專利名稱：：注射用紫杉醇凍干微乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說涉及含有紫杉醇的注射用凍干微乳劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：紫杉醇是一種新的、獨(dú)特的抗微管藥物，被美國(guó)新化合物實(shí)體(NCE)稱為近20年來極偉大的發(fā)現(xiàn)之一，它具有獨(dú)特的微管穩(wěn)定作用，是目前一類臨床上用于治療晚期卵巢癌、乳腺癌的最好藥物之一，另外還發(fā)現(xiàn)它們對(duì)非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、頭頸部腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等也具有良好的療效。由于紫杉醇類物質(zhì)的水溶性極差，目前臨床使用的紫杉醇制劑是用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophoi^EL)與無水乙醇1:1混合制成的油劑，注射給藥前用生理鹽水或5%葡萄糖溶液稀釋到給藥濃度。由于聚氧乙烯蓖麻油在體內(nèi)能夠引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，給藥前需用抗過敏藥物對(duì)病人進(jìn)行預(yù)處理，整個(gè)過程非常不便，需謹(jǐn)慎監(jiān)測(cè)用藥過程，給患者帶來了極大的痛苦。為避免因CremophoWEL及紫杉醇自身帶來的不良反應(yīng)，提高紫杉醇的抗腫瘤作用，近年來，國(guó)內(nèi)外藥學(xué)工作者致力于紫杉醇新的給藥系統(tǒng)研究，其中最成功的是將其制備成脂質(zhì)體，但是在一周的貯存期內(nèi)即能出現(xiàn)藥物沉淀，該脂質(zhì)體的粒徑范圍在4.5-5um之間，同時(shí)存在大于30"m的粒子，在注射后通過毛細(xì)血管時(shí)可能引起栓塞，臨床應(yīng)用具有一定的危險(xiǎn)性；專利200410068134.3和03134714.2公開了紫杉醇乳劑，是將紫杉醇與注射用油，注射用乳化劑和注射用水混合制成脂肪乳劑，這種乳劑，可以克服現(xiàn)有注射液的一些缺陷，并可補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，但仍然存在載藥量低，貯存時(shí)間短，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，并且平均粒徑均在500nm左右，不具備良好的器官靶向性；專利99800022.1公開了紫杉醇與非水溶性衍生物——聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯的組合物，雖然在一定程度上提高了紫杉醇的穩(wěn)定性，使其在該載體溶液中不易降解，但是機(jī)體對(duì)該制劑的耐受性還有待進(jìn)一步研究；專利98811010.5公開了紫杉醇與環(huán)糊精的組合物，但環(huán)糊精有較大的過敏反應(yīng)和溶血現(xiàn)象，限制了紫杉醇包合物的廣泛使用。其他紫杉醇制劑的研究還包括聚合物納米粒，固體脂質(zhì)納米粒及供局部給藥的紫杉醇微球制劑和凝膠劑，但這些制劑不同程度的存在著藥物滲漏、體內(nèi)藥物的突釋行為以及聚合物的毒性問題。因此，開發(fā)方便安全的給藥系統(tǒng)成為了紫杉醇大規(guī)模應(yīng)用的關(guān)鍵。為提高紫杉醇用藥的安全性和用藥的順應(yīng)性，我們選擇微乳作為紫杉醇的載藥系統(tǒng)并進(jìn)行了全面的研究。微乳自20世紀(jì)90年代有藥用產(chǎn)品上市以來，已有了較大的進(jìn)展。作為藥物的膠體性載體，其主要優(yōu)點(diǎn)是毒性小、安全性高、高壓乳勻法易于大生產(chǎn)，還可增大難溶性藥物的溶解性，提高藥物的穩(wěn)定性，也可作為緩釋給藥系統(tǒng)，具有一定的靶向作用。微乳可認(rèn)為是一種膨脹膠束體系，在其形成時(shí)，油相增溶到膠束的烴鏈核內(nèi)部，增大了內(nèi)核體積，且由于油相對(duì)藥物的溶解性較好，從而極大地提高藥物在微乳中的溶解度。此外，本發(fā)明還進(jìn)一歩采用冷凍干燥法將紫杉醇微乳制劑制成塊狀固體或固體粉末，該方法提高了微乳的穩(wěn)定性，避免藥物的滲漏，有利于制劑的貯存，運(yùn)輸和銷售。冷凍干燥過程中由于二糖的存在，有利于降低脂質(zhì)的相轉(zhuǎn)變溫度。這樣，干膜脂質(zhì)在室溫下為液晶相，避免了相分離的發(fā)生，且在復(fù)溶過程中不會(huì)發(fā)生相轉(zhuǎn)變和雙分子層的泄漏。因此，將微乳制成凍干制品，既保持了微乳的形態(tài)特征，保證藥物穩(wěn)定的包裹于微乳油相內(nèi)核中，又增加了產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性，為臨床應(yīng)用提供了可靠的保障。