專利名稱：皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物類皮膚美容保健制劑產品和技術，特別指可用于延緩皮膚衰老和美容抗 皺的一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳及其制備方法。
技術背景關于皮膚皺紋的
背景技術：
皮膚位于人體的表面， 一般由表皮、真皮和皮下脂肪組織所組成，它是人體最大的器官 ，擔負著重要的生理學功能。皮膚不僅具有十分重要的屏障作用和防御功能，而且還具有諸 多的生理作用和代謝功能。然而，隨著歲月的流逝、年齡的增長，人皮膚與其他組織器官一 樣，也逐漸開始出現衰老，皮膚衰老是不可改變的自然規(guī)律。皮膚衰老最直觀、最主要的表 現之一就是皺紋。甚至有學者認為，皺紋是肉眼觀察皮膚老化最重要的標志之一。皺紋是內因性和外因性皮膚老化最明顯，最重要的特征，也是整體機能老化最直觀，最易 觀察的外部征象和指標。人的皺紋一般從20歲左右開始出現，并隨著年齡的增長而逐漸增多和加深，并進行性加重。有人觀察認為，人體的皺紋從前額部開始出現，與此同時在外側眼角部出現扇形展開的皺紋，接著圍繞眼瞼周圍出現魚尾紋和放射紋。由口至腭部皺紋深溝是45 歲以后發(fā)展起來的，并不斷向口的周圍延伸。以后甚至向耳根部，頸部和全身發(fā)展。也有學者 認為，皺紋主要由皮膚生理性老化或自然老化和光照老化等原因共同產生。自然老化在皮紋 加深的同時，伴有皮膚變薄和彈性喪失，累及全身皮膚，光老化導致的皺紋是由于紫外線( UV)損害，在光暴露部位的皮膚常伴有皮膚干燥、粗糙、皮溝加深，皮嵴隆起，出現皮革樣 外觀，伴毛細血管擴張，外觀灰暗，無光澤，色素異常，甚至癌變等。關于皺紋的分級，臨床皮膚和醫(yī)學美容界，曾有人將皮膚皺紋分為輕、中、重、嚴重四個 等級，S卩I級為輕度皺紋，在面部表情靜止時不易察覺，只有在面部作表情運動時才能隱約可 見；II級為中度皺紋，在面部表情靜止時隱約可見，而在面部作表情運動明顯可見；III級為 重度皺紋，在面部表情靜止時皺紋就明顯可見，但在用力伸展皺紋時可見皺紋明顯減輕；IV級 為嚴重皺紋，即使加力伸展皺紋時皺紋仍然清晰可見。當然，也有人將皺紋分為三個等級或按 照皺紋的部位，多少，長短和深淺進行積分分級。關于皺紋的分類，目前學術界傾向于將面部的皺紋分為三大類，即體位性皺紋、動力性 皺紋和重力性皺紋。體位性皺紋大都是頸闊肌長期伸縮的結果，主要出現在頸部。體位性皺紋的出現并非都是皮膚老化，但隨著增齡，橫紋變得越來越深，而出現皮膚老化性皺紋；動 力性皺紋是表情肌長期收縮的結果，主要出現在額肌的抬眉紋、皺眉肌的眉間紋、眼輪匝肌 的魚尾紋、口輪匝肌的口角紋和唇部豎紋、顴大肌和上唇方肌的頰部斜紋等；重力性皺紋主 要是由于皮下組織脂肪、肌肉和骨骼萎縮、皮膚老化后，加上地球引力及重力的長期作用逐 漸產生的。不過，也有人按照皺紋形成的病因分為生理性皺紋、病理性皺紋和光照性皺紋及 老化性皺紋。總體上講，皮膚皺紋的產生是一個復雜的生物學過程及該過程產生在外部的特征性現象 ，與多種因素有關，包括真表皮連接變薄，層粘連蛋白-5減少，皮膚膠原，氨基葡聚糖及皮下 脂肪的丟失，重力及肌肉、關節(jié)的運動也起了重要作用，還與激素、種族、遺傳、氧化、壓力 及系統性疾病、空氣污染、溫度、吸煙、酒精有一定關系。具體地說，皮膚皺紋的產生主要是因為①水分丟失增多隨著增齡，表皮與真皮結構處變 平，表皮變薄，表面積增大，使皮膚水分揮發(fā)加快，丟失增多，導致皮膚組織細胞皺縮和老化， 出現組織形態(tài)學改變，而使皮膚出現細小皺紋;②皮膚角質層中水分含量減少隨著年齡的增 長，天然保濕因子含量減少，使皮膚水合能力下降，由于水合能力降低，皮膚難以保持正常水 分，而使皮膚逐漸出現細小皺紋，隨著皺紋的進一步增多和加深，使皮膚表面積不斷增加，水 分喪失更加嚴重，此時皮膚干燥，皺紋加重。特別是皮膚水脂乳化物含量減少，使皮膚角質層 中水分含量減少。皮膚水脂乳化物(HE)是由小汗腺分泌的汗液與皮脂腺分泌的皮脂在皮膚表 面所形成的一層乳狀膜，隨著年齡增長，皮膚組織中的汗腺逐漸萎縮，數目減少，分泌功能也日 趨下降，皮脂腺數目也明顯減少，皮脂分泌下降導致皮膚角質層的HE含量也不斷減少，其皮 膚的滋潤和保水功能降低，使皮膚干燥。隨著HE減少，皮膚表皮相應失去其滋潤和保水功能， 特別是皮膚中和堿性物質的能力大為降低，使皮膚干燥程度增加，皮膚變粗變硬，出現明顯粗 糙;③表皮細胞更新速度減慢隨年齡的增長，表皮細胞的代謝能力減弱，更新速度開始減慢， 新生細胞生成減少，角朊細胞增大， 一些角朊細胞出現角化不全，表面輪廊不清，角質層屏障功 能減弱，使皮下組織水分儲備不足、皮膚干燥和皺紋增加;④表皮黑素細胞的改變:活化的黑 素細胞的數目隨年齡增加而減少，且其儲備能力也在不斷減少，使其光老化作用加強，真皮彈 性纖維加快變性和破壞，使皺紋增多加深加重；而真皮膠原纖維和彈力纖維改變，決定了皮膚 皺壁，松弛，萎縮，毛細血管擴張等老化外貌的發(fā)生和發(fā)展;⑤真皮膠原纖維的變性和合成減少 是引起皮膚彈性和韌性下降及皺紋形成的重要原因之一，然而皮下組織中的脂肪組織的萎縮 及功能改變在皺紋的形成和加重方面也起了重要作用。有報道認為，老年人的皮下脂肪組織 減少，很大程度上是由于皮下脂肪組織萎縮的緣故。另外，由于老年人真皮纖維母細胞壽命縮短，分裂能力下降，致使老年期彈性蛋白的基因表達驟降，彈性蛋白基因表達下降，使功能性彈 性纖維合成減少，加上真皮網狀彈力纖維發(fā)生結構性變化，分裂能力下降，使功能性的彈性纖維合成減少，這些是形成皺紋的重要因素;⑥機體代謝廢產物及毒素不斷長期刺激積累，不僅 加快了組織和細胞的損傷，而且導致真皮結構蛋白，結締組織和酸性粘多糖的降解，促使皮膚 進一步老化，皺紋加重;⑦紫外線輻射損害的慢性積累，造成暴露部位的皮膚老化。皺紋是皮 膚光老化最明顯的外在表現，是紫外線(UV)對皮膚直接或間接損傷的累積效應，在UV慢性輻射 下，表皮首先受損，皮膚光滑度降低，皮膚紋理發(fā)生改變，繼而膠原破壞，含量減少，皮膚失去正 常支撐結構；同時，彈性纖維扭曲變性，功能喪失，皮膚失去彈性回縮力而松弛無彈性.皺紋不 斷加深;⑧主動或被動吸煙，低雌激素，生活壓力，睡眠不足，皮膚不清潔，表情肌運動，地球引 力也是皺紋形成的其中原因。有學者認為，主動或被動吸煙可引起維生素A水平及面部角質層 水分減少，真皮中部及網狀層彈性組織變性以及使外周血管收縮而致真皮局部缺血等，可能 是香煙中的毒性成分參與了皮膚的老化及皺紋形成過程;女性比男性更明顯，吸煙的數量(支 /年)與皺紋和皮膚灰暗的程度直接相關。低雌激素因參與皮膚膠原減少過程從而促使皺紋產 生。關于皮膚皺紋防治的
背景技術：
皺紋是皮膚在生命過程逐步形成和加重的，從某種意義上講，皮膚的皺紋對人體健康和 長壽并無大礙。然而，對于美容和人體外部形象卻有著直接影響，因此，人們仍然希望了解 皺紋的成因，以幫助解決皺紋出現的煩惱和問題。目前關于皮膚皺紋的防治主要從幾個方面 進行:第一是預防性措施；第二是合理化調理；第三是針對性治療。在皮膚皺紋預防性措施方面，目前主要通過:①平衡膳食為保持肌膚的健美，延緩肌膚的 衰老和皺紋產生，應堅持合理營養(yǎng)，平衡膳食，限制總熱量和動物性脂肪及膽固醇和食鹽的攝 入，保持多樣飲食，注意多食奶類、豆類、魚類、蔬菜、水果及富含維生素A、 B、 C、 E的食 物。維生素A、 E有抗氧化，抗輻射，抗角化功能，是抗皮膚衰老的良劑；B族維生素有抗氧 化、積蓄骨膠原的作用；維生素C能幫助人體骨膠原的合成，修復創(chuàng)傷，防止老化，淡化色 素等。②適量運動科學鍛煉，可使人體生命旺盛，促進人類健康長壽。長期有氧運動，可 使線粒體產生適應變化，提高氧化磷酸化功能，從而延緩衰老過程中線粒體功能的退行性變 化，還能降低膽固醇(TC)、高甘油三酯(TG)和血漿低密度脂蛋白膽固醇，增高血漿高密 度脂蛋白膽固醇(HDL-G)。③良好心態(tài)不良精神狀態(tài)，也是引發(fā)皺紋的一方面，如憂慮 ，精神壓力等不正常的生活環(huán)境，有的人心靈上的創(chuàng)傷， 一夜間顯得蒼老許多，如皺紋的增 加及白發(fā)等，因此要保持良好的心態(tài)，學會放松自己。④注意防曬紫外線(UV)介導的光老化過程中，表皮損傷的發(fā)生先于真皮，表皮的角化過程受損，是早期皺紋形成的重要因素.外 出時應避免日曬，如帶草帽或遮陽傘，也可使用全波段防曬霜，既防UVB，又防UVA，防曬指數 (SPE) 15-30即可。在皮膚皺紋的合理化調理方面，目前主要通過①采用中醫(yī)中藥療法抗皺中醫(yī)理論認為，皮膚衰老以及整個機體衰老的直接原因是 五臟虛損，氣血失調。研究發(fā)現，許多中藥含有各種氨基酸，維生素，微量元素，果酸，脂類多糖 ，生物堿，皂苷等，具有清除體內自由基，增強機體抗氧化能力，改善皮膚微循環(huán)，提高皮膚膠原 纖維及膠原蛋白的含量，調節(jié)免疫功能等。應用中醫(yī)臨床辨證施治為基礎，運用健脾補氣血， 溫補腎陽，滋補腎陰，活血化瘀等法則治療虛衰癥，如補腎益精方(仙靈脾，何首烏，肉蓯蓉，骨 碎補等)；補腎復方(附子，肉桂，熟地，山茱萸，懷山藥，仙靈脾，茯苓，炙甘草)等。自由基是衰 老的重要啟動因素，具有極強的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成脂質過 氧化物(LPO)，實驗證明，多種中藥具有一定的抗氧化能力，如黃芪多糖，阿魏酸，甘草次酸等， 對羥自由基(.OH)以及超氧離子自由基均有較強的清除作用；紅景天，人參能增強組織SOD活性 ，降低LPO，還有三七，丹參，肉蓯蓉，枸杞，刺五加，菟絲子，巴戟天，淫陽藿等等，均具有養(yǎng)顏抗 衰，除皺增白作用，中藥延緩皮膚老化的作用是多方面的，相應的治療措施也應是多樣的。② 采用現代醫(yī)學療法抗皺:合理補充抗氧化劑，清除自由基，可預防和減緩皮膚衰老的發(fā) 生或改善已發(fā)生的癥狀?？寡趸瘎┑钠贩N很多，如維生素A， C， E，胡蘿卜素，番茄紅素，茶多酚 ，谷胱甘肽，輔酶QIO， N-三丁基菜詡苯基硝酮，褪黑素，二巰基乙醇，微量元素硒，鋅等。③ 外用保濕類護膚品皮膚中的含水量是皮膚滋潤，豐滿，亮麗的關鍵，角質層中水分含量 約為10%-15%，而其水分含量的減少在皺紋產生中具有重要意義。隨著年齡的增長，角質層中 的天然保濕因子含量減少，使皮膚水含性能下降，導致皮膚組織萎縮和老化，出現組織學的改 變，表現為皮膚細小皺紋的產生。合理應用保濕劑，對保持皮膚的水分和恢復皮膚屏障功能 有著重要作用。保濕劑種類很多，如丙二醇，1-3-丁二醇，尿素，吡咯烷酮羧酸鈉，透明質酸，甲 殼素及其衍生物，氨基酸類，蘆薈，膠原蛋白，泛醇，霍霍巴油，礦物油，凡士林油脂類等。甘油 也稱丙三醇，是化妝品中最早且最常使用的保濕劑，具有特定的功效，是化妝品優(yōu)質保濕劑，它 通過促進糜蛋白酶樣蛋白酶的活性固定角質細胞的橋粒結構，促進干性皮膚角質層橋粒降解，促進脫屑，還可防止角質層脂質在濕度低的情況下結晶保持層狀結構，起到皮膚保濕作用； 而丙二醇，1-3-丁二醇也是常用保濕劑，可作為助添劑也是一種促滲劑，有類似甘油的角質松 解作用。丙二醇最大用量不要超過15%，否則會引起刺激反應。還有尿素，它是一種無色梭柱 狀結晶或白色結晶性粉末，水溶液顯中性反應，具有抗菌，止癢，增加蛋白質的水合作用，提高角質層含水量，使皮膚柔軟，潤澤，其皮膚保濕推薦用10%左右。膠原蛋白亦稱膠蛋白，是人體 內含量最多的蛋白質，主要存在于皮膚，骨骼，軟骨，牙齒，肌腱，韌帶和血管中，是結締組織重 要的蛋白質，起著支撐器官、保護肌體的功能。它是由3個a螺旋肽鏈絞合而成的大分子( 分子量約30萬)在每個肽鏈上約含1200個氨基酸。由于其水解物多肽鏈中含有氨基、羧基和 羥基等親水基，對皮膚有較大的親和力并具有很好的保濕作用，其性質溫和，補充人體流失的 膠原蛋白，氨基酸，保持皮膚水分，刺激皮膚微循環(huán)，促進其新陳代謝，使皮膚光滑，亮澤，減少 皺紋等。透明質酸(HA)也稱玻璃糖醛酸或玻尿酸，廣泛存在于機體各組織中，在機體內通過粘 彈性(大分子網狀結構)及高度水合性等物理學功能以及與受體作用的生理學功能來發(fā)揮其重 要作用，是一種理想的天然保濕因子。將含HA的護膚品涂于皮膚時，可形成一層黏彈性水化膜 ，能潤濕角質層，維持和加強角質層自身的吸水能力和屏障功能，促進皮膚對護膚品養(yǎng)份的吸 收，防止皮膚干燥，使皮膚嫩滑，延緩和防止皮膚老化。氨基酸類中的三甲基甘氨酸(NMF-50)， 是自然界中存在的天然分子，存在于水生貝類動物和植物的甜菜根，菠菜中。由于NMF-50具有 很強結合氫原子的極性端分子，所以，它能與水和類似水的分子強烈結合，從而使它具有獨特 的理化性質。NMF-50是白色結晶狀粉末或微球形，物理條件改變時，它很容易把水分子釋放， 讓水分子可以被活細胞作用，涂擦于皮膚有良好的滋潤清爽膚感(如絲綢般滑爽)和抗皺效果， 還具有酸性緩沖功能和抗表面活性劑刺激等?；艋舭陀偷闹饕煞质遣伙柡透呒壌己椭舅?，類似人類皮膚自身所產生的天然油分，有良好的穩(wěn)定性，極易與皮膚融合，將其涂擦在皮膚 上時，在皮膚上形成一層非常薄的無油膜，具有皮膚保濕和修復作用。實驗結果表明，霍霍巴 油可以將面部表層干紋在使用lh，4h和8h后有效減少到26。/。、 18%、 11%。外用含有霍霍巴油護 膚品可以保持皮膚潤滑8h以上，具有保濕和潤滑皮膚的雙重作用，給人以柔軟而又不油膩的清 爽感覺。④外用抗氧化劑護膚品隨著年齡的增長，機體各器官保護機制下降，機體生理性損傷，引 起的脂質過氧反應，即這些過多增強自由基能與多不飽和脂肪酸作用，形成過氧化脂質 (LPO)及其衍生物丙二醛(MDA)，這些強氧化性物質又與磷脂、核酸及蛋白質反應，生成淀粉樣 不溶性化合物一脂褐素即老年斑(脂溢性角化病)，成為細胞老化的標志，因此抗氧化一直是 防治皮膚老化的手段和方法。目前，常用的抗氧化劑包括酶類和非酶類，如超氧化物歧化酶 (SOD)，木瓜巰基酶，輔酶QIO，金屬硫蛋白(MT)，維生素E， C， A，谷胱甘肽，半胱氨酸，P -胡蘿卜 素，綠茶(茶多酚)等。超氧化物歧化酶(SOD)是一種重要的抗氧化酶，其皮膚抗衰老的重要作 用已經得到廣泛證實，它能夠特異性清除超氧陰離子自由基。從人或哺乳動物血液或臟器、 植物(刺梨和小白菜等)和微生物細胞中分離和純化出，SOD注射10-30單位/克 體重，可降低紫外線對皮膚的光老化損傷，局部外用SOD能夠降低皮膚中過氧化脂質(LPO)的含量。因此， 能有效的防止自由基損傷，延緩皮膚衰老。S0D是帶負電荷的可溶性酶，涂在皮膚表面很難使 它較長時間保留在皮膚上，因此也難于在皮膚表面發(fā)揮良好的抗老化作用。利用基因工程技 術中的基因連接、拼接、重組等技術重新合成或復制了一些SOD基因產品，如SOD復合酶及修 飾SOD及其衍生物，這類高科技產品，含有高度生物活性的大分子和小分子氧自由基清除劑， 在延緩皮膚老化和皺紋產生或加重方面有著更實際應用的價值和廣闊前景。金屬硫蛋白(MT )是一類低分子量，富含半胱氨酸及非金屬離子的非酶蛋白質，分子量為6000-7000，富含活 性巰基(-SH)，含60-63個氨基酸殘基。MT在人體內參與各種代謝活動，它具有奇妙的生物學性 性質，對有害的羥自由基有很強的清除作用，保護自由基引起的過氧化損傷，使丙二醛的生成 明顯減少，對成年人來說，外源性補充MT，能夠清除體內自由基，防止脂質過氧化使細胞尤其 是細胞膜中的不飽和脂肪酸得以保護，從而起到保護細胞膜的流動性，防止細胞衰老的作用， 也能使丙二醛的產生減少，不僅可以使老化色素沉著減少，同時可以和人體內重金屬絡合，達 到解毒、排毒作用，MT對各種不同金屬的結合力不同，其結合力由強到弱的順序為銀(Ag)， 汞(Hg)，鎘(Ca)，鉛(Pb)。有毒重金屬與MT結合后，其毒性不能發(fā)揮。重金屬毒性越強，MT的解 毒作用也愈強。MT是一重要的抗氧化和清除自由基蛋白質，有減少皺紋產生或皺紋加重的作 用。茶多酚為黃酮類化合物，它是茶葉的提取物，能清除活性氧自由基，對超氧陰離子與過氧 化氫自由基清除率可達98。/。以上，其效果優(yōu)于經典的天然抗氧化劑維生素E、 C;用0.05%和 0. 