專利名稱：一種生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物支架制備領(lǐng)域，具體地說，涉及一種生物活性蛋 白或多肽涂層生物支架的制備方法。
背景技術(shù)：
由于動(dòng)脈粥樣硬化引起血管管腔狹窄，從而造成肌肉供血供氧障 礙而引起相應(yīng)部位的肌肉缺血壞死。半個(gè)世紀(jì)以來，冠心病等動(dòng)脈血 管疾病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。
1976年德國學(xué)者安德里亞.格隆茨戈首次提出了動(dòng)脈血管內(nèi)安裝 支架的設(shè)想，到90年代冠狀動(dòng)脈支架已廣泛地應(yīng)用于臨床治療。血 管支架是為防止心血管及外周血管阻塞病變進(jìn)行介入治療的主要手 段，其特點(diǎn)是能通過細(xì)小管道進(jìn)入預(yù)定的部位，釋放后能膨脹至設(shè)定 的直徑大小，對(duì)管腔起到支撐作用，使管腔保持通暢。血管支架按照 表面狀態(tài)可分為裸支架、藥物洗脫支架、聚合物包被支架、金屬涂層 支架、放射性支架和人造血管覆蓋支架，最先使用的支架基本為裸支 架。由于支架相對(duì)血管或其它肌體管道來說是一種異源性物質(zhì)，安放 后刺激血管內(nèi)膜引起反應(yīng)性增生，使血管發(fā)生再狹窄。再狹窄的發(fā)生 率高達(dá)30%-35%，尤其是病變較長(zhǎng)的血管和直徑較小的血管。為解 決再狹窄的問題，人們隨后開發(fā)出放射性支架和藥物洗脫支架，其中 藥物洗脫支架已被公認(rèn)為在冠心病的介入治療中，是能夠解決冠脈血 管內(nèi)再狹窄問題的最有效的方法。
現(xiàn)有的藥物洗脫支架多釆用聚合物作為載體來攜帶藥物并控制 其釋放，典型的作法是將活性藥物和聚合物混合涂覆在裸支架部分 或全部表面上，聚合物一般最少要占涂層質(zhì)量的70%以上才能起到載 體的作用，支架本體上涂覆一層包含活性藥物的聚合物涂層，聚合物
涂層上又涂覆一層多聚物涂層。這種含有聚合物涂層的藥物支架在臨 床應(yīng)用中可以將再狹窄發(fā)生率降低到10%以下，但是，這種支架在植 入人體后，由于藥物的不斷減少而聚合物濃度相應(yīng)的不斷增高，可能 導(dǎo)致血栓的形成。
理想的可植入的支架不但應(yīng)具有良好的生物相容性，而且能促進(jìn) 受傷組織愈合，防止細(xì)胞過度增生，加速管腔組織內(nèi)皮化，防止血栓 形成和再狹窄。因此能夠促進(jìn)內(nèi)皮修復(fù)和抑制內(nèi)膜增殖的不同階段信 號(hào)因子成為目前研究的熱點(diǎn)之一，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
(VEGF)、 一氧化氮合酶(iNOS, eNOS)、雌激素、17p雌二醇等。 這些支架在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段大部分都表現(xiàn)了較好的抑制再狹窄和促進(jìn) 內(nèi)皮修復(fù)的結(jié)果。其中較為理想的設(shè)計(jì)理念為內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲支架， 這種支架通過動(dòng)員夕卜周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)到血管局部加速支架表面內(nèi)皮的快速修復(fù)，抵抗再狹窄發(fā)生的 同時(shí)降低支架血栓的發(fā)生。根據(jù)這一理念，奧勃斯醫(yī)學(xué)技術(shù)股份有限 公司(Orbusneich)設(shè)計(jì)的Genous支架將內(nèi)皮祖細(xì)胞特異性CD34抗體
共價(jià)固定在R支架的表面，通過抗原抗體特異結(jié)合的理論捕獲血液循 環(huán)中的內(nèi)皮袓細(xì)胞以加速內(nèi)皮愈合以及控制中膜和外膜的增殖。阿昔 單抗具有抗血小板活性、抑制中心粒細(xì)胞和單核細(xì)胞引起的炎癥，并 具有oivP3抗體活性，能夠特異捕獲內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)等特性，Humed 公司利用阿昔單抗這些生物特性，將其涂覆在支架表面加速支架表面 內(nèi)皮化的同時(shí)具有抗炎和抗血栓活性。還有RGD環(huán)肽支架，通過設(shè)計(jì) 出對(duì)(w(33整合素受體更高親和力的RGD環(huán)肽，特異捕獲內(nèi)皮祖細(xì)胞加 速支架表面內(nèi)皮修復(fù)。但是這些支架在臨床實(shí)驗(yàn)階段并沒有如動(dòng)物實(shí) 驗(yàn)顯示的良好結(jié)果，可能是因?yàn)樗麄優(yōu)榱斯潭ɑ蛘咄扛策@些生物抗體 均在支架本體設(shè)置了一層基質(zhì)層，而這一層基質(zhì)誘發(fā)的炎癥和過敏反 應(yīng)很可能是導(dǎo)致臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果失敗的原因。
Orbusneich公司申請(qǐng)的中國專利01806680.l提供了 一種包涂了基
質(zhì)和與內(nèi)皮細(xì)胞抗原反應(yīng)的抗體的醫(yī)療器械組合物和其制造方法。該
專利首先在醫(yī)療器械表面涂覆一層由合成材料如聚尿烷、聚L-乳酸 等，或天然材料如膠原蛋白、血纖蛋白等，或長(zhǎng)約C60-C100的吹侖
碳組成的基質(zhì)，然后通過基質(zhì)連接物分子將治療有效量的與內(nèi)皮細(xì)胞 抗原反應(yīng)的抗體共價(jià)固定在醫(yī)療器械表面，從而促使內(nèi)皮細(xì)胞在所述 醫(yī)療器械上分化和增殖，所述抗體限定為單克隆抗體。
中國專利申請(qǐng)03803370.4提供了 一種醫(yī)療裝置的各種組成部分 和其制作方法。此類醫(yī)療裝置都用含有抗體、具有刺激內(nèi)皮生成作用 的化合物和小分子物質(zhì)的生物相容的基質(zhì)進(jìn)行包衣。特征在于至少包 括一層包衣層，至少一種具有治療有效量的抗體、抗體片段或其組合， 以及至少一種化合物，能夠促進(jìn)在該裝置表面的始祖代內(nèi)皮細(xì)胞加速 黏附、生長(zhǎng)和分化過程，而成為成熟的和功能性內(nèi)皮細(xì)胞，以防止內(nèi) 膜增殖。
中國專利申請(qǐng)200580004068.6闡述 一種用于植入到體內(nèi)血管和
管腔結(jié)構(gòu)中的醫(yī)療裝置，其包括與血液接觸的表面和用于將一種或多 種藥物有控制地釋放到毗鄰組織中的涂層，所述涂層包含生物可吸收 性或不可吸收性的生物相容性基質(zhì)、 一種或多種藥物、 一種或多種配 體，所述配體結(jié)合于該醫(yī)學(xué)裝置與血液接觸表面上的內(nèi)皮祖細(xì)胞膜上 的特異性分子。
