專利名稱：：含有阿魏酸與苦參堿類化合物藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參堿的藥物組合物。本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參素的藥物組合物。本發(fā)明涉及含有阿魏酸與槐果堿的藥物組合物。本發(fā)明涉及的阿魏酸包括正阿魏酸和異阿魏酸以及他們的同分異構(gòu)體以及所組成的無機鹽類化合物。結(jié)構(gòu)特征見有關(guān)文獻(xiàn)[張娟等。阿魏酸及其衍生物合成及藥理研究進(jìn)展，糧食與油脂，2007年第1期，43-45]。根據(jù)權(quán)利要求1，本發(fā)明所涉及的苦參堿類化合物主要包括苦參堿、氧化苦參堿(苦參素)、槐果堿、氧化槐果堿、槐醇、白金雀花堿以及苦參堿的異構(gòu)體槐定堿、異苦參堿等以及他們的同分異構(gòu)體和/或他們的無機鹽類。其基本結(jié)構(gòu)特征是具有四環(huán)的喹嗪啶，如下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>苦參堿類生物堿的基本結(jié)構(gòu)本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物的組合物，其阿魏酸可以和一種苦參堿類生物堿組成組合物，也可以和2種或2種以上苦參堿類生物堿發(fā)組成組合物，優(yōu)選阿魏酸與苦參堿、阿魏酸與苦參素組成的組合物，其阿魏酸與苦參堿和/或苦參素的分子摩爾比為i:1-50，優(yōu)選i:l-3。本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物的組合物具有明顯的協(xié)同效應(yīng)，既增加阿魏酸的藥學(xué)效應(yīng)又能夠增加苦參堿類化合物的藥學(xué)效應(yīng)。例如抗臟器纖維化作用，改善血液流變學(xué)，抗病毒作用，抗炎作用，抑制膽堿酯酶的作用，止痛和止癢作用，抗血栓作用，抗菌作用，抗腫瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，抗動脈硬化，抗風(fēng)濕、增加免疫，增加精子活力和運動，抗高血壓作用等。本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物的組合物可明顯增加阿魏酸和苦參堿類生物堿的水溶性和脂溶性。本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物的組合物，可以采用藥劑學(xué)的方法制備預(yù)防和治療腫瘤、動脈硬化、心、腦血管病、骨關(guān)節(jié)疾病、感冒、老年癡呆、皮膚的炎癥、濕疹、痤瘡、斑丘疹、蕁麻疹、牛皮癬、胃腸道動力低下，肝炎、腎炎等臟器的炎癥和臟器纖維化、以及全身和/或臟器發(fā)生的急性和慢性炎癥的藥物，其制劑可以是口服制劑，也可以注射劑、以及皮膚粘膜用制劑。具體實施例實施例一阿魏酸苦參素復(fù)方凍干粉針的的制備將阿魏酸用少許乙醇溶解，加入等摩爾的苦參素水溶液，按照常規(guī)方法制成凍干粉針。實施例二阿魏酸槐果堿片劑的制備將阿魏酸和槐果堿l:2摩爾混合后，按照常規(guī)藥劑學(xué)的方法制成片劑，每片lOOmg.實施例三阿魏酸苦參堿凝膠劑的制備取i:i摩爾的阿魏酸苦參堿，蒸餾水溶解后，加入已經(jīng)溶脹后的卡波姆凝膠中，常規(guī)灌裝封口即得。實施例四幾種藥物組合物的鎮(zhèn)痛作用及其與苦參素和阿魏酸的作用的比較表1.幾種藥物組合物配制表組合物代號阿魏酸(摩爾數(shù))苦參堿(摩爾數(shù))苦參素(摩爾數(shù))槐果堿(摩爾數(shù))I1100II1200III1110IV1010V1002選取健康小鼠，每組10只。灌胃給藥20mg/kg，連續(xù)3天，末次給藥30min后，腹腔注射0.6%醋酸10ml/kg，記錄15min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)。計算藥物鎮(zhèn)痛百分率。藥物鎮(zhèn)痛百分率(％)=(對照組扭體次數(shù)治療組扭體次數(shù))/對照組扭體次4數(shù)X100%表2.