1%濃度的茶多酚喂養(yǎng)家蠅，可使家蠅大腦的SOD活性升高，脂質過氧化降低，還能提高老大鼠 體內谷胱甘過氧化酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力，有抗過氧化質脂及延緩脂褐素 生成作用。而在皮膚皺紋的針對性治療方面，目前主要通過①化學剝脫法，即用一定種類和劑量皮膚角質溶解劑或剝脫劑進行表皮或真皮淺層 剝脫從而使皮膚皺紋消除或減輕?；蚶酶鞣N酸或堿性化學物質使表皮腐蝕后再生的抗皺美 容方法。化學剝脫法可根據其作用和治療目的進行深淺不同的化學剝脫，維生素A酸(維甲酸 )，a -羥基酸(AHA)使用較多。維生素A酸(RA)是一組化合物總稱，包括與維生素A作用相似的 所有天然和人工合成的化合物，維生素A酸分為三代，第一代為非芳香類(視黃醇，全反式維A酸 );第二代為單芳香類(阿維A酯，阿維A);第三代為多芳香類(他扎羅汀，阿達帕林，芳維A胺乙酯 )。維生素A酸(維甲酸)對皮膚老化的表皮粗糙和色素沉著及皺紋的形成均有明確作用。外用 全反式維A酸能明顯改善皮膚光老化的現象，消除或減少皺紋形成，減少或淡化色素沉著等，且 組織學的改變也和臨床的改善相對應，增加膠原的合成并減少紫外線誘導的膠原降解是其重要的作用機制，因此，外用全反式維A酸對皮膚光老化的形成還有預防作用，其外用濃度應從 低濃度(如O. 015%)開始，以后逐步過度到高濃度(O. 05%-0. 1%)，多采用霜劑型，可減少刺激，凝 膠劑型適合于油性皮膚和潮濕環(huán)境，由于維A酸具有光敏性，最好在晚上使用，開始每天晚涂擦 一次，等癥狀減輕后，改為每周2-3次，維持療效；不良反應主要有皮膚干燥，脫屑、瘙癢，多 于使用頭一個月發(fā)生，以后逐漸耐受。它的不良反應發(fā)生主要看RA的種類、濃度、基質的性 質等。a-羥基酸(AHA)，包括甘醇酸、檸檬酸、乳酸等，即我們通常說的果酸，使用后可使角 質層變薄，通過抑制轉移酶與激酶干擾離子鍵，細胞橋粒形成，減弱角質細胞間黏附且誘導細 胞脫落，促進細胞更新；在真皮，其增加粘多糖在基低層的沉積，促進新的膠原合成，來替代 膠原與彈性纖維的降解。故認為a-羥基酸可以改善皺紋及恢復真皮彈性。水楊酸(BHA)，又 稱B柔膚果酸，為脂溶性，具有優(yōu)秀去角質，清潔毛孔的能力。對皮膚刺激較果酸低，不但有縮 小毛孔，去除細小皺紋，改善日曬引起的老化，還有淡化色素斑作用。② 激光除皺法及光子嫩膚法:激光除皺法應用于治療皮膚老化皺紋也較原來有了新的進 展，如高能超脈沖C02激光除皺技術的應用，能使老化皮膚在瞬間即逝，且能使老化的膠原再生 ，皮膚彈性恢復，皮膚較術前明顯細嫩光滑。但由于這種方法仍然容易出現皮膚色素沉著，近 年來又出現鉺激光除皺技術，這種激光治療效果更顯著，更安全，且組織損傷更小，恢復更快， 更好。最近幾年又相繼出現幾種無創(chuàng)，無損，無副作用的脈沖染料激光和半導體激光及其該激 光除皺嫩膚儀器，這類特定譜段的強脈沖激光能夠穿透皮膚，并通過其產生潛熱效應改善皮膚 微循環(huán)，刺激真皮膠原蛋白的再生和彈性纖維的重新排列以及真皮細胞外基質分泌增加，使皮 膚彈性，韌性逐步恢復，粗大毛孔縮小，細小或較輕度皺紋減輕或消失。③ 水針及注射除皺法水針及注射除皺技術也是改變皮膚老化皺紋的重要方法之一。由 于這種方法不用開刀，出血少，痛苦小，不留疤，且操作簡單，因此，目前很多美容機構和醫(yī)學美 容中心都在開展這些技術?？梢哉f，注射消除皮膚老化皺紋，成為當今社會美容和對抗皮膚 老化的熱點，也有學者將其稱之為軟組織填充法。此法主要是在面部皺紋處注射填充一些軟 組織填充劑，通過軟組織填充劑注射，可達到一定的抗皺效果。以往多采用液體硅膠、硅凝 膠、水凝膠、生理鹽水和植物油等。以后，又從國外引進聚丙烯酰胺凝膠，還又注射肉毒桿 菌毒素、膠原蛋白、自體脂肪、Artecoll和Restylane等。最近，有專家將Artecoll中PMMA的 表面制備成圓形光滑的微球，加入到一定濃度的膠原溶液中混合均勻，然后注射到皺紋部位； 當機體吸收微粒體中的膠原蛋白后，PMMA會刺激皮膚產生新的膠原蛋白并逐漸取代注入的膠 原；同時，PMMA還能起到支架的作用，可使自身纖維結締組織增生并包裹PMMA微粒球，最終變 為自體成分，既不會被機體吞噬細胞吞噬和消化吸收，也使PMMA對組織的刺激性和變態(tài)反應降低至最小，而且，看上去更顯得光滑平整，達到永久性除皺的目的。據報道，在加拿大整形 美容界常用它填充面部皺紋，包括額頭紋、眼角紋、眉紋、口角紋等。Restylane是一種由合 成透明質酸加工而成的軟組織填充劑，為非動物源性物質。有報道，Restylane能夠與人體皮 膚組織自然融合，并能為營養(yǎng)物質提供有效的通道，注射用量很少，但除皺效果顯著。在歐洲 ，Restylane用于皮膚除皺其保持時間是膠原蛋白的兩倍。國外專家們預測， 一旦Restylane 獲得美國FDA批準應用，將會出現一個注射Restylane除皺的高潮。④ 機械磨削法:是一種手術性除皺法，通常在擬進行磨削術部位常規(guī)消毒，并同時進行浸 潤麻醉，后用水砂紙或牙臺鉆帶動磨削砂輪，以1000-1500rpm/min的速度在面部嚴重皺紋處進 行淺表性磨削，其深度一般為致創(chuàng)面出現密集點狀出血為宜或磨削后出現白色平行線或隆線，表示已達到真皮乳頭層。磨削后用紗布壓迫止血，并取消毒凡士林紗布敷于患部加壓包扎， 或涂抗生素軟膏防止創(chuàng)面感染，并使之自然干燥愈合。通過在皮膚皺紋出較表淺性的磨削，可 刺激皮下膠原蛋白增生，新生皮膚再生，從而使面部嚴重皺紋得以消除或減輕。⑤ 手術拉皺法:也被稱之為面部皮膚提升術，或者也稱為面部皮膚除皺術。隨著年齡增長 ，皮膚本身老化，面部骨骼吸收或退縮，軟組織萎縮，皮下組織減少或變性等，而使面部逐漸形 成較為明顯的皺紋。但由于整個面部的皮膚面積并未明顯縮小，因此，皮膚顯得多余而松弛形 成皺紋。如果將多余的皮膚切除，然后再通過手術縫合將皮膚拉緊就能消除皺紋。過去，一般 在發(fā)際線后側切開皮膚，用鈍器將皮膚剝離，向上和向兩側拉緊皮膚，再將多余皮膚切除即能 將皺紋消除。對于面部除皺方式的選擇，在進行上面部除皺時，通常在內窺鏡下或非內窺鏡下通過小切 口額部懸吊進行，只對額部皺紋嚴重者采用傳統的冠狀切口手術。頸部采用頦部脂肪抽吸、 頸闊肌折疊等術式。頜下脂肪和頦下脂肪量多者，用細管進行抽吸;對皮膚衰老以中面部為主 、頸部變化不明顯的中老年患者，用減少瘢痕除皺方式，縮短切口至耳垂部位，對頸部衰老明 顯患者仍以傳統的手術切口延長到乳突發(fā)際。⑥ 手術重塑皮膚結構抗皺法進行手術重塑皮膚結構抗皺前標記受術者外眥皺紋范圍， 對明顯粗大的魚尾紋重點作出標記，根據受術者選擇重瞼術，上瞼松垂皮膚切除成形，下瞼眼 袋整形術。在完成皮膚縫合前，從已切開的上瞼或者下瞼外眥部皮膚切口，用眼科剪緊貼真皮 下銳性剝離，潛性分離至已表記的外眥皺紋范圍，將鐮刀狀手術刀伸入皮下創(chuàng)口，縱橫網狀切 割真皮，切割深度達真皮乳頭層，以不刺破表皮基底層為度，切割密度約lmm左右.對已標記的 較粗大明顯的魚尾紋作重點切割。操作時皮膚切口要避免過度牽拉以及切割損傷，切割真皮 注意用力及間隔盡量均勻一致，壓迫止血，縫合皮膚，剝離創(chuàng)面加壓包扎。外眥魚尾紋屬而部動力性皺紋，隨著皮膚衰老，真皮變薄，彈性纖維，膠原纖維數量減少及斷裂，使皺紋加深增粗 ，出現不可逆改變。30歲以下外眥魚尾紋主要在面部肌肉活動時明顯，認為皺紋發(fā)生主要是 眼輪匝肌收縮所致；31-40歲受術者皺紋在肌肉靜止時明顯，面肌肉活動時更加深粗，認為這 與肌肉收縮有關外，還與皮膚衰老有密切關系；40歲以上受術者皺紋靜止時也粗深， 一般伴有 外眥角下垂，認為主要與皮膚衰老、真皮彈性膠原纖維減少斷裂有關。真皮切割除皺基礎為 切割后真皮創(chuàng)面刺激彈性、膠原纖維以及其它細胞外基質增生合成，修復變薄斷裂的真皮組 織，使纖維重新排列而重塑皮膚結構。另外，真皮切割和切斷一部分神經纖維減少了肌肉動 力作用，但真皮切割除皺術操作技巧很重要，外眥皮膚剝離時，應緊貼真皮下進行，縱橫切割 真皮時應正確掌握深度及密度，對皺紋明顯的位置應重點切割，如因術中及術后壓迫止血不夠 ，則可能形成輕度血腫；如因切口過度牽拉，則可能形成輕度癱痕。特別是由于面部血運豐富 ，剝離真皮時有較多毛細血管滲血，術中應注意對剝離區(qū)域的壓迫止血，確認無滲血后再縫合 切口，且術后對除皺區(qū)域應加壓包扎以避免滲血或血腫形成而影響愈后及恢復延遲，切割真 皮時應避免對切口過度牽拉及損傷。真皮切割法除皺術或者說手術重塑皮膚結構抗皺法，對 于四十歲以下受術者魚尾紋消除滿意，除皺術后皮膚柔軟、平整、年青化改善明顯。對于40 歲以上受術者雖外眥皺紋較術前減少，但效果不甚滿意，表明真皮切割法除皺術更適用于40 歲以下中細皺紋去除?？朔四ハ鳌⒒瘜W學及注射等方法的許多不足點。 關于肉毒素的
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肉毒毒素(Botulinum toxin， BTX)是由厭氧性的革蘭氏陽性(G+)芽胞肉毒梭狀桿菌在生 長繁殖過程中所產生的一種細菌外毒素，它具有極其強烈的毒性，通常O. 05 y g即可使人致死 。因此，肉毒毒素是所有細菌毒素中毒性作用最強的毒素之一。按其抗原性的不同，它可分為 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G七種類型，其中A、 B、 E、 F四種類型能引起或誘發(fā)人類中毒，而C、 D、 G三種類型尚未發(fā)現引起或誘發(fā)人類中毒的正式報道。雖然，各型肉毒毒素的抗原性和免疫性 及其毒性作用機制不同，但其分子結構基本一致，都是由重鏈(H)和輕鏈(L)構成，而兩者主要 通過二硫鍵結合，但可以被蛋白酶裂解。肉毒毒素也是一類大分子蛋白復合物，其相對分子 質量為15萬道爾頓，其中，重鏈(H)相對分子質量為10萬道爾頓，輕鏈(L)為5萬道爾頓，各 型肉毒毒素具有此相近的相對分子質量。重鏈(H)的羧基端與靶細胞受體具有高度特異性結 合位點，重鏈(H)的氨基端則相關于細胞內吞轉運活動:另一條輕鏈(L)，實質上是鋅肽鏈的 內切酶，為肉毒毒素的活性成分。肉毒毒素溶液為無色、無臭、無味，如果溫度在4(TC以上、特別是在堿性環(huán)境中，肉毒 毒素很容易發(fā)生熱變性而失去其毒性作用。而且，在空氣-液體界面形成的氣泡，也能夠使肉毒毒素的伸展和形態(tài)結構發(fā)生變化，從而使其失去部分毒性。同時，過低濃度的稀釋也可 使肉毒毒素的穩(wěn)定性降低，但加入PH《6.8其它蛋白(如明膠、血清白蛋白等)緩沖液稀釋可 以防止這一效應。因此，肉毒毒素產品通常是以一種復合制劑的形式保存和運輸。過去，一直視肉毒毒素為劇烈、甚至是致命的細菌毒素。但隨著上世紀70年代美國舊金 山眼科研究所從肉毒毒素中毒患者最早出現眼癥狀、后緩慢恢復中得到的啟示，大膽將肉毒 毒素應用于斜視、眼瞼痙攣等眼科疾病的治療。在此基礎上，臨床上又逐步將肉毒毒素的應 用擴展到面部肌肉痙攣、痙攣性斜頸及肢體肌張力障礙等癥狀的治療，而且都取得了良好的 效果。事實上，早在1817年Justi皿s Kemer就首先發(fā)現在某些食物中攜帶的毒素能夠導致骨骼 肌和副交感神經功能麻痹；1897年就有學者從肉毒中毒患者尸體中分離出肉毒毒素；1920年 有學者試圖提取肉毒毒素。1946年Scott提取了純肉毒毒素，1950年就有學者采用肉毒毒素 治療肌肉過度收縮。1973年Scott用猴眼肌作動物試驗，證明肉毒毒素可導致肌肉無力。 1979年美國眼力健(Allergan)公司正式生產肉毒毒素，其藥名為保妥適(Botox) ， 1980年 Scott用肉毒毒素治療斜視和眼瞼痙攣。1987年Carruthers等用肉毒毒素治療眼部疾病患者 ，1989年12月美國FDA正式批準A型肉毒毒素作為臨床合法治療藥物，也是國際上第一個將A型 肉毒毒素用于臨床治療的國家，也是第一個細菌毒素被允許用于臨床治療。而英國生產的肉 毒毒素的商品名為迪斯波特(Dysport) ; 1993年中國研制出肉毒毒素產品，其商品名為肉 毒毒素(BTXA); 1997年2月中國衛(wèi)生部也正式批準A型肉毒毒素作為臨床合法治療藥物，這是 繼美英兩國之后第三個能合法生產和應用A型肉毒毒素的國家。2001年加拿人批準可將肉毒 毒素用于美容，2002年4月美國FDA也正式批準肉毒毒素應用于美容領域，之后，英國和法國 等國家亦先后批準肉毒毒素用于美容。目前，肉毒毒素中的A型肉毒毒素(BTXA)毒力最強，被研究也最多，很多基礎和臨床應 用及其機制均較為清楚，其主要作用機制是①神經毒素H鏈的羧基端受體識別位點與膽堿 能神經末梢質膜上受體特異性結合；②在受體介導下，經能量依賴性細胞內吞作用完成神經 毒素跨膜轉運形成胞內體；③酸性環(huán)境的胞內體，神經毒素經一系列蛋白分解活動，形成L 鏈一鋅肽鏈內切酶并釋放進入神經細胞胞質，裂解突觸相關膜蛋白或突觸融合蛋白，從而抑 制了乙酰膽堿以囊泡為單位的"傾囊"式突觸間隙釋放，即所謂量子式釋放。而肌肉化學性 去神經支配效應則是肉毒毒素作用的最主要臨床效應，即是乙酰膽堿突觸間隙量子式釋放抑 制，從而阻斷了有效性神經-肌接頭的興奮傳遞，致使肌肉失神經支配，臨床則表現為肌肉 弛緩性癱，即所謂的肌肉化學性去神經支配。具體地說，A型肉毒毒素特異性地作用在運動神經終板的突觸前膜，通過作用于膽堿運動神經末梢，阻斷乙酰膽堿釋放到突觸間隙中，導 致受累的神經不能刺激肌纖維支配肌肉的收縮，因而肌張力減低，肌痙攣緩解。它不阻斷神 經興奮的傳播，神經和肌肉都沒有興奮性和傳導性的損害，這種作用也稱為化學去神經作用 。肉毒毒素的麻痹效果在注射后l- 7天出現，7-14天達到高峰，持續(xù)12-24周不等，隨時間 推移，其作用逐漸減弱或消失。A型肉毒毒素是一種神經毒素，也是一種肌肉松弛劑。正是應用A型肉毒毒素的作用特點 ，國內外己將肉毒毒素用于涉及眼科、神經科、康復科、消化科及皮膚科(多汗癥、美容)等 多個學科領域超過五十多種病癥的治療，包括用于斜視、眼瞼痙攣、口及面部肌肉痙攣、痙 攣性斜頸、肢體痙攣和畸形、職業(yè)性肌張力障礙、半側面肌肉痙攣、小兒腦癱、小兒麻痹、 多汗癥等，并取得了較好的臨床療效。目前，國際上用于制備A型肉毒毒素的菌株通常采用A型肉毒梭狀桿菌Hall株，并通過含有 胰酪-酵母透析液-葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后，再通過硫酸沉淀、磷酸鹽緩沖液提取、核糖 核酸酶處理、DEAE A50層析、超濾濃縮、冷凍干燥結晶等過程制備A型肉毒毒素。按照美國 的鑒定標準，純凈的A型肉毒毒素為單一針狀結晶，將它溶解于磷酸鹽緩沖液后，在278nm處 有最大的光吸收；且0D，/0D278之比《0. 6 ;其特異毒性或純度為3X1(/LD50 (小白鼠)±20% mgpr;在lcm比色光路中，lmg/ml的毒素具有1. 65的消光系數。A型肉毒毒素的穩(wěn)定性及有效 期與保存溫度密切相關。關于A型肉毒毒素(BTXA )的效價，各國制品略有差別。中國產品和 美國的A型肉毒毒素產品效價基本一致，即中國和美國的l單位B0T0X等于英國4單位DysportA型肉毒毒素產品為結晶型粉末狀針劑，至少要保存在-4'C以下的環(huán)境中，在-2(TC的環(huán) 境中可長期保存，且使用和操作過程中盡可能保持低溫環(huán)境，以減少肉毒毒素生物活性的損 失。關于保存溫度，有報道認為，A型肉毒毒素凍干制品在-2(TC下保存，3年內其毒性效價 可保持穩(wěn)定不變。而在2-8'C條件下，A型肉毒毒素的凍干制品2年內保持穩(wěn)定，效價不變。 在25'C條件下一周內保持穩(wěn)定，效價不變。說明制品穩(wěn)定性、效期與保存溫度有關。因此， 有條件時最好將A型肉毒毒素的凍干制品保存在-2(TC以下的低溫冰箱最為理想;普通冰箱冷 凍室內一般溫度在-15'C左右，也基木能達到同樣效果。由于A型肉毒毒素的凍干制品在25'C 保存一周其效價仍較穩(wěn)定，所以用干冰或冰皇等制冷劑包裝、運輸，在數天內不會影響制品 質量。