專利名稱：一種積雪草甙及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種積雪草甙及其制備方法，屬于藥用活性成分的提取技術(shù)領(lǐng)域。(二)
背景技術(shù)：
積雪草為雙子葉植物傘形科植物積雪草的全草或帶根全草，具有清熱利濕，消腫解毒之 功效；用于治療濕熱黃疸，痢疾風(fēng)疹、喉腫、腫毒和跌打損傷等。積雪草甙是積雪草提取物 中的有效成分之一。積雪草甙具有多種藥理作用(1)美容有抗氧化作用，祛除老死角 脂層，促進皮膚的新陳代謝，增加皮膚的彈性及光滑，補充營養(yǎng)素。(2)保健調(diào)節(jié)內(nèi)分 泌，改善腸道功能，延緩衰老，改善記憶，改善貧血，促進睡眠，改善腸胃功能。(3)減 肥降低膽固醇，清除多余脂肪與降低超重，調(diào)節(jié)大腦的神經(jīng)遞質(zhì)，補充大腦神經(jīng)中樞的營 養(yǎng)。(4)促進傷口愈合和治愈皮膚損傷能治療皮膚潰瘍，如頑固性創(chuàng)傷、皮膚結(jié)核、麻 風(fēng)等。對小鼠、豚鼠、兔肌肉注射或皮下植入時可促進皮膚生長、局部白細胞增多、結(jié)締組 織血管網(wǎng)增生、粘液分泌增加、毛和尾的生長加速等。(5)調(diào)節(jié)免疫功能積雪草甙可抑 制自身抗體的形成，降低免疫球蛋白，改善細胞免疫功能。(6)抗菌對金黃色葡萄菌、 溶血型鏈球菌、各種痢疾桿菌、傷寒桿菌均有抑制作用。(7)抗?jié)冏饔每梢种拼笫笥?門結(jié)扎潰瘍和應(yīng)激性潰瘍。(8)對中樞神經(jīng)的作用刺激中心神經(jīng)系統(tǒng)，從而改善記憶和 抗疲勞。(9)鎮(zhèn)靜、安定作用可用于治療失眠癥。另據(jù)文獻報道，積雪草甙對靜脈功能 不全而致的長期不能愈合的下肢漬瘍及外傷病例、手術(shù)或創(chuàng)傷引起的肌腱粘連、灼傷等因素 所致的創(chuàng)面恢復(fù)后的瘢痕疙瘩以及硬皮病均有一定療效。積雪草甙還能輕度抑制乙酰膽堿的 作用，并用于乳腺增生的治療。積雪草甙的保健、藥用功效如此之多，但到目前為止，很少有關(guān)于從積雪草中提取高純 度積雪草甙的相關(guān)報道。CN1491656A公開了從積雪草中提取積雪草提取物的工藝步驟，但該 提取物的主要成分為積雪草甙和羥基積雪草甙，二者在提取物中的含量為10 95%，沒有將 積雪草甙和羥基積雪草甙分開。CN101210040A公開了一種積雪草甙化學(xué)對照品的分離制備方 法，可獲得純度大于98%的積雪草甙化學(xué)對照品，但該方法是以重量含量30 97%的積雪草 甙提取物為原料進行分離提純的，必須先從積雪草中提取出一定含量的積雪草甙提取物。(三)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是采用先進的工藝方法從積雪草中提取、分離、純化積雪草甙，其工藝流程簡單，生產(chǎn)成本低，所得提取物中積雪草甙的含量高。本發(fā)明的技術(shù)方案 一種積雪草甙，它是以積雪草為原料，用水或低碳醇提取，提取液經(jīng)過柱層析分離純化、樹脂脫色、析晶、重結(jié)晶、干燥而制得的以積雪草甙為主要成分的提取物，其中積雪草甙的重量含量》95%。上述積雪草甙的制備方法為取積雪草，用水或低碳醇加熱回流或超聲提取1 3次，每次5 180min，合并提取液，濃縮，離心，上清液進大孔樹脂柱進行純化，先用水再用低碳 醇洗柱，收集醇洗脫液；洗脫液進脫色樹脂柱，收集流出液，再用低碳醇進行洗脫，將洗脫 液和流出液合并，濃縮后放置12 72小時，析出晶體，用低碳醇加熱溶解晶體，溶解液濃縮 后放置12 72小時，析出晶體，洗滌，干燥，即得積雪草甙。所用的積雪草原料可以是鮮積 雪草或干積雪草。上述制備方法中，可用加熱滲漉提取代替加熱回流或超聲提取，滲漉速度O. 1 2BV/h， 滲漉時間4 24小時。