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于研制和向臨床提供一種供注射用的安全性高，療效顯著，性質(zhì)穩(wěn)定，毒副作用小，制備工藝簡(jiǎn)單并且適合工業(yè)化生產(chǎn)的注射用紫杉醇凍干微乳劑。采用有效劑量的紫杉醇作為藥物，并含有油相，乳化劑，助乳化劑，pH調(diào)節(jié)劑，等滲調(diào)節(jié)劑，凍干保護(hù)劑等藥用輔料，稱取處方量的乳化劑，助乳化劑和注射用油攪拌均勻后，將紫杉醇加入上述混合液中后攪拌至完全溶解，然后加入注射用水，充分?jǐn)噭?，調(diào)節(jié)pH值后即得紫杉醇微乳劑，進(jìn)一歩向其中加入凍干保護(hù)劑，經(jīng)真空冷凍干燥后，制成凍干微乳劑。使用前用生理鹽水,葡萄糖溶液或林格溶液進(jìn)行稀釋，即可迅速回復(fù)成微乳。本發(fā)明能提高或改善藥物的包封率，具有控制藥物釋放、靶向定位釋放且穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。既能克服現(xiàn)有制劑的缺陷和不足，提供一種不含聚氧乙烯蓖麻油(Cremopho^EL)，吐溫以及有機(jī)溶劑的紫杉醇類物質(zhì)制劑，又能提高紫杉醇類物質(zhì)的生物利用度、臨床上持續(xù)給藥劑量以及治療指數(shù)。本發(fā)明的另一目的是提供了紫杉醇凍干微乳劑的制備方法，該方法均采用常規(guī)的工藝設(shè)備，可工業(yè)大規(guī)模高效率生產(chǎn)。并且本制劑通過冷凍干燥以塊狀固體或固體粉末形式保存，方便了制劑的貯存，運(yùn)輸和銷售。在冷凍干燥過程中，保護(hù)劑形成一種具有極高粘度的"玻璃化"狀態(tài)，它包圍在乳滴的周圍，抑制了乳滴的運(yùn)動(dòng)和聚集。此外，微乳凍干失水過程中，保護(hù)劑二糖分子中的羥基能在失水部位與之連接，形成一種新的保護(hù)膜，使微乳在物理狀態(tài)上與有水存在時(shí)相似，從而保持了微乳的完整結(jié)構(gòu)，避免了藥物的滲漏。本發(fā)明的注射用紫杉醇凍干微乳劑，各組分按重量百分比組成為-紫杉醇0.1%2%注射用油0.5%10%乳化劑0.1%20%助乳化劑0.1%15%抗氧劑適量pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH3.08.0等滲調(diào)節(jié)劑適量?jī)龈杀Ｗo(hù)劑1.0%30%注射用水適量本發(fā)明所述的注射用油包括大豆油，紅花油，橄欖油，玉米油，沙棘油，亞麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，C6C18中等脂肪鏈長(zhǎng)度的甘油三酯類，魚油，薏仁油，月見草油，維生素E琥珀酸酯，維生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol812)，油酸乙酯，油酸，亞油酸乙酯，月桂酸異丙酯，肉豆蔻酸異丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的乳化劑包括天然大豆卵磷脂，天然蛋黃卵磷脂，天然磷脂酰膽堿或半合成磷脂酰膽堿及其衍生物，泊洛沙姆188，182,407，908,聚氧乙烯脂肪酸酯類，聚氧乙烯脂肪醇醚類，膽酸或去氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉，?；悄懰徕c，去氧?；悄懰徕c等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的輔助乳化劑包括聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS)，聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)，聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酯(Labrasol)，聚乙二醇-二硬脂ft乙醇胺(PEG-DSPE)，乙二醇單乙基醚(Transcutol)，二已基琥珀?；撬徕c(Aeroso〗OT)，JH丁醇，乙二醇，丙二醇和聚甘油酯等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的抗氧劑為亞硫酸鹽類，抗壞血酸，沒食子酸丙酯，抗壞血酸棕櫚酸酯，叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)，二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)，維生素E等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉，擰檬酸鈉，擰檬酸，磷酸，醋酸或鹽酸中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的等滲調(diào)節(jié)劑為甘油，山梨醇，甘露醇或葡萄糖中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的凍干保護(hù)劑為蔗糖，乳糖，麥芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，木糖醇，甘露醇，氨基酸等中的一種或一種以上組合物。