A型肉毒毒素在注射前應根據需要用不含防腐劑的注射生理鹽水進行稀釋才能使用。而 關于A型肉毒毒素的凍干制品經稀釋后的應用濃度，應根據不同國家的B0T0X制劑分別對待。而肉毒毒素的實際用藥劑量主要依據注射位點及病種不同而酌情給藥，有條件的可在肌電圖 的引導下給藥，并根據肌電圖的反應調整給藥的部位和劑量。應用中國的產品時，使用時，用 生理鹽水稀釋至所需濃度。 一般地說，采用現用現配的方法，用生理鹽水2-4ml將A型肉毒毒 素的凍干制品稀釋至2. 5- 5.0U/0. lml的濃度進行應用。稀釋應用時，應注意掌握好溫度。溫 度不能過低，更不能過高。因為，A型肉毒毒素的凍干制品在室溫狀態(tài)下的溶解最好，溫度過低 將影響它的溶解性;而溫度過高，則影響它的生物活性及藥用效價。另外，配制好的肉毒毒素 溶液最好一次用完；實在用不完，可置2-8'C冰箱之中，但最多只能保持4個小時，即要求在4 小時內全部用完；且在進行稀釋配制肉毒毒素注射液的過程中，應將注射器針頭貼在安瓶內 壁緩慢推入生理鹽水以使藥物全部溶解，不可用力沖注、搖晃、振蕩，應盡量減少抽吸次數 及泡沫形成，而且，A型肉毒毒素的凍干制品切勿反復凍融，以減少因為時間和溫度等相關 因素對肉毒毒素空間結構及穩(wěn)定性的影響，降低其生物活性，造成肉毒毒素藥效降低，影響 治療效果，同時增加機體產生肉毒素A抗體的機會，進一步導致A型肉毒毒素效價降低及其生 物學功能的發(fā)揮。而且，，對于之前注射過A型肉毒毒素的患者，再次進行治療時維持的時間會 比較長些，因為注射過的肌肉有姜縮。而且，A型肉毒毒素消除皺紋的效果還和皮膚本身的彈 性和厚度有關，所以相對年輕的人注射后效果會好些，而皮膚越松弛，效果越差。在應用A型肉毒毒素B0T0X注射前，應核實受術者有無肉毒毒素的適應癥和禁忌癥，在確 定準確無誤后才能進行肉毒素的注射治療。另外，在應用A型肉毒毒素B0T0X注射時，需要熟 練掌握A型肉毒毒素的特性，熟悉面部神經、肌肉的解剖和眼眶部的結構，注意產品的正確 保存、適合的稀釋濃度、準確的劑量和精確到位的注射對于保證除皺療效非常重要。同時， 清楚了解A型肉毒毒素BOTOX應用后可能會出現的副作用也非常必要。而且，要嚴格注意肉毒 毒素注射部位的消毒，用75%的酒精消毒注射部位皮膚，須待消毒酒精完全揮發(fā)后再進行注 射，以免影響操作和消毒酒精降低肉毒毒素的生物活性。A型肉毒素本質為異體蛋白、且分子量較大，因此，具有一定的免疫原性。肉毒毒素制 劑在凍干過程中或多或少有毒力的喪失，受術者實際上接受的是毒素和類毒素的混合注射， 因而其抗原性比生物活性檢測所指示的更強。用肉毒毒素免疫的人可產生特異的高水平的抗 毒素，在部分接受肉毒毒素重復注射的受術者已檢測到抗體。肉毒毒素抗體的形成的臨床表 現現是，對再次注射肉毒毒素的治療效果明顯減弱。而大劑量、頻繁注射是產生肉毒毒素抗 體的主要因素。一般來講，A型肉毒毒毒素治療是安全的，它對人的半數致死量(LD50)為40U/kg體重。而 一次美容除皺療法通常用量在20-25U，屬于微小劑量，且A型肉毒毒毒素注射后，會選擇性與高親和性地結合在神經末稍，尚無多余毒素進入血液或腦脊液，故毒副作用不會很大。然而，如 果注射A型肉毒毒素出現技術方面的問題，或者A型肉毒毒素向注射部位周圍組織的擴散，也可 引起此局部的不良反應;其常見副作用如下:①呼吸道的反應:A型肉毒毒素在進行頸部的肌肉 或喉部的肌肉注射后，可能出現短暫的聲嘶、誤吸，吞咽障礙、呼吸阻塞感和呼吸困難等;② 眼部的反應:A型肉毒毒素眼部注射后的不良反應主要有眼瞼下垂、局部水腫和瘀斑、上瞼 下垂、眼瞼閉合不全、眼眶脂肪疝、畏光流淚、視力模糊、眉毛下垂、眼瞼下外翻以及暴露 性角膜炎等;③面部的反應:A型肉毒毒素面部注射后的副反應主要有上唇下垂、鼻唇溝變淺 、表情不自然、額部緊繃感、鄰近部位皺紋加深等;④遠隔部位肌肉的反應:局部注射治療劑 量的A型肉毒毒素后，在遠隔部位肌肉也發(fā)現了廣泛輕度的單纖維肌電圖異常，主要表現為顫 抖值和肌纖維密度增加，說明A型肉毒毒素注射后可以弓1發(fā)遠隔部位肌肉的反應等; 肌肉組 織學改變:在小鼠的腿部肌肉內注射A型肉毒毒素后，解剖注射部位的肌肉，發(fā)現肌纖維萎縮 ，神經纖維發(fā)芽。神經發(fā)芽呈現復雜的分支排列，肌肉萎縮通常為6周或更長，然后在數周 內增粗；⑥全身反應A型肉毒毒素注射后可出現一些全身反應，主要表現為發(fā)燒，全身不 適，疲倦，乏力和感冒樣癥狀等；除此之外，A型肉毒毒素注射還有一些主要的禁忌證，如重癥 肌無力，Lambert Eaton綜合征等全身性肌無力性疾病，使用影響神經肌接頭傳遞藥物時，孕婦 及哺乳期婦女，注射部位感染，有A型肉毒毒素中毒史等。 關于肉毒素用于皮膚美容除皺的
背景技術：
隨著肉毒毒素臨床應用的不斷發(fā)展，特別是1986年加拿大溫哥華不列顛哥倫比亞大學眼 科教授在用A型肉毒毒素治療眼瞼痙攣時意外發(fā)現它的皮膚除皺作用后，便開始與皮膚科合 作，大膽在美容抗皺領域應用。開始，他們先將A型肉毒毒素應用于眉間紋治療，以后，擴 大到魚尾紋、額頭紋等部位皺紋的治療，均取得了意想不到的效果。1997年有關A型肉毒毒 素治療皺紋的綜述發(fā)表在權威性的雜志上，使A型肉毒毒素正式在美容除皺方面應用。此后，A型肉毒毒素美容除皺方法便開始在加拿大、美國、歐洲共同體國家逐步得到推 廣應用，特別是美國一些好萊塢影星們在應用A型肉毒毒素美容除皺治療后，其面部皺紋消 除，顯得面部更加年輕漂亮、美麗動人，便開始轟動一時，使A型肉毒毒素除皺在美國美容 界風靡開來，并不斷波及到東南亞、中國乃至全世界，并被有關專家譽為"二十一世紀醫(yī)學 美容除皺的主要方法"，也被稱之為"生物美容除皺的主要方法"。實際上，最初將A型肉毒毒素用于面部除皺，主要是用在面部的上l/3除皺，如抬頭紋、 眉間紋、魚尾紋等，以后才逐步將它用于面部的中部和下部除皺，如鼻背部皺紋、口周皺紋 及面中部動力性皺紋如過深的鼻唇溝紋等；最后，用于頸部和上胸部(包括乳房)的除皺，如頸闊肌索條狀畸形等?，F在除了除皺，還有用A型肉毒毒素治療面部不對稱、眉毛不對稱、 面癱、下眼瞼輪匝肌肥厚、軟組織移位等。除了單獨使用A型肉毒毒素，還將它配合其他的 除皺方法應用，以增加療效和持續(xù)時間，如作為內窺鏡額部提緊術、激光除皺術前、軟組織 充填術中的輔助性治療。A型肉毒毒素除皺方法是將一定劑量的肉毒毒素注射到面部對應部位皮下肌肉組織。如 治療額頭紋，可采用"V"字形進行肉毒毒素注射，同時在"V"字形中間再適當增加一些注 射點。治療女性眉間紋，通常將一定劑量的肉毒毒素注射液注射在眉間5個點；而治療男性 眉間紋，則在治療女性眉間紋方法的基礎上于左右眉上各加l個點，S卩7個點同時注射一定劑 量的肉毒毒素注射液。在進行魚尾紋治療時，則分別將一定劑量的肉毒毒素注射液于兩側外 眼角各放射狀注射3個點。具體方法是①注射應用液準備將每瓶50 U或55 U或IOO U的 A型肉毒毒素從-2(TC冰箱內取出，臨用時，立即用注射生理鹽水稀釋成2.5U/ml，分裝于l ml皮試注射器內，然后用4.5號針頭注射。用注射生理鹽水稀釋后的A型肉毒毒素要求于4h內 用完，且使用過的注射器及其相關物品一律銷毀處理。②注射部位及劑量的選擇:根據額紋 及魚尾紋數量多少及年齡大小確定。 一般年齡偏小、皺紋少、皮膚柔軟者，額紋注射3-4個 點、魚尾紋注射l-2個點，每點注射1.25U或2. 5U。而年齡偏大、鈹紋密集、皮膚僵硬者，可 在額紋處注射5-6個點，魚尾紋注射2-3個，每點至少注射2. 5U，并于雙側皺眉肌內各注射 2.5U。額紋注射位點距眉上緣2-3cm，魚尾紋注射位點距外眥部l cm。③注射方法:令受術者 仰臥，施術者坐于其頭頂側。將注射部位消毒后，右手持注射器，額紋從上向下、與皮膚成 5°夾角進針深約5 mm，根抓情況注射肉毒毒素O. 05- 0.1 ml，即肉毒毒素用量l. 25-2. 5U。 一般正中線一點兩側各對稱性注射l-3點，兩點相距l(xiāng)-2cm?；蛞灾芯€為準等距離兩側各注射 2-3個點。魚尾紋注射方向是從內向外、與皮膚成5。夾角角度進針。以魚尾紋的中線確定注 射位點。 一般為l-3點，劑量為0.05-0. 1 ml，即肉毒毒素用量1.25-2. 5U。為防止過敏反應 的發(fā)生， 一般注射第1針后觀察10-15 min，若無反應，再繼續(xù)進行后續(xù)注射。注射完畢后再 觀察30 min方可離院。為防萬一，治療前應常規(guī)備用腎上腺素和肉毒毒素抗血清，以便搶救 之用。④療效判斷:完全除皺，即注射肉毒毒素后額紋及魚尾紋完全消失，皮膚飽滿無痕跡 ，且持續(xù)3-6個月；部分除皺，即注射肉毒毒素后額紋及魚尾紋明顯變淺，但略有痕跡，持 續(xù)3-6個月；除皺無效，即注射肉毒毒素后額紋及魚尾紋等皺紋均無變化。A型肉毒毒素在面部美容除皺方面的應用，目前主要是應用在治療額紋、魚尾紋、眉間 紋。這是因為這幾類皺紋在面部最明顯處，且面部表情運動時更加清晰可見，并直接影響著 人的美容，因此，急于處理干凈。額紋俗稱抬頭紋，位于眉和眉間的上方至鄰近前額發(fā)際處，呈橫向排列，為額肌收縮所致 。額肌是前額的一塊縱向大肌肉，起于帽狀腱膜，止于眉和鼻根部皮膚，它的收縮可以產生抬 頭紋，同時額肌的下部有對抗眉毛下垂的作用。溝紋與肌纖維方向垂直，一般為3-6條，可分 為正中組和外側組。外側組的產生乃因額肌直接收縮所致，中間組的產生則系兩側額紋共同 牽拉正中皮膚的結果。注射位點的分布與額紋平行，且以前正中線為中心向兩側對稱分布。 注射的目標肌肉實際上是額肌肌腹。注射位點一般遠離眉弓，以免出現雙眼上瞼上抬困難。魚尾紋呈粗細不等的條紋狀，沿外眥部呈放射狀排列，閉眼時因眼輪匝肌收縮致紋理更為 明現。皺紋少者，選擇中線為注射點，距外眥l cm左右；皺紋稍多，則可選中線上、下各l點為 注射點；皺紋密集而多者，則可確定上、中、下三點為注射點，其目的使眼輪匝肌外眥部松弛 。因為眼輪匝肌參與閉合眼睛的功能，環(huán)繞在瞼板和眶膈前，它的對抗肌是提上瞼肌，眼輪匝 肌眶部的用力收縮可以引起外眥部放射狀的皺紋一魚尾紋。而且，顴肌和眶外側眼輪匝肌的 協同作用，在外眥部可加深魚尾紋。眼輪匝肌外眥部松弛，則魚尾紋可得到消除。眉間紋也是肉毒毒素面部除皺首選的適應證。應注射皺眉肌、眼輪匝肌內側緣和降眉肌 。因為眼眶上內側的部分肌纖維的功能可降低眉內側部分，眶上外側的眼輪匝肌收縮可降低 眉外側。皺眉肌起于眉弓內端，止于眉部皮膚，緊貼骨膜，在眼輪匝肌的下方，它向下內側 牽拉產生垂直方向的眉間紋。降眉肌是指眼輪匝肌眼眶部少數纖維，終止于眉，可向下牽拉 眉頭產生橫行的鼻背部皺紋。降眉間肌起于鼻上皮膚，止于前額皮膚。女性眉采用5點注射 ，每點5個單位；男性水平型眉采用7個點注射，每點3- 4個單位。如果肌肉塊比較大，用量 可以增加到每點5-7個單位。在A型肉毒毒素注射后，除了消除皺眉時產生的眉間紋，部分有 前額緊張性頭痛的患者在注射后頭痛癥狀消失;此外由于內側降眉肌麻痹，患者注射后內眉 上抬，眉型改變。與面部皮膚提緊除皺術、局部膠原注射術、激光除皺術、磨削術和化學剝脫術除皺等方 法相比，A型肉毒毒素除皺美容具有簡便易行、作用短、起效快、效果明顯、非皮膚浸潤性 、無痛苦、副作用小、不需住院、無嚴重并發(fā)癥和后遺癥等優(yōu)點。A型肉毒毒素美容除皺雖然較其它針對性治療方法有一定的優(yōu)點，但A型肉毒毒素美容除 皺的缺點也很突出，主要是①因為神經突觸新芽形成和神經-肌肉傳導的重建，使A型肉毒毒素松馳肌肉的作用 逐漸降低，從而會使治療后的局部皺紋逐漸重現。因此，肉毒毒素除皺效果是暫時性的，除皺 效果不能持久。通常，肉毒毒素除皺效果只能維持3-6個月時間，有些甚至只能維持l-2個月 ;而要維持除皺效果，則需要多次反復進行注射。 一般情況下，按照每次注射肉毒毒素可維持3-6月除皺效果計算，則每年需注射2-3次。② 由于肉毒毒素屬于浸潤性美容治療方法，具有一定的風險性，且多部位實施多點注射， 較為痛苦，因此，A型肉毒毒素用于皮膚美容不是一般的美容行為(或行業(yè)行為)，而是一種醫(yī)療 行為，且是高一級的醫(yī)療行為，不能在一般美容院可以進行的， 一定要在從事醫(yī)療美容的單位 進行，并由技術水平較高的醫(yī)生操作，也就是使用單位和個人都要經資質認證，只有具備上述 條件的單位和個人才能供藥和用藥。因此非一般美容院或普通美容師能合法應用，必須在具 有國家衛(wèi)生部批準的美容醫(yī)療單位和具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師執(zhí)照的專業(yè)醫(yī)師才能組織實施。③ 肉毒毒素是一類外源性異種蛋白，具有一定的免疫源性，反復注射或者大劑量注射肉毒 毒素，機體有可能產生相應的抗肉毒毒素抗體。通常，注射肉毒毒素后約有3-10%產生了抗體 ，而一旦形成這種抗體，以后再次使用肉毒毒素用于美容除皺將會產生抗藥性，從而影響治療 效果。大劑量、頻繁注射是產生肉毒毒素抗體的主要因素，因此，只能采用適量注射和盡可 能有較長時間間隔期注射，原則上注射間隔期不應短于3個月。④ 局部注射A型肉毒毒素對額部除皺效果較為理想，其次為魚尾紋、鼻背紋，但對于眉 間紋的治療效果較差。因為眉間紋由皺眉肌、降眉肌、眼輪肌內側和額肌的下側緣共同作用 產生，且皺眉肌和降眉肌收縮力較大，位置較深，這給眉間注射A型肉毒毒素的位置準確性、合適的用量及合適用藥濃度帶來一定困難，從而會導致部分病例效果欠佳。因此，注射A 型肉毒毒素后眉間紋效果相對較差；⑥注射A型肉毒毒素后眼袋明顯增加，另外，鼻根較粗 大患者眉間紋注射A型肉毒毒素后因皺眉肌及降眉肌松馳，可導致鼻根粗大，影響美觀。另外，A型肉毒毒素抗皺治療的副作用也很糟糕，主要表現為①部分人治療部位出現前 額繃緊感、沉重感、麻木感；②面肌無力，表情不自然、出現呆板現象；③雙眼上瞼活動不 靈活；④眼睛畏光流淚；⑤少數出現鼻周圍皺紋加深；⑥出現眉形改變或眉下垂；⑦上眼瞼 下垂、下眼瞼外翻；⑧視力模糊或下降；⑨注射部位有輕度疼痛，局部出現水腫、紅斑、淤 斑；⑩暴露性角膜炎；而且，嚴重時，還可能出現復視、斜視、吞咽困難、心律失常、心臟病 發(fā)作等不良反應。特別是肉毒毒素引起的上瞼下垂，是由于注射的肉毒毒素彌散，并通過眶膈膜使提上瞼肌 麻痹造成的。這與注射的手法關系密切，如果注射速度快，用力或過深(在骨膜周圍)可以促進 毒素擴散，易引起上瞼下垂。上瞼下垂通常在注射后7-10天出現；另B0T0X稀釋體積過大時也 易出現。同時，如多數的額頭紋，則必須麻醉比較大范圍的肌肉才能達到滿意的效果，但額肌 的下2. 5-4cm部分參與眉毛的運動，如完全麻醉額肌會導致眉毛下垂，尤其是本身眉毛就比較 低的人。甚至可使眉、眼瞼下垂和表情失落等在眉外側特別明顯，嚴重的由于眉毛部位的軟組織也下垂，甚至會擋住眼睛。魚尾紋治療不當，也可能使下眼皮松弛或眼袋突出，出現暫時 性的外下眼瞼下垂，如果肌肉麻痹的時間過長，可以導致角膜病變、眼干、淺表點狀角膜角 化，甚至角膜潰瘍。在A型肉毒毒素進行鼻唇溝治療時，在遠離口角的顴大肌起始點，即下瞼眼 輪匝肌的下緣水平注射，不僅可以柔和魚尾紋，且可以減輕鼻唇溝的皺折。但注射部位不是 鼻唇溝上方的鼻翼側，而是在頰正中注射，且注射后不當向下按摩可致提上唇肌麻痹，到致同 側唇下垂。除此之外，A型肉毒毒素抗皺治療還有嚴格的禁忌證，如下列情況之一的人就不適合用 A型肉毒毒素注射治療面部皺紋:①精神不穩(wěn)定或有不現實目標的人；②孕婦或哺乳期婦女； ③患有神經肌肉疾病的患者；④對毒素制品中任何成分(毒素、鹽水、人血蛋白)過敏的人； ⑤目前正在使用影響神經肌肉傳導和毒素效果的藥物治療(如氨基糖甙類藥物、青霉胺、奎 寧和鈣離子拮抗劑等)；⑥由于注射A型肉毒毒素后面部表情肌麻痹，表情會減少， 一些需要 靠面部表情的人如演員等也不適合注射；⑦年齡大、皮膚過度松弛，尤其是眼皮下墜的患者 ;⑧對于下眼皮過度松弛或眼袋突出的患者應該避免用A型肉毒毒素治療魚尾紋，以免下眼 瞼外翻或眼袋惡化。關于勝肽的技術背景勝肽其化學本質就是肽(P印tide)，民間也將其稱之為小分子蛋白質。近年來，在美國等 發(fā)達國家或地區(qū)，已有將勝肽添加到護膚品中已經很流行，因為它成分先進，效果顯著，被 很多藥妝品牌使用。