更具體的制備方法為將積雪草粉碎(粉碎后有利于有效成分的充分溶出)，用2 20 倍(優(yōu)選為3 12倍)重量的水或低碳醇加熱滲漉、加熱回流或超聲提取，合并提取液，濃 縮至提取液體積的1/10 1/2，離心，上清液進大孔樹脂柱進行純化，先用純化水洗柱1.5 4h，再用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，收集醇洗脫液(為樹脂重量的1 4倍)；洗脫液 進脫色樹脂柱，收集流出液，再用樹脂重量2 6倍的低碳醇進行洗脫，將洗脫液和流出液合 并，濃縮至其體積的1/15 1/2，放置12 72小時，析出晶體，抽濾，洗滌，用5 15倍晶體 重量的低碳醇加熱至35 9(TC溶解晶體，將溶解液濃縮至其體積的1/15 1/2，放置12 72 小時，析出晶體，抽濾，洗滌，干燥，粉碎，即得積雪草甙。加熱滲漉提取時，溫度為40 6(TC;加熱回流提取時，溫度為30 10(TC，提取時間為 每次1 3小時；超聲提取時，工作頻率15 80KHz，提取時間為每次5 100min。以上所述的低碳醇為甲醇、乙醇、丁醇或戊醇，其體積濃度為30% 100%。當采用回流 提取時，提取次數(shù)和醇濃度是影響收率和含量的關(guān)鍵因素，提取次數(shù)優(yōu)選為2次，醇濃度優(yōu) 選為30% 95%。所述的濃縮均為真空濃縮，濃縮溫度40 6(TC，真空度O. 06 0. lMPa。 提取液離心時采用三足離心，轉(zhuǎn)速為1700r/min。 大孔樹脂柱純化時，液體流速為O. 5 2BV/h。所述的大孔樹脂柱是以苯乙烯為骨架的D101型、HPD-100型、D130型或AB-8型大孔吸附 樹脂。申請人經(jīng)過篩選實驗發(fā)現(xiàn)，這幾種大孔吸附樹脂對積雪草甙的純化效果更好，而且其價格便宜，可以多次重復(fù)使用，成本較低。所述的脫色樹脂柱為大孔型脫色樹脂柱、中性氧化鋁樹脂柱或者活性炭柱。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用現(xiàn)代生物提取技術(shù)，采用水提或醇提、柱層析分離純化、 脫色、析晶、重結(jié)晶的工藝路線從積雪草中提取積雪草甙，通過樹脂柱層析和重結(jié)晶來提高 積雪草甙的純度，使得提取物中積雪草甙的重量含量達95%以上(HPLC法測定)；而且其工 藝流程簡單，生產(chǎn)周期短，有機溶劑用量省，生產(chǎn)成本低，適于大批量生產(chǎn)。 具體實施例方式
本發(fā)明的實施例l:積雪草甙的制備方法，其步驟如下1) 提取將鮮積雪草粉碎后投入潔凈的提取罐中，加入8倍重量的60% (v/v)乙醇，控 制溫度在85'C，第一次回流提取2h (從溶液沸騰開始計時)，然后壓出藥液，第二次再加入 6倍重量的60% (v/v)乙醇，回流提取2h，合并提取液。2) 濃縮、離心將提取液導(dǎo)入潔凈的濃縮器中進行真空濃縮，溫度控制在5(TC，真空 度為0.08MPa，濃縮至提取液體積的l/6;濃縮后的提取液通過三足離心機離心，轉(zhuǎn)速為 1700r/min;3) 柱層析純化離心上清液直接進型號為AB-8的大孔吸附樹脂柱進行純化，液體流速 為1.5BV/h;先用純化水洗柱至流出液清澈，水洗約2. 5小時，再用60% (v/v)乙醇洗柱至洗 脫液澄清、透明，收集帶醇味的洗脫液，收集醇洗脫液為樹脂重量的3倍。4) 脫色將收集的洗脫液直接進大孔型脫色樹脂柱，收集流出液，再用相當于樹脂重 量4倍的60% (v/v)乙醇進行洗脫；將洗脫液和流出液合并，進行真空濃縮，溫度控制在50 °C，真空度為0.08MPa，濃縮至原液(濃縮前液體)體積的1/8。5) 析晶濃縮液放置18小時，析出大量的晶體，抽濾，用60% (v/v)乙醇洗晶體。6) 重結(jié)晶用10倍晶體重量的30% (v/v)乙醇加熱至8(TC溶解晶體，將溶解液真空濃 縮，溫度控制在5(TC，真空度為0.08MPa，濃縮至溶解液體積的1/5，濃縮液放置15小時，析 出大量的晶體，抽濾，用30% (v/v)乙醇洗凈晶體。7) 干燥將晶體真空干燥，粉碎，得積雪草甙。 本發(fā)明的實施例2:按以下步驟制備積雪草甙1) 提取將干積雪草粉碎后投入潔凈的提取罐中，加入12倍重量的水，控制溫度在 IO(TC，第一次回流提取3h (從溶液沸騰開始計時)，然后壓出藥液，第二次加入5倍重量的 水，回流提取2h，第三次再加入2倍重量的水，回流提取lh，合并提取液。