專利名稱：：一種酮化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是一種富含去甲基雛菊葉龍膽酮的。山酮化合物的制備方法，以及P山酮化合物用于抗病毒的作用。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有技術(shù)中，多份文獻公開了從川東獐牙菜(5>1^//"(/^/^7]"肌(^，俗稱水黃連、魚膽草或水靈芝等)中分離得到一系列Q山酮的方法，以及所述口山酮的用途。例如，CN1650927公開的"一種含有n山酮有效成分的藥物"，可以用于制備抗菌和治療動脈粥樣硬化的藥物等。但去甲基雛菊葉龍膽酮的口山酮化合物用于抗乙肝病毒作用、保肝作用、抗皰疹病毒和流感病毒，以及抗氧化作用的研究卻未見報道。注本文中的"n山"為左右部首構(gòu)成的一個字。乙型病毒性肝炎，特別是慢性乙型肝炎(ChronicViralH印atitisB)為一種嚴重危害人類健康的常見病，已經(jīng)成為全球性重要公共衛(wèi)生問題之一，引起世界各國的關(guān)注。我國是乙型病毒性肝炎疾病高發(fā)區(qū)，平均年發(fā)病率為120-140萬，乙型肝炎病毒感染率高達57.63%，即全國至少有6億人感染過，乙型肝炎表抗原陽性率9.75%，約有l(wèi).2億人，占全球的1/3，其中約l/4將發(fā)展為慢性肝病，部分患者可發(fā)展為肝硬化，甚至演變?yōu)楦伟?。目前有癥慢性乙肝患者2000多萬人，每年有23.7萬人死于乙型肝炎相關(guān)的疾病，其中有15.6萬人死于肝癌，全球每年有100萬以上的人死于HBV感染及其相關(guān)疾病。乙型肝炎不僅嚴重危害人們的健康，而且還為國家?guī)韲乐氐纳鐣?jīng)濟負擔。據(jù)統(tǒng)計，我國每年用于治療慢性肝炎、肝硬化、肝癌的直接醫(yī)療耗費約300億元人民幣，每年因乙肝造成的直接經(jīng)濟損失達500億元。乙型肝炎已經(jīng)成為全球性的重大公共健康問題之一。一般地，乙型病毒性肝炎治療主要包括抗病毒治療、免疫調(diào)節(jié)治療和保肝抗炎治療，其中抗病毒治療是關(guān)鍵。藥物類別有化學藥物、生物藥物和中藥，從結(jié)構(gòu)方面看，也分三類大類，一類為肽類藥物，如干擾素、胸腺素；另一類為核苷類藥物，如拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋等；第三類為多糖類藥物，如豬苓多糖、紫芝多糖和靈芝多糖等。干擾素臨床療效不佳，不良反應(yīng)較多，耐受性差。核苷類藥物是近年來抗病毒藥物研究的熱點，進展很快，該類藥物在人體內(nèi)，通過磷酸化，成為三磷酸核苷類似物后，具有抗病毒作用，可以抑制病毒的DNA多聚酶和逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，并與核苷競爭性摻入病毒的DNA鏈，終止DNA鏈的延長和合成，使病毒的復(fù)制受到抑制而發(fā)揮抗病毒作用，代表藥物如拉咪呋啶，泛昔洛韋(Famciclovir)、阿地福韋(Adefovir)、恩他卡韋(Entacavir)、單磷酸阿糖腺苷(Ara-Amp)和膦甲酸鈉(phosphonoformate)等，能迅速抑制病毒復(fù)制，耐受性好。但服用時間較長，部分病例產(chǎn)生病毒變異，停藥后復(fù)發(fā)率較高。具有免疫調(diào)節(jié)作用的胸腺素和多糖類藥物缺乏針對性，療效還不夠滿意，尚有待進一步研究。自上世紀70年代之后，應(yīng)用中藥治療慢性乙肝的報道日益增多，且取得一定療效。其優(yōu)越性表現(xiàn)在能夠明顯改善患者癥狀及生活質(zhì)量，且能通過多靶點作用發(fā)揮保肝和免疫調(diào)節(jié)作用，但物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚，作用機理不明確，療效不穩(wěn)定。綜上可見，乙型肝炎治療仍缺乏理想的治療藥物，在現(xiàn)有抗病毒藥物結(jié)構(gòu)中也未見本發(fā)明涉及的口山酮類化合物。本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，為開發(fā)治療乙型肝炎藥物提供一種新的先導(dǎo)口山酮化合物及其制備方法；同時，提供口山酮化合物用于抗乙肝病毒作用和保肝作用、抗皰疹病毒和流感病毒，以及抗氧化的藥物。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種n山酮化合物，其特征在于該化合物化學名為1，3，5，8-tetrahydroxyxanthone，又名去甲基雛菊葉龍膽酮，化學結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，去甲基雛菊葉龍膽酮含量不低于90%。進一步的特征是，將該化合物用于抗乙型肝炎病毒藥物。進一步的特征是，將該化合物用于制備化學物質(zhì)引起的急性和慢性肝損傷藥物。進一步的特征是，將該化合物用于抗皰疹病毒和流感病毒藥物。進一步的特征是，將該化合物用于抗氧化藥物。一種制備權(quán)利要求l所述口山酮化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)取川東獐牙菜CSWeW/"^vWFranch)全草，在60-8(TC下烘干，粉碎成100目得到
