Hz，2H)，8.07(d，J＝9.0Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.30(d，J＝8.40Hz，1H)，7.16-7.10(m，2H)，4.33(m，2H)，3.99(m，2H)，3.75(s，3H)，2.78(m，2H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)512.3(M+Na+) 合成3-([2-(4-氨基-苯亞胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(6)與合成3-({2-[(4-氨基-苯亞胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成3-({2-(-4-(2，3-二芐氧基酰亞胺)甲基亞胺-苯亞胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-(嘧啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(7)與合成3-({2-(-4-(2，3-二芐氧基酰亞胺)甲基亞胺-苯亞胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成3-([2-(4-胍基-苯亞胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(嘧啶-2-亞胺)-丙酸乙酯(8)與合成3-([2-(4-胍基-苯亞胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亞胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成VI 將化合物8(6.0mmol)溶于60mL無(wú)水乙醇和30mL水中，加入氫氧化鋰(9.0mmol)，室溫下攪拌15h。加水稀釋，以適量乙酸中和后，靜置，有沉淀析出，濾去溶液，固體用水，無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醚淋洗，即得到白色固體VI(87％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ9.10(brs，1H)，8.49(d，J＝4.8Hz，1H)，7.92(brs，4H)，7.83(d，J＝7.8Hz，1H)，7.23-7.04(m，6H)，4.23(m，2H)，3.69(s，3H)，2.40(m，2H)ppm. ESI-MS(M/z)4769.4(M+Na+). 實(shí)施例4 受試品化合物為實(shí)施例中化合物V。該樣品中加入適量DMSO，用生理鹽水將其濃度分別調(diào)整為1*10-6mol/l，其中DMSO的濃度為0.1％。
取300-350g的雄性SD大鼠，以10％水和氯醛(1ml/300g)麻醉，腹主動(dòng)脈取血約10ml，3.8％枸櫞酸鈉91抗凝全血，離心(3000rpm，10min)，取貧血小板血漿(PPP)3-4ml。每次取0.1ml PPP放入尖底玻璃小試管中，測(cè)定管加0.1ml受試品，對(duì)照管加0.1ml相應(yīng)溶酶，置37℃水浴中預(yù)溫2min。然后分別加入10U/ml的凝血酶溶液0.1ml，加完后立即混勻記時(shí)，觀察并記錄血漿凝固現(xiàn)象和所需時(shí)間，此方法重復(fù)數(shù)次。
與正常對(duì)照組血漿凝固時(shí)間(20.6±0.9秒)相比，該化合物加樣組有極顯著性差異，結(jié)果分別為1*E-6(39.2±2.1)。初步活性測(cè)試表明該化合物具有非常顯著的體外抗凝血酶活性。
實(shí)施例5 受試品化合物為實(shí)施例中化合物VI中固體粉末。
活性測(cè)試方法如實(shí)施例4 與正常對(duì)照組血漿凝固時(shí)間(30.0±1.7秒)相比，該化合物加樣組血漿凝固時(shí)間1*E-6(33.7±1.4**)，初步活性測(cè)試表明該化合物具有顯著的體外抗凝血酶活性。
實(shí)施例6 受試品化合物為實(shí)施例中化合物III中固體粉末。
活性測(cè)試方法如實(shí)施例4 與正常對(duì)照組血漿凝固時(shí)間(30.0±1.7秒)相比，該化合物加樣組血漿凝固時(shí)間1*E-6(38.1±4.4**)，初步活性測(cè)試表明該化合物具有顯著的體外抗凝血酶活性。
權(quán)利要求
1、一種含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物，其特征在于具有如下結(jié)構(gòu)式
其中R1部分為吡啶、對(duì)氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；或?yàn)楸交⑦拎?、嘧啶的取代基，R2為脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2。
2、一種制備含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物的方法，其特征在于，按下述路線合成，
其中R1部分為吡啶、對(duì)氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；或?yàn)楸交?、吡啶、嘧啶的取代基，R2為脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2；所述的合成包括如下步驟
步驟1化合物1與化合物2在一種醇類溶劑中反應(yīng)2-20小時(shí)后經(jīng)過(guò)濃縮，得具有化合物3結(jié)構(gòu)的混合物，不需要分離純化；
步驟2具有化合物3結(jié)構(gòu)的上述混合物和一種縮合劑在一種溶劑反應(yīng)5-30小時(shí)后，純化得具有化合物4結(jié)構(gòu)的化合物，其中R2＝CN、NO2；
