專利名稱：：黃連總堿在制備糖尿病并發(fā)癥治療藥物中的應(yīng)用的制作方法黃連總堿在制備糖尿病并發(fā)癥治療藥物中的應(yīng)用[
技術(shù)領(lǐng)域：
]本發(fā)明涉及一種從黃連原料藥中提取的總生物堿(黃連總堿)在制備治療糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用，以及黃連總堿的制備方法。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，屬中醫(yī)"消渴"范疇。隨著世界人口的老齡化，糖尿病已經(jīng)成為常見(jiàn)病、多發(fā)病，據(jù)統(tǒng)計(jì)目前全球已診斷的II型糖尿病患者達(dá)1.3億人，我國(guó)己超過(guò)4000萬(wàn)人，而且發(fā)病率在逐年上升。糖尿病患者由心腦血管疾病引起的死亡率約占80%，并使其壽命減少1/3，糖尿病患者合并血脂升高者在80%以上，合并血液粘度升高者達(dá)90%以上。糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等糖尿病微血管病變所致的死亡率與致殘率均呈上升態(tài)勢(shì)。由于糖尿病并發(fā)癥引起的死亡人數(shù)在發(fā)達(dá)國(guó)家是繼心腦血管疾病、癌癥之后的第三位，引起了世界各國(guó)的重視，紛紛對(duì)糖尿病的發(fā)病機(jī)制、藥物防治等進(jìn)行研究。從目前臨床所用或即將應(yīng)用的降糖藥物來(lái)看，各種西藥也只能控制血糖而已，對(duì)糖尿病患者合并血脂升高、血液粘度增強(qiáng)、血管壁增厚硬化等大、小血管病變無(wú)明顯作用，且有一定的局限性和不良反應(yīng)，甚至是嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如導(dǎo)致低血糖、乳酸性酸中毒等。我國(guó)已注冊(cè)申報(bào)抗糖尿病的中成藥有近40種，大多只針對(duì)改善糖尿病的"三多一少"癥狀，因中藥藥性緩和，降糖效果不及西藥起效快而缺乏市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，在定位上未能揚(yáng)長(zhǎng)避短，充分發(fā)揮中藥在治療糖尿病慢性并發(fā)癥上的優(yōu)勢(shì)。目前市場(chǎng)銷(xiāo)售的消渴丸雖然年銷(xiāo)售額超億元，是降糖中成藥的主要產(chǎn)品，但消渴丸為中西藥混合制劑，長(zhǎng)期大量使用有導(dǎo)致"低血糖反應(yīng)"副作用，且對(duì)糖尿病血管并發(fā)癥無(wú)明顯作用。因此，開(kāi)發(fā)既能降低血糖、又能調(diào)節(jié)血脂、保護(hù)血管等治療糖尿病合并慢性血管并發(fā)癥的中藥新藥，將能夠揚(yáng)長(zhǎng)避短，極大地提高產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，填補(bǔ)市場(chǎng)空白，產(chǎn)生良好的社會(huì)效益、獲得可觀的經(jīng)濟(jì)效益。[
發(fā)明內(nèi)容l黃連總堿既能有效降低血糖、又能調(diào)節(jié)血脂、保護(hù)血管。本發(fā)明的目的在于提供黃連總堿在制備糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥治療藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種治療糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥的藥物，它主要為從中藥黃連中提取的總生物堿組成。該藥物的制備方法包括以下步驟1)將黃連藥材粉碎成粗粉2)5-10倍量60-80%乙醇將黃連粗粉回流提取1-3次，l-2h/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。3)將黃連提取物加入5倍量0.5%硫酸溶解，濾過(guò)，濾液分別用石灰乳調(diào)pH9,濾過(guò)，用鹽酸分別調(diào)pHl2,加氯化鈉使含鹽量達(dá)10%，搖勻，靜置，得黃連總堿?；?qū)ⅫS連提取物用大孔樹(shù)脂法分離純化黃連總堿。干燥；或?qū)ⅫS連提取物用大孔樹(shù)脂法分離純化黃連總堿。干燥，制劑成口服劑型或注射劑型。對(duì)2型糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥療效突出。[具體實(shí)施方式l實(shí)施例l:從中藥黃連中提取的總生物堿。1)將黃連藥材粉碎成粗粉2)5-10倍量60-80%乙醇將黃連粗粉回流提取1-3次，l-2h/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。3)將黃連提取物加入5倍量0.5%硫酸溶解，濾過(guò)，濾液分別用石灰乳調(diào)pH9,濾過(guò)，用鹽酸分別調(diào)pHl2,加氯化鈉使含鹽量達(dá)10%，搖勻，靜置，得黃連總堿。或?qū)ⅫS連提取物用大孔樹(shù)脂法分離純化黃連總堿。千燥，進(jìn)一步制劑成形為口服劑型或注射劑型。例如口服劑型可加工成顆粒劑(沖服劑)、片劑(素片、包衣片、分散片、速崩片、泡騰片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、口服液體劑。實(shí)施例2:將黃連藥材粉碎成粗粉，按5倍量的60%乙醇將黃連粗粉回流提取3次，lh/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。其余步驟同實(shí)施例l，制得本發(fā)明藥物。