發(fā)明內(nèi)容粉狀藥材;(2)將步驟(1)獲得的粉狀藥材按萃取壓力20-35MPa，萃取溫度30-45°C，萃取時間為60-120min，夾帶劑為體積分數(shù)為95%的乙醇，進行超臨界0)2萃取，獲得去甲基雛菊葉龍膽酮；其中，所述95%的乙醇與粉狀藥材之比為1一1.2乙lkg;(3)采用十八垸基硅垸鍵合硅膠柱，流動相甲醇-水之比為35-65:65-35，檢測波長254nm，室溫條件下對步驟(2)獲得的去甲基雛菊葉龍膽酮進行樣品制備，收集樣品溶液;(4)對步驟(3)獲得的樣品溶液進行減壓濃縮；(5)然后，對步驟(3)的減壓濃縮，在60-8(TC條件下，干燥3-5小時；(6)最后，獲得去甲基雛菊葉龍膽酮含量不低于90°/。的口山酮化合物。相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(1)本發(fā)明提供一種從傳統(tǒng)的中草藥川東獐牙菜(S，r^6to;WFranch沖，采用超臨界C02萃取和色譜技術(shù)制備獲得去甲基雛菊葉龍膽酮，化學名為l，3，5,8-tetrahydroxyxanthone。去甲基雛菊葉龍膽酮含量不低于90%。(2)采用的C02為超臨界流體技術(shù)的一種溶劑，乙醇為夾帶劑，主要起增加有效成分的溶出，使提取更完全的作用，提高提取率；采用二氧化碳作溶劑，因其臨界溫度為常溫，且無毒、無嗅、無污染、安全和價廉。本發(fā)明制備方法的超臨界C02萃取技術(shù)與傳統(tǒng)溶劑提取方法相比，具有工藝穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好的特點。(3)本發(fā)明總口山酮提取率高，效率高、生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本較低，無三廢排出。(4)本發(fā)明的化學成分去甲基雛菊葉龍膽酮，經(jīng)過理化性質(zhì)測定，紫外、紅外、質(zhì)譜和核磁共振波譜解析，最終確證其結(jié)構(gòu)；該化合物抗乙型肝炎病毒抑制作用明顯，對CC14和D-氨基半乳糖所致急性或慢性肝損傷有明顯保護作用，有望在制備具有治療乙型病毒性肝炎作用、保肝作用、抗皰疹病毒和流感病毒，以及抗氧化作用的藥物中得到應(yīng)用。具體實施例方式為表明本發(fā)明的制備法和用途，通過以下實施例對本發(fā)明進行更進一步說明。但應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實驗例只是用于說明而不是限制本發(fā)明。實施例l:一種Q山酮化合物，制備方法如下步驟l:將中草藥川東獐牙菜干燥，粉碎至100目細粉，取10kg加入萃取釜中；步驟2:按萃取壓力30MPa，萃取溫度35。C，夾帶劑為體積分數(shù)95%乙醇(用量為1.2L/kg藥材)，萃取時間90min，獲總。山酮化合物；步驟3:采用十八垸基硅垸鍵合硅膠柱，流動相甲醇-水之比為35-65:65-35，檢測波長254nm，室溫條件下，對步驟2獲得的總n山酮化合物進行樣品制備，收集樣品溶液；步驟4:對上述收集樣品溶液進行減壓濃縮；步驟5:在60-8(TC溫度條件下，對經(jīng)減壓濃縮的樣品，進行干燥3-5小時；步驟6:最后獲得不低于90%的去甲基雛菊葉龍膽酮。為表明本發(fā)明制備方法超臨界C02萃取技術(shù)優(yōu)勢，對本發(fā)明制法超臨界C02萃取技術(shù)與傳統(tǒng)溶劑提取方法進行比較，結(jié)果表明超臨界C02萃取工藝穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好，總口山酮提取率高，效率高、生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)成本低及無三廢排出，說明本發(fā)明制法優(yōu)勢十分明顯(見表l)。表1超臨界C02萃取技術(shù)與傳統(tǒng)溶劑提取方法比較總a山酮提取DB提取率溶劑用量生產(chǎn)周期成本率*(%)**(%)(L/kg藥材)(h)(元/kg)SFE提取工藝1.61040.80251.23.09.00丙酮回流1.50130.498414.040.087.36乙醇回流1.51450.513215.040.058.32*總口山酮=總口山酮質(zhì)量/藥材質(zhì)量，DB為去甲基雛菊葉龍膽酮，**DB提取率-DB質(zhì)量/藥材質(zhì)量為表明本發(fā)明的效果及用途，對本發(fā)明在治療乙型肝炎作用進行了體內(nèi)外活性評價(見表2)。