步驟3R＝CN的化合物4在一種有機(jī)溶劑中與一種氣體反應(yīng)1-2天后與另一種氣體反應(yīng)1-3天，再經(jīng)過(guò)濃縮硅膠柱層析后得脒基化合物5；
步驟4R＝NO2的化合物4在一種醇類溶劑或醚類溶劑中，在金屬催化劑的催化下，與一種還原性氣體反應(yīng)5-20小時(shí)后，經(jīng)過(guò)濾、濃縮后得化合物6；
步驟5化合物6溶于一種有機(jī)溶劑中，加入一種有機(jī)堿，再加入甲硫基甲脒9后，加入一種無(wú)機(jī)鹽，攪拌1～10h，經(jīng)過(guò)濾，萃取，濃縮硅膠柱層析后得化合物7；
步驟6化合物7溶于一種醇溶液，加催化劑，通入氫氣，反應(yīng)3～10h，經(jīng)過(guò)濾，濃縮得呱基化合物8；
步驟7化合物4或化合物8溶于一種醇與水的混合液中，加入無(wú)機(jī)堿，攪拌2～20h，加水稀釋，酸化，沉淀析出，過(guò)濾得化合物I～VI。
3、按權(quán)利要求1或2的含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物，其特征在于所述的化合物是具有下述結(jié)構(gòu)I，II，III，IV，V，VI的化合物
4、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1中的醇類溶劑選自甲醇、乙醇、叔丁醇或正辛醇。
5、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2中的一種溶劑選自N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜或四氫呋喃。
6、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2中的一種縮合劑選自DCC、EDCI、CDI或碘甲烷。
7、按照權(quán)利6所述的制備方法，所說(shuō)的縮合劑是碘甲烷或EDC。
8、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3中的一種有機(jī)溶劑選自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、四氫呋喃、甲醇或乙醇；所述的一種氣體是氯化氫；所述的另一種氣體是氨氣。
9、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4中的醇選自甲醇、乙醇或叔丁醇；所述的醚是四氫呋喃；所述的金屬催化劑是鈀碳或瑞尼鎳；所述的還原性氣體是氫氣。
10、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟5中的一種有機(jī)溶劑選自甲醇，乙醇，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺，環(huán)丁砜，二氯甲烷，三氯甲烷或四氯化碳；所述的有機(jī)堿選自二甲胺，三乙胺，異丙胺，N，N-二異丙基乙胺，叔丁胺或正丁胺；所述的一種無(wú)機(jī)鹽是高價(jià)金屬氯化物，選自氯化鐵，氯化汞，氯化鈣或氯化銅。
11、按照權(quán)利10所述的制備方法，其中所述的一種無(wú)機(jī)鹽是氯化汞。
12、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟6中的醇溶液選自甲醇，乙醇，叔丁醇或正己醇；所述的催化劑是金屬催化劑。
13、按權(quán)利要求12所述的制備方法，其特征在于，所述金屬催化劑選自鈀，鈷，鐵或鋅或所述金屬催化劑的固載物或合金。
14、按權(quán)利要求13所述的制備方法，其特征在于，所述金屬催化劑的固載物或合金選自氫氧化鈀碳，鈀碳，瑞尼鎳，鐵鎳合金或鐵鋅合金。
15、按照權(quán)利12所述的制備方法，其特征在于，所述的金屬催化劑是氫氧化鈀碳或鈀碳。
16、按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟7中的醇是甲醇或乙醇；所述的無(wú)機(jī)堿是氫氧化鉀，氫氧化鈉或氫氧化鋰。
17、按照權(quán)利16所述的制備方法，其特征在于，所述的無(wú)機(jī)堿是氫氧化鋰。
18、權(quán)利要求1所述的含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物在制備凝血酶抑制劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬化學(xué)合成領(lǐng)域，涉及含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制劑類化合物及其制備方法和應(yīng)用。所述的抑制劑類化合物含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架。本發(fā)明并以體內(nèi)活性篩選為指導(dǎo)，優(yōu)化了不同取代基對(duì)時(shí)對(duì)活性的影響，優(yōu)選出了對(duì)凝血酶的產(chǎn)生具有明顯的抑制作用的化合物。本發(fā)明所述的合成方法步驟操作分離簡(jiǎn)單，所用的試劑均為常用試劑，路線較短，各步驟產(chǎn)率較高。所得目標(biāo)化合物經(jīng)過(guò)活性測(cè)試，具有抑制凝血酶產(chǎn)生的效果。
文檔編號(hào)A61K31/4184GK101417997SQ200810202929
公開日2009年4月29日 申請(qǐng)日期2008年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月18日
發(fā)明者魏邦國(guó), 馬景毅, 林國(guó)強(qiáng), 朱海波, 凱 渠 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué), 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所