專利名稱：從中藥決明子中提取的化合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明為植物化學領域，具體屬于中藥有效成分的提取、分離與制備工藝領域，尤其涉及從中藥決明子中提取分離具有藥理活性的化合物及其方法。

背景技術：
決明子(Semen Cassiae)為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥成熟種子。決明子的化學成分主要為蒽醌類成分，另外還有苯并吡喃酮類、甾醇類、脂肪酸類等其它成分。現(xiàn)代藥理學研究表明，決明子有降血壓，降血脂，保肝及抑菌等活性，被廣泛應用。另外，決明子又是可以作為藥食兩用的中藥，是保健食品領域的良好原料。目前，對中藥決明子的化學成分研究還不夠深入，需要進一步挖掘其有效成分，明確其藥理活性與有效成分的關系。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是從中藥決明子中提取分離具有藥理活性的不同于現(xiàn)有技術的化合物，提取分離得2個新的化合物為 1-hydroxyl-2-acetyl-3，8-dimethoxy-6-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-naphthalene(新的萘類化合物，化合物I)和 1-demethylaurantio-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside(新的蒽醌類化合物，化合物II)。
中藥決明子的具體提取分離步驟是 決明子干燥種子20kg，粉碎后用生藥10倍量的95％酒精滲漉提取，減壓濃縮至無醇味，加入適量水分散，依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚萃取物100g，氯仿萃取物150g，n-BuOH萃取物200g以及剩余的水部分。n-BuOH萃取物，經(jīng)硅膠(100-200目)柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，每500ml收集一流份，回收溶劑，其中第88-90流份，過濾出不溶于甲醇的部分，干燥后的粉末為化合物II，其中第109-113流份合并后，經(jīng)硅膠(100-200目)柱色譜分離，乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)洗脫，每100ml收集一份流份，得到74流分，其中第22-33流份合并，均經(jīng)聚酰胺(100-200目)柱色譜分離，甲醇洗脫，析出的結晶用甲醇洗滌，得化合物I。提取分離過程如附圖1所示。
本發(fā)明化合物I為淺黃色結晶(甲醇)，UVλmaxMeOHnm232，275，310和392，是萘類化合物的特征吸收。薄層板噴以5％KOH，顯紅色。Molish反應為陽性。HRESI-MS(m/z)給出準分子離子峰為579.1684，計算值(C25H32O14+Na)579.1679，所以確定其分子式為C25H32O14。
1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)見下表1 表1化合物I NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6，TMS，δppm)
通過1H-NMR，13C-NMR和二維譜確定化合物結構為 1-hydroxyl-2-acetyl-3，8-dimethoxy-6-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-naphthalene。

化合物I 本發(fā)明化合物II為橘紅色粉末，UVλmaxMeOHnm218，254，278，314和438，是蒽醌類化合物的特征吸收。薄層板噴以5％KOH，顯紅色。Molish反應為陽性。HRESI-MS(m/z)給出準分子離子峰為501.1003，計算值(C25H32O14+Na)501.1024，所以確定其分子式為C25H32O14。
1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)見下表2。
表2化合物II NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6，TMS，δppm)
通過1H-NMR，13C-NMR和二維譜確定化合物結構為 1-demethylaurantio-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside。

化合物II 本發(fā)明的目的另一個目的，化合物I與化合物II在制備具有藥理活性藥物方面的用途。研究表明化合物I具有對抗小鼠四氯化碳致肝損傷的作用，提示具有保肝活性，化合物II具有清除DPPH自由基的功效，并且其活性明顯強于維生素C(Vitamin C，VC)(P＜0.01)，提示化合物II具有抗氧化方面的活性。

具體實施例方式 實施例1化合物I和II的提取分離方法 決明子干燥種子20kg，粉碎后用生藥10倍量的95％酒精滲漉提取，減壓濃縮至無醇味，加入適量水分散，依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚萃取物100g，氯仿萃取物150g，n-BuOH萃取物200g以及剩余的水部分。n-BuOH萃取物，經(jīng)硅膠(100-200目)柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，每500ml收集一流份，回收溶劑，其中第88-90流份，過濾出不溶于甲醇的部分，干燥后的粉末為化合物II，其中第109-113流份合并后，經(jīng)硅膠(100-200目)柱色譜分離，乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)洗脫，每100ml收集一份流份，得到74流分，其中第22-33流份合并，均經(jīng)聚酰胺(100-200目)柱色譜分離，甲醇洗脫，析出的結晶用甲醇洗滌，得化合物I。
實施例2萘類化合物I在保肝方面的活性 1實驗材料 1.1樣品及試劑 四氯化碳由北京化學試劑廠提供。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒由南京建成生物研究所提供。陽性對照藥聯(lián)苯雙酯，德州德藥制藥有限公司，批號040410。測試樣品上述分離得到的萘類化合物I1-hydroxyl-2-acetyl-3，8-dimethoxy-6-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-naphthalene。
1.2動物 昆明種小鼠，雄性，體重18～22g，由中國中醫(yī)科學院實驗動物中心提供。
1.3儀器 752紫外光柵分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；LDZ5-2型離心機，北京醫(yī)用離心機廠；DKB-8A型電熱恒溫水槽，上海精宏實驗設備有限公司。
2實驗內(nèi)容 取昆明種小鼠90只，隨機分為9組，每組10只。分組及灌胃給藥劑量見表3，每日給藥1次，連續(xù)15d。末次給藥后10h，除空白對照組外，其余各組腹腔注射0.15％四氯化碳油溶液10ml/kg，禁食、自由飲水。注射四氯化碳16h后，小鼠眼眶靜脈叢取血，2500r/min離心10min，分離血清，于505nm測定小鼠血清ALT、AST的含量。
3實驗結果 大、中、小3個劑量組均能顯著降低四氯化碳致急性肝損傷小鼠血清ALT和AST的含量，與模型組比較有顯著性差異，(P＜0.05或P＜0.01)。結果見表3。
表3化合物I對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用(