但是勝肽的價格很貴，所以添加了勝肽的產品也賣的比較貴。勝肽實際上也是蛋白質的最小單位-氨基酸的縮合物，生物化學上也稱之為縮氨酸。按照 勝肽中所含有氨基酸的數目不同可將其分為二勝肽(含兩個氨基酸)，三勝肽(含三個氨基酸 )，四勝肽(含四個氨基酸)，……，十勝肽(含十個氨基酸)，等等，依此類推。在目前所發(fā)現或使用的勝肽中，按照美容化妝品的功效作用，可將它們的主要功效歸納為 以下五個方面的功能:①面部神經傳導抑制作用抑制SNARE接受體的合成，抑制肌膚兒茶酚胺 (catecholamine)和乙酰膽堿(acetylcholine)過度釋放，局部阻斷神經傳遞肌肉收縮訊息，影 響皮膚神經傳導，使臉部肌肉放松，達到平撫動態(tài)紋和靜態(tài)紋及細紋的，與此有關的這類勝肽 主要有六勝肽、五勝肽、七勝肽、八勝肽、二勝肽、十勝肽；②促進膠原蛋白，彈力纖維和 透明質酸增生，提高肌膚的含水量，增加皮膚厚度以及減少細紋的作用，這類勝肽有五勝肽、六勝肽、寡勝肽；③抗羰化，保護膠原不會被活性羰基團損傷，促進m型膠原的生長，抗氧化，抗糖基化等作用，這類勝肽主要有二勝肽、三勝肽、銅勝肽；④抗水腫，改善微循環(huán) ，加強血液循環(huán)，消除炎癥等作用，這類勝肽主要有四勝肽；⑤阻斷MSH(促黑激素)的傳導，降低黑色素生成的作用，這類勝肽主要有九勝肽。而目前與美容化妝品應用最為密切相關勝肽的主要有①六勝肽據報道，最早是由南極灣冰河泥中所發(fā)現的菌種-單胞綠膿菌所研發(fā)出 的六勝肽，因其具有類似肉毒桿菌所分泌的肉毒毒素對肌膚神經傳導的抑制作用，故也稱之為 類肉毒毒素。將六勝肽作為主要功效成分，并透過涂抹六勝肽，以胺基酸復合成類似肉毒毒素 的結構，可阻斷神經傳遞肌肉收縮訊息，影響皮膚肌肉神經傳導，使臉部肌肉放松，達到平撫 動態(tài)紋和靜態(tài)紋及細紋的目的；并可預防兒茶酚胺過度釋放所產生的皺紋，如肌膚臉部重復 牽動所形成的皺紋。有效舒緩并抑制額頭抬頭紋、眼睛魚尾細紋及皺紋周邊肌肉的收縮與活 動，幫助肌肉放松，使肌膚彈性組織回復柔順平滑的線條，減少臉部細紋。六勝肽擁有肉毒毒 素的效果，但沒有注射用肉毒毒素的副作用。② 五勝肽:五勝肽具有促進真皮膠原蛋白合成，以及彈力纖維和透明質酸增生的作用，且還能提高皮膚組織的含水量，增加皮膚厚度及減少細紋的作用；同時增加一個長鏈脂肪酸還可以增加吸收效果。③ 銅肽:被視為生長因子，刺激細胞生長，加速傷口修復，增加皮膚上皮組織再生;恢復肌 膚年輕，皮膚細胞增殖，減少粗細皺紋，減少疤痕，改善肌膚彈性，增加角質細胞和纖維姆細胞 增生，亦可讓皮下組織增厚。同時，還具有刺激頭發(fā)生長和減少落發(fā)，健全組織增加毛囊大小 及阻止組織氧化傷害。④ 四勝肽四勝肽具有抗水腫，改善微循環(huán)，加強血液循環(huán)，消除炎癥等作用，故在美容上 可用于抑制眼部水腫和眼袋加重等作用。⑤ 寡勝肽:寡勝肽也有一定的皮膚抗皺效果，且能豐唇和健胸等。綜上所述，上述任何一種皮膚抗皺方法均存在著這樣或那樣的問題如采用預防性措施 (包括平衡膳食、適量運動、保持良好心態(tài)等)，只能對皮膚皺紋的產生起到一定的預防性 效果，而無法達到減輕或消除皮膚皺紋的效果。如采用合理化調理(包括中醫(yī)中藥療法抗皺 、現代醫(yī)學療法抗皺、外用保濕類護膚品等)，雖能在一定程度上改善或減輕皮膚皺紋，特 別是對一些輕度皺紋確有一定幫助、且方式安全無痛苦，但對于一些中重度皺紋或一些運動 性皺紋、光老化性皺紋等作用效果非常之慢、且療效極其有限。如采用針對性治療方法(化 學剝脫法、激光除皺法、光子嫩膚法、水針及注射除皺法、機械磨削法、手術拉皺法、手術 重塑皮膚結構抗皺法等)，雖對各種原因引起的皮膚老化或皺紋具有較好的效果，且時間短 、見效快，但這些方法均為創(chuàng)傷性方法，且可不同程度造成皮膚及組織直接或間接破壞或損 傷，不僅風險性大、后遺癥多、而且痛苦較大、愈合時間長、費用較高。特別是諸如皮膚磨削術、化學剝脫術等治療容易形成疤痕疙瘩、嚴重色素沉著或色素脫失。另外，磨削深度或 化學剝脫程度很難掌握，稍微疏忽，將很難避免毀容情況發(fā)生，而造成受術者終身遺憾和痛苦。與面部皮膚提緊除皺術、局部膠原注射術、激光除皺術、磨削術和化學剝脫術除皺等方 法相比，A型肉毒毒素除皺美容雖具有簡便易行、作用明確、起效快速、效果明顯、淺皮膚浸 潤性、痛苦較小、不需住院、且無嚴重并發(fā)癥和后遺癥等優(yōu)點。但采用A型肉毒毒素注射美 容除皺的缺點也很突出，如A型肉毒毒素注射時間過久后，其松馳肌肉的作用會逐漸降低，從而 會使治療后的局部皺紋逐漸重現。而要維持美容除皺效果，則需要多次反復注射或多位點注 射，但間隔期太短的反復多次注射，不僅較為痛苦，花費更多，且容易產生相對應的抗體抵消作 用效果，而且，具有更大的風險性和毒副作用。同時，A型肉毒毒素畢竟是一種生物毒素，注射用于皮膚美容，不是一般美容院可以合法進 行的，而一定要在從事醫(yī)療美容的單位，且由技術水平高超的專業(yè)醫(yī)護人員操作，使其應用 具有明顯的局限性。除此之外，局部注射A型肉毒毒素也可能使眼袋明顯增加，另外，鼻根較 粗大患者眉間紋注射A型肉毒毒素后因皺眉肌及降眉肌松馳，可導致鼻根粗大，影響美觀。尤其是注射A型肉毒毒素抗皺治療的副作用也很糟糕，不僅注射后容易出現治療部位的繃 緊感、沉重感、麻木感及面肌無力、表情不自然、呆板等現象，而且，有時出現雙眼上瞼活 動不靈活、眼睛畏光流淚、視力模糊或下降、出現眉形改變或眉下垂及上眼瞼下垂、下眼瞼 外翻，甚至注射部位有時會出現疼痛、過敏、局部水腫、紅斑、淤斑，嚴重時，還可能出現 復視、斜視、吞咽困難等不良反應。除此之外，A型肉毒毒素抗皺治療還有嚴格的禁忌證，如一些精神不穩(wěn)定的人、孕婦或 哺乳期婦女、患有神經肌肉疾病的患者、對毒素制品中任何成分過敏的人、正在使用影響神 經肌肉傳導和毒素效果的藥物治療(如氨基糖甙類藥物、青霉胺、奎寧和鈣離子拮抗劑等)； ⑥由于注射A型肉毒毒素后面部表情肌麻痹，表情會減少， 一些需要靠面部表情的人如演員 等也不適合注射；⑦年齡大、皮膚過度松弛，尤其是眼皮下墜的患者；⑧對于下眼皮過度松 弛或眼袋突出的患者應該避免用A型肉毒毒素治療魚尾紋，以免下眼瞼外翻或眼袋惡化。特別是A型肉毒毒素在常溫(自然條件下)、特別是它稀釋成液體后非常不容易保存(必須 在四小時內使用完畢)、儲存期很短、且很快失去生物活性，制備成皮膚外用精華素更加不容 易保存，即使置于冰箱中保存也是如此。而且，由于A型肉毒毒素分子量較大(大于15萬道爾頓 )，因此，很難在皮膚上外用，或者通過皮膚作用途徑而發(fā)揮其優(yōu)勢作用；如果采用不科學的態(tài) 度強行進行皮膚外用，或皮膚外用過程中不慎進入眼內將會產生更加嚴重的影響和后果。由此可見，采用A型肉毒毒素注射治療進行除皺有一定的風險和很多的局限性，配制成皮膚外用制劑因難以吸收和保持肉毒毒素活性又無法發(fā)揮其應有的皮膚肌肉神經麻痹作用而實現其皮膚肌肉松弛和美容抗皺的功效。雖然，勝肽種類和功效甚多，且已有不少歐美、日韓等發(fā)達國家及港澳臺地區(qū)用于高檔美 容化妝品之中，特別是將六勝肽作為肉毒毒素替代品用于皮膚美容和抗皺，但在應用中仍然存 在一些缺陷和問題，如勝肽(包括六勝肽)均為水溶性，雖然分子量很小，但仍很難透過皮膚發(fā) 揮其應有的生物學效應，即使采用一些能夠促進其透皮吸收的促滲透劑等協助，其作用仍無法 達到理論上的效果，臨床試驗表現為抗皺反應較為緩慢，療效仍不十分顯著;而且，即使一部分 人群有效，但由于仍是通過類似肉毒毒素對面部肌肉神經傳遞的抑制和面神經的麻痹作用所 發(fā)揮的抗皺作用，因此，面部表情仍顯得有些不自然和不協調，特別是單純采用六勝肽這種類 似肉毒毒素的神經麻痹作用，其抗皺效果仍只是對一些由于表情肌運動所產生的皺紋有效，而 對生理性老化和光老化所致的皺紋無實質性的改觀和療效，而且，對那些由于表情肌運動所產 生的皺紋的有效也只是十分短暫且可逆的，并不能從根本上解決皮膚皺紋問題。發(fā)明內容本發(fā)明的目的是針對背景技術中存在的缺點和問題加以改進、創(chuàng)新，提供一種使用簡單 、來源方便、價格便宜、安全可靠、療效顯著的皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復 合納米乳及其制備方法。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳是由下述重量份配比的原料制成 肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E 2-10克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克 、紅景天素O. 003-0. 03克、六勝肽O. 001-0. Ol克、超氧化物歧化酶O. 0002-0. 002克、還原型 谷胱甘肽O. 2-2. 0克、胎牛血清2-20克、透明質酸0.02-0.2克、神經酰胺O. 02-0. 2克、蒸餾 水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克； 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳是由下述重量份配比的原料制成 肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E2-IO克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克 、紅景天素O. 003-0. 03克、六勝肽O. 001-0. Ol克、超氧化物歧化酶O. 0002-0. 002克、還原型 谷胱甘肽O. 2-2. 0克、胎牛血清2-20克、透明質酸0.02-0.2克、神經酰胺O. 02-0. 2克、蒸餾 水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克、甘露醇15-30克、 甘氨酸2-8克。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂O. 8克、人參皂苷O. 2克、紅景天素O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克；本發(fā)明固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備方法如下1) 按液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、 蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內原料充分混合、溶解，不能溶 解的部分加少許無水醇促進完全溶解，并將作為油相(A)備用；2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質酸、神經酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用；3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分攪拌均勻，使之形成S/C混合物(B)備用；4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合物 (B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中；5) 在室溫條件下，選用定時恒溫磁力攪拌器，并以200rpmmin—^勺轉速磁力攪拌30min ，即可得到可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。本發(fā)明固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備方法如下1) 按固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、 蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內原料充分混合、溶解，不能溶 解的部分加少許無水醇促進完全溶解，并將作為油相(A)備用；2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質酸、神經酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用；3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分攪拌均勻，使之形成S/C混合物(B)備用；4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合物 (B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中；5)在室溫條件下，選用定時恒溫磁力攪拌器以200rpmmin—i的轉速磁力攪拌30min，再 加入甘露醇和克甘氨酸，再以200rpmmin—^勺轉速磁力攪拌30min，并進行冷凍干燥處理，即 可得到可供皮膚外用的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。本發(fā)明有以下有益效果第一，科學性加強本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，不僅克服肉毒毒素 皮膚外用的諸多問題和局限性，且在最大限度保留六勝肽類似肉毒毒素對抗表情肌運動所產 生的面部運動性皺紋的基礎上，針對性地添加了一些能對抗或延緩皮膚自然老化所產生的生 理性皺紋的輔助功效成分。兩者有機結合，聯合應用，作用途徑和機制互補，即可相互協同，共 濟增效，可達到最佳的皮膚抗衰老和消除皮膚皺紋的效果，且科學性明顯加強，抗皺復合納 米乳國際尚屬空白。第二，新穎性突出本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的最大特點和新穎 性突出表現在①將能對抗表情肌運動所產生的面部運動性皺紋的小分子類肉毒素(六勝肽 )與能對抗或延緩皮膚自然老化所產生的生理性皺紋的輔助功效成分(如S0D-CCE等)有機結合 和聯合應用，國內外尚未見報道(尚屬空白)；②將類肉毒素(六勝肽)與輔助功效成分(如 S0D-CCE等)復配后，再與目前最先進的納米載體系統-納米乳復合應用，國內外尚未見報道(尚 屬空白)；③皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳按照不同的用途及使用條件和儲存要求， 不僅研制成功制備皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的技術方法，而且還研制成功 制備皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的技術方法，該技術和產品國內外尚未見報 道(尚屬空白)。第三，實用性明顯:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，不僅可用在消除或 減輕純粹動力性皺紋和運動性皺紋，且可用在消除或減輕皮膚生理性性皺紋和光老化皺紋;不 僅有短暫但較快的抗皺效果，且還有較長但緩慢的皮膚抗老化方面;不僅可用于治療已形成的 面部鈹紋，且還可用于預防或延緩老化性和生理性鈹紋；不僅可用于青年人面部的鈹紋，也可 用于中老年人面部的皺紋，其實用性更加明顯，且此同步作用，國內外尚屬空白；另外，本發(fā)明 的實用性還體現在所使用的功效成分及相關原料均來源方便、價廉物美。在確保使用安全和 作用效果基本一致的前提下，本發(fā)明可采用國產原料替代進口原料，這樣不僅降低原料成本 或生產消耗，而且這樣也才能保證原料來源方便，使成品價格便宜，且產品制備也簡單方便。 還有，本發(fā)明可使功效成分用量的減少，降低了資源消耗和浪費，也使產品成本大大降低。