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，可通過如下方法制備(1)按處方量稱取紫杉醇，乳化劑，輔助乳化劑和注射用油，在4080'C加熱熔融得油相；(2)稱取處方量的注射用水，加入等滲調(diào)節(jié)劑和抗氧劑，在4080。C加熱溶解得水相；(3)以上兩相在408(TC下攪拌即得到紫杉醇微乳劑或經(jīng)高壓勻質(zhì)形成納米乳，調(diào)節(jié)pH值3.08.0;(4)在制備好的紫杉醇微乳劑中加入適量保護(hù)劑，通過真空冷凍干燥方法得到固體制劑。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，粒徑在100nm以下，且分布均勻。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，破乳后測(cè)定相分布，該微乳劑共分三層，包括油層,乳化劑層和水層，其中油層中的藥物含量為90%99%,乳化劑層的藥物含量為1%10%，水層中的藥物含量低于0.01%。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍千微乳劑，其紫杉醇的包封率在85%以上，滿足臨床使用的藥物包封率要求。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑可用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液進(jìn)行稀釋，在〗00秒鐘內(nèi)即可溶解，并且粒徑和包封率沒有明顯變化。本發(fā)明所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，可被生理相容性溶液在相圖微乳區(qū)大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑在100nm以下。本發(fā)明提供一種新的注射用紫杉醇凍干微乳劑，由于選用了合適的注射用油及乳化劑等組分以及合適的制備方法，該產(chǎn)品載藥量大，包封率高；該微乳劑進(jìn)一步采用冷凍干燥法制成粉針劑，提高了制劑的穩(wěn)定性，保持了微乳的完整結(jié)構(gòu)，避免了現(xiàn)有乳劑儲(chǔ)存期短，藥物易滲漏的缺點(diǎn)；該凍干微乳劑在臨用前用生理性溶液配伍后即可迅速溶解，并且在相圖微乳區(qū)可被大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑和包封率沒有明顯變化，在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，未見藥物晶體析出；該凍干微乳劑無毒副作用，也無剌激性，極大地減少了患者輸液時(shí)的疼痛，易為患者接受；該制劑還具有一定的靶向性，提高了藥物的生物利用度和治療指數(shù)；該制劑制備工藝簡(jiǎn)單易行，適于大量制備和工業(yè)化生產(chǎn)注射用紫杉醇凍干微乳劑。圖1是凍干前后微乳形態(tài)示意圖，其中I為凍干前II為凍干后；A為親水區(qū)；B為疏水區(qū)；C為真空冷凍干燥；l為紫杉醇；2為表面活性劑；3為助表面活性劑；4為油5為水；6為凍干保護(hù)劑。圖2是實(shí)施例1凍干前后微乳的粒徑圖A凍干前B凍干后圖3是實(shí)施例2透射電鏡下觀察的凍干前及凍干后復(fù)溶的微乳形態(tài)A凍干前B凍千后圖4是實(shí)施例3配伍穩(wěn)定性粒徑圖A凍干前B凍干后圖5是反相透析法測(cè)定實(shí)施例13凍干微乳劑的體外釋放曲線圖6是自制組與參比組多劑量組織分布圖具體實(shí)施方式實(shí)施例h(1〉稱取注射用大豆油50g,大豆磷脂12g，維生素￡2.0§，紫杉醇10g置于水浴中加熱攪拌瑢融，保持溫度70。C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS')15g，Poloxamer1884.0g，山梨醇9.5g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度7(TC，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳或經(jīng)高壓750bar高壓乳勻6次形成納米乳，用0.2。/。檸檬酸調(diào)pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入15%蔗糖，在-80。C預(yù)凍8h后，真空冷凍干燥72h,即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得粒徑37.2nm，包封率為87.3%,以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出，凍干前后粒徑結(jié)果如圖2所示。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得粒徑25.6nm，包封率為85.8%。