2) 濃縮、離心將提取液導(dǎo)入潔凈的濃縮器中進行真空濃縮，溫度控制在6(TC，真空度為O. lMPa，濃縮至提取液體積的l/2;濃縮后的提取液通過三足離心機離心，轉(zhuǎn)速為 1700r/min;3) 柱層析純化離心上清液直接進型號為HPD-IOO的大孔吸附樹脂柱進行純化，液體流 速為1.0BV/h;先用純化水洗柱至流出液清澈，水洗約3小時，再用85% (v/v)乙醇洗柱至洗 脫液澄清、透明，收集帶醇味的洗脫液，收集醇洗脫液為樹脂重量的2倍。4) 脫色將收集的洗脫液直接進中性氧化鋁樹脂柱，收集流出液，再用相當于樹脂重 量6倍的75% (v/v)乙醇進行洗脫；將洗脫液和流出液合并，進行真空濃縮，溫度控制在60 °C，真空度為O. lMPa，濃縮至原液(濃縮前液體)體積的1/12。5) 析晶濃縮液放置40小時，析出大量的晶體，抽濾，用45% (v/v)乙醇洗晶體。6) 重結(jié)晶用12倍晶體重量的65% (v/v)乙醇加熱至9(TC溶解晶體，將溶解液真空濃 縮，溫度控制在6(TC，真空度為O. lMPa，濃縮至溶解液體積的1/10，濃縮液放置30小時，析 出大量的晶體，抽濾，用45% (v/v)乙醇洗凈晶體。7) 干燥將晶體真空干燥，粉碎，得積雪草甙。 本發(fā)明的實施例3:按以下步驟制備積雪草甙1) 提取將鮮積雪草粉碎后加入2 3倍重量的80% (v/v)甲醇浸潤6小時，使積雪草原 料充分膨脹，分次均勻地裝入滲漉器中，壓緊，放置8 48小時后再加入17 18倍重量的 80% (v/v)甲醇，加熱至5(TC開始滲漉，滲漉速度為lBV/h，時間15小時，收集滲漉液。2) 濃縮、離心將滲漉液導(dǎo)入濃縮器中進行真空濃縮，溫度控制在4(TC，真空度為 0.06MPa，濃縮至提取液體積的1/10;濃縮后的提取液通過離心機離心，轉(zhuǎn)速為1700r/min;3) 柱層析純化離心上清液直接進型號為D101的大孔吸附樹脂柱進行純化，液體流速 為O. 5BV/h;先用純化水洗柱至流出液清澈，水洗約1.5小時，再用70% (v/v)甲醇洗柱至洗 脫液澄清、透明，收集帶醇味的洗脫液，收集醇洗脫液為樹脂重量的l倍。4) 脫色將收集的洗脫液直接進活性炭柱，收集流出液，再用相當于樹脂重量2倍的 70% (v/v)甲醇進行洗脫；將洗脫液和流出液合并，進行真空濃縮，溫度控制在4(TC，真空 度為0.06MPa，濃縮至原液(濃縮前液體)體積的1/2。5) 析晶濃縮液放置15小時，析出大量的晶體，抽濾，用30% (v/v)甲醇洗晶體。6) 重結(jié)晶用5倍晶體重量的60% (v/v)甲醇加熱至5(TC溶解晶體，將溶解液真空濃縮 ，溫度控制在4(TC，真空度為0.06MPa，濃縮至溶解液體積的1/2，濃縮液放置12小時，析出 大量的晶體，抽濾，用30% (v/v)甲醇洗凈晶體。7) 干燥將晶體干燥，粉碎，得積雪草甙。本發(fā)明的實施例4:按以下步驟制備積雪草甙1) 提取將干積雪草粉碎后投入提取罐中，加入7倍重量的95% (v/v)乙醇，超聲提取 80min，收取藥液，再加入3倍重量的95% (v/v)乙醇，超聲提取50min，合并提取液；超聲 工作頻率為15 80KHz。2) 濃縮、離心將提取液導(dǎo)入濃縮器中進行真空濃縮，溫度控制在55'C，真空度為 0.07MPa，濃縮至提取液體積的l/8;濃縮后的提取液通過離心機離心，轉(zhuǎn)速為1700r/min;3) 柱層析純化離心上清液直接進型號為D130的大孔吸附樹脂柱進行純化，液體流速 為2BV/h;先用水洗柱至流出液清澈，水洗約4小時，再用50% (v/v)乙醇洗柱至洗脫液澄清 、透明，收集帶醇味的洗脫液，收集醇洗脫液為樹脂重量的4倍。4) 脫色將收集的洗脫液直接進大孔型脫色樹脂柱，收集流出液，再用相當于樹脂重 量5倍的50% (v/v)乙醇進行洗脫；將洗脫液和流出液合并，進行真空濃縮，溫度控制在45 °C，真空度為0.09MPa，濃縮至原液(濃縮前液體)體積的1/15。5) 析晶濃縮液放置72小時，析出大量的晶體，抽濾，用60% (v/v)乙醇洗晶體。6) 重結(jié)晶用15倍晶體重量的50% (v/v)乙醇加熱至35。C溶解晶體，將溶解液真空濃 縮，溫度控制在5(TC，真空度為0.07MPa，濃縮至溶解液體積的1/15，濃縮液放置70小時， 析出大量的晶體，抽濾，用40% (v/v)乙醇洗凈晶體。7) 干燥將晶體干燥，粉碎，得積雪草甙。
權(quán)利要求