以上器械或裝置的特點(diǎn)是均在裝置本體表面涂布了一層基質(zhì)，利 用基質(zhì)的連接作用把生物抗體或藥物涂覆和/或固定在本體上。但本 申請(qǐng)發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如果能夠直接在裝置本體上涂覆和/或固定生 物活性成分，避免在本體和生物抗體之間設(shè)置一層基質(zhì)，不僅能夠充 分利用生物活性成分在生理環(huán)境下發(fā)揮促進(jìn)內(nèi)皮修復(fù)和抑制平滑肌 增殖的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也能避免基質(zhì)帶來的炎癥及副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的
制備方法，該方法無需涂覆基質(zhì)，就能充分發(fā)揮所涂覆生物活性物質(zhì) 的促進(jìn)內(nèi)皮修復(fù)和抑制平滑肌增殖的作用。
本發(fā)明所提供的生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的制備方法， 其釆用陽極極化的方法，以支架本體為陽極，將其與陰極一起插入生 物活性蛋白或多肽溶液中，在電源電場(chǎng)力的作用下，生物活性蛋白或 多肽電離而帶負(fù)電，向支架陽極移動(dòng)，均勻地涂覆在支架的表面。
上述釆用陽極極化的方法涂覆生物支架，包括如下步驟
1、 支架本體的預(yù)處理用四氫呋喃、丙酮、乙醇或甲醇超聲清 洗，然后再用去離子水進(jìn)行清洗；
2、 生物活性蛋白或多肽涂覆液的配制以蒸餾水、生理鹽水、 硼酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液、濃度為1%-20% 的乙醇溶液或磷酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入濃度為 0.001mg/ml-lmg/ml的生物活性蛋白或多肽溶液；
3、 涂覆液的涂覆釆用陽極極化包被的方式涂覆生物支架，以 支架本體為陽極，在直流電源下，控制電壓在0.1V以上，生物活性蛋
白或多肽電離帶負(fù)電，向陽極移動(dòng)，均勻牢固地涂覆在支架本體表面， 涂覆時(shí)間為l-100min，涂覆量為支架重量的1/102-1/106。
陽極極化的原理電化學(xué)中的極化現(xiàn)象是指極化作用一經(jīng)開始，
在陽極，電子流走了，溶液中的陰離子向陽極移動(dòng)；在陰極，電子流 入快，溶液中的陽離子向陰極移動(dòng)。當(dāng)把支架作為陽極，溶液中釆用 蛋白或多肽溶液時(shí)，該蛋白或多肽電離變?yōu)殛庪x子，通電后蛋白或多 肽向陽極支架處移動(dòng)，在陰陽相吸作用下，克服支架表面的液面張力， 使蛋白或多肽與支架表面牢固均勻的結(jié)合，與電鍍的原理基本相同。
所述支架本體可先經(jīng)過表面清洗和防腐處理后，進(jìn)行陽極極化的 涂覆處理；所述涂覆后的生物支架自然晾干，經(jīng)預(yù)冷凍后，放入真空 冷凍干燥機(jī)干燥。
其中，支架本體的表面清洗過程為
1、 用砂帶打磨支架本體表面，用于去除表面的氧化物，調(diào)整表
面粗糙度；
2、 利用超聲波，依次用75%的醫(yī)用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶液、 去離子水清洗，超聲波頻率為28-100 KHz，清洗時(shí)間為5-15min;
3、 將支架本體放入15-60 g/L、 70-10(TC的氫氧化鈉溶液中浸泡 5-10 min，用于去除油脂和氧化皮；
4、 將清洗后的支架本體放置在真空干燥機(jī)中，溫度設(shè)定在30-40 。C,干燥30-60min后取出。
支架本體的防腐處理釆用化學(xué)氧化處理或陽極氧化處理的方法 進(jìn)行。
化學(xué)氧化處理的過程為將支架本體浸入含重鉻酸鉀15-20 g/L、 硝酸15-25g/L、氯化鈉0.75-1.25 8化的混合溶液中，在70-80。C下，氧 化0.5-2.0min,在支架本體表面生成氧化膜。
陽極氧化處理的過程為釆用交流電氧化，在兩電極上分別安裝 完全相同的支架本體，陽極氧化處理用槽液為高錳酸鉀15-20g/L、磷 酸三鈉15-55g/L、氟化鉀25-55 g/L、氫氧化鉀65-165 g/L、氫氧化鋁 15-65 g/L的混合液，在20-60。C下，電流密度為O.l-lO A/dm2,交流電 壓為50-卯V下，氧化10-50 min，支架本體表面生成氧化膜。
除上方法外，還可釆用離子注入、激光表面處理、熱擴(kuò)散、金屬 鍍層、氣相沉積、有機(jī)涂層等方式中的一種或多種對(duì)支架本體表面進(jìn) 行防腐處理。
本發(fā)明的生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的制備方法中，所述 的支架本體的材質(zhì)為不銹鋼、鈷鉻合金、鎂合金、Ni-Ti合金或其它 醫(yī)用金屬材料。
所述的支架本體為冠脈血管支架、頸動(dòng)脈血管支架、外周血管支 架、腎動(dòng)脈血管支架、顱內(nèi)動(dòng)脈血管支架、移植片固定膜、移植片固 定膜移植物、合成的人造血管、心臟瓣膜、血管修補(bǔ)篩、起搏器、起
搏器導(dǎo)子、除纖顫器、PFO隔膜封閉裝置、血管夾、動(dòng)脈血管瘤閉鎖 器、血液透析移植物、血液透析導(dǎo)管、房室吻合分流、大動(dòng)脈血管瘤 移植物裝置、靜脈瓣、血管接合夾、留置式動(dòng)脈導(dǎo)管或血管護(hù)鞘或藥 物輸送口等。
所述生物活性成分為阿昔單抗(抗血小板凝聚單克隆抗體)、一