實(shí)施例2:(1)稱取中鏈油35g，蛋黃磷脂20g，紫杉醇18g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度65'C，作為油相；(2)稱取乙二醇單乙基醚(Transcutol)25g，去氧膽酸鈉3.0g，甘露醇8.5g，抗壞血酸1.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度65'C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳，用0.1mol/LNaOH調(diào)pH7.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入20%海藻糖，在-85。C預(yù)凍7h后，真空冷凍干燥64h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為90.1%，粒徑35.5nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為87.3%,粒徑37.4nm。實(shí)施例3:(1)稱取油酸乙酯45g，大豆油25g，大豆磷脂15g，紫杉醇6.0g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度75°C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)2.5g，Poloxamerl885.0g，亞硫酸鈉1.2g，甘油10.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度75。C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成微乳，用0.5mol/L磷酸調(diào)pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入12%甘露醇，在-55t:預(yù)凍12h，真空冷凍干燥80h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為89.3%,粒徑30.1nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后4811內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為87.6%，粒徑32.8nm。實(shí)施例4:(1)稱取紅花油25g，亞油酸乙酯25g，蛋黃磷脂22.5g，聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酉旨(Labrasol)8.0g，紫杉醇30g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度7(TC，作為油相；(2)稱取牛磺膽酸鈉7.5g，抗壞血酸1.Og加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度70°C，用0.lmo/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為3.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入15%蔗糖，在-65。C預(yù)凍10h后，真空冷凍干燥72h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為87.3%，粒徑38.6nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為85.1%，粒徑34.0腦。實(shí)施例5:(1)稱取月桂醇異丙酯100g，大豆磷脂42.5§，正丁醇47.58，紫杉醇65g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度65。C，作為油相；(2)稱取Poloxamerl886.0g，甘油150g，維生素E2.5g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度65t:，用2.0y。檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH為5.0;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入10%乳糖和10%海藻糖，在-70。C預(yù)凍8h后，真空冷凍干燥72h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為86.1%,粒徑54.3nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為85.7%，粒徑53.2nm。