尤 其是本發(fā)明可按照需要任意匹配一些理化特性不同、溶解性各異、分子量大小不一的功效成 分，使其工藝技術更方便和實用。第四，先進性提高:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，不僅采用具有高效 生物學作用為主導的生物制劑，而且，采用目前最為先進的納米技術及其功效成分靶向載體系 統。同時，本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，不僅大大提高了類肉毒素(六勝 肽)及其輔助功效成分的透皮吸收速率和轉運效果，而且，大大提高了類肉毒素(六勝肽)及其 輔助功效成分作用的趨向性和耙向針對性，這較目前將類肉毒素(六勝肽)及其輔助功效成分 直接添加到傳統的美容化妝品基質和產品中的技術水平大大提高。特別是美容功效成分的針 對性或靶向性非常重要。目前傳統美容化妝品制備技術尚只能保證含有相關美容功效成分， 但并非所有的美容功效成分都具有針對性或靶向性，即使添加了一些促皮膚滲透劑也只能增 加功效成分的透皮吸收，也無法使功效成分發(fā)揮靶向作用。而采用本發(fā)明制備的復合納米乳 ，由于可將功效成分結合在某一載體上，且這種載體具有一定的針對性和靶向性，因此，可實 現功效成分的針對性和靶向性，使其作用更加特異和直接，則相應功效將會更加明顯和高效。第五，安全性更好:理論上講，無論哪種功效成分，在超過其使用劑量或多次反復時，均有 可能引起皮膚的異常反應;特別是一些化學合成物質或異源性的生物大分子物質更是如此。 如果不采用相關的制劑或載體處理，其產品自然無法保證其安全性，甚至出現嚴重的皮膚刺激 或過敏或皮膚損傷。采用本發(fā)明復合納米乳配制技術處理后，其功效成分添加濃度可大大降 低，使用次數也明顯減少，促皮膚滲透的化學合成或半合成物質基本剔除，則使應用的安全性 得以提高。而且，本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分和輔助 功效成分均不含有A型肉毒毒素和化學剝脫制劑，因此，理論上不會出現諸如肉毒毒素和化學 剝脫制劑易于出現的毒副作用，刺激反應及臨床合并癥、禁忌癥和后遺癥等；除此之外，在使 用效果相同的情況下，大大降低了主要或輔助功效成分的應用濃度，并減少了傳統方法添加的 濃度，使功效成分可能發(fā)生的皮膚刺激性、過敏反應、毒副作用大大降低，而安全性則大大提 高。第六，穩(wěn)定性更高:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分在美容化妝品中的穩(wěn)定性至關重要。如功效成分不能在美容化妝品中 保持穩(wěn)定，且在有效期穩(wěn)定存在，其產品自然無法保證質量。六勝肽及其輔助功效成分在應用 本發(fā)明的納米乳技術配制，其形成的功效納米乳則可顯著地提高其穩(wěn)定性，大大延長其有效 期，且肉眼觀察外觀清澈、透明、美觀。按照納米乳穩(wěn)定性試驗要求驗證:①將復合納米乳和 傳統美容精華素同時置于日光燈和自然光下連續(xù)照射O、 5、 10、 15、 30天取樣測定證實，復 合納米乳較傳統工藝配制的美容精華素對光照的穩(wěn)定性大大提高;②將復合納米乳和傳統美 容精華素同時置于0。C、 4°C、 25°C、 40°C、 60°C、 8Q。C下，按0、 5、 10、 15、 30天取樣測定證實，復合納米乳較美容精華素對在不同溫度條件下的穩(wěn)定性更高;③將復合納米乳和傳統美 容精華素同時置于空氣中(室溫條件溫度為20-25。C，相對濕度為50%-75%)暴露，按0、 5、 10、 15、 30天取樣測定證實，復合納米乳較美容精華素對暴露在空氣中和室溫自然存放的穩(wěn)定性 試驗更高；且置于自然室溫空氣中(室溫條件溫度為25 32。C，相對濕度為40 80%)存放30天取 樣測定也證實，復合納米乳較美容精華素穩(wěn)定性更高;④將復合納米乳和傳統的美容精華素分 別置于高速離心機中，并以10000-16000rpmmin—1的速度離心30min后測定證實，復合納米乳 較美容精華素穩(wěn)定性更高;⑤將復合納米乳和傳統的美容精華素分別用馬爾文粒徑測定儀分別測定其粒徑，證實復合納米乳粒徑全部在納米級，且絕大部分在20納米左右；而傳統的美容 精華素粒徑基本在微米級，大多數在i-ioo微米。由此可見，復合納米乳粒徑較美容精華素乳 滴粒徑小得多，且復合納米乳的粒徑分布更集中，均勻性更好。第七，合理性更優(yōu):本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分組合和配方比例的合理性顯示出本發(fā)明的突出優(yōu)勢。如功效成分組合 因制備工藝使其無法在美容化妝品中復配、且復配比例的合理性受到影響，其產品自然無法 保證其作用。而本發(fā)明的主要功效成分六勝肽及其輔助功效成分在應用本發(fā)明納米乳制備方 法配制時，則可按照配方或復配的需要進行添加，不僅所形成的復合納米乳能保持更好的穩(wěn) 定性，并大大提高或增強了作用效果。特別是主要功效成分六勝肽及其輔助功效成分在復合 納米乳中的溶解性直接影響其配制和效果。在美容化妝品配制和使用過程中，只有一定濃度 的功效成分解決了溶解性，其功效成分協同才能發(fā)揮更好的效果。但是，傳統的美容化妝品 制備技術對完全解決功效成分的溶解性問題尚存在一定困難，導致因其功效成分溶解不好， 產品穩(wěn)定性和使用濃度降低，或者不同溶解性的功效成分無法協同增效而無法達到相應的劑 量效應或共濟協同作用，產品自然無法保證其療效。本發(fā)明采用的復合納米乳制備技術進行 配制，其溶解性，流動性和分散性均好，且可促進不同溶解性的功效成分互溶和共溶。分別按 照本發(fā)明的技術和傳統的美容精華素制備方法，在完全相同的條件下將同種單一功效成分( 如GSH)進行溶解性試驗，發(fā)現本發(fā)明納米乳的飽和溶解度明顯高于傳統的美容精華素產品； 同時，在完全相同的條件下，再將同樣種類的多種功效成分進行溶解性試驗，發(fā)現皮膚復合納 米乳的飽和溶解度也明顯高于傳統的美容精華素產品。第八，生物活性好:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分大多數是生物活性成分，而生物活性物質通常需要在低溫或常溫下保 存和使用才能發(fā)揮其生物學作用的優(yōu)勢；因此，在配制產品過程中，這些生物活性物質對最終 反應溫度要求甚高;如反應溫度過高容易使功效成分結構改變而失去生物活性;而如反應溫度過低，又無法達到各反應體系的溶解。但目前美容化妝品配制技術大多必須采用70-8(TC條件 下進行水相和油相成分的乳化溶解，這樣是必使生物活性物質大量丟失或滅活，不僅導致其含 量大大下降，而且功效作用明顯降低，甚至失去其應有的作用效果。而本發(fā)明采用的復合納米 乳技術是在常溫25'C左右條件下進行配制，使添加的功效生物活性物質得以大量保存或?；?，生物利用度提高，這樣能有效地發(fā)揮其應有的作用效果。生物活性測試:分別按照本發(fā)明的 技術和傳統的美容精華素制備方法，在完全相同的條件下將同種具有生物活性的功效成分 (SOD)分別配制成S0D納米乳和S0D精華素，在完全相同的存放條件下分別于放置30天前后分 別測定SOD活性發(fā)現，SOD納米乳較SOD精華素中剩余SOD活性明顯高。第九，透皮吸收更多本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分 六勝肽及其輔助功效成分大多數是水溶性成分，不利于皮膚的滲透吸收。而美容化妝品要想 真正發(fā)揮功效作用，很重要的是生物活性物質或功效成分能夠透過皮膚角質層屏障達到相應 的作用部位、并在這些部位維持一定的效應時間。而傳統的美容化妝品要實現生物活性物質 或功效成分或天然藥物的透皮吸收，需要添加一些有效的助劑、媒介、載體等協助才有可能 使其透過表皮屏障而進入皮膚內發(fā)揮它們應有的生物學作用，且現有傳統的美容化妝品制備 技術及配方大多數是添加一些傳統的促皮膚滲透劑，不僅產品功效成分的透皮吸收無法保證 ，且添加過多的化學合成或半合成的促皮膚滲透劑添還有可能發(fā)生皮膚刺激反應甚至出現過 敏和致癌等。而本發(fā)明的復合納米乳配制技術所得到的產品由于其粒徑小、粒徑分布均勻， 加上乳化好，與皮膚屏障結構的相溶性好，因此，即使未添加任何促皮膚滲透劑，其功效成分也 較易透過表皮吸收，甚至可穿透全層皮膚發(fā)揮其良好的皮膚抗皺效果。特別是因納米乳明顯 提高了難溶性藥物在水相中的溶解度，且納米乳的粒徑和皮膚組織親合性，使功效成分或生物 活性物質的經皮擴散速率明顯增加，透皮吸收明顯加快。第十，療效性更佳:功效成分應用的有效性與其共濟協同和聯合增效密切相關。目前，傳 統美容化妝品并非所有的美容功效成分都能發(fā)揮共濟協同和聯合增效的優(yōu)勢，即使添加了一 些具有共濟協同和聯合增效的美容功效成分也未必能達到設計預期效果。而采用本發(fā)明制備 的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，由于其分散性，流動性，均勻性，穩(wěn)定性，透皮吸收 性，針對性或靶向性及與皮膚接觸的面積增大，作用時間延長等共同影響，使配伍以后的功效 成分的共濟協同性和聯合增效性更加明顯，實際應用效果將會更加明顯和高效。其對皮膚皺 紋的療效性更佳主要表現在:①有效和痊愈率更高;②有效反應時間更快;③近期和遠期效果 更顯著;④作用效果維持時間更持久;⑤多種生物學效應更明顯;⑥預防和治療周期更短等。 ⑨應用的有效性。應用本發(fā)明研制的復合功效納米乳與傳統工藝所配制的同類型同劑量功效成分的非納米乳精華素臨床試用的結果表明，前者較后者有效率高25-35%，且最快有效時間 提高了一倍之多。第十一，舒適性更好:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳舒適性更好，而使 用的舒適性是高質量美容化妝品的重要指標之一。但按照目前傳統的美容化妝品制備工藝， 其顆粒相對較大，分子粒徑大多在微米級左右，而采用本發(fā)明制備的復合納米乳，其分子或乳 滴粒徑絕大多數在納米級(10-80納米之間)，且清亮透明，流動性好，因此，使用起來感覺更加 細膩，光滑，潤澤和舒適。第十二，高效性更突出傳統美容化妝品制備不僅生產工藝復雜，工藝流程繁瑣，生產周期 較長，且無論生產何種類型美容化妝品，因需使用多種原料，油相和水相成分復雜，特別是它們 必須在高溫條件下才能完成乳化等，因而嚴重破壞對熱敏感生物活性物質的結構，甚至妨礙其 應有生物學效應的發(fā)揮。而本發(fā)明所制備的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復合納米乳條件簡單 ，工藝快捷，操作容易，制備高效，周期較短，不需特殊儀器設備，不需外界提供能量，不需加熱 乳化，且配制成一批產品的全部完成時間不過30分鐘即可形成產品，因此，具有高效且易于產 業(yè)化的優(yōu)勢，使其產業(yè)化技術水平也明顯提高和改善;還在能量和原材料節(jié)省，降低環(huán)境污染 等方面也有明顯進步和改觀。本發(fā)明要解決的技術問題第一，克服A型肉毒毒素皮膚外用的問題，采用新的技術最大限度保留六勝肽類似肉毒毒 素抗皺的生物學作用。第二，解決六勝肽作為主要功效成分目前盲目添加和使用的問題，科學設計其作為皮膚 外用抗皺制劑所添加的最佳有效濃度問題。第三，解決六勝肽作為一種水溶性功效成分難以直接透過皮膚有效吸收的問題，從而， 有效發(fā)揮和提高其皮膚抗皺作用的優(yōu)勢。第四，解決六勝肽與其它輔助功效成分科學組方的問題，使其在真正意義上實現皮膚抗 皺和延緩皮膚衰老相結合的目標。第五，解決六勝肽及其它輔助功效成分在皮膚制劑及美容化妝品中應用的載體系統-納米 乳制備問題，從而使皮膚外用固態(tài)和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳在更大程度上發(fā)揮和 提高六勝肽及其它輔助功效成分在皮膚抗皺和延緩皮膚衰老方面的作用和優(yōu)勢。第六，解決六勝肽及其它輔助功效成分與載體系統配伍的穩(wěn)定性問題，使皮膚外用固態(tài) 和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳完全符合國家有關美容化妝品法規(guī)所要求的穩(wěn)定性和保 存期的問題。第七，解決六勝肽及其它輔助功效成分與載體系統配伍的安全性問題，使皮膚外用固態(tài) 和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳完全符合國家有關美容化妝品法規(guī)所要求的使用安全性 問題。第八，降低六勝肽及其輔助功效成分與載體系統配伍后的成本問題，使皮膚外用固態(tài)和 液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳價廉物美。 本發(fā)明的技術原理本發(fā)明復合納米乳制備的原理:復合納米乳是以空白納米乳和皮膚抗皺功效成分配制而成。空白納米乳則由油相、水相、表面活性劑或乳化劑、助表面活性劑或助乳化劑四個體系 組成，而皮膚抗皺功效成分則由主要功效成分和輔助功效成分組成。油相和水相是空白納米乳形成的基本條件；乳化劑有助于油相和水相交融并形成乳滴；助乳化劑也是納米乳形成的 重要條件，它可以插入到乳化劑的界膜中，使之形成復合凝聚膜，提高膜的凝固性和柔順性，并 可增加乳化劑的溶解度，進一步降低界面張力，有利于納米乳形成后更加穩(wěn)定。本發(fā)明中，肉 豆蔻酸異丙酯作為油相，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯作為表面活性劑或乳化劑，聚甘油脂肪酸酯 為助表面活性劑或助乳化劑，蒸餾水作為水相。由于乳化劑辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯有助于 油相肉豆蔻酸異丙酯和水相蒸餾水的相互交融并形成乳滴，而助乳化劑聚甘油脂肪酸酯也是 皮膚外用空白納米乳形成的重要條件，特別是由于聚甘油脂肪酸酯與辛酸癸酸聚乙二醇甘油 酯各自特殊的理化特性，使助乳化劑聚甘油脂肪酸酯可以插入到與乳化劑辛酸癸酸聚乙二醇 甘油酯的界膜中，形成復合凝聚膜，以提高膜的凝固性和柔順性，并可增加與辛酸癸酸聚乙二 醇甘油酯的溶解度，且進一步降低界面張力，有利于形成更加穩(wěn)定的皮膚外用空白納米乳。辛 酸癸酸聚乙二醇甘油酯常受溶解度的限制，而聚甘油脂肪酸酯能使辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 的溶解度增大，納米乳的乳滴更容易進一步分散，特別是辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂 肪酸酯在肉豆蔻酸異丙酯和蒸餾水相界面進一步大量吸附，使兩者在連續(xù)相內的濃度降低，界 面張力重新成為正值，使之逐步形成穩(wěn)定的皮膚外用空白納米乳。理論上講，皮膚外用空白納 米乳僅僅只是作為功效成分的載體系統，單獨使用尚未發(fā)現其有明顯的皮膚抗皺和延緩皮膚 衰老的作用和功效，而添加的相關皮膚抗皺功效成分，才是發(fā)揮皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的主 要成分。在實際配制皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的復合納米乳的過程中，應根據各個成分各自 水溶性或油溶性等理化特點，分別將皮膚抗皺功效成分，即皮膚抗皺主要功效成分一面部表情 肌抑制劑(六勝肽)和輔助功效成分--自由基清除劑(S0D和GSH)、皮膚營養(yǎng)劑(維生素E和蛋 黃卵磷脂)、促細胞生長劑(胎牛血清)、天然保濕因子(透明質酸和神經酰胺)、天然植物或 中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等按一定比例先溶解，然后，再按照偽三相圖計算油相、水相及表面活性劑或乳化劑/助表面活性劑或助乳化劑的添加比例，并按照此比例進行配制，即可得到皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳;如再將一定劑量的凍干保護劑一甘露醇 和甘氨酸適時添加至其中，并經冷凍干燥處理，即可得到皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合 納米乳。