氧化氮合酶(NOS)、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽、血管 內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3 (FGF-3)、成纖維細(xì) 胞生長(zhǎng)因子4 (FGF-4)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5 (FGF-5)、成纖維細(xì) 胞生長(zhǎng)因子6 (FGF-6)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子7 (FGF-7)、成纖維細(xì) 胞生長(zhǎng)因子8 (FGF-8)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9 (FGF-9)、堿性成纖 維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板誘導(dǎo)性因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P1、酸性成纖 維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、骨粘連蛋白、促血管生成素l、促血管生成素2、胰 島素樣生長(zhǎng)因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、血小板衍生生長(zhǎng)因 子AA、血小板衍生生長(zhǎng)因子BB、血小板衍生生長(zhǎng)因子AB、內(nèi)皮細(xì) 胞PAS蛋白1、血小板反應(yīng)蛋白、增殖蛋白、肝配蛋白-Al、 E-選擇蛋 白、肥胖蛋白、白介素8、甲狀腺素以及神經(jīng)鞘氨醇l-磷酸酯、角蛋 白8 (Keratin 8)、尿激酶前體(Pro-UK)、反義寡核核苷酸、抗CD2 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD3白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD4白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD8白細(xì)胞分化抗原抗 體及其片段、抗CD3R白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDla白細(xì)胞 分化抗原抗體及其片段、抗CDlb白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD5白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD6白細(xì)胞分化抗原抗體及其 片段、抗CD7白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD9白細(xì)胞分化抗原 抗體及其片段、抗CD10白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDlla白 細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD18白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD19白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD20白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD21白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD22白細(xì)胞分
化抗原抗體及其片段、抗CD23白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗
CD24白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD37白細(xì)胞分化抗原抗體及 其片段、抗CD33白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD34白細(xì)胞分化 抗原抗體及其片段、抗CD35白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD64 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD65白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CDw65白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD66b白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CD66e白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD31 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD133白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD89白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDw90白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CD56白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD57白 細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD94白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD40白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD72白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD77白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD16白細(xì)胞分 化抗原抗體及其片段、抗CD32白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD63白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD36白細(xì)胞分化抗原抗體及 其片段、抗CD41白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD42a白細(xì)胞分 化抗原抗體及其片段、抗CD42b白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CDllb白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDllc白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD29白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD44白細(xì)胞分 