實(shí)施例6:(1)稱取米格列醇(Miglyo1812)120g，蛋黃磷脂86.5g，乙二醇43.0g，紫杉醇75g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度80°C，作為油相；(2)稱取聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)200g，Polox咖er40712.0g，山梨醇4.5g，亞硫酸鈉1.0g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度80'C，用0.5mol/L磷酸調(diào)pH為5.5;(3)在上述紫杉醇微乳劑中加入20%葡萄糖，在-55。C預(yù)凍12h后，真空冷凍千燥74h，即得注射用紫杉醇凍干微乳劑。將凍干制劑加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為92.7%，粒徑26.3nm，以5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液稀釋后48h內(nèi)無沉淀析出。將冷凍干燥的微乳劑在室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月后，加水復(fù)溶后測(cè)得包封率為90.1%,粒徑28.3nm。實(shí)施例7:紫杉醇在微乳劑中的相分布試驗(yàn)取3mL自制微乳劑加入氯化鈉使溶液飽和后，在酒精燈上直火加熱，使其破乳分層，從上到下依次為油層，乳化劑層和水層。分別取出油層和水層，按照含量測(cè)定方法進(jìn)高效液相色譜儀分析，以紫杉醇微乳的含量為參比，計(jì)算油層和水層中紫杉醇的標(biāo)示百分含量分別為95.37%和9.68X10-3%，結(jié)果表明藥物主要分布于油相中。實(shí)施例8:包封率的測(cè)定微柱離心法測(cè)定包封率將用蒸餾水平衡好的SephadexG-50裝入3mL固相萃取柱的針筒中(5.2cmX0.9cm)，底部放一略小于其內(nèi)徑的圓形篩板，離心(IOOOr*min-l)lmin，除去多余的水分，制成SephadexG-50的微型柱。取實(shí)施例16中的紫杉醇凍干微乳劑及室溫儲(chǔ)存3個(gè)月樣品，加水復(fù)溶后分別精密吸取0.2mL，緩緩加于柱頂部，1000r*min-l離心lmin。由柱頂部加入1.0mL40^乙醇溶液，1000rmin-1離心lmin，收集濾過液，再于柱頂部加入相同體積的40%乙醇溶液，重復(fù)以上操作，合并19管濾過液，加40%乙醇溶液稀釋并定容至25mL，搖勻，精密吸取20uL溶液，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算紫杉醇的含量，記為Ml;另吸取0.2mL微乳，置于25mL容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，精密吸取20nL上清液進(jìn)樣，計(jì)為MO;按下式計(jì)算包封率包封率(％)=(M17M0)X100%，Ml為微乳中所包封的紫杉醇的量；MO為微乳中紫杉醇的總量。實(shí)施例9:取實(shí)施例2中凍干前和凍干后復(fù)溶的產(chǎn)品進(jìn)行透射電鏡觀察，比較兩者在凍干前后的微觀形態(tài)變化，結(jié)果如圖3所示。可以看出，凍干后，微乳的粒徑與凍干前相比更加均勻，凍干過程中，保護(hù)劑分布于微粒內(nèi)外，從而阻止了微粒間相互聚集、融合，起到類似空間穩(wěn)定作用。因此，冷凍干燥后復(fù)溶的微乳形態(tài)依然圓整，未見藥物晶體析出，凍干前后微乳形態(tài)示意圖如圖1所示。實(shí)施例10:配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)取實(shí)施例3中紫杉醇凍干微乳劑，用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液稀釋至臨床給藥濃度，分別于Oh和放置6h后測(cè)得粒徑大小為30.1nm和31.0nm，包封率為89.3%和88.7%，粒徑如圖4所示。實(shí)施例11:取實(shí)施例13中紫杉醇凍干微乳制劑，測(cè)定其體外釋放曲線。采用反相動(dòng)態(tài)透析法，以pH7.4PBS+20。/。乙醇溶液200mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50r*min-l，溫度(37±0.5)。C。將12個(gè)大小一致，裝有2mL釋放介質(zhì)的透析袋(截留分子量1200014000)，浸入釋放介質(zhì)中，平衡12h。分別于0.25,0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0，24.0，48.0，60.0h各取出一個(gè)透析袋，吸取袋內(nèi)適量溶液，同時(shí)補(bǔ)入等量同溫釋放介質(zhì)，樣品過濾后進(jìn)樣。結(jié)果表明，在釋放條件下，前8小時(shí)釋放速度較快，隨后釋放速度減慢。結(jié)果如圖5所示。實(shí)施例12:含量測(cè)定取實(shí)施例46中的紫杉醇凍干微乳劑加水復(fù)溶后，精密量取紫杉醇微乳混懸液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，超聲后，3500r*min-l離心3min，取上清液，進(jìn)高效液相色譜儀分析，以對(duì)照溶液為外標(biāo)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算，得樣品中紫杉醇的標(biāo)示百分含量分別為98.5%，99.1%，98.0%。