化合物對小鼠醋酸扭體的鎮(zhèn)痛作用比較組別N鎮(zhèn)痛百分率(％)空白對照組10苦參素1029.98阿魏酸1018.30I1088.86II1098.29III1087.42IV1099.36V1078.13實施例五幾種藥物組合物的抗炎作用及其與苦參素和阿魏酸的作用的比較劑量和化合物同實施例四，小鼠每組IO只，稱重標(biāo)記后，將小鼠的右耳用二甲苯棉球接觸5sec，左耳作為對照，于致炎10min后，分別在致炎耳殼上，涂覆給予藥物濃度為1%受試藥物，空白對照組給生理鹽水，30min后將小鼠頸脫臼處死，用直徑6mm打孔器取等積左(自身對照)、右耳(二甲苯處理)稱重，計算耳腫脹率。耳腫脹率(％)=右耳重量_左耳重量/左耳重量X100%.結(jié)果見表4。表4.化合物對小鼠耳腫脹的作用組別腫脹率(％)空白對照組173.72苦參堿133.4阿魏酸164.6I74.9II98.9III36.4IV111.25<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例六幾種組合物對肝臟肝星狀細(xì)胞增值和分泌型I膠原蛋白的的作用材料與試劑大鼠I型膠原蛋白ELISA試劑盒，胰蛋白酶，胎牛血清等。[OO34]方法大鼠肝臟肝星狀細(xì)胞(h印aticstellatecell,HSC)復(fù)蘇后接種在lOOmL塑料培養(yǎng)瓶中，于5%C02、95X濕度的C02培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。待培養(yǎng)瓶中細(xì)胞長成單層后，棄去培養(yǎng)液，加入0.25X胰蛋白酶的消化液，收集消化液，2200rPmin離心7min，棄上清液，再用DMEM培養(yǎng)液離心洗滌一次，細(xì)胞團(tuán)塊用含20%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液懸浮并計數(shù)，用含DMEM培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100yl，48h后吸去培養(yǎng)液再用含10X小牛血清的DMEM培養(yǎng)液同步化細(xì)胞，使細(xì)胞同步化于靜止期。實驗分組(生理鹽水)，加入藥物使得各組培養(yǎng)液中藥物濃度分別是50mol/L，每組6孔重復(fù)培養(yǎng)3次，作用48h后，終止培養(yǎng)，分別在每孔加入5mg/L噻唑藍(lán)(MTT)20yL，再培養(yǎng)4h，加入DMSO后振蕩10min，用酶標(biāo)儀(波長570nm)測定HSC吸光度。領(lǐng)取藥物作用后的細(xì)胞，按照上述方法培養(yǎng)后，吸取上清液，按照試劑盒說明書測定I型膠原蛋白含量。結(jié)果見表5表5化合物對大鼠肝肝星狀細(xì)胞增值和I型膠原蛋白含量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例七幾種組合物抗膽堿酯酶的作用的比較自健康大鼠取血5ml，放入加有抗凝劑的試管中，用生理鹽水稀釋10倍，待用。將藥物用生理鹽水分別稀釋為0、5、10、20、40、80、160、320、640mg/L的待測溶液。取0.05ml不同的待測溶液中加入0.5ml稀釋了的全血中，充分混勻后，置37。C環(huán)境預(yù)孵lh。然后按照乙酰膽堿酯酶試劑盒說明書測定全血乙酰膽堿酯酶的活性。計算半數(shù)抑制濃度(IC5。)。結(jié)果表明化合物I-X都具有抑制全血乙酰膽堿酯的作用，其中化合物III的抑制作用最強。表6幾種化合物對膽堿酯酶抑制作用的IC;化合物名稱IC50(mg/L)空白苦參素735.5苦參堿阿魏酸新斯的明365.7I223.4II86.5III58.8IV433.9V567.1實施例八幾種組合物對小鼠腸動力作用的比較藥品和試劑苦參素注射液，山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)(批號0306003);甲硫酸新斯的明注射液，山東天福制藥廠生產(chǎn)(批號0404131);硫酸阿托品注射液，山東天福制藥廠生產(chǎn)(批號0409271);硫酸嗎啡控釋片，北京萌蒂制藥有限公司生產(chǎn)(批號04082312)。