表2去甲基雛菊葉龍膽祠在2.2.15細胞培養(yǎng)中對HBsAg和HBeAg表達作用HBsAgHbeAg濃度(嗎.mL-1)抑制率(％)抑制率(％)5064.269.23262.366.13.258.269.70.3254.565.720*37.935.410*30.228.3*:為拉米呋定從表2可以看出，去甲基雛菊葉龍膽酮能顯著抑制肝炎病毒HBsAg禾QHBeAg表達，在0.32-50嗎.mL-1范圍內(nèi)，對HBsAg抑制率達54.5-64.2%，HBeAg抑制率達65.7-69.2%，對照化學藥物拉米呋定10.0-20.0嗎.mL-1范圍內(nèi)，HBsAg和HBeAg抑制率達分別是30.2-37.9%和28.3-35.4%。表3去甲基雛菊葉龍膽酮對小鼠CCl4所致小鼠急性肝損傷的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與模型組比較林p〈0.01，*p〈0.05表3數(shù)據(jù)表明，去甲基雛菊葉龍膽酮對CC:U所致小鼠急性肝損傷有明顯降低ALT、AST的作用。結(jié)果提示，去甲基雛菊葉龍膽酮對CCl4所致小鼠急性肝損傷有一定保護作用。表4去甲基雛菊葉龍膽酮對D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝損傷的影響(歹±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與模型組比較林p〈0.01，*p〈0.05表4結(jié)果表明，與模型對照組比較，去.甲基雛菊葉龍膽酮對D—氨基半乳糖所致小鼠急性肝損傷有明顯降低ALT、AST的作用。結(jié)果提示，去甲基雛菊葉龍膽酮對D-氨基半乳糖小鼠所致急性肝損傷有保護作用。表5去甲基雛菊葉龍膽酮對CCl4所致大鼠慢性肝損傷的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與模型組比較林p〈0.01，*p〈0.05表5結(jié)果表明，去甲基雛菊葉龍膽酮對CCl4所致大鼠慢性肝損傷與模型組比較，血清ALT有一定的降低作用，AST有顯著降低作用P<0.05，對AKP的降低有顯著性P〈0.01-0.05。表6去甲基雛菊葉龍膽酮對CCl4所致慢性肝損傷大鼠存活率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表6結(jié)果表明，去甲基雛菊葉龍膽酮對CCl4所致大鼠慢性肝損傷對大鼠死亡只數(shù)有明顯減少作用。本發(fā)明是在申請人承擔的重慶市教委科研項目，在研究過程中，經(jīng)過反復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)所研究的傳統(tǒng)中草藥川東獐牙菜中含有的去甲基雛菊葉龍膽酮具有抑制乙型肝炎病毒和保肝作用。本發(fā)明的另一個重要用途是去甲基雛菊葉龍膽酮具有抗皰疹病毒和流感病毒作用。不同加藥方式下，去甲基雛菊葉龍膽酮與阿昔洛韋均對HSV-ISm44表現(xiàn)出綜合抑制作用并能抑制病毒吸附后的復(fù)制增殖過程，隨藥物濃度升高而增強，在濃度l.Omg.ml-i以上對HSV-I具強的直接殺傷作用，最高有效率達97.8%。在不同藥物處理時間下，去甲基雛菊葉龍膽酮及阿昔洛韋組病毒的感染性均較平行設(shè)置的病毒對照組減弱，且去甲基雛菊葉龍膽酮組的感染力較陽性藥物組更弱。去甲基雛菊葉龍膽酮對甲型人流感病毒具明顯的抑制復(fù)制增殖作用，半數(shù)有效濃度分別為0.38mg.ml-1。隨作用時間延長，低濃度抗病毒有效率呈減小趨勢，高濃度時(0.7mg.ml-1)其抗病毒能力基本不變。小鼠試驗可減少死亡率，并能延長其平均存活時間。組織病理學檢査表明10，20及30mg/kg的去甲基雛菊葉龍膽酮對小鼠肺部感染均有一定的療效，30mgkg-1的去甲基雛菊葉龍膽酮治療作用與利巴韋林15mgkg-1相似，提示去甲基雛菊葉龍膽酮體內(nèi)外抗甲型人流感病毒作用明顯。本發(fā)明的另一個重要作用是去甲基雛菊葉龍膽酮抗氧化作用。用比色法測定總抗氧化能力(TAOC)及一氧化氮(NO)，用硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)。去甲基雛菊葉龍膽酮高、中和低劑量組抗氧化能力顯著高于對照組(表7)。