本發(fā)明的作用原理皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中的主要功效成分主要是由6個氨基酸縮合的具有類似肉毒毒素作用的六勝肽，以及能夠輔助和增強六勝肽皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的輔助功效成分自由基清除劑(SOD和GSH)，促細胞生長劑(胎牛血清)，皮膚營養(yǎng)劑(維生 素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質酸和神經酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷 和紅景天素)等組成。六勝肽為生物制劑，又稱之為類肉毒毒素，其皮膚抗皺機制與注射抗皺所使用的A型肉毒 毒素基本相同，即六勝肽類似面部皮膚肌肉的松弛劑，能選擇性作用于外周膽堿能神經(運動 神經)末稍，在神經肌肉接點突觸處(作用最強點)，抑制突觸前膜釋放神經介質乙酰膽堿，有效 阻斷神經介質的傳遞，而引起肌肉松弛性麻痹，使肌纖維不能收縮，肌肉張力下降，肌痙孿緩解 ，面部表情肌無法發(fā)揮作用，從而，使臉部肌肉放松，減少或消除面部表情肌運動形成的皺紋， 達到平撫動態(tài)紋、靜態(tài)紋及細紋的目的。同時，類肉毒毒素六勝肽還能有效預防兒茶酚胺 過度釋放所產生的皺紋，減少面部肌肉重復牽動所形成的皺紋，從而，有效舒緩并抑制額頭抬 頭紋、魚尾紋、眉間紋、鼻橫紋、鼻背紋及皺紋周邊肌肉的收縮與活動，幫助肌肉放松，使肌 膚彈性組織回復柔順平滑的線條，進一步減少或消除臉部細紋。隨著年齡的增長，老化皮膚的 膠原纖維變直，纖維蛋白束與皮膚表而越加平行，皮膚伸展余地大為減少，彈性減低，皮膚變 得松垂無張力而出現皺紋。自由基清除劑中超氧化物歧化酶(SOD)屬于自由基清除劑，能清除超氧陰離子自由基，具 有明顯而有效的抗氧化作用，能夠預防和修復由于氧自由基所導致的皮膚組織過氧化損傷出 現的皮膚細胞及亞細胞結構破壞、細胞合成與分泌代謝障礙、生物大分子(蛋白質和核酸)變 性、酸性粘多糖降解、膠原纖維交聯、彈性纖維斷裂等引起的老化性皺紋的再形成和進行性 加重。谷胱甘肽(GSH)是屬于含有巰基的小分子肽類物質，具有三種重要的生理作用，即抗衰 老、抗氧化和整合解毒作用。它由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通過肽鍵縮合而成的三肽化合 物，半胱氨酸上的巰基為其解毒的活性基團；由于谷胱甘肽的化學本質是小分子肽(分子量為 307)，容易透過細胞膜而被皮膚吸收。由于還原型谷胱甘肽本身易受某些物質氧化，所以它在 體內能夠保護許多蛋白質和酶等分子中的巰基不被如自由基等有害物質氧化，從而讓蛋白質和酶等分子發(fā)揮其生理功能;它還能直接將SOD轉化的過氧化氫等氧化劑生成無毒的水，從而 提高SOD生物學作用，減少皺紋形成，延緩皮膚衰老，被美國著名營養(yǎng)保健專家艾爾 敏德爾博 士稱之為三倍效能的抗衰老氨基酸。表皮和真皮細胞數量減少，細胞增殖和更新減慢，皮膚細胞內量減少，細胞DNA和蛋白質以 及膠原和彈性纖維合成的能力降低是皮膚衰老和皺紋形成的重要原因之一。促細胞生長劑( 胎牛血清)是滋養(yǎng)皮膚組織和細胞的重要物質，系采用健康母牛懷孕八月齡胎牛血液為原料制 備而成。它相對其它牛血清品質更高，因胎牛尚未接觸外界，血清所含抗體和補體等對細胞有 害成分更少，而血漿蛋白、多肽、氨基酸、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、核酸衍生 物、無機物、維生素等，特別是胎白蛋白和胎球蛋白及細胞生長因子和激素更豐富，更適合皮 膚細胞的培養(yǎng)和生長。胎牛血清皮膚外用，不僅可提供皮膚組織和細胞生命活動必需的營養(yǎng) 物質，且可提供促進皮膚細胞分裂、增殖和生長所需的多種激素和各種生長因子(如成纖維細 胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等)；同時，還可提供細胞代謝過程中起重要作 用的結合蛋白(結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪及激素 等，轉鐵蛋白攜帶鐵)；胎牛血清蛋白形成血清的粘度，可保護細胞免受機械損傷，其中一些微量元素和離子，在細胞代謝和解毒中也起重要作用，這些無疑對促進表皮細胞和真皮細胞不斷分裂和增殖，形成大量新生年輕細胞有益；同時，這些新生細胞在代謝過程中又不斷合成并分 泌新的細胞外基質及新生膠原蛋白和彈性蛋白，使面部皮膚出現年輕化趨勢，皺紋得以減輕或 消除。皮膚營養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，則能夠提供給皮膚組織和細胞新陳代謝所需要的充 足營養(yǎng)供應；同時，能夠有效地維護皮膚細胞膜結構的穩(wěn)定性和完整性，延緩細胞的凋亡，并及時修復受損的細胞，減少細胞損傷和破壞所導致的皺紋形成或加重。表皮和真皮水分大量丟失，表皮細胞層次變薄，真皮內膠原纖維減少，排列紊亂。表皮和 真皮均變薄，含水量減少。皮膚缺少水的滋潤，皮膚干燥、萎縮，出現皮膚老化，缺乏彈性，出現皺紋。透明質酸(簡稱HA)是由N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸的雙糖重復單元構成的黏 多糖類物質，白色無定形固體，有極強的吸濕能力。它是人體皮膚組成成分之一，也是細胞間 質中重要的成分。由于它的高粘稠度和向空間伸展度以及疏松、膨大的分子形態(tài)，使它在溶 液中占據較大的空間，能結合大量水分，而皮膚水分決定著其濕潤水平，這都與HA含量密切相 關。隨著年齡的增長，皮膚中HA含量降低，使皮膚保水功能減弱，產生皺紋。HA具有較強的黏 彈性和潤滑性，涂于皮膚表面，可形成一層保濕透氣膜，保持皮膚滋潤，有利于皮膚對營養(yǎng)物 質的吸收，增加皮膚彈性，對皮膚老化、觸覺和外觀都有重大改善作用；HA在保濕的同時又是良好的透皮吸收促進劑，部分低分子量的透明質酸還可滲透到皮膚的真皮層，改善和調節(jié)皮膚 中間代謝，使皮膚濕潤光滑、細膩柔嫩、富有彈性，從而起到延緩皮膚衰老、防皺抗皺和美容 保健的作用。神經酰胺是一種水溶性脂質物質，它占皮膚角質層脂質的主要成分，在保持角質層水份平 衡上起重要的作用。由于它和構成皮膚角質層的物質結構相近，因此能很快滲透進皮膚與角 質層中的水結合，形成一種網狀結構，并通過氫鍵形成層狀結構的分子復合體，促進表皮層的 水合作用，從而改善皮膚保持水分的能力，維持皮膚水分的平衡。但隨著年齡增長進入老年 期，皮膚中存在的神經酰胺逐漸減少，干性皮膚和粗糙皮膚型等皮膚異常癥狀的出現亦是由于 神經酰胺量減少所致。神經酰胺是高效保濕劑易被皮膚吸收，在皮膚應用有改善和調節(jié)皮膚 細胞間質的組成和功能，并能促進其他營養(yǎng)物質滲透，適用于粗糙、干燥多屑皮膚，尤其適合 對老年干性皮膚保濕。同時，神經酰胺能增強表皮細胞的內聚力，修復皮膚屏障功能，從而緩 解角層的脫屑癥狀，幫助皮膚再恢復，改善皮膚外觀，令皮膚光滑有彈性，也可避免或減少因紫 外線照射而引起的表皮剝落，從而有助于皮膚抗衰老。神經酰胺并有助于減輕或消除皮膚上 的皺紋，除去皮膚皮炎，保持皮膚的彈性。而這些天然皮膚保濕因子(透明質酸和神經酰胺 )聯合應用，不僅能通過吸收空氣中的水份保持皮膚的水份，而且還能有效地防止皮膚組織中 水份的揮發(fā)或丟失，從而，發(fā)揮出良好的皮膚保濕效果。通常面部許多細小皺紋是由于皮膚組 織短暫性缺水所致，因此，通過天然皮膚保濕因子(透明質酸和神經酰胺)的保濕或補水作用， 可使因皮膚缺水而導致的細小皺紋得以減輕或消失。天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)均是天然生物活性物質，且人參皂苷和紅 景天素的皮膚抗老化作用已得到大量動物和人體試驗證明。人參和紅景天均有滋陰壯陽，促 進細胞增殖，組織修復再生之功效。有實驗證實，人參皂苷和紅景天素能增強組織SOD酶活性 ，降低LPO含量，還有促進細胞生長增殖作用和增強皮膚細胞抗衰老能力。外用人參皂苷和紅 景天素三個月以上所進行的眼瞼皮膚掃描電鏡觀察發(fā)現，皮膚膠原纖維有新生細纖維出現， 纖維網有空隙存在，纖維束之間交織松軟，成纖維細胞數增多，新生性架橋增多，老化性架橋 數目相對減少，新生皮膚膠原有增加趨勢;彈性纖維表面光滑，輪廓清晰，變性物質顆粒附著 較少或沒有，真皮的結構清楚，乳頭層和網狀層結構得以辨認，皮膚組織明顯改善，并呈現年 輕化趨勢，這證明人參皂苷和紅景天素不僅具有較好的預防和延緩皮膚老化效果，而且能使皮 膚抗衰老和抗皺紋效果更加持久和長遠。而將這些功效成分通過納米乳載體復合應用，其皮 膚抗皺效果出現快慢結合，遠近效果同現，其表達形式更具創(chuàng)新和特色。冷凍干燥是利用升華原理進行干燥的一種技術，是將被干燥的物質在低溫下快速凍結，然后在適當的真空環(huán)境下，使凍結的水分子直接升華成為水蒸氣逸出的過程。物質在干燥前始 終處于低溫(凍結狀態(tài))，同時冰晶均勻分布于物質中，升華過程不會因脫水而發(fā)生濃縮現象， 避免了由水蒸氣產生泡沫和氧化等副作用。干燥物呈干海綿多孔狀，體積基本不變，極易溶于 水而恢復原狀。在最大程度上防止干燥物質的理化和生物學方面的變性。而皮膚外用液態(tài)復 合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳由液態(tài)轉變?yōu)楣虘B(tài)，實際上就是冷凍干燥的結果。真空冷凍干 燥將含有水分的復合納米乳在低溫狀態(tài)下預冷后，再在低溫真空條件下，對其升溫加熱，使復 合納米乳中凍結成的細小冰晶顆粒直接升華，由冷凝器捕集，使含有水分的液態(tài)復合納米乳轉 變成功效完全一致的固態(tài)復合納米乳。而在皮膚外用液態(tài)復合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳轉 變?yōu)楣虘B(tài)納米乳過程中，甘露醇和甘氨酸發(fā)揮著十分重要的作用，成為使液態(tài)復合納米乳成形 的重要添加劑。甘露醇和甘氨酸共同作為凍干賦形保護劑之所以能對液態(tài)復合納米乳起到較 好的賦形和保護效果，是因為甘露醇和甘氨酸隨納米乳的凍結和結晶的生長，逐漸濃縮，并分 布在納米乳乳滴周圍，阻止乳滴的融合;在納米乳冷凍干燥過程中，賦形保護劑的加入使液態(tài) 復合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳的粘性增加，弱化了水的結晶過程，從而減少了冰晶對乳滴的 損傷;而且，賦形保護劑加入提高了乳劑的玻璃化轉變溫度，并在一定的降溫速率下使乳劑實 現部分玻璃化，避免了晶態(tài)固化，減少了冰晶對乳滴的損傷；同時，可改善復合納米乳外觀及再 分散性能發(fā)揮重要作用。本發(fā)明的主要技術構思和內容本發(fā)明的技術構思分為三個部分:第一部分:空白納米乳制備。主要包括:①空白納米乳 工藝流程和操作方法設計;②高質量空白納米乳的制備。第二部分:皮膚外用液態(tài)類肉毒素( 六勝肽)復合納米乳制備。主要包括:①皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳工藝流程 和操作方法設計;②皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備;第三部分:皮膚外用 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備。主要包括:①皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合 納米乳工藝流程和操作方法設計;②皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備。第一部分:空白納米乳制備:①稱取10-20克重量的肉豆蔻酸異丙酯(IPM)置于100mL三角 燒瓶中，使之為油相(A);②根據km等于3的設計系數配制乳化劑和助乳化劑混合物，即按辛酸 癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol):聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例， 再取30-40克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置于另一容器之中，充分攪拌，混合均勻，從形成S/C混合物(B);③ 按油相(A) :S/C混合物(B):純蒸餾水(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二 醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 30-50克的純蒸餾水(C)依此加入上述(A)中的100mL三角燒瓶中；④立即選用定時恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以 200rpmmin—^勺轉速磁力攪拌30min，即可得到供皮膚外用的空白納米乳載體。第二部分:皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備。①準確稱取5-15克重量的 肉豆蔻酸異丙酯(IPM)置于100mL三角燒瓶之中；再用精密分析天平分別準確稱取維生素 E(VE)2-IO克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克、紅景天素3-30毫克，加入至上述 盛有肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合，盡可能溶解；實在不能溶解的部 分，可滴加少許無水乙醇以促使其完全溶解，并將之作為油相(A);②再用精密分析天平分別 準確稱取六勝肽1-10毫克、超氧化物歧化酶(S0D)0.2-2.0毫克、還原型谷胱甘肽 (GSH)0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質酸20-200毫克、神經酰胺20-200毫克，加入適量 蒸餾水使之完全溶解，然后，再用蒸餾水加至30-50毫升，使之作為水相(C);④根據km等于3的 設計系數配制乳化劑和助乳化劑混合物，即按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol):聚甘油 脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例，分別準確稱取30-40克辛酸癸酸聚乙二醇 甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置于另一容 器之中，充分攪拌，混合均勻，完全溶解，使之形成S/C混合物(B) ; 最后，再按油相(A) :S/C混 合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂 肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) 、 30-50克的水相(C)依此加入上述油相(A)中的100mL三 角燒瓶中；⑥此時，立即選用定時恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一^勺轉速磁 力攪拌30min，即可得到供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。