實(shí)施例13:刺激性試驗(yàn)注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后對(duì)兔耳緣靜脈注射10.0mg/kg的劑量，未見明顯剌激性。過敏試驗(yàn):注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后給豚鼠0.2m1/只(0.6mg/kg)皮下注射致敏，攻擊劑量為0.8ml/只(7.2mg/kg)，結(jié)果為陰性。溶血試驗(yàn)在裝有注射用紫杉醇凍干微乳劑用生理鹽水或5%葡萄糖溶液配伍稀釋后2.5mL的試管中加入濃度為2%家兔紅血球混懸液2.5mL，結(jié)果無溶血作用。實(shí)施例14:急性毒性試驗(yàn)18只SD大鼠六只一組分成三組，第一組對(duì)照組注射生理鹽水，第二組注射市售紫杉醇(Taxol)注射液，第三組注射自制的紫杉醇凍干微乳劑，給藥前，用生理鹽水將紫杉醇(Taxol)注射液和紫杉醇凍干微乳劑稀釋為濃度1.0mg/mL，尾靜脈注射給藥15mg/kg，注射15天后檢查動(dòng)物的存活率和器官重量(單位克)，結(jié)果如表1所示。市售紫杉醇注射液尾靜脈注射后立即表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)失調(diào)并對(duì)外界剌激不反應(yīng)，24小時(shí)內(nèi)全部死亡。而自制紫杉醇凍千微乳劑給藥后動(dòng)物行為正常，實(shí)驗(yàn)后的幾天，體重并未明顯下降，死亡的一只動(dòng)物在給藥后的第9天。因此，從結(jié)果中可以得出，自制組制劑靜脈注射后毒副作用明顯小于市售制劑。表1市售紫杉醇注射液與自制紫杉醇凍干微乳劑的毒性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例15:組織分布試驗(yàn)雌性荷瘤小鼠12只，隨機(jī)分成2組，分別按4mg/kg劑量尾靜脈緩慢推注自制紫杉醇凍干微乳劑和市售紫杉醇(Taxol)注射液，連續(xù)給藥6天，第6天給藥后4h乙醚麻醉，摘眼球采血，立即解剖采集心、肝、脾、肺、腎、腦、胰腺、生殖腺、股骨、胸骨、胃、小腸、大腸、平滑肌、骨骼肌、脂肪、膀胱、瘤體，勻漿后測(cè)定各組織中的藥物濃度，結(jié)果除肺部外，自制組在各個(gè)組織中的濃度普遍高于參比組，其中在腫瘤部位的藥物濃度約為市售組的2倍。自制組臟器中藥物的分布順序?yàn)楦?gt;膀胱>胸骨>胰腺>小腸>脾>腎>卵巢>心>大腸>子宮>肺>胃>骨骼肌>平滑肌>股骨>腫瘤>腦>血漿>脂肪；市售組臟器中藥物的分布順序?yàn)榉?gt;肝>小腸>胰腺>胸骨>脾>大腸>卵巢>腎>膀胱>子宮>心>骨骼肌>胃>平滑肌>脂肪>血槳>股骨>腦>腫瘤。結(jié)果見圖6所示。權(quán)利要求1.本發(fā)明的注射用紫杉醇凍干微乳劑，各組分按重量百分比組成為紫杉醇0.1％～2％注射用油0.5％～10％乳化劑0.1％～20％輔助乳化劑0.1％～15％抗氧劑適量pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH3.0～8.0等滲調(diào)節(jié)劑適量?jī)龈杀Ｗo(hù)劑1.0％～30％注射用水適量2.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在了-所述的注射用油包括大豆油，紅花油，橄欖油，玉米油，沙棘油，亞麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，C6~C18中等脂肪鏈長(zhǎng)度的甘油三酷類，魚油，薏仁油，月見草油，維生素E琥珀酸酯，維生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol812)，油酸乙酯，油酸，亞油酸乙酯，月桂酸異丙酯，肉豆蔻酸異丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一種成一種以上組合物；乳化劑包括天然火豆卵磷脂，天然蛋黃卵磷脂，天然磷脂酰膽堿或半合成磷脂酰膽堿及其衍生物，泊洛沙姆188,182,407,908，聚氧乙烯脂肪酸酯類，聚氧乙烯脂肪醇醚類，膽酸成去氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉，?；悄懰徕c，去氧牛磺膽酸鈉等中的一種或一種以上組合物；輔助乳化劑包括聚乙二醇IOOO維生素E琥珀酸酯(TPGS)，聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15),聚氧乙烯-8-辛酸/癸酸甘油酯(Labrasol),聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺(PEG-DSPE),乙二醇單乙基醚(Transcutol)，一己基琥珀?