動物及飼養(yǎng)環(huán)境健康昆明小鼠，SPF級，雌雄各半，體重18_22g，由山東綠葉制藥股份有限公司動物實驗中心提供。合格證號SYXK(魯)20030020。動物每籠10只放置。飼料由山東省實驗動物中心提供。屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)，過濾送風(fēng)，室內(nèi)溫度18-22t:;濕度50-60%;光照12小時。實驗方法小鼠灌胃給相應(yīng)藥物或生理鹽水，連續(xù)3天，末次給藥前禁食不禁水16h，于給藥30min后，每只小鼠灌胃給予5%活性炭混懸液0.2ml，20min后脫臼處死小鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取幽門至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度作為小腸總長度，從幽門至炭末前沿的距離作為炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離。用以下公式計算炭末推進(jìn)率。炭末推進(jìn)率(％)=炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸總長度X100%[OO48]表7幾種化合物對正常小鼠小腸炭末推進(jìn)率的影B向(7士sD)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與對照組比較*P<0.05;**P<0.01。實施例九幾種化合物急性毒性的實驗數(shù)據(jù)實驗方法取小鼠，l次灌胃給藥，觀察72小時，記錄死亡情況，結(jié)果見表8。表8幾種化合物對小鼠毒性的觀察(7±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例十、阿魏酸苦參素組合物抗動脈硬化的觀察試驗方法藥物制備將阿魏酸苦參素以1:l分子摩爾比混合后配成溶液。按照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[劉占濤，劉賽，王守蘭，張健，仲偉珍。海洋貝類綜合提取物對實驗性動脈粥樣硬化的治療作用。中國動脈硬化雜志2005年第13巻第3期；305308]。取雄性鵪勢140只，隨機分為7組，正常對照組、模型組、陽性對照組(羅伐它丁10mg/kg)，阿魏酸口服對照組(40mg/kg)和藥物高、中、低劑量組(分別給藥10、20、40mg/kg)。除正常對照組喂基礎(chǔ)飼料外，其余5組按照文獻(xiàn)方法建立高脂食餌性動脈硬化模型。各用藥組灌胃給藥，每日一次，連續(xù)用藥4周。分別于用藥后第4周末，每組取10只動物測定其血清脂質(zhì)。于實驗結(jié)束時對存活的鵪鶉進(jìn)行病理學(xué)檢測。血清脂質(zhì)含量測定各組于用藥后第2，4周末，禁食12h后經(jīng)頸靜脈取血2mL，分離血清，采用酶法測定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。結(jié)果阿魏酸苦參素醚可明顯降低動脈硬化模型鵪鶉血清TC、TG水平，其作用比阿魏酸明顯增強(表9)。模型組多數(shù)主動脈有明顯的病變，多數(shù)As病變在2級以上，阿魏酸苦參素醚組主動脈粥樣硬化病變程度較輕，多在12級以下(表10)。鏡下可見多數(shù)動脈內(nèi)膜完整，部分有輕度脂質(zhì)浸潤，內(nèi)含散在泡沫細(xì)胞。表9.阿魏酸苦參素對高血脂模型鵪鶉血脂的影響分組TC(mmol/L)TG(mmol/L)正常對照組4.96±0.880.87±0.21模型組25.23±5.325.66±1.21羅伐它丁對照組10.19±2.071.68±0.36阿魏酸對照組16.88±6.313.52±0.73試驗高劑量組11.43±4.381.75±0.54試驗中劑量組14.67±5.952.87±0.45試驗低劑量組15.86±6.672.99±0.38表10.