化抗原抗體及其片段、抗CD48白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD49a白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD49b白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD49c白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD49e白細(xì)胞 分化抗原抗體及其片段、抗CD49f白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD50白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD51白細(xì)胞分化抗原抗體及 其片段、抗CD54白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD58白細(xì)胞分化 抗原抗體及其片段、抗CD61白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD62E 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD62L白細(xì)胞分化抗原抗體及其片
段、抗CD62p白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD103白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CD105白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD26 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD71白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD95白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD122白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CDwl24白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD126 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD127白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD117白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子l (VEGF-1)抗體及其片段、抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子2 (VEGF-2)抗體 及其片段、抗CD146(Muc-18)抗體及其片段、抗干細(xì)胞抗原(Sca-1) 抗體及其片段、抗干細(xì)胞因子l ( SCF/c-Kti配體)抗體及其片段、抗 酪氨酸激酶Tie-2抗體及其片段和抗HAD-DR細(xì)胞表面抗原抗體及其 抗體片段中的一種或多種。
此外，在支架本體表面涂覆抗體前，可先涂覆治療性藥物，涂覆 的治療性藥物與抗體的比例為10: 1-100: 1。其中，所述治療性藥物 為肝素、阿司匹林、水蛭素、秋水仙堿、抗血小板GPIIb/IIIa受體拮
抗劑、白甲氨蝶呤、嘌呤類、嘧啶類、植物堿類和埃坡破霉素 (Epothilone)類、雷公藤系列化合物、抗生素、激素、抗體治癌藥 物、環(huán)孢霉素、他克莫司及同系物(FK506)、脫精胍菌素 (15-deoxyspergualin )、霉酚酸脂(MMF )、雷帕霉素(Rapamycin) 及其衍生物、FR 900520 、 FR 900523 、 NK 86-1086、戊酰胺 (depsidomycin)、 康樂霉素C ( kanglemycin C )、 斯博格埃林 (spergualin )、靈菌紅素25c(prodigiosin25-c)、曲尼斯特(tranilast)、 多球殼菌素(myriocin)、 FR 651814、 SDZ214-104、環(huán)孢霉素C、 布雷青霉素(bredinin)、麥考酚酸、布雷菲得菌素A、 WS9482、糖 皮質(zhì)類固醇、替羅非班(tirofiban)、埃替非巴肽(eptifibatide )、紫杉 醇、放線菌素-D等中的一種或多種。
上述治療性藥物溶液的涂覆處理，其過程為以甲醇作溶劑，加
入濃度為l-15Mg/ml的上述治療性藥物的溶液對(duì)支架本體表面進(jìn)行
定向超聲噴涂，勻速旋轉(zhuǎn)支架本體，根據(jù)支架本體表面藥物含量要求
噴涂1-15次；
上述治療性藥物的涂覆處理，其過程也可為以四氫呋喃作有機(jī) 溶劑，加入濃度為l-15ng/ml的藥物，將支架本體浸泡在上述溶液中 5-10分鐘，重復(fù)浸涂4次。
上述支架本體的表面還可制成有直徑100-800nm的孔洞。 本發(fā)明所提的生物活性涂層支架的制備方法，其具有如下有益效
果
1. 在支架本體原材料的表面，即直接與人體病變組織接觸的表 面上制備有孔洞或者沒有孔洞分布。無需額外制備載藥涂層，無明顯 界面，能夠在支架本體全部或者部分表面通過靜電作用均勻包被一層
抗體；
2. 支架本體全部或者部分表面包被抗體后，支架本體上抗體包 被量穩(wěn)定性較好，經(jīng)過直接或者超聲清洗生物支架，生物支架上抗體 量均沒有損失，這預(yù)示著該抗體支架能夠耐受更長(zhǎng)時(shí)間的血液沖刷， 抗體主要是通過陽極吸附作用或者特殊的孔洞結(jié)構(gòu)結(jié)合到支架本體 表面；
3. 使用安全，滿足臨床需要?？贵w包被所使用的藥品器材都是比 較安全的醫(yī)用級(jí)藥品和器材，本身產(chǎn)品就比較安全，所使用的抗體為 治療性抗體，能夠直接作用于人體；
4. 工業(yè)實(shí)用性強(qiáng)。該種抗體包被方式能夠進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)化 生產(chǎn)，且操作簡(jiǎn)單，成本較低。


圖1為本發(fā)明支架本體的掃描電鏡圖。
圖2為本發(fā)明表面帶有納米孔的支架本體表面的掃描電鏡圖。 圖3為本發(fā)明表面帶有納米孔的支架本體上的抗體分布掃描電
鏡圖。
圖4為陽極極化涂覆過程示意圖中1、操控電腦2、陽極極化儀3、儲(chǔ)液容器4、電極。 圖5為實(shí)施例1的單克隆抗體CD34涂層生物支架吸附抗原細(xì)胞
KG-la后在熒光顯微鏡下的圖片。
圖6為直接采用碳酸鈉緩沖液涂覆的單克隆抗體CD34涂層生物