第三部分:皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備:①稱取5-15克重量的肉豆蔻 酸異丙酯置于100mL三角燒瓶之中；再用精密分析天平分別稱取維生素E 2-10克，蛋黃卵磷脂 0. 5-5. 0克，人參皂苷O. 1-2. 0克、紅景天素3-30毫克，加入至盛有肉豆蔻酸異丙酯的100mL三 角燒瓶之中，充分混合，盡可能溶解；實在不能溶解的部分，可滴加少許無水乙醇以促使其完全 溶解，并將之作為油相(A);②再用分析天平分別稱取六勝肽1-10毫克，超氧化物歧化酶 0. 2-2. 0毫克，還原型谷胱甘肽O. 2-2. 0克，胎牛血清2-20克，透明質酸20-200毫克，神經酰胺 20-200毫克，加入適量蒸餾水使之完全溶解，然后再用蒸餾水加至30-50毫升，使之作為水相 (C);④根據km等于3的設計系數配制乳化劑和助乳化劑混合物.即按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 (Labrasol):聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例，稱取30-40克辛酸癸酸 聚乙二醇甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置 于另一容器之中，充分攪拌，混合均勻，完全溶解，使之形成S/C混合物(B)48克;⑤最后，按油相 (A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 30-50克的水相(C)依此加入上述油相(A)中的 100mL三角燒瓶中；⑥此時，立即選用定時恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一1 的轉速磁力攪拌30min后，再加入15-30克甘露醇和2-8克甘氨酸，再以200rpmmin—工轉速的磁力 攪拌器攪拌30min，并進行冷凍干燥處理，即可得皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳本發(fā)明的主要技術創(chuàng)新點用本發(fā)明設計的組方及工藝技術制備的納米乳同時作為不同作用途徑的多種復雜功效成 分的同一載體，即主要抗皺功效成分類肉毒毒素(六勝肽)和輔助功效成分自由基清除劑(SOD 和GSH)，促細胞生長劑(胎牛血清)，皮膚營養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透 明質酸和神經酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等的載體系統，目前國際 上未見報道，為本發(fā)明首創(chuàng);②用本發(fā)明設計的組方及工藝技術制備的納米乳作為功效成分的 有效載體系統，將主要皮膚抗皺功效成分一類肉毒毒素(六勝肽)作為面部運動神經抑制和面 部表情肌松弛劑制備的皮膚抗皺納米乳，用于對抗由面部表情運動產生的皺紋，并發(fā)揮快速見 效作用，同時將輔助皮膚抗皺功效成分一 自由基清除劑(SOD和GSH)，促細胞生長劑(胎牛血清 )，皮膚營養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質酸和神經酰胺)，天然植物或 中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)制備的延緩皮膚衰老(抗皮膚生理性衰老)，增強類肉毒毒 素(六勝肽)皮膚抗皺效果的乳米乳，并發(fā)揮緩慢而持久效果，使快慢結合，近期和遠期效果結 合，內外抗皺效果并用的設計理念，目前國際上未見報道，為本發(fā)明首創(chuàng);③用本發(fā)明設計的組 方及工藝技術制備的可供皮膚外用的液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，且兩者可以 相互轉化的納米乳(即由液態(tài)轉為固態(tài)，或者由固態(tài)轉為液態(tài))，目前國際上未見報道，為本發(fā) 明首創(chuàng);④外用皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的雙效液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納 米乳，目前國際上未見報道，為本發(fā)明首創(chuàng)。本發(fā)明的主要注意事項第一，皮膚抗皺的主要功效成分一類肉毒毒素(六勝肽)的用量非常關鍵。劑量太小，無 法達到面部神經抑制和面部表情肌松弛的作用；而劑量太大，可能過多抑制面部神經傳導和面 部表情肌松弛的作用，引起面部表情不自然和不協調；而且，由于六勝肽價格昂貴，添加過多， 還可能造成產品成本過高或不必要浪費。第二，皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的輔助功效成分一 自由基清除劑(SOD和GSH)，促 細胞生長劑(胎牛血清)，皮膚營養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質酸和神 經酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等，具有各自不同的作用途徑和功效，其添加比例也是有明確的規(guī)定和要求，過多或過少，都難以達到設計效果和實際功效，尤其是 生物制劑的添加更應控制好劑量。第三，皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的輔助功效成分中的胎牛血清為血液制品，它必 須系來源于健康胎的血清，且必須在檢定后剔除含有致病性微生物(包括致病菌、病毒、支原 體、衣原體等)和遺傳變異的胎牛血清，且大部分血清在使用前必須經過加熱滅活處理，即在 56。C恒溫水浴的條件下滅活30分鐘。滅活的目的主要是去除血清中可能含有的補體成分，避 免補體對皮膚組織和細胞產生毒性作用。第四，在對胎牛血清進行熱滅活時，溫度和時間必須嚴格按照規(guī)定。如滅活溫度過高，時 間過長，均可能會損失一些對皮膚組織和細胞生長有利的細胞生長因子及其它對熱敏感的生 物活性成分；因此，對于一些品質高的胎牛血清和新生牛血清可以考慮不經滅活直接使用。第五，在對胎牛血清滅活前，應盡量避免長時間將血清置于高溫環(huán)境中，以防止血清出現 污染而造成浪費。而且，在操作胎牛血清時務必注意無菌觀念和無菌操作；另外，胎牛血清在 不馬上使用時應儲存在一2(TC冰箱，同時應避免將其反復凍融。收集或采集胎牛血清及滅活 處理后，最好是分裝成小包裝，以方便使用時融化或使用。除此之外，已融化后的胎牛血清，在 4"C冰箱中不宜長時間存放，應盡快使用。第六，胎牛血清解凍的正確操作很重要， 一般規(guī)范的操作規(guī)程應是:在將胎牛血清從一 2(TC冷凍箱中取出后，先置于2-8。C冰箱中使之溶解，然后，再在室溫下使之全溶。但必須注意 的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻，切莫劇烈振蕩，這樣才不會使產品質量受損。第七，胎牛血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現，可能是血清中脂蛋白變性造成；血纖維 蛋白在血清解凍后也會存在于血清中，亦是造成血清沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物 ，并不影響血清本身的質量，若絮狀沉淀物不太多，可直接使用；若絮狀沉淀物太多，應先設法 去除，即可將其分裝在無菌容器中，置于離心機中稍微離心即可。第八，由于添加功效成分較多，可能是油溶或水溶或醇溶或水油兼溶，因此，實際配制時 ，應根據各自功效成分溶解特性，先將固體或液體功效成分溶于同相之中。如功效成分屬水溶 性，則先將它溶于水相之中；如功效成分屬油溶性，則先將它溶于油相之中；如功效成分屬醇溶性，則先將它溶于醇劑之中，再分別溶于油相或水相或乳化齊IJ/助乳化劑體系之中，之后，再 按本發(fā)明設計的比例進行復合納米乳配制。第九，由于納米乳是一個自發(fā)形成的體系，因此在制備納米乳時，應以相圖為基礎，綜合考慮乳化劑、助乳化劑、油相、水相以及Km溫度的作用。而納米乳配制時的油相、水相、 乳化劑、助乳化劑的比例非常關鍵，但在實際配制其它功效納米乳時，可根據配制過程中出現的具體情況適當調整油相、水相、乳化劑、助乳化劑的比例，但上下最好不要超過5%。如此 方法仍無法解決，則可根據偽三相圖進行估算，再采用滴定的方式，即用水相滴定或乳化劑/ 助乳化劑混合物進行滴定。滴定用滴管或注射器均可， 一滴滴緩慢進行;滴定過程中，攪拌器 仍正常工作，直至滴定配制完全透明和澄清為止;此時，應計算準確滴定所消耗量并記錄之，以 便再次配制時參考。第十，因配方中有些功效成分添加量極微，故應稱量準確，溶解完全，蕩洗干凈，以免影響 其實際濃度或效果；且在按照所添加的功效成分各自的理化特性及溶解特性完成溶解并添加 至納米乳各液相時再次出現渾濁或不溶解時，仍可先根據偽三相圖進行估算，在納米乳配制過 程的最后攪拌階段，采用水相滴定或者醇滴定，或乳化劑/助乳化劑混合物滴定，或乳化劑或助 乳化劑單獨滴定，直至納米乳完全澄清和透明為止。偽三元相圖法是研制納米乳相行為最常 用和基本的方法，本設計可采用繪制偽三元相圖法進行納米乳的制備，選擇將水相和油相按比 例混合制備成二元液，同時用S/C混合液作為滴定液對二元液進行滴定，這樣在滴定過程中只 需觀察一次相變過程，降低了用水相或油相作為滴定液進行滴定時出現兩次相變而產生的誤 差。第十一，按照本發(fā)明專利的技術工藝和制備方法，也可選擇其他乳化劑/助乳化劑體系， 但最好是選擇能與各功效成分相互匹配，以及無色、無味、無臭、透明、且高度安全、對皮 膚無刺激性的乳化劑/助乳化劑體系。這樣，不僅可以替代進口試劑，來源方便，且可大大降低 成本;不過，選擇新的乳化齊iJ/助乳化劑體系及油相和水相時，應先摸索并計算好比例。第十二，本發(fā)明制備固態(tài)復合納米乳所采用的賦形保護劑為甘露醇與甘氨酸的混合物。 其中，甘露醇的結晶為羽毛狀，乳滴分散在結晶的片層之間，因此能得到外觀較好的凍干制品 。通常甘露醇的量越大，產生的結晶空隙越多，其納米乳滴分散越均勻，且重分散性越好。而 甘露醇與甘氨酸合用，其共晶點溫度相對較高，這能有效保持樣品凍干過程中固態(tài)的形狀，減 少樣品的皺縮，提高凍干速率，縮短凍干時間。但甘露醇和甘氨酸最好在形成納米乳前加入 ，如配制好的納米乳再加入 一方面不好溶解，浪費時間，而且，也影響賦形和保護的效果。第十三，功效成分在納米乳液體系中的釋放和分散程度，取決于這些功效成分在納 米乳體系中的濃度。 一般說，功效成分在納米乳載體中的濃度越高，則功效成分釋放和分散就 越快，因此，功效成分在納米乳中的濃度不可太低，否則功效成分會強烈吸附于乳化劑或表 面活性劑組成的液膜上，從而造成擴散受阻;另一方面，功效成分濃度低，體系濃度差小，擴散 就慢，導致功效成分生物利用率降低，效果下降。第十四，納米乳較其它體系最突出的一個特點就是可以增溶功效成分，不管是水溶性的功效成分，還是脂溶性的功效成分，在納米乳液中都可以達到很大的增溶量。而功效成分在納 米乳內的增溶，對功效成分的緩釋和控釋具有重要的意義。因為小液滴內功效成分釋放，必須 先通過由乳化劑或表面活性劑分子組成的界面膜，此過程通常是較慢，而功效成分在納米乳液 的小液滴內的總濃度卻可達很高。而且，功效成分增溶在納米乳中，可減少用藥次數，緩慢釋 放藥物的目的。第十五，納米乳雖然屬于熱力學穩(wěn)定系統，但溫度過高和過低則直接影響到它的穩(wěn)定性 。低溫時，乳化劑或表面活性劑主要分布在水相，而高溫時則主要分布在油相。溫度的升高， 乳化劑或表面活性劑的親油性增大，親水性減弱，形成反膠團，因此，非離子乳化劑或表面活性 劑的親水基與水形成的氫鍵強度減弱，甚至斷裂，將導致乳化劑或表面活性劑從水溶液中析出 ，即產生濁點現象。溫度降低，由于非離子乳化劑或表面活性劑的親水性大于親油性，它與水 形成正膠團，因此，也將產生類似的濁點現象;只有當體系處在某個中間溫度，非離子乳化劑或 表面活性劑則能形成層狀膠團，從而真正達到平衡，體系也維持平衡和穩(wěn)定。因此，納米乳需 要在常溫下保存。第十六，乳化劑或表面活性劑的選擇上首先需要考慮的就是它的親水親油平衡(HLB)值 ，如選擇HLB介于8 18之間乳化劑或表面活性劑，則它將形成0/W型納米乳，而選擇3 6之間 的乳化劑或表面活性劑則易形成W/0型納米乳。本發(fā)明設計選擇的乳化劑或表面活性劑 Labrasol主要來源于植物，它的HLB值為14，它適用于功效成分制劑的高HLB值的非離子型兩 性輔料。而作為助乳化劑或助表面活性劑的Plurol Oleique CC 497主要作為非離子型乳化 劑及納米乳的助表劑，將兩種表面活性劑按一定比例混合能形成混合膜，可以制得更為穩(wěn)定 的復合納米乳制劑。
具體實施方式
1、 主要原料①空白納米乳主要制備原料肉豆蔻酸異丙酯(IPM)，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 (Labrasol)，聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，純蒸餾水，無水乙醇等；②主要功效 成分:類肉毒素(六勝肽)；③輔助功效成分維生素E，蛋黃卵磷脂，人參皂苷，紅景天素，超氧 化物歧化酶(SOD)，還原型谷胱甘肽(GSH)，胎牛血清，透明質酸，神經酰胺第三部分:皮膚外用 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備；④冷凍干燥賦形保護劑甘露醇，甘氨酸。2、 主要配制器材十萬分之一電子天平、萬分之一電子天平、千分之一藥物天平、液體快速混合器、定時 恒溫磁力攪拌器、石英管玻璃雙重蒸餾水器、大容量低溫離心機、冷凍干燥機、無菌過濾器、各種規(guī)格容器、燒瓶、燒杯、吸管、采血器等。一、 空白納米乳制備(以配制100g為例) ①用千分之一藥物天平準確稱取15g重量的肉豆蔻酸異丙酯，并立即置于經過洗消過的100mL潔凈三角燒瓶之中，加蓋后，用彩色記號筆清楚地標記為油相(A) 15g。② 按照事先已設計好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準確稱取36g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12g聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經過洗消過的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開液體快速混 合器，并將其調至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5min后，關 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號筆清楚標記為S/C混合物(B)48g。③ 再按油相(A) :S/C混合物(B):純蒸餾水(C) =15:45:40的比例，分別取45g辛酸癸酸聚乙 二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 40g的純蒸餾水(C)依此加入上 述(A)中的100mL三角燒瓶之中，加蓋，固定于定時恒溫磁力攪拌器上。④ 檢査固定放置牢固后，立即啟動定時恒溫磁力攪拌器開關，在室溫25'C條件下，以 200rpmmin一1的轉速磁力攪拌30min 。