阿魏酸苦參素對高血脂模型鵪鶉主動脈動脈硬化病變的影響9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例九、阿魏酸苦參堿凝膠對急性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的影響。藥物制備將阿魏酸苦參堿以l:l分子摩爾比混合后，按照藥劑學(xué)方法制成乳膏劑。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人30對，其中30例為對照組，30例為試驗組。對照組單獨口服奈普生200g，治療組患處涂抹阿魏酸苦參堿酮乳膏，每天1次，連續(xù)用藥5天。療效觀察腫脹和疼痛基本消失，為顯效；輕度腫脹，疼痛基本消失為有效；腫脹和疼痛均未好轉(zhuǎn)，為無效。結(jié)果試驗組顯效21例，有效8例，總有效率為96.7%。對照組顯效12例，有效ll例，總有效率為76.7%。實施例十幾種化合物對皮疹的治療作用病例選擇年齡在18-25歲，身體雙側(cè)皮疹，性別不限，每種藥物實驗10例。在皮疹上局部涂抹1%藥物，歸參乳膏，自身單盲對照，左側(cè)肢體涂抹藥物，右側(cè)肢體生理鹽水，涂抹后io分鐘進(jìn)行結(jié)果評價。結(jié)果評價對消腫止癢作用進(jìn)行評價。顯效皮疹明顯消退，止癢作用明顯。有效有一定的止癢作用，丘疹有一定程度的消退。無效未見明顯作用。結(jié)果見下表。表ll.幾種化合物對皮疹的治療作用療效評價10<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例i^一、化合物ii、ni、v對大鼠老年癡呆的治療作用1.藥品與試劑苦參素、苦參堿和槐果堿由寧夏博爾泰力藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，石杉堿甲片由上海紅旗制藥廠生產(chǎn)。D-半乳糖為上海試劑二廠出產(chǎn)，鵝膏蕈氨酸(IB0)購自Sigma公司，均為分析純。全血和腦組織總膽堿酯酶(TchE)檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。2.動物分組、造模與給藥15月齡初老年雌性Wistar大鼠57只，體重300450g，均由青島市藥檢所動物中心提供。常規(guī)分籠飼養(yǎng)，自然照明，隨意飲水和取食。隨機分成6組，其中正常對照組(簡稱正常組)，腹腔注射生理鹽水6周及腦內(nèi)Meynert核注射生理鹽水，AD模型組(簡稱模型組)，腹腔注射D_半乳糖(48mg/kg/d)6周和腦內(nèi)雙側(cè)Meynert核注射IBO，石杉堿甲對照組(簡稱石杉堿甲組)和受試物觀察組造模均同模型組。腦內(nèi)注射在腹腔注射后參考有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[1]。造模結(jié)束后，石杉堿甲組灌胃給予石杉堿甲50ug/kg，化合物n、III、X組分別灌胃藥物50mg/kg。正常組、模型組給予同體積的生理鹽水。連續(xù)給藥7天，在末次給藥1小時后，進(jìn)行學(xué)習(xí)能力檢測，然后大鼠用戊巴比妥麻醉，在冰臺上腹主動脈采血5ml，解剖迅速取出大腦皮層以生理鹽水作為勻漿介質(zhì)，制成10X(W/V)大腦皮層組織勻漿。按照試劑盒說明進(jìn)行乙酰膽堿酯酶活性的測定，全血的乙酰膽堿酯酶活性的測定按照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[2]。3.檢測指標(biāo)動物記憶行為測試被動回避跳臺試驗，將大鼠置反應(yīng)箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境3min。然后通以50V交流電。大鼠受到電擊后。逃避反應(yīng)為跳上平臺以躲避傷害性剌激。記錄5min內(nèi)受到電擊次數(shù)(錯誤次數(shù))作為學(xué)習(xí)成績以反應(yīng)學(xué)習(xí)能力。24h后直接將大鼠置于平臺上。記錄第1次跳下的潛伏期以反應(yīng)記憶能力和5min內(nèi)錯誤次數(shù)，潛伏期超過5min者以5min計。