支架吸附抗原細(xì)胞KG-la后在熒光顯微鏡下的圖片。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例進(jìn) 一 步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明 的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步 驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
圖l所示的支架本體是醫(yī)用316L不銹鋼，也可以為鈷絡(luò)合金、 鎂合金、Ni-Ti合金或其它醫(yī)用金屬材料。通過激光雕刻或機(jī)械加工 而成的，除可制成血管支架外，還可制成骨縫合線、骨釘、骨連接件， 脊推骨盤、縫合用錨、止血鉗、止血螺絲、止血板、止血夾，以及組 織粘合劑、密封劑、人造骨等醫(yī)療設(shè)備。
圖2所示的表面帶有納米孔的支架本體是醫(yī)用316L不銹鋼合金， 也可以為鈷絡(luò)合金、鎂合金、Ni-Ti合金或其它醫(yī)用金屬材料。經(jīng)拋 光后，用激光雕刻成血管支架；支架表面通過化學(xué)或物理方法，如腐 蝕、陽極氧化、微弧氧化、微弧氣化等方法或這些方法的結(jié)合，在器 械本體原材料的局部表面直接制備形成孔洞，孔洞可以是載藥槽或孔
結(jié)構(gòu)，孔洞的直徑為100-800nm。
實(shí)施例l單克隆抗體CD34涂層生物支架的制備
選用316L不銹鋼合金或者鈷絡(luò)合金材質(zhì)經(jīng)拋光后，用激光雕刻 成血管支架，按照如下步驟制得單克隆抗體CD34涂層生物支架
1、支架本體表面的清洗
(1)砂帶打磨支架本體表面，機(jī)械去除表面的氧化物，調(diào)整表
面粗糙度；
(2) 利用超聲波，依次用75%的醫(yī)用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去離子水清洗，超聲波頻率為100KHz，清洗時(shí)間為10min;
(3) 將支架本體放入30 g/L、 80 'C的氫氧化鈉溶液中浸泡10 min,去除油脂和氧化皮；
(4) 將清洗后的支架本體放置在真空干燥機(jī)中，溫度設(shè)定在40 °C,干燥45min后取出。
2、 支架本體表面的防腐處理采用交流電氧化，在兩電極上安 裝完全相同的圖l所示的支架或者圖2所示的支架，陽極氧化處理用 槽液成份為高錳酸鉀18g/L、磷酸三鈉55g/L、氟化鉀40 g/L、氫 氧化鉀165g/L、氫氧化鋁65g/L;在60。C,氧化50min,電流密度為 10A/dm2，交流電壓為90V，支架本體表面即可生成氧化膜。
3、 支架本體表面單克隆抗體CD34溶液的涂覆處理
(1) 支架本體的預(yù)處理用四氫呋喃超聲清洗，超聲波頻率為 lOOKHz，清洗時(shí)間為10min;使用去離子水清洗三次；
(2) 抗體涂覆液的配制以濃度為0.05mo1/1、 pH值為9.6的碳 酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入濃度為0.1mg/ml單克隆抗體(CD34)溶 液；
(3) 陽極極化涂覆如圖4所示，將支架本體串聯(lián)到陽極極化儀 的陽極[4]上，將配制好的抗體溶液注入陽極極化的抗體儲(chǔ)存容器[3 ] 中，調(diào)節(jié)陽極電壓為2.5v,進(jìn)行極化，極化時(shí)間為30min，通電后抗 體離子向陽極支架處移動(dòng)，在陰陽相吸作用下，克服支架表面的液面 張力，使單克隆抗體與支架表面牢固均勻的結(jié)合。并在支架表面形成 一層均勻的抗體涂層，抗體的量為支架重量的1/103;
(4) 、生物支架干燥將支架自然稍晾干后，冰箱中預(yù)冷凍后放 入真空冷凍干燥機(jī)中干燥4 h。
實(shí)施例2具有納米孔的單克隆抗體CD34涂層生物支架的制備
選用316L不銹鋼合金或者鈷絡(luò)合金材質(zhì)經(jīng)拋光后，用激光雕刻 成血管支架；支架表面通過化學(xué)或物理方法，如腐蝕、陽極氧化、微 弧氧化、微弧氮化等方法或這些方法的結(jié)合在器械本體原材料的局部 表面直接制備形成孔洞，孔洞可以是載藥槽或孔結(jié)構(gòu)，孔洞的直徑為
200-300nm。按照如下步驟制得單克隆抗體CD34涂層生物支架
1、 支架本體表面的清洗
(1) 砂帶打磨支架本體表面，機(jī)械去除表面的氧化物，調(diào)整表 面粗糙度；
(2) 利用超聲波，依次用75%的醫(yī)用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去離子水清洗，超聲波頻率為lOOKHz，清洗時(shí)間為10min;
(3) 將支架本體放入30g/L、80 "C氫氧化鈉溶液中浸泡10min, 去除油脂和氧化皮；
(4) 將清洗后的支架本體放置在真空干燥機(jī)中，溫度設(shè)定在40 'C，干燥45min后取出。
2、 支架本體表面的防腐處理采用交流電氧化，在兩電極上安 裝完全相同的圖l所示的支架或者圖2所示的支架，陽極氧化處理用 槽液成份為高錳酸鉀15g/L、磷酸三鈉15g/L、氟化鉀25 g/L、氫 氧化鉀65g/L、氫氧化鋁15g/L;在25。C,氧化10min，電流密度為 0.1A/dm2，交流電壓為50V，支架本體表面即可生成氧化膜。
3、 支架本體表面單克隆抗體CD34溶液的涂覆處理
(1) 支架本體的預(yù)處理用四氫呋喃超聲清洗，超聲波頻率為 lOOKHz,清洗時(shí)間為10min;使用去離子水清洗三次；
(2) 抗體涂覆液的配制以濃度為0.05mo1/1、 pH值為9.6的碳 酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入濃度為0.1mg/ml單克隆抗體CD34溶液；
(3) 陽極極化涂覆如圖4所示，將支架本體串聯(lián)到陽極極化儀
中，調(diào)節(jié)陽極電壓為2.5v，進(jìn)行極化，極化時(shí)間為30min，通電后抗
體離子向陽極支架處移動(dòng)，在陰陽相吸作用下，克服支架表面的液面 張力，使單克隆抗體(CD34)與支架表面牢固均勻的結(jié)合。并在支
架表面形成一層均勻的抗體涂層，抗體的量為支架重量的1/103;
(4)、生物支架干燥將支架自然稍晾干后，冰箱中預(yù)冷凍后放 入真空冷凍干燥機(jī)中干燥4h。
實(shí)施例3具有納米孔的抗體藥物聯(lián)合涂層生物支架的制備
選用316L不銹鋼合金或者鈷絡(luò)合金材質(zhì)經(jīng)拋光后，用激光雕刻 成血管支架；支架表面通過化學(xué)或物理方法，如腐蝕、陽極氧化、微 弧氧化、微弧氮化等方法或這些方法的結(jié)合在器械本體原材料的局部 表面直接制備形成孔洞，孔洞可以是載藥槽或孔結(jié)構(gòu)，孔洞的直徑為 200-300 nm。按照如下步驟制得單克隆抗體CD34涂層生物支架
1、 支架本體表面的清洗
(1) 砂帶打磨支架本體表面，機(jī)械去除表面的氧化物，調(diào)整表 面粗糙度；