表7去甲基雛菊葉龍膽酮抗氧化作用(I±S)組別劑量NOMDATAG0(mg/kg)模型組—3.50±2.4545.47±5.4973.69±51.99陽性藥物組1027.27±1.0811.62±3.28211.83±43.56A1528.57±1.28*12.63±3.21**184.54±42.063035.89±1.60**12.83±2.25**235.23土51.90**6038.56±1.41**10.22±2.01**286.31±46.78**B1525.51±1.7613.41±2.24**146.23±43.573029.34±1.59*11.98±1.28**224.89±35.68**6035.78±1.81**10.76±2.41**246.71±41.11**注與模型組比較林P〈001,*P<0.05。本發(fā)明所述藥物是指用所述化合物，結(jié)合已知藥物制劑工藝及藥學水平上可接受的賦形劑或載體物質(zhì)，采用通常的粉碎、混合、溶解、制片、裝膠囊等制劑工藝生產(chǎn)制成固態(tài)或液態(tài)制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑和軟膠囊等。本發(fā)明所述的藥學上可接受的載體是指不影響各活性部分且對人體無毒副作用的藥用載體，包括所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣等這些介質(zhì)和試劑對藥學上的活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域所熟知的。本發(fā)明提供了傳統(tǒng)中藥中一種有效成分p山酮化合物制備方法，通過動物試驗表明該化合物抗乙型肝炎病毒抑制作用明顯，對CCU和D-氨基半乳糖所致急性或慢性肝損傷有明顯保護作用，同時還具有抗皰疹病毒、流感病毒和氧化作用。目前，乙型肝炎病毒病治療一直缺乏有效藥物，對該化合物開發(fā)必將給乙型肝炎病毒病患者帶來福音，本發(fā)明工業(yè)應(yīng)用前景十分看好。權(quán)利要求1.一種酮化合物，其特征在于該化合物化學名為1，3，5，8-tetrahydroxyxanthone，又名去甲基雛菊葉龍膽酮，化學結(jié)構(gòu)如下其中，去甲基雛菊葉龍膽酮含量不低于90％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的n山酮化合物，其特征在于，將該化合物用于抗乙型肝炎病毒藥物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的a山酮化合物，其特征在于，將該化合物用于制備化學物質(zhì)引起的急性和慢性肝損傷藥物。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的「」山酮化合物，其特征在于，將該化合物用于抗皰疹病毒和流感病毒藥物。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的n山酮化合物，其特征在于將該化合物用于抗氧化藥物。6.—種制備權(quán)利要求l所述p山酮化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)取川東獐牙菜全草，在60-8(TC下烘干，粉碎成100目得到粉狀藥材；(2)將步驟(1)獲得的粉狀藥材按萃取壓力20-35MPa,萃取溫度30-45。C，萃取時間為60-120min，夾帶劑為體積分數(shù)為95%的乙醇，進行超臨界0)2萃取，獲得去甲基雛菊葉龍膽酮；其中，所述95。/。的乙醇與粉狀藥材之比為l一1.2L:lkg;(3)采用十八烷基硅垸鍵合硅膠柱，流動相甲醇-水之比為35-65:65-35，檢測波長254nm，室溫條件下對步驟(2)獲得的去甲基雛菊葉龍膽酮進行樣品制備，收集樣品溶液;(4)對步驟(3)獲得的樣品溶液進行減壓濃縮；(5)然后，對步驟(3)的減壓濃縮，在60-8(TC條件下，干燥3-5小時；(6)最后，獲得去甲基雛菊葉龍膽酮含量為不低于90%的口山酮化合物。全文摘要本發(fā)明公開了一種酮化合物，它是以傳統(tǒng)中草藥川東獐牙菜(SwertiadavidiFranch)為原料，經(jīng)過超臨界CO₂萃取技術(shù)，色譜制備分離，獲得去甲基雛菊葉龍膽酮。經(jīng)抗乙型肝炎病毒和保肝實驗表明，該化合物抗乙型肝炎病毒抑制作用明顯，對CCl₄和D-氨基半乳糖所致急性或慢性肝損傷有明顯保護作用，在制備抗乙型肝炎病毒藥物中將得到良好的應(yīng)用。本發(fā)明制備方法的超臨界CO₂萃取技術(shù)與傳統(tǒng)溶劑提取方法相比，具有工藝穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好的特點，而且總酮提取率高，效率高、生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本較低。文檔編號A61P1/16GK101429187SQ200810233399公開日2009年5月13日申請日期2008年12月18日優(yōu)先權(quán)日2008年12月18日發(fā)明者傅善權(quán),惠周,胥秀英,鄭一敏申請人:重慶工學院