，n＝5)
注與模型組比較，*P＜0.05或**P＜0.01 以上結果說明化合物I在大中小3個劑量下對四氯化碳致小鼠急性肝損傷具有明顯的保護作用。
實施例3蒽醌類化合物II在抗氧化方面的活性 1實驗材料 1.1樣品及試劑 DPPH(1，1-二苯基-2-苦肼基自由基)，Sigma公司產(chǎn)品。陽性對照藥維生素C，Sigma公司。測試樣品上述分離得到的蒽醌類化合物II即1-demethylaurantio-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside 1.2儀器 UV-T6新世紀紫外分光光度器，KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，Sartorius萬分之一電子天平。
2實驗內(nèi)容 2.1清除DPPH自由基的檢測方法 分別精密稱定2.1mgVC，2.4mg化合物II，分別溶于10mL量瓶中用乙醇配制成濃度分別為0.21mg/mL，0.24mg/mL，再把以上待測液按2倍、6倍、18倍、54倍、162倍稀釋成系列濃度備用。精密稱取8.4mgDPPH，配制成0.084mg/mL(2.1×10-4mol/L)備用。
分別精密吸取各待測液2ml，加入2mL的DPPH溶液(0.084mg/mL)，搖勻后放置30min，以溶劑為空白對照，測定517nm處的Abs值A1；同時測定上述待測液2mL與2mL空白溶劑混合后517nm的Abs值記為A2；再測定2mLDPPH溶液與2mL空白溶劑混合后517nm的Abs值記為A3；將三值根據(jù)下式計算對DPPH自由基的清除率。
清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％。
3實驗結果 表4化合物II和VC對DPPH自由基的清除率(

n＝5)
注**表示P＜0.01 以上結果表明化合物II具有清除DPPH自由基的功效，并且其活性明顯強于VC(P＜0.01)，提示化合物II具有抗氧化方面的活性。



圖1是決明子藥材提取分離流程圖。
權利要求
1.一種新的萘類化合物，其特征在于具有以下化合物I的結構
化合物I。
2.如權利要求1所述的化合物在制備抗臟器損傷藥物中的用途。
3.如權利要求2所述的用途，其特征在于在制備抗肝臟損傷藥物中的用途。
4.如權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于
A.將決明子干燥種子用5-10倍量的50％-95％乙醇滲漉，減壓濃縮，加入適量水分散；
B.將水分散體依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚萃取物、氯仿萃取物、n-BuOH萃取物、以及水部分；
C.將n-BuOH萃取物，經(jīng)柱色譜分離，低極性有機溶劑梯度洗脫，每500ml收集一份流份，其中第88-90流份，過濾出不溶于甲醇的部分，干燥后的粉末為化合物II；
D.第109-113流分合并，經(jīng)柱色譜分離，乙酸乙酯-甲醇-水洗脫，每100ml收集一份流份，得到74流分，其中第22-33流分分別合并，均經(jīng)柱色譜分離，甲醇洗脫，析出的結晶用甲醇洗滌，得化合物I。
5.一種新的蒽醌類化合物，其特征在于具有以下化合物II的結構
化合物II。
6.如權利要求5所述化合物的用途，其特征在于制備具有抗氧化作用藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了來自中藥決明子的2個新化合物的結構，它們分別為1-hydroxyl-2-acetyl-3，8-dimethoxy-6-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)β-D-glucopyranosyl]-naphthalene(I)，1-demethylaurantio-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside(II)，同時本發(fā)明還公開了這2個新化合物的提取分離方法，以及其衍生物在制備抗氧化及保肝活性藥物中的應用。
文檔編號A61P1/16GK101735289SQ20081022686
公開日2010年6月16日 申請日期2008年11月19日 優(yōu)先權日2008年11月19日
發(fā)明者王祝舉, 唐力英, 吳宏偉 申請人:中國中醫(yī)科學院中藥研究所