1.一種積雪草甙，其特征在于它是以積雪草為原料，用水或低碳醇提取，提取液經(jīng)過柱層析分離純化、樹脂脫色、析晶、重結(jié)晶、干燥而制得的以積雪草甙為主要成分的提取物，其中積雪草甙的重量含量≥95％。
2.權(quán)利要求l所述積雪草甙的制備方法，其特征在于取積雪草，用水或低碳醇加熱回流或超聲提取1 3次，每次5 180min，合并提取液，濃縮，離心，上清 液進大孔樹脂柱進行純化，先用水再用低碳醇洗柱，收集醇洗脫液；洗脫液進脫色樹脂柱， 收集流出液，再用低碳醇進行洗脫，將洗脫液和流出液合并，濃縮后放置12 72小時，析出 晶體，用低碳醇加熱溶解晶體，溶解液濃縮后放置12 72小時，析出晶體，洗滌，干燥，即得積雪草甙。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述積雪草甙的制備方法，其特征在于用加熱滲 漉提取代替加熱回流或超聲提取，滲漉速度O. 1 2BV/h，滲漉時間4 24小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述積雪草甙的制備方法，其特征在于將積 雪草粉碎，用2 20倍重量的水或低碳醇加熱滲漉、加熱回流或超聲提取，合并提取液，濃 縮至提取液體積的1/10 1/2，離心，上清液進大孔樹脂柱進行純化，先用純化水洗柱1.5 4h，再用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，收集醇洗脫液；洗脫液進脫色樹脂柱，收集流出 液，再用樹脂重量2 6倍的低碳醇進行洗脫，將洗脫液和流出液合并，濃縮至其體積的1/15 1/2，放置12 72小時，析出晶體，抽濾，洗滌，用5 15倍晶體重量的低碳醇加熱溶解晶 體，將溶解液濃縮至其體積的1/15 1/2，放置12 72小時，析出晶體，抽濾，洗滌，干燥 ，粉碎，即得積雪草甙。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于所述的低 碳醇為甲醇、乙醇、丁醇或戊醇，其體積濃度為30% 100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于所述的濃 縮均為真空濃縮，濃縮溫度40 60。C，真空度O. 06 0. lMPa。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于提取液離心時采用三足離心，轉(zhuǎn)速為1700r/min。權(quán)利要求8根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于大孔樹脂 柱純化時，液體流速為O. 5 2BV/h。權(quán)利要求9根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于所述的大 孔樹脂柱是以苯乙烯為骨架的D101型、HPD-100型、D130型或AB-8型大孔吸附樹脂。權(quán)利要求IO根據(jù)權(quán)利要求4所述積雪草甙的制備方法，其特征在于所述的 脫色樹脂柱為大孔型脫色樹脂柱、中性氧化鋁樹脂柱或者活性炭柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種積雪草甙及其制備方法，它是以積雪草為原料，用水或低碳醇提取，提取液經(jīng)過柱層析分離純化、樹脂脫色、析晶、重結(jié)晶、干燥而制得的以積雪草甙為主要成分的提取物，其中積雪草甙的重量含量≥95％。本發(fā)明利用現(xiàn)代生物提取技術(shù)，采用水提或醇提、柱層析分離純化、脫色、析晶、重結(jié)晶的工藝路線從積雪草中提取積雪草甙，通過樹脂柱層析和重結(jié)晶來提高積雪草甙的純度，使得提取物中積雪草甙的重量含量達95％以上(HPLC法測定)；而且其工藝流程簡單，生產(chǎn)周期短，有機溶劑用量省，生產(chǎn)成本低，適于大批量生產(chǎn)。
文檔編號A61K36/23GK101323637SQ20081030315
公開日2008年12月17日 申請日期2008年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月29日
發(fā)明者盧昶年, 盧照凱 申請人:盧照凱;盧昶年