實(shí)施例3:將黃連藥材粉碎成粗粉，按8倍量的75%乙醇將黃連粗粉回流提取2次，1.5h/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。其余步驟同實(shí)施例l，制得本發(fā)明藥物。實(shí)施例4:將黃連藥材粉碎成粗粉，按10倍量的80%乙醇將黃連粗粉回流提取1次，2h/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。其余步驟同實(shí)施例l,制得本發(fā)明藥物。本發(fā)明藥物(黃連總堿)對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠血糖、血脂等效應(yīng)觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康膋k-Ay小鼠是一種毛色基因(ay)突變型糖尿病小鼠，ay基因不僅影響小鼠的毛色而且可引起代謝紊亂，出現(xiàn)肥胖、高血糖、脂質(zhì)代謝紊亂和高胰島素血癥等代謝異常綜合癥，其發(fā)病是在遺傳易感的基礎(chǔ)上加環(huán)境因素而誘發(fā)，與人類(lèi)2型糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥表現(xiàn)極為相似。本實(shí)驗(yàn)觀察黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠的血糖、血脂、氧化應(yīng)激、醛糖還原酶等指標(biāo)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)材料1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠，雌雄各半，SPF級(jí)，50只，體重28土2g，血糖值均W0.0mmol/L，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。2、實(shí)驗(yàn)藥物黃連總堿由中山大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室提取、分離、制備，純度>95%。3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施實(shí)驗(yàn)在中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，動(dòng)物室內(nèi)溫度20-25t、相對(duì)濕度40%-70%、換氣次數(shù)10-15次/h。4、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑4.l主要儀器ONETOUCHUltra血糖監(jiān)測(cè)儀，美國(guó)Lifescan公司，上海強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司進(jìn)口；CX5-全自動(dòng)生化分析儀，美國(guó)貝克曼公司；752紫外分光光度儀，上海第三分析儀器廠；放射免疫測(cè)定儀，DFM-96型，多管放射免疫計(jì)數(shù)器(10探頭)，安徽合肥眾成機(jī)電技術(shù)公司。4.2:主要試劑血糖檢測(cè)試劑，美國(guó)美國(guó)Lifescan公司生產(chǎn)，上海強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司進(jìn)口；膽固醇、甘油三脂試劑盒由北京中瑞科美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；胰島素測(cè)定試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)?？偟鞍讟?biāo)準(zhǔn)液德國(guó)Human公司生產(chǎn)；超氧化物歧化酶檢測(cè)、丙二醛檢測(cè)試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)；50%葡萄糖液，河北刑臺(tái)中興制藥廠生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、實(shí)驗(yàn)分組與用藥劑量將動(dòng)物隨機(jī)分為黃連總堿高、中、低3個(gè)劑量組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、空白對(duì)照組，每組10只。高劑量組給藥劑量為90mg/kg:中劑量組給藥劑量為30mg/kg，低劑量組給藥劑量為10mg/kg，陽(yáng)藥對(duì)照藥消渴丸組的給藥劑量相當(dāng)于臨床等效劑量(中劑量)，為0.9g/7kg，上述藥物用羧甲基纖維鈉稀釋，灌胃給藥，給藥容量為lml/100g體重，空白對(duì)照組給予相同容量的羧甲基纖維鈉，每日一次，實(shí)驗(yàn)給藥共四周。2、指標(biāo)觀察2.1降糖效應(yīng)觀察2.1.l血糖、糖耐量實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后次日，各組動(dòng)物禁食(自由飲水)6小時(shí)，測(cè)定血糖后立即灌胃給藥，給藥3小時(shí)后測(cè)定血糖值(葡萄糖氧化酶法)，比較各組給藥前后血糖值的變化。計(jì)算血糖均值下降百分比(給藥前血糖值一給藥后血糖值/給藥前血糖值)。實(shí)驗(yàn)1周后，各組動(dòng)物禁食(自由飲水)6小時(shí)，實(shí)驗(yàn)時(shí)先測(cè)禁食動(dòng)物血糖值，然后給藥，給藥1小時(shí)后腹腔注射葡萄糖(用50%葡萄糖，2g/kg)，測(cè)定給糖后0、0.5、1及2小時(shí)的血糖值。