(2) 利用超聲波，依次用75%的醫(yī)用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去離子水清洗，超聲波頻率為100KHz,清洗時(shí)間為10min;
(3) 將支架本體放入30g/L、80 'C氫氧化鈉溶液中浸泡10min，
去除油脂和氧化皮；
(4) 將清洗后的支架本體放置在真空干燥機(jī)中，溫度設(shè)定在40 °C，干燥45min后取出。
2、 支架本體表面的防腐處理釆用交流電氧化，在兩電極上安 裝完全相同的圖l所示的支架或者圖2所示的支架，陽極氧化處理用 槽液成份為高錳酸鉀15g/L、磷酸三鈉15g/L、氟化鉀25 g/L、氫 氧化鉀65g/L、氫氧化鋁15g/L;在25。C,氧化10min,電流密度為 0.1A/dm2,交流電壓為50V，支架本體表面即可生成氧化膜。
3、 治療性藥物溶液的涂覆處理以四氫呋喃作溶劑，加入濃度 為15pg/ml的雷帕霉素對(duì)支架表面進(jìn)行定向超聲噴涂，勻速旋轉(zhuǎn)支，
噴涂4次，使支架表面藥物含量達(dá)到支架重量的1/102。 4、支架本體表面單克隆抗體CD34溶液的涂覆處理
(1) 、支架本體的預(yù)處理用四氫呋喃超聲清洗，超聲波頻率為 100KHz,清洗時(shí)間為10min;使用去離子水清洗三次；
(2) 、抗體涂覆液的配制以濃度為0.05mo1/1、 pH值為9.6的碳 酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入濃度為0.1mg/ml單克隆抗體CD34溶液；
(3) 陽極極化涂覆如圖4所示，將支架本體串聯(lián)到陽極極化儀 的陽極[4]上，將配制好的抗體溶液注入陽極極化的抗體儲(chǔ)存容器[3] 中，調(diào)節(jié)陽極電壓為2.5v，極化時(shí)間為30min，通電后抗體離子向陽 極支架處移動(dòng)，在陰陽相吸作用下，克服支架表面的液面張力，使單 克隆抗體與支架表面牢固均勻的結(jié)合。并在支架表面形成一層均勻的 抗體涂層，抗體的量為支架重量的1/103;
(4) 、生物支架干燥將支架自然稍晾干后，冰箱中預(yù)冷凍后放 入真空冷凍干燥機(jī)中干燥4 h。
實(shí)驗(yàn)例l靜電包被效果前后抗體支架捕獲細(xì)胞效果對(duì)比
1、 試驗(yàn)材料
KG-la細(xì)胞，DAPI活細(xì)胞核染色劑，316L不銹鋼支架。 直接釆用濃度為0.05mo1/1、 pH值為9.6的碳酸鹽緩沖溶液為溶 劑，加入濃度為0.1mg/ml單克隆抗體(CD34)溶液，浸涂316L不銹
鋼支架制得抗體涂層生物支架1 ,
以濃度為0.05mo1/1、 pH值為9.6的碳酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入 濃度為0.1mg/ml單克隆抗體(CD34)溶液，按照實(shí)施例l的方法制得 抗體涂層生物支架2。
2、 試驗(yàn)?zāi)康?br> 比較靜電包被效果前后抗體支架的捕獲細(xì)胞效果
3、 試驗(yàn)方法
將一定量的DAPI活細(xì)胞核染色劑加入到KG-la細(xì)胞培養(yǎng)液中，培
養(yǎng)一個(gè)小時(shí)后離心除去培養(yǎng)液中的未結(jié)合的染色劑后，稀釋細(xì)胞濃度
為106個(gè)/1111,分別向上述生物支架l和生物支架2中加入lml的細(xì)胞液。 培養(yǎng)l小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察支架上吸附的細(xì)胞情況。結(jié)果如圖7 圖8所示。
4、 試驗(yàn)結(jié)果
由圖5 (靜電包被的抗體生物支架)和圖6 (直接釆用碳酸鈉緩沖 液包被的抗體生物支架)可見，經(jīng)過靜電包被后的抗體支架吸附大量 的該抗體的抗原細(xì)胞，而未經(jīng)過靜電包被的抗體支架只吸附少量的抗 原細(xì)胞KG-la。
5、 試驗(yàn)結(jié)論
通過靜電包被的支架能夠包被上大量的具有生物活性功能的抗 體，而且分布均勻。
權(quán)利要求
1、一種生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的制備方法，其特征在于，采用陽極極化的方法，以支架本體為陽極，將其與陰極一起插入生物活性蛋白或多肽溶液中，在電源電場(chǎng)力的作用下，生物活性蛋白或多肽電離而帶負(fù)電，向支架陽極移動(dòng)，均勻地涂覆在支架的表面。
2、 如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于，所述支架本體表面制成有直徑100-800nm的孔洞。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，用陽極極化 方法涂覆生物支架，包括如下步驟(1) 支架本體的預(yù)處理用四氫呋喃、丙酮、乙醇或甲醇超聲 清洗，然后再用去離子水進(jìn)行清洗；(2) 生物活性蛋白或多肽涂覆液的配制以蒸餾水、生理鹽水、 硼酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液、濃度為1%-20% 的乙醇溶液或磷酸鹽緩沖溶液為溶劑，加入濃度為 0.001 mg/ml-1 mg/ml的生物活性蛋白或多肽溶液；(3) 涂覆液的涂覆釆用陽極極化包被的方式涂覆生物支架， 以支架本體為陽極，在直流電源下，控制電壓在0.1V以上，生物活性 蛋白或多肽電離帶負(fù)電，向陽極移動(dòng)，涂覆時(shí)間為l-100min，涂覆量 為支架重量的1/102-1/106。
4、 如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在陽極極 化的涂覆處理前，先對(duì)支架本體進(jìn)行表面清洗和防腐處理；陽極極化 涂覆處理后的生物支架自然晾干，經(jīng)預(yù)冷凍后，放入真空冷凍干燥機(jī) 干燥。
5、 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述支架本體的 表面清洗過程為(1)用砂帶打磨支架本體表面，用于去除表面的氧化物，調(diào)整 表面粗糙度；(2) 利用超聲波，依次用75%的醫(yī)用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去離子水清洗，超聲波頻率為28-100 KHz，清洗時(shí)間為5-15 min;(3) 將支架本體放入15-60 g/L、 70-10(TC的氫氧化鈉溶液中浸 泡5-10min,用于去除油脂和氧化皮；(4) 將清洗后的支架本體放置在真空干燥機(jī)中，溫度設(shè)定在 30-40°C,干燥30-60 min后取出。
6、 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述支架本體 的防腐處理釆用化學(xué)氧化處理或陽極氧化處理的方法進(jìn)行。