數(shù)據(jù)處理采用組間比較t檢驗，以p<0.05作為統(tǒng)計顯著性指標(biāo)。4.結(jié)果3種化合物均能夠降低全血和腦組織膽堿酯酶水平，提高大鼠學(xué)習(xí)記憶成績(表12，13)表12化合物II、III、V對大鼠全血及腦組織內(nèi)TChE水平的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>權(quán)利要求本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參堿類化合物的藥物組合物。2.本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參堿的藥物組合物。3.本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參素的藥物組合物。4.本發(fā)明涉及含有阿魏酸與槐果堿的藥物組合物。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4，本發(fā)明涉及的阿魏酸包括正阿魏酸和異阿魏酸以及他們的同分異構(gòu)體以及所組成的無機鹽類化合物。結(jié)構(gòu)特征見有關(guān)文獻(xiàn)[張娟等。阿魏酸及其衍生物合成及藥理研究進(jìn)展，糧食與油脂，2007年第1期，43-45]。6.根據(jù)權(quán)利要求1，本發(fā)明所涉及的苦參堿類化合物主要包括苦參堿、氧化苦參堿(苦參素)、槐果堿、氧化槐果堿、槐醇、白金雀花堿以及苦參堿的異構(gòu)體槐定堿、異苦參堿等以及他們的同分異構(gòu)體和/或他們的無機鹽類。其基本結(jié)構(gòu)特征是具有四環(huán)的喹嗪啶，如下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>苦參堿類生物堿的基本結(jié)構(gòu)。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6，阿魏酸可以和一種苦參堿類生物堿組成組合物，也可以和2種或2種以上苦參堿類生物堿組成組合物，優(yōu)選阿魏酸與苦參堿、阿魏酸與苦參素組成的組合物，其阿魏酸與苦參堿和/或苦參素的分子摩爾比為1:l-50，優(yōu)選l:1-3。8.根據(jù)權(quán)利要求l-7，本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物所組成的組合物具有明顯的協(xié)同效應(yīng)，既增加阿魏酸的藥學(xué)效應(yīng)又能夠增加苦參堿類化合物的藥學(xué)效應(yīng)。例如抗臟器纖維化作用，改善血液流變學(xué)，抗病毒作用，抗炎作用，抑制膽堿酯酶的作用，止痛和止癢作用，抗血栓作用，抗菌作用，抗腫瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，抗動脈硬化，抗風(fēng)濕、增加免疫，增加精子活力和運動，抗高血壓作用等。9.本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物所形成組合物可明顯增加阿魏酸和苦參堿類生物堿的水溶性和脂溶性。10.本發(fā)明涉及的含有阿魏酸與苦參堿類化合物所形成組合物，可以采用藥劑學(xué)的方法制備治療腫瘤、動脈硬化、心、腦血管病、骨關(guān)節(jié)疾病、感冒、老年癡呆、皮膚的炎癥、濕疹、痤瘡、斑丘疹、蕁麻疹、牛皮癬、胃腸道動力低下，肝炎、腎炎等臟器的炎癥和臟器纖維化、以及全身和/或臟器發(fā)生的急性和慢性炎癥的藥物，其制劑可以是口服制劑，也可以注射齊U、以及皮膚粘膜用制劑。全文摘要本發(fā)明涉及含有阿魏酸與苦參堿類化合物藥物組合物，其用于制備治療腫瘤、心血管疾病、骨關(guān)節(jié)疾病等的藥物。文檔編號A61P35/00GK101732299SQ20081030538公開日2010年6月16日申請日期2008年11月5日優(yōu)先權(quán)日2008年11月5日發(fā)明者宋健,尚堅,彭康康,馬維富申請人:青島啟元生物技術(shù)有限公司