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，各組動(dòng)物禁食(自由飲水)9小時(shí)后。觀察比較各組血糖值的變化。2.1.2血清胰島素水平實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，各組動(dòng)物空腹稱重后乙醚麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，用放射免疫法測(cè)定血清胰島素水平。2.1.3肝糖原含量實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組動(dòng)物空腹取血后處死動(dòng)物，各組取新鮮肝組織，用比色法測(cè)定肝糖原含量。2.2血脂觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組動(dòng)物空腹稱重后乙醚麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，在CX5全自動(dòng)生化分析儀上用酶法檢測(cè)血膽固醇、甘油三脂。2.3抗氧化指標(biāo)各組于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用乙醚麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血超氧化物歧化酶活性，單位用u/ml表示；用硫代巴比妥酸法(TBA)檢測(cè)血脂質(zhì)過(guò)氧化物代謝產(chǎn)物一丙二醛水平，單位用nmol/ml表示。2.4組織醛糖還原酶活性各組于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死動(dòng)物，取部分腎皮質(zhì)及一側(cè)眼球，用紫外分光光度法檢測(cè)腎及晶狀體等組織醛糖還原酶活性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果用spssl1.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，具體方法為方差分析(LSD法)、t檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(Z士S)表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、降糖效應(yīng)1.1黃連總堿對(duì)kk-Ay小鼠血糖及糖耐量的影響，見(jiàn)表l-3從表1看出，給藥3小時(shí)后，黃連總堿各組對(duì)kk-Ay小鼠(2型自發(fā)性糖尿病小鼠)血糖有較好地降低作用，與用藥前相比有顯著性差異(尸均<0.05);黃連總堿中、高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照藥物的血糖均值下降幅度接近，約為23%左右(21%—24%)。從表2看出，在給糖后0h各組血糖無(wú)明顯差異；給糖后0.5h、lh、2h黃連總堿各組、消渴丸組血糖值的升高幅度低于空白對(duì)照組(尸均<0.05);黃連總堿與消渴丸組相比，給糖后0.5h時(shí)消渴丸組血糖值的升高幅度低于黃連總堿各劑量組(尸均<0.05)，給糖后lh黃連總堿高劑量組與消渴丸組相比無(wú)明顯差異，給糖后2h黃連總堿各劑量組與消渴丸組相比無(wú)明顯差異。提示黃連總堿各組有緩和的增強(qiáng)、改善糖耐量的作用。從表3看出，用藥四周后，黃連總堿各劑量組空腹血糖與模型組相比明顯下降(戶均<0.05);與用藥前相比，各組均值下降30%左右(28%_38%)，黃連總堿中、高劑量組血糖值與陽(yáng)性對(duì)照藥物消渴丸相比無(wú)明顯差異(尸>0.05)。提示黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠有較明顯的降低血糖作用。表1、黃連總堿對(duì)kk-Ay糖尿病小鼠即時(shí)血糖影響(I±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白對(duì)照組相比，*戶<0.05;與消渴丸組比較Aix:0.05表3、黃連總堿給藥四周后kk-Ay糖尿病小鼠各組血糖變化(mmol/L，J±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白對(duì)照組相比，*i><0.05;與消渴丸組比較A戶〈0.051.2黃連總堿對(duì)kk-Ay小鼠血胰島素及肝糖原的影響，見(jiàn)表4從表4看出，黃連總堿各劑量組與空白對(duì)照組相比，能明顯降低血清胰島素水平及提高肝糖原含量(尸均<0.05)。提示黃連總堿對(duì)2型糖尿病小鼠降低血糖作用與黃連總堿改善胰島素抵抗、增強(qiáng)胰島素敏感性、促進(jìn)肝葡萄糖合成肝糖原增加、肝糖原輸出減少等有關(guān)。黃連總堿與對(duì)照藥物消渴丸相比，提高肝糖原含量的作用趨勢(shì)為優(yōu)，以黃連總堿高劑量組明顯(i><0.05)。表4、黃連總堿對(duì)kk-Ay小鼠血胰島素及肝糖原的影響(i±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與空白對(duì)照組相比，求尸〈0.05，與消渴丸組比較AP〈0.052、血脂變化，見(jiàn)表5從表5看出，各用藥組與空白對(duì)照組相比，黃連總堿各劑量組具有顯著的降低血膽固醇與甘油三脂水平作用，與空白對(duì)照組相比，尸均<0.05;對(duì)照藥物消渴丸雖對(duì)kk-Ay小鼠也有一定的改善甘油三脂效應(yīng)，但作用明顯弱于黃連總堿各劑量組(戶均<0.05)。