；撬徕c(AerosolOT)，正丁醇，乙二醇，丙二醇和聚甘油酯等中的一種或一種以上組合物；抗氧劑為亞硫酸鹽類，抗壞血酸，沒食子酸丙酯，抗壞血酸棕櫚酸酯，叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)，—叔丁基對(duì)甲酚(BHT)，維生素E等中的一種或一種以上組合物；pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉，檸檬酸鈉，檸檬酸，'磷酸，醋酸或鹽酸中的一種成一種以上組合物；等滲調(diào)節(jié)劑為甘油，山梨醇，甘露醇或葡萄糖中的一種成一種以上組合物；凍干保護(hù)劑包括蔗糖，乳糖，麥芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，TlC瞎醇，甘露醇，氨基酸等中的一種或一種以上組合物。3.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑的制備方法，其特征包括如下步驟(l)按處方呈稱取紫杉醇，乳化劑，輔助乳化劑和注射用油，在4080。C加熱熔融得油相；(2)稱取處方量的注射用水，加入等滲調(diào)節(jié)劑和抗氧劑，在4080。C加熱溶解得水相；(3)以上兩相在408(TC下攪拌即得到紫杉醇微乳劑或經(jīng)高壓勻質(zhì)形成納米乳，調(diào)節(jié)pH值3.08.0;(4)在制備好的紫杉醇微乳劑中加入適量保護(hù)劑，通過真空冷凍干燥方法得到固體制劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于所述的粒徑在lOOmn以下，且分布均勻。5.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于破乳后測(cè)定相分布，該微乳劑共分三層，包括油層，乳化劑層和水層，其中油層中的藥物含量為85%99%，乳化劑層的藥物含試為1%15%，水層中的藥物含量低于0.01%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于所述的紫杉醇的包封率在85%以上，滿足臨床使用的藥物包封率要求。7.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于使用前可用生理鹽水，5%葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液進(jìn)行稀釋，在100秒鐘內(nèi)即可溶解，并且粒徑和包封率沒有明顯變化。8.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于可被生理相容性溶液在相圖微乳區(qū)大體積稀釋，微乳的形態(tài)和類型保持不變，粒徑在100nm以下。9.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于與溶液配伍后，在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，未見藥物晶體析山。10.根據(jù)權(quán)利耍求1所述的注射用紫杉醇凍干微乳劑，其特征在于具有緩慢釋藥特性，可增大單次給藥劑量，減少臨床給藥次數(shù)。臨床應(yīng)用無致敏及變態(tài)反應(yīng)，無需進(jìn)行預(yù)防過敏治療，縮短治療準(zhǔn)備時(shí)間。全文摘要本發(fā)明提供了一種注射用紫杉醇的凍干微乳劑及其制備方法。采用有效劑量的紫杉醇作為藥物，并含有油相，乳化劑，助乳化劑，pH調(diào)節(jié)劑，等滲調(diào)節(jié)劑，凍干保護(hù)劑等藥用輔料，稱取處方量的乳化劑，助乳化劑和注射用油攪拌均勻后，將紫杉醇加入上述混合液中后攪拌至完全溶解，然后加入注射用水，充分?jǐn)噭颍{(diào)節(jié)pH值后即得紫杉醇微乳劑，進(jìn)一步向其加入凍干保護(hù)劑，經(jīng)真空冷凍干燥后，制成凍干微乳劑。使用前用生理鹽水，葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液進(jìn)行稀釋，即可迅速回復(fù)成微乳。本發(fā)明的特點(diǎn)是通過將紫杉醇微乳進(jìn)一步冷凍干燥的工藝，顯著提高了紫杉醇的穩(wěn)定性和療效，大大降低了毒副作用，特別值得關(guān)注的是，冷凍干燥法對(duì)微乳起到了很好的保護(hù)作用，避免了藥物的滲漏，對(duì)于建立紫杉醇微乳載藥系統(tǒng)的穩(wěn)定劑型及其長(zhǎng)期保存開辟了新的前景。本發(fā)明提供的凍干微乳劑的制備方法，制備工藝簡(jiǎn)單，不含有機(jī)溶劑，成本低廉，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。文檔編號(hào)A61P35/00GK101428002SQ20081022890公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2008年11月20日優(yōu)先權(quán)日2008年11月20日發(fā)明者丹劉,健宋,李淑斌,潔鮑申請(qǐng)人:沈陽萬愛普利德醫(yī)藥科技有限公司