7、 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述化學(xué)氧化 處理的過程為將支架本體浸入含重鉻酸鉀15-20 g/L、硝酸15-25 g/L、氯化鈉0.75-1.25 g/L的混合溶液中，在70-80。C下，氧化 0.5-2.0min;所述陽極氧化處理的過程為釆用交流電氧化，在兩電 極上分別安裝完全相同的支架本體，陽極氧化處理用槽液為高錳酸鉀 15-20 g/L、磷酸三鈉15-55 g/L、氟化鉀25-55 g/L、氫氧化鉀65-165 g/L、氫氧化鋁15-65 g/L的混合液，在20-60。C下,電流密度為0.1-10 A/dm2，交流電壓為50-90 V下，氧化10-50 min。
8、 如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述的支 架本體的材質(zhì)為不銹鋼、鈷鉻合金、鎂合金、Ni-Ti合金或其它醫(yī)用 金屬材料；所述的支架本體為冠脈血管支架、頸動(dòng)脈血管支架、外周血管支 架、腎動(dòng)脈血管支架、顱內(nèi)動(dòng)脈血管支架、移植片固定膜、移植片固 定膜移植物、合成的人造血管、心臟瓣膜、血管修補(bǔ)篩、起搏器、起 搏器導(dǎo)子、除纖顫器、PFO隔膜封閉裝置、血管夾、動(dòng)脈血管瘤閉鎖 器、血液透析移植物、血液透析導(dǎo)管、房室吻合分流、大動(dòng)脈血管瘤 移植物裝置、靜脈瓣、血管接合夾、留置式動(dòng)脈導(dǎo)管或血管護(hù)鞘或藥 物輸送口；所述生物活性蛋白或多肽為阿昔單抗、 一氧化氮合酶、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3、 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子7、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8、成纖維細(xì)胞 生長(zhǎng)因子9、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板誘導(dǎo)性因子、轉(zhuǎn)化生 長(zhǎng)因子P1、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、骨粘連蛋白、促血管生成素 1、促血管生成素2、胰島素樣生長(zhǎng)因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激 因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子AA、血小板衍生生長(zhǎng)因子BB、血小板 衍生生長(zhǎng)因子AB、內(nèi)皮細(xì)胞PAS蛋白1、血小板反應(yīng)蛋白、增殖蛋 白、肝配蛋白-Al、 E-選擇蛋白、肥胖蛋白、白介素8、甲狀腺素、 神經(jīng)鞘氨醇l-磷酸酯、角蛋白8、尿激酶前體、反義寡核核苷酸、抗 CD2白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD3白細(xì)胞分化抗原抗體及 其片段、抗CD4白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD8白細(xì)胞分化 抗原抗體及其片段、抗CD3R白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD 1 a 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDlb白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD5白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD6白細(xì)胞分化抗原 抗體及其片段、抗CD7白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD9白細(xì) 胞分化抗原抗體及其片段、抗CDIO白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CDlla白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD18白細(xì)胞分化抗原抗 體及其片段、抗CD19白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD20白細(xì) 胞分化抗原抗體及其片段、抗CD21白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD22白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD23白細(xì)胞分化抗原抗 體及其片段、抗CD24白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD37白細(xì) 胞分化抗原抗體及其片段、抗CD33白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD34白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD35白細(xì)胞分化抗原抗 體及其片段、抗CD64白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD65白細(xì) 胞分化抗原抗體及其片段、抗CDw65白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD66b白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD66e白細(xì)胞分化抗原 抗體及其片段、抗CD31白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD133 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD89白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CDw90白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD56白細(xì)胞分化 抗原抗體及其片段、抗CD57白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD94 