表5、黃連總堿對(duì)kk-Ay<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與空白對(duì)照組相比，*i><0.05，與消渴丸組比較A戶〈0.053、血SOD、MDA變化，見(jiàn)表6從表6看出，各用藥組與空白對(duì)照組相比，黃連總堿各劑量組具有顯著的提高血超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化物代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量的作用，與空白對(duì)照組相比，戶均<0.05;對(duì)照藥物消渴丸對(duì)kk-Ay小鼠雖也有一定的提高血SOD活性、降低MDA含量的作用，但與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(&0.05)。表6:黃連總堿對(duì)kk-AM、鼠血SOD、MDA的影響(X土S)_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>空白對(duì)照組10152.30±17.098.23±1.59消渴丸組10165.18±25.947.52±2.25低劑量組10189.63±23.12*6.25±1.55*中劑量組10221.61±379.20*5.93±1.27*高劑量組10245.19±248.12*5.85±1.31*與模型組相比，*P<0.054、組織醛糖還原酶活性變化，見(jiàn)表7從表7看出，各用藥組與空白對(duì)照組相比，黃連總堿各劑量組具有顯著的降低腎臟與晶體醛糖還原酶活性的作用(戶均<0.05);對(duì)照藥物消渴丸對(duì)kk-Ay小鼠的腎臟與晶體醛糖還原酶活性雖有一定作用，但與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(i>0.05)。表7:黃連總堿對(duì)kk-Ay.小鼠組織AR活性的影響(X±S)分組N晶狀體AR(umol.tnin—1.mg扁ipro)腎臟AR空白對(duì)照組100.30±0.051.35±0.45消渴丸組100.27±0.071.18±0.38低劑量組100.23±0.03*0.95±0.51中劑量組100.19±0.04*0.84±0.31高劑量組100.17±0.06*0.73±0.29*與模型組相比，*尸<0.05，結(jié)論1、黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠有明顯的降低血糖效應(yīng)，與消渴丸組作用相近，其降血糖作用與黃連總堿改善胰島素抵抗、增加肝糖原含量等有關(guān)。2、黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠有明顯的改善脂代謝紊亂、降低血膽固醇與甘油三脂的作用，從而有利于延緩、改善糖尿病血管并發(fā)癥的形成與發(fā)展。3黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠具有滿意的提高機(jī)體抗氧化的作用，從而有利于保護(hù)血管內(nèi)膜、防止糖尿病并發(fā)血管硬化、狹窄等病變的形成、發(fā)展。4、黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠具有滿意的降低腎、眼醛糖還原酶活性，從而有利于防止腎、眼等糖尿病微血管并發(fā)癥的形成、發(fā)展。綜上，黃連總堿對(duì)kk-Ay自發(fā)性糖尿病小鼠具有明顯地降低血糖效應(yīng)，同時(shí)有滿意的調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抑制醛糖還原酶活性等保護(hù)血管、防止慢性血管并發(fā)癥形成與發(fā)展的作用。權(quán)利要求1.黃連總堿在制備糖尿病合并慢性血管并發(fā)癥治療藥物中的應(yīng)用。2.黃連總堿在制備糖尿病合并高血脂治療藥物中的應(yīng)用。3.黃連總堿的提取方法，它包括以下步驟1)將黃連藥材粉碎成粗粉，2)6-10倍量60-75%乙醇將黃連粗粉回流提取3次，l-2h/次，分次過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮，干燥，得黃連提取物。3)將黃連提取物加入5-10倍量0.5%硫酸溶解，濾過(guò)，濾液分別用石灰乳調(diào)pH9，濾過(guò)，用鹽酸分別調(diào)pHl2,加氯化鈉使含鹽量達(dá)10%，搖勻，靜置，得黃連總堿，或?qū)ⅫS連提取物用大孔樹(shù)脂法分離純化黃連總堿。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于將黃連總堿加工成口服劑型與注射劑型。全文摘要本發(fā)明涉及一種降低血糖、調(diào)節(jié)血脂治療糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥的藥物及其制備方法。它主要是從中藥黃連中提取的總生物堿。該藥物的制備方法包括以下步驟1)將黃連藥材粉碎成粗粉；2)5-10倍量60-80％乙醇將黃連粗粉回流提取1-3次，1-2h/次，分次過(guò)濾，合并濾液。減壓濃縮，干燥，得黃連提取物；3)將黃連提取物加入5倍量0.5％硫酸溶解，濾過(guò)，濾液分別用石灰乳調(diào)pH9，濾過(guò)，用鹽酸分別調(diào)pH1～2，加氯化鈉使含鹽量達(dá)10％，搖勻，靜置，得黃連總堿?；?qū)ⅫS連提取物用大孔樹(shù)脂法分離純化黃連總堿。干燥，制劑成口服劑型或注射劑型。對(duì)2型糖尿病合并高血脂等慢性血管并發(fā)癥療效突出。文檔編號(hào)A61P3/00GK101396445SQ20081021882公開(kāi)日2009年4月1日申請(qǐng)日期2008年10月31日優(yōu)先權(quán)日2008年10月31日發(fā)明者黃河清申請(qǐng)人:中山大學(xué)