⑤ 關閉定時恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為淡淡藍色，清亮，透明，流 體性和分散性好，有明顯可見的乳光，即為100g的皮膚外用空白納米乳。二、 皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備(以配制100g為例) ①用千分之一藥物天平準確稱取10g重量的肉豆蔻酸異丙酯，立即置于經過洗消過的100mL潔凈三角燒瓶之中。② 再用萬分之一的精密分析天平分別稱取維生素E(VE)2g，蛋黃卵磷脂O. 8g，人參皂苷0. 2g，紅景天素10mg，加入至已盛有10g肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合 ，盡之可能溶解；實在不能溶解的部分，可用10mL吸管緩慢滴加分析醇(AR級)的無水乙醇，以促 使其完全溶解，并用記號筆清楚標記為油相(A)。③ 再用十萬分之一的精密分析天平分別稱取六勝肽5mg、超氧化物歧化酶(SOD) lmg(丁氏 S0D微量快速測定法定量的6000U)，還原型谷胱甘肽(GSH)O. 5g，胎牛血清5g，透明質酸50mg，神 經酰胺50mg，置于同一個經過洗消滅菌的50mL潔凈的三角燒瓶之中。④ 直接加入40mL的蒸餾水至上述盛有各種功效成分的50mL三角燒瓶之中，加蓋，并將此三 角燒瓶迅速置于液體快速混合器上;打開液體快速混合器，并將其調至II檔，充分混合均勻使 之完全溶解，3-5min后，關閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號筆清楚標記為水 相(C)。⑤ 按照事先已設計好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準確稱取36克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12克聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經過洗消過的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開液體快速混 合器，并將其調至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5分鐘后，關 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用記號筆清楚標記為S/C混合物(B)。⑥ 最后，再按油相(A) : S/C混合物(B):水相(C)等于l5:45:40的比例，取40g的水相(C)直接 加入至上述油相(A)中的100mL三角燒瓶中；然后，再取45g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油 脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B)直接加入至上述油相(A)和水相(C)混合的100mL三角 燒瓶中。⑦ 立即選用定時恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一^勺轉速磁力攪拌 30min。⑧ 關閉定時恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為清亮，透明，流體性和分 散性好，有明顯可見的乳光，即為100g可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。三、皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳制備(以配制100g為例)① 用千分之一藥物天平準確稱取10g重量的肉豆蔻酸異丙酯，立即置于經過洗消過的 100mL潔凈三角燒瓶之中。② 再用萬分之一的精密分析天平分別稱取維生素E(VE)2g，蛋黃卵磷脂O. 8g，人參皂苷0. 2g，紅景天素10mg，加入至已盛有10g肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合 ，盡之可能溶解；實在不能溶解的部分，可用10mL吸管緩慢滴加分析醇(AR級)的無水乙醇，以促 使其完全溶解，并用記號筆清楚標記為油相(A)。③ 再用十萬分之一的精密分析天平分別稱取六勝肽5mg、超氧化物歧化酶(SOD) lmg(丁氏 S0D微量快速測定法定量的6000U)，還原型谷胱甘肽(GSH)O. 5g，胎牛血清5g，透明質酸50mg，神 經酰胺50mg，置于同一個經過洗消滅菌的50mL潔凈的三角燒瓶之中。④ 直接加入40mL的蒸餾水至上述盛有各種功效成分的50mL三角燒瓶之中，加蓋，并將此三 角燒瓶迅速置于液體快速混合器上;打開液體快速混合器，并將其調至II檔，充分混合均勻使 之完全溶解，3-5min后，關閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號筆清楚標記為水 相(C)。⑤ 按照事先已設計好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準確稱取36克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12克聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經過洗消過的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開液體快速混合器，并將其調至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5分鐘后，關 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用記號筆清楚標記為S/C混合物(B)。⑥ 最后，再按油相(A) : S/C混合物(B):水相(C)等于l5:45:40的比例，取40g的水相(C)直接 加入至上述油相(A)中的100mL三角燒瓶中；然后，再取45g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油 脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B)直接加入至上述油相(A)和水相(C)混合的100mL三角 燒瓶中。⑦ 立即選用并啟動定時恒溫磁力攪拌器，在室溫25。C條件下，以200rpmmin—^勺轉速磁力 攪拌30min。⑧ 關閉定時恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為清亮，透明，流體性和分 散性好，有明顯可見的乳光，即為100g可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。⑨ 用千分之一藥物天平準確稱取22g甘露醇和3g甘氨酸，分別加入上述皮膚外用的液態(tài)類 肉毒素(六勝肽)復合納米乳中，加蓋，立即用定時恒溫磁力攪拌器在室溫25'C條件下，以 200rpmmin—^勺轉速磁力攪拌30min后，關閉定時恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶。⑩ 100mL三角燒瓶打開瓶蓋，先置于-2(TC冰箱預凍，12 h后取出，然后置于-5(TC的環(huán)境 中保持3. 5h，待達到預凍效果之后，立即置于冷凍干燥機中；開動真空系統，將凍干箱內壓力抽 至7Pa，并保持此真空度；讓此復合納米乳樣品自然升溫至-2(TC，保溫8h，使其中大部分水分升 華;最后，緩慢將溫度升至(TC，再通過加熱板將此復合納米乳樣品溫度緩慢加熱至3(TC，去除 殘余水分，在真空狀態(tài)下壓蓋，即可得到冷凍干燥后的皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納 米乳。另外，如需要將此固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳再次轉化為液態(tài)類肉毒素(六勝肽 )復合納米乳，只要在此固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳中加入40mL蒸餾水，置于液體快 速混合儀器上振搖3-5 min，此時，固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳可迅速分散于蒸餾水 之中，再次形成均勻一致、流體性和分散性較好的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。本發(fā)明所述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行的描述，并非對本發(fā)明構思和 范圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設計思想的前題下，本領域中的學者或工程技術人員對本發(fā) 明的技術方案作出的各種變型和改進，均應落入本發(fā)明的保護范圍，本發(fā)明請求保護的技術 內容，已經全部記在權利要求書中。
權利要求
1. 一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳，其特征在于液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳是由下述重量份配比的原料制成肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E 2-10克、蛋黃卵磷脂0.5-5.0克、人參皂苷0.1-2.0克、紅景天素0.003-0.03克、六勝肽0.001-0.01克、超氧化物歧化酶0.0002-0.002克、還原型谷胱甘肽0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質酸0.02-0.2克、神經酰胺0.02-0.2克、蒸餾水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克；固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳是由下述重量份配比的原料制成肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E2-10克、蛋黃卵磷脂0.5-5.0克、人參皂苷0.1-2.0克、紅景天素0.003-0.03克、六勝肽0.001-0.01克、超氧化物歧化酶0.0002-0.002克、還原型谷胱甘肽0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質酸0.02-0.2克、神經酰胺0.02-0.2克、蒸餾水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克、甘露醇15-30克、甘氨酸2-8克。
2.根據權利要求l所述的皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復 合納米乳，其中液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳各原料最佳的重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂O. 8克、人參皂苷O. 2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克；固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。
3.根據權利要求l所述的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備 方法，其特征在于包括以下步驟 1) 按液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內原料充分混合、溶解，不能 溶解的部分加少許無水醇促進完全溶解，并將作為油相(A)備用； 2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質酸、神經酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用； 3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分攪拌均勻，使之形成S/C混合物(B)備用； 4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合 物(B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中； 5) 在室溫條件下，選用定時恒溫磁力攪拌器，并以200rpmmin-l的轉速磁力攪拌30min ，即可得到可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。
4.根據權利要求l所述的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳的制備 方法，其特征在于包括以下步驟 1) 按固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內原料充分混合、溶解，不能 溶解的部分加少許無水醇促進完全溶解，并將作為油相(A)備用； 2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質酸、神經酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用； 3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分攪拌均勻，使之形成S/C混合物(B)備用； 4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合 物(B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中； 5) 在室溫條件下，選用定時恒溫磁力攪拌器以200rpmmin-l的轉速磁力攪拌30min，再 加入甘露醇和克甘氨酸，再以200rpmmin-l的轉速磁力攪拌30min，并進行冷凍干燥處理，即 可得到可供皮膚外用的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復合納米乳及其制備方法。液態(tài)類納米乳各原料重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素0.01克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽0.5克、胎牛血清5克、透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克；固態(tài)類納米乳各原料重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素0.01克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽0.5克、胎牛血清5克、透明質酸0.05克、神經酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。
文檔編號A61K8/85GK101214200SQ20081030015
公開日2008年7月9日 申請日期2008年1月21日 優(yōu)先權日2008年1月21日
發(fā)明者宇 丁, 丁克祥, 朱曉亮 申請人:丁克祥