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD40白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD72白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD77白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CD16白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD32 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD63白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CD36白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD41白細(xì)胞分化抗 原抗體及其片段、抗CD42a白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD42b 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CDllb白細(xì)胞分化抗原抗體及其 片段、抗CDllc白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD29白細(xì)胞分化 抗原抗體及其片段、抗CD44白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD48 白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD49a白細(xì)胞分化抗原抗體及其 片段、抗CD49b白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD49c白細(xì)胞分 化抗原抗體及其片段、抗CD49e白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD49f白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD50白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD51白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD54白細(xì)胞 分化抗原抗體及其片段、抗CD58白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD61白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD62E白細(xì)胞分化抗原抗體 及其片段、抗CD62L白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD62p白細(xì) 胞分化抗原抗體及其片段、抗CD103白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、 抗CD105白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD26白細(xì)胞分化抗原 抗體及其片段、抗CD71白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD95白 細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD122白細(xì)胞分化抗原抗體及其片 段、抗CDwl24白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗CD126白細(xì)胞分 化抗原抗體及其片段、抗CD127白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗 CD117白細(xì)胞分化抗原抗體及其片段、抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子1抗體及其片段、抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子2抗體及其片段、抗CD146抗體及其 片段、抗干細(xì)胞抗原抗體及其片段、抗干細(xì)胞因子l抗體及其片段、 抗酪氨酸激酶Tie-2抗體及其片段和抗HAD-DR細(xì)胞表面抗原抗體及 其抗體片段中的一種或多種。
9、 如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在支架本體表面涂覆抗體前，先涂覆治療性藥物，并且所涂覆的治療性藥物與抗 體的比例為IO : 1-100:1。
10、 如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述治療性藥 物為肝素、阿司匹林、水蛭素、秋水仙堿、抗血小板GPIIb/IIIa受體拮 抗劑、白甲氨蝶呤、嘌呤類、嘧啶類、植物堿類、埃坡破霉素類、雷 公藤系列化合物、抗生素、激素、抗體治癌藥物、環(huán)孢霉素、他克莫 司及同系物、脫精胍菌素、霉酚酸脂、雷帕霉素及其衍生物、FR 900520、 FR 900523、 NK 86-1086、戊酰胺、康樂霉素C、 斯博格 埃林、靈菌紅素25c、曲尼斯特、多球殼菌素、FR651814、SDZ214-104、 環(huán)孢霉素C、布雷青霉素、麥考酚酸、布雷菲得菌素A、 WS9482、糖 皮質(zhì)類固醇、替羅非班、埃替非巴肽、紫杉醇、放線菌素-D中的一種 或多種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物活性蛋白或多肽涂層生物支架的制備方法，其采用陽極極化的方法，以支架本體為陽極，將其與陰極一起插入生物活性蛋白或多肽溶液中，在電源電場(chǎng)力的作用下，生物活性蛋白或多肽電離而帶負(fù)電，向支架陽極移動(dòng)，均勻地涂覆在支架的表面。本發(fā)明所提供的制備方法，無需額外制備載藥涂層，無明顯界面，能夠在支架本體全部或者部分表面通過陽極極化作用均勻包被一層生物活性蛋白或多肽，生物活性蛋白或多肽包被量穩(wěn)定性好，不易洗脫，并且使用安全，適于工業(yè)上大規(guī)模的生產(chǎn)，操作簡(jiǎn)單，成本低。
文檔編號(hào)A61L29/02GK101391115SQ200810226299
公開日2009年3月25日 申請(qǐng)日期2008年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月12日
發(fā)明者余占江, 張正才, 蒲忠杰, 陳永強(qiáng) 申請(